污水中肠道杆菌噬菌体的分离及其生物学活性研究

目的 通过肠道杆菌噬菌体特性的观察,为了解噬菌体生物学活性及其吸附特异性,探讨噬菌体溶菌机理及治疗性噬菌体的临床应用奠定研究基础.方法 利用标准菌株从污水中分离特异性噬菌体,从中探讨噬菌体的生物学特性,纯化并保存.结果 在污水中分离得到大肠杆菌ACTT25922的噬菌体和大肠杆菌ACTT35218的噬菌体.结论 噬菌体普遍存在于自然界中,且其生物特性于普通病毒相似,在自然中很容易被灭活和变异.     

1株宽宿主谱大肠杆菌噬菌体的生物学特性观察

目的 观察1株自污水中分离的宽宿主谱大肠杆菌噬菌体的生物学特性。方法 采用宿主范围测定、噬菌斑计数、负染色电镜观察、血清中和试验及血清交叉中和试验、一步生长实验等技术观察分离的噬菌体。结果 ①宽宿主谱大肠杆菌噬菌体可裂解五株大肠杆菌；②针对不同宿主菌其噬菌斑形态、大小、透明度、边缘界限、中心透明区及晕环均发生相应变化；③电镜超微结构显示此噬菌体为直径20～40nm的微球形颗粒，棱角不明显，偶见短尾；④噬菌体的抗血清K值为41．5，与f2噬菌体血清学相关度为0．38；⑤潜伏期为30～35min，裂解量为104。结论 分离所得的噬菌体是1株大肠杆菌宽宿主谱噬菌体，为直径20～40nm的圆形颗粒，其与f2噬菌体的血清相关度较低，可独立为一个血清型。     

从污水中分离大肠杆菌噬菌体的方法改进

噬菌体是一类属于病毒的微小生物,具有体积微小、结构简单和严格的寄生性,在自然界分布极广,凡是有细菌的场所,就可能有相应噬菌体的存在。在人和动物的排泄物或污染的井水、河水中,常有肠道菌的噬菌体。一般从污水中分离大肠杆菌的噬菌体,所用菌种大多是实验室保存的大肠杆菌。由于噬菌体对寄生的宿主细菌表现出高度特异性,而大肠杆菌型较多,因此污水中存在的大肠杆菌噬     

f2噬菌体及其宽噬株的生物学特性比较

目的:探讨和比较一株分离自污水中的宽噬噬菌体与其原始野生型标准噬菌体f2株的生物学特性的差异.方法:①测定宿主范围;②测定裂菌滴度;③噬菌斑形态比较及超微结构观察;④血清中和试验以及血清交叉中和试验;⑤一步生长实验.结果:①宽噬噬菌体株可裂解四种同一属不同种大肠杆菌;②宽噬噬菌斑形态、大小、透明度、边缘界限、中心透明区及晕环针对不同宿主菌发生相应变化;③电镜超微结构显示两噬菌体均为二十面体微球形且棱角不明显,但尾部结构及直径范围存在差异;④中和试验测定宽噬噬菌体及其标准株的抗血清K值分别为41.5及30.0;⑤血清交叉中和试验证实二者在血清学上存在较低相关度;⑥一步生长实验显示宽噬噬菌体较其标准株的潜伏期短,裂解量大.结论:宽噬噬菌体的生物学特性与其标准株存在显著差异,可独立为一个血清型.     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

目的 通过分离耐碳青霉烯类鲍曼小动杆菌(CRAB)噬菌体,研究其生物学特性,为噬菌体治疗CRAB感染提供实验依据.方法 利用噬菌斑法从医院污水中分离CRAB噬菌体,电子显微镜观察噬菌体的形态特征,提取其基因组行酶切电泳,SDSPAGE分析噬菌体表面衣壳蛋白,测定噬菌体感染复数和耐受突变率,并观察其一步生长曲线.结果 筛选出1株具有较宽裂解谱的无尾双链DNA的CRAB噬菌体,命名为噬菌体AB3.其基因组大小约35 kb,表面主要衣壳蛋白相对分子质量约为35×103.该噬菌体感染宿主菌的潜伏期为20 min,爆发期为60 min,裂解量为350,耐受突变率为2.5×10-10,对pH值耐受范围广,热稳定性好.结论 噬菌体AB3具有较宽的噬菌谱,潜伏期短、裂解量大、耐受突变率低,对理化因素稳定性好,具有临床应用前景.     

分枝杆菌噬菌体Chy2的分离及生物学特性

目的分离鉴定新分枝杆菌噬菌体并研究其生物学特性。方法以平板法从泥土中分离纯化噬菌体,紫外线诱导法鉴定溶原性,从噬菌斑大小、颗粒形态和限制性内切酶分析三方面比较Chy2、D29、TM4异同;以不同感染复数(MOI)扩增Chy2,测定最佳MOI;通过一步生长实验测出Chy2潜伏期、裂解期和裂解量;采用单斑法测定MOI的裂解谱;检测MOI在不同pH值培养基中裂解耻垢分枝杆菌mc2155的能力。结果成功分离纯化1株分枝杆菌噬菌体,命名为Chy2,其噬菌斑圆形透明,紫外线诱导法处理宿主菌后不能形成噬菌斑,头部呈椭圆形,长尾,基因组核酸能被双链DNA内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ及XbaⅠ切开,大小约49 kb,与D29、TM4差异大;Chy2最佳MOI为9.58×10-5;Chy2一步生长周期为270 min,潜伏期210 min,裂解期60 min,裂解量为23;Chy2能裂解耻垢分枝杆菌mc2155、结核菌标准株H37Rv、多数临床耐药株;在7H9固体培养基pH值为5.0和7.4时,Chy2均能裂解耻垢分枝杆菌mc2155。结论 Chy2属长尾噬菌体科,基因组为双链DNA,宽噬谱广,是一种潜在的抗结核药物资源。     

噬菌蛭弧菌的分离及某些生物学特性的研究

用１／１０ ＬＢ琼脂，从６份污水标本中分离到２０３株噬菌蛭弧菌。从噬菌斑特征、相关显微镜下动力观察、电镜下形态观察及对不同宿主菌（死菌和活菌）的裂解试验等特征的研究，认为符合噬菌蛭弧菌的特征。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌噬菌体分离及其生物学特性观察

目的 分离、筛选宽噬产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs):大肠埃希菌噬菌体,观察其生物学特性.方法 以30株产ESBLs大肠埃希菌为宿主菌,从医院污水中分离获得噬菌体,筛选出宽噬噬菌体,进行吸附实验、一步生长实验、噬菌体DNA初步酶切分析和电镜观察.结果 所筛选出的宽噬噬菌体φ9882其宽噬率为36.7%,滴度为8.1 x1018pfu/mL.5分钟吸附率约为98%,潜伏期约为30～40min,裂解量约为110.φ9882的DNA约为30 kb.电镜显示,φ9882具有直径70 nm微球形颗粒头部,棱角不明显,可见100 mn尾轴.结论 分离、筛选所获得的φ9882为宽噬噬菌体,其裂解性较强,裂解谱宽,吸收率高,潜伏期短,可进一步用于相应耐药菌感染的治疗研究.     

MS2噬菌体宿主范围及其相关特性的实验研究

目的为探索MS2噬菌体的宿主菌范围及在不同的宿主菌内的生长情况等,为流行病学研究、细菌的噬菌体分类鉴定和其他相关研究中提供基本数据和资料。方法采用双层琼脂法测定大肠埃希菌MS2噬菌体对各试验菌株的裂解情况,观察其噬菌斑生长情况并计数,并比较MS2噬菌体在相关宿主菌内的易感性。结果①大肠埃希菌MS2噬菌体与埃希大肠肝菌（ATCC15597）、大肠杆菌285和大肠杆菌B分别进行双层琼脂平板培养,结果均出现大小均一、边缘整齐、透明清晰的噬菌斑;②相同稀释度的MS2噬菌体与埃希大肠杆菌（ATCc15597）、大肠肝菌285和大肠杆菌B培养产生的噬菌斑数量依次递减;（3）Ms2噬菌体与其余6种所选试验菌株分别进行双层琼脂平板培养,结果琼脂表面均出现浑浊,未产生噬菌斑。结论①在本次试验所选的8种试验菌中,通过双层琼脂法测定适合做大肠埃希菌MS2噬菌体宿主菌者有埃希大肠杆菌（ATCC15597）、大肠肝菌285和大肠杆菌B,其中埃希大肠肝菌（ATCC15597）为MS2噬菌最适宿主菌;所选其余6种试验菌株均不适合做MS2噬菌体的宿主菌。②在37℃22h的培养过程中,MS2噬菌体对前述三种宿主菌的易感性由大到小依次可能为：埃希大肠肝菌（ATCC15597）〉大肠肝菌285〉大肠杆菌B。     

Isolation of a novel polyvalent virulent bacteriophage of E.coli

Objective：To isolate virulent bacteriophage from environment samples and explore the potential way of decontaminating the environmental wastewater. Methods： The standard plaque assay, negative staining transmission electron microscopy （TEM）, genome extraction and nucleases test were used to isolate bacteriophages. Then its morphology and characteristics were examined. Results： A novel bacteriophage XY-1 was isolated from a sewage pond in a hospital. It infected and killed 6 E.coli reference strains. The phage had a round head （diameter 40-50 nm）, no tail and the genome was ssRNA of approximately 5.0 kb. It was able to reduce E.coli to an extent of 44.63% to 67.00% when being added into the samples of different raw sewage water, depending on the contact time, the temperature and the phage dose. Conclusion： From the morphology typical and nucleotide characteristics （RNA） of the genome of phage, phage XY-1 appears to be closely related to phage f2. It may have some effects for the control of E.coli in sewage water.     

医院污水中EV71病毒核酸的检验

目的研究医院污水EV71病毒核酸的检测方法,为手足口病控制提供依据。方法用载阳电荷的硅胶滤材吸附浓集污水中的EV71病毒,然后用RT-PCR和实时荧光PCR技术检测EV71病毒。结果建立的载阳电荷硅胶浓集方法能有效浓集医院污水中的EV71病毒,通过对6家医院的医院污水检测有2家检出EV71病毒核酸,所有检出EV71核酸的医院污水余氯都不符合国家卫生标准。结论医院污水中含有EV71病毒核酸,提示其为环境中EV71病毒的重要污染源,因此需要加强医院污水消毒的监督检查。     

过氧乙酸与漂白粉对模拟医院污水消毒效果的研究

目的　为了比较两种消毒剂对模拟医院污水的消毒效果。方法　用过氧乙酸和漂白粉对模拟医院污水消毒 ,比较两者在同一浓度、同一作用时间下对细菌的杀灭作用。结果　 0 .0 5g·L- 1的过氧乙酸作用 15min对埃希氏大肠杆菌的杀灭率为 10 0 % ,而 0 .0 5g·L- 1的漂白粉的杀灭率只为 97.93% ;0 .2 0g·L- 1的过氧乙酸作用 60min对枯草杆菌芽胞的杀灭率为 96.16% ,而漂白粉为 90 .5 3%。结论　过氧乙酸对埃希氏大肠杆菌和枯草杆菌芽胞的杀灭率均高于漂白粉     

噬菌体控制细菌研究的回顾与展望

噬菌体控制细菌的研究已有近百年。随着抗生素的发现和随后的大规模工业化生产及应用,噬菌体作为控制细菌的手段之一逐渐淡出广大研究者尤其是西方各国研究者的视野,虽然在前苏联国家一直持续着噬菌体治疗的研究,但在当代以两方舆论为主导的世界,其研究成果不为人们熟知。目前,细菌耐药性已成为世界抗感染治疗领域面临的严峻问题,采用噬菌体治疗这个老方法来解决新问题重新引起人们关注。该文从噬菌体治疗的研究历程、噬菌体制剂的分类、噬菌体应用于感染的预防及治疗、环境消毒及食品防腐等方面进行论述。     

Mu噬菌体的gam基因产物的纯化及其特性分析

由Mu噬菌体gam基因编码的蛋白可抑制外切酶活性,保护Mu DNA不受外切酶降解。用柱层析法从含有gam基因的重组质粒的菌株(MM294PJA21)中分离纯化gam蛋白(pgam),纯化的蛋白分子量约为20 000 dal,对其特性分析表明:pgam是一个非特异性DNA结合蛋白,它能与不同末端的线状双链DNA结合,但不能与闭合环状DNA结合。pgam能保护线状双链DNA不被外切酶降解。实验结果还发现pgam有促进T4 DNA连接酶对钝末端DNA的连接作用。     

大型医院污水深处理及回用技术的开发研究

目的　对医院污水进行深处理 ,并在医院污水站、病区、门诊大楼、绿化地等处建立再生水的循环利用系统 (中水道 ) ,使再生水重复利用达到节水。方法　医院污水一级处理加氯化消毒 ,中水道建设。结果　处理后水中悬浮物为 8～16mg L、化学需氧量 2 5～ 31mg L、5d生化需氧量 14～ 16mg L、细菌总数 4 9× 10 2 ～ 5 9× 10 2 个 ml、粪大肠菌群数 <2 0个 L、余氯 0 0 2～ 0 4 2mg L ,理化指标达到综合循环再利用要求标准。结论　医院污水处理达标后再生水的重复应用有利于节水和环保。     

南宁市朝阳溪污水中诺如病毒检测及其基因型分布

目的了解南宁市朝阳溪污水中诺如病毒(Norovirus,NV)污染状况及其基因分布。方法应用实时荧光逆转录-聚合酶链(Realtime RT-PCR)方法对2011年采集的72份朝阳溪污水进行NV检测,阳性标本进行基因克隆和序列测定,并进行亲缘关系分析。结果 72份污水均能检出NV,基因Ⅰ组(GenogroupⅠ,GⅠ)NV、基因Ⅱ组(GenogroupⅡ,GⅡ)NV阳性率分别为70.83%和100.00%。经亲缘关系树分析发现,测序成功的239株阳性克隆,共包含有16种不同亚型的NV,GⅠ(GⅠ.1、GⅠ.3、GⅠ.4、GⅠ.6、GⅠ.9、GⅠ.10、GⅠ.13、GⅠ.14、)、GⅡ(GⅡ.1、GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.5、GⅡ.6、GⅡ.12、GⅡ.14)各8种。污水中GⅠ和GⅡNV代表株与广西急性腹泻病例的各亚型代表株的亲缘关系密切。在污水中还检测到37株在广西腹泻病例中未检测到的基因亚型NV,占总NV检出株数的15.48%(37/239),其中GⅠ有6个亚型、GⅡ有2个亚型。NV各亚型中检出比例最高的是GⅡ.14,占31.80%(76/239)、GⅠ.4次之,占18.83%(45/239)。在污水中同时检出GⅡ.4 2006年变异株与2010年变异株。结论污水监测能从侧面反映有多个基因亚型NV在南宁市人群中流行,但一些基因亚型的NV可能以隐性感染为主。     

鲍曼不动杆菌噬菌体AB3的全基因组测序及生物信息学分析

目的 对本研究小组分离的鲍曼不动杆菌噬菌体AB3进行测序和基因组生物信息学分析,阐明其亲缘关系.方法 采用鸟枪法和重叠群组装的策略对噬菌体AB3进行基因组测序,并通过EditSeq、tRNAscan-SE、TRF、FindTerm、ORF finder、BPROM、GeneMarkTM、Clustalx、phylip等软件对所获噬菌体AB3基因组的一般特性、编码基因的功能预测、RNA聚合酶基因系统的进化进行分析.结果 噬菌体AB3基因组为全长31 185 bp的双链DNA,G+C含量为39.18％,包含28个预测基因,1个转录终止子和4个可能的启动子序列.结论 基因分析和RNA聚合酶基因进化分析显示噬菌体AB3与噬菌体AB1类似,均属于phiKMV-like病毒属.     

关于城市污水处理方法的探讨

城市污水处理已经成为当前我国水污染治理工作的重点 ,因此着重分析城市污水处理现状 ,对比各种城市污水处理方法 ,从中探讨出城市污水的最佳处理方式。