转化生长因子-β1对大鼠肌成纤维细胞增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肌成纤维细胞（MFB）增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响。方法 TGF-β1（0．33～81pmol／L）在不同作用时间（5～120min）的条件下诱导MFB细胞活化,采用免疫吸附和Westernblot方法观察TGF-β1对MFB细胞内pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L及Smad2／3蛋白表达的影响;采用M1Tr方法观察TGF-β1对MFB细胞增殖的影响。结果 在0．33—9pmol／L浓度范围内,TGF-β1均呈浓度依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化,以9pmol／L最明显,TGF-β1在27、81pmol／L浓度时,Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态,而各组Smad2／3蛋白表达无明显变化。在TGF-β1为9pmol／L浓度条件下,30—60min孵育时间对MFB细胞增殖无明显影响,但可呈时间依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化,以30min最明显,TGF-β1在60、120min时间时,Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态,而各组Smad2／3蛋白表达量无明显变化。结论 TGF-β1诱导MFB细胞内Smads磷酸化先于刺激细胞增殖。     

PPAR γ配体抑制气道肌纤维母细胞分化的作用机制

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)配体对气道肌纤维母细胞分化和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号传导途径的影响.方法 小鼠气道纤维母细胞原代培养,并于特定时间加入TGF-β1(5 mg/L)或PPARγ配体-罗格列酮(10mmol/L)或PPARγ抑制剂(10mmol/L)处理后,用Western blot检测肌纤维母细胞的标志物-α平滑肌肌动蛋白原(αSMA)以及结缔组织基质-纤维结合蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达情况;并采用Western blot、DNA凝胶电泳迁移率检测和免疫细胞化学检测对Smad3蛋白的磷酸化、与DNA结合能力和细胞核转位的影响.结果 罗格列酮能抑制TGF-β1诱导的αSMA的产生,并降低纤维结合蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达;同时抑制Smad3的磷酸化、与DNA的结合能力和细胞核转位.PPARγ配体的抑制剂能够完全消除PPARγ配体对TGF-β1的抑制作用.结论 PPARγ配体能够通过阻断TGF-β1/Smad3信号传导通路,抑制TGF-β1诱导产生的肌纤维母细胞分化和纤维化的细胞效应.     

MAPK抑制因子对HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响

目的 探究3种丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)抑制因子对转化生长因子-β( TGF-β)活化的大鼠肝星状细胞( HSC)中Smad2/3磷酸化及Smad4 核转位的影响. 方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位肝灌流法分离正常大鼠HSC并传代培养,分别用细胞外信号调节激酶( ERK)、c-Jun氨基末端激酶( JNK )、p38 抑制因子( PD98059、SP600125、SB203580 )与HSC共同培养,再加入TGF-β1活化细胞,采用免疫沉淀和 Western blot 法检测 pSmad2C、pSmad2L、pS-mad3L蛋白表达;采用细胞免疫荧光法检测Smad4 蛋白表达及细胞内定位情况. 结果 Western blot显示静息状态下HSC几乎不表达 pSmad2C 而低表达 pSmad2L、pSmad3L, TGF-β1刺激后显著上调上述磷酸化蛋白表达, p38 抑制因子(1、3 μmol/L)、ERK 抑制因子(1 μmol/L)对 Smad2C、Smad2L、Smad3L 磷酸化无显著影响;p38 抑制因子( 10μmol/L)降低了 pSmad3L 蛋白表达;ERK 抑制因子( 3、10μmol/L)降低了pSmad2C蛋白表达;JNK抑制因子(1、3、10μmol/L)减少了 pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L 蛋白表达.TGF-β1刺激可明显诱导Smad4核转位,而3种MAPK抑制因子不同程度地抑制TGF-β1 诱导的Smad4 转位入核. 结论 在 HSC 细胞中 TGF-β1 可能通过活化 JNK 通路促进Smad2/3磷酸化,活化ERK、JNK、p38 通路促进Smad4 核转位.     

人工冬虫夏草对IPF上皮间充质转分化过程中Smad3核转位和下游靶基因的干预作用

目的研究人工冬虫夏草(cultured cordyceps sinensis,Ccs)在特发性肺纤维化(idiopathic pulmonaryfibrosis,IPF)上皮间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition)过程中的干预作用和可能机制。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549,以转化生长因子β1(TGF-β1)5 ng/μL诱导A549向肌成纤维细胞(myofibro-blast,MF)转分化。MTT法测定不同浓度(2.5、5.0、7.5、10和12.5 mg/mL)Ccs对TGF-β1诱导下A549活化的抑制作用;Western-blotting检测10 mg/mL Ccs对A549向MF转分化中Smad3蛋白表达的影响;Real-time PCR检测10 mg/mL Ccs对A549向MF转分化中Ⅰ型前胶原(COL1A1)、结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。结果 Ccs可抑制TGF-β1诱导下A549的增殖活化(P<0.05和P<0.01),随药物浓度的增加,其抑制呈上升趋势,具有浓度依赖性。10 mg/mL Ccs可抑制TGF-β1诱导下A549向MF转分化中Smad3蛋白的核转位,下调COL1A1、CTGF、MMP-2、VEGF mRNA表达水平。结论 Ccs对TGF-β1诱导下A549增殖活化有抑制作用,可逆转TGF-β1诱导下A549转分化中Smad3的核转位,通过下调COL1A1、CTGF、MMP-2、VEGF等基因表达,延缓IPF的进展。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

二苯乙烯苷对TGF-β1诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制

探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷,TSG)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并研究其相关机制。用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立TGF-β1诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测CFB增殖情况;乳酸脱氢酶(LDH)法检测药物对细胞毒性作用;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞仪测定细胞周期;Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COL Ⅲ)、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、p-ERK、ERK、p-P38、P38、p-JNK、JNK的蛋白表达。结果表明,终浓度为0.1~100 μmol/L的TSG无明显细胞毒性作用;在一定浓度范围内,TSG可明显抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,抑制细胞由G₀/G₁期向S期的转变,抑制TGF-β1诱导的CFB核内PCNA的蛋白表达,降低α-SMA、COLⅠ和COL Ⅲ的过度表达,并抑制TGF-β1诱导的Smad3、ERK和P38的磷酸化。因此推测一定浓度的TSG能抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,其机制可能与干预Smad3、ERK和P38信号通路有关。     

VEGF对上皮间充质转化的抑制与Smad信号途径及SnoN表达的变化

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad2/3,Smad7信号途径以及SnoN表达的影响。方法体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μg/L)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5μg/L)+VEGF165(100μg/L)共同作用组。采用WesternBlot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad2/3和Smad2/3(共同作用30和60min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad7、SnoN的表达水平(共同作用48h)。结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF-β1单独作用组比较明显减弱(P0.05)。体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60min,与正常对照组比较,(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比值明显升高,TGF-β1+VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30min时下降明显。TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad7表达明显升高(P0.05)。VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad2/3)/(Smad2/3)、Smad7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P﹥0.05)。TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P﹥0.05),各组SnoNmRNA表达差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad2/3磷酸化、上调Smad7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关。     

Smad signal transduction pathway involved in supression of VEGF on TGF-β1 induced EMT of HK-2 cells

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad 2/3,Smad 7信号途径以及SnoN表达的影响.方法 体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μgL)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5 μg/L)+ VEGF165(100 μg/L)共同作用组.采用Western Blot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad 2/3和Smad 2/3(共同作用30和60 min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad 7 、SnoN的表达水平(共同作用48 h).结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF -β1单独作用组比较明显减弱(P＜0.05).体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60 min,与正常对照组比较,(p-Smad 2/3)/(Smad 2/3)比值明显升高,TGF-β1 +VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30 min时下降明显.TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad 7表达明显升高(P＜0.05).VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad 2/3 )/(Smad 2/3)、Smad 7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P＜0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P＞0.05),各组SnoN mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad 2/3磷酸化、上调Smad 7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关.     

GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化

目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象,以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒(野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT;第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸,由此不能再被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β突变质粒GSK3β-S9A;第85、86位点上赖氨酸突变为丙氨酸、失去激酶活性的GSK3β突变质粒GSK3β-KD)转染细胞,观察肾脏纤维化的标志性分子纤维连接素蛋白(fibronectin,FN)表达水平的改变,以及对TGF-β/Smad信号通路的作用。结果 LiCl增加HK-2细胞GSK3β的磷酸化,抑制GSK3β的活性,同时降低了细胞基础水平和TGF-β1诱导的FN表达。过表达的GSK3β-WT增强TGF-β1诱导的FN表达,而这种效应在GSK3β-S9A转染细胞更为显著。过表达GSK3β-KD抑制TGF-β1诱导的FN表达。分析对TGF-β/Smad信号通路的作用,LiCl可以抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化,而对Smad2磷酸化水平无影响。同时,LiCl也不改变Smad3的总蛋白表达。结论 GSK3β通过TGF-β1/Smad3信号通路促HK-2细胞纤维化,抑制GSK3β可以抗纤维化。     

血根碱通过TGF-β1/Smad通路抑制化疗耐药性宫颈癌细胞的增殖

【目的】观察血根碱对人宫颈癌耐药细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】建立顺铂（DDP）耐药的Hela细胞（HeLa/DDP）模型,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定HeLa/DDP细胞增殖能力,采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测HeLa/DDP细胞转化生长因子（TGF）-β1/Smad通路相关蛋白TGF-β1、Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)和p15的蛋白表达水平。在拯救实验中,观察TGF-β1预处理对血根碱诱导HeLa/DDP细胞增殖抑制和TGF-β1/Smad信号失活的改变。【结果】宫颈癌Hela/DDP细胞模型成功建立,血根碱抑制HeLa/DDP细胞增殖并下调了TGF-β1、p-Smad2/Smad2和p15蛋白表达水平（P<0.05）。TGF-β1预处理缓解了血根碱诱导的HeLa/DDP细胞增殖抑制和TGF-β1/Smad通路的失活（P<0.05）。【结论】血根碱可通过TGF-β1/Smad通路抑制DDP耐药宫颈癌细胞的增殖。     

拓展利用病案资源 突出病案服务功能

从病案信息利用的范围及病案信息利用的管理两大方面阐述了病案在信息时代所处的地位及其利用价值,同时就拓展病案利用价值提出了一些建议。     

服务创新是提升病案质量的保证

病案服务创新是病案工作持续发展的根本动力。病案服务创新要做到服务观念创新,服务内容创新,服务方式创新,服务机制创新。服务创新,由被动服务向主动服务转变,由单一服务向全面服务转变,由一般服务向深层次服务转变,从而更好地为医院各项建设服务。     

病案信息管理发展趋势

目的探索病案信息管理未来发展方向。方法将病案信息管理过程中所涉及的问题进行分析。结果病案信息管理在医疗、教学、科研、医院管理、医疗保险、法律等起着举足轻重的作用。结论病案信息管理发生显著的变化,向数字化、高智能化的电子病案方向发展。     

强迫症的亚型探讨与疗效比较

目的：探讨认知行为心理治疗（CBT）在强迫症（OCD）患者各亚型治疗中的有效性和规律性。方法：本研究为临床对照研究。符合入组标准的强迫症患者按患者自愿原则分为两组,治疗观察3、6个月。疗效评定分别运用Yale-Brown强迫量表,自拟的自评好转程度量表和临床疗效评定。结果：认知行为心理治疗合并药物治疗组31例,临床有效率70.9%,其中治愈率1.8%。单纯药物治疗组24例,临床有效率33.3%。Yale-Brown强迫量表在6个月两组有显著性差异（P〈0.05）。其中强迫症亚型（怕脏型、反复检查型和反复担心型）的疗效比较,怕脏型在治疗3个月末两组间自评量表评分有显著性差异（P〈0.05）;反复担心型在治疗6个月末两组间Yale-Brown强迫量表总分有显著性差异（P〈0.05）;反复检查型两组间无统计学差异。结论：认知行为心理治疗合并药物治疗强迫症的疗效明显优于单纯药物治疗。强迫症的亚型在治疗中的有效性次序为：反复担心型〉怕脏型〉反复检查型。     

罗格列酮在多囊卵巢综合征促排卵周期中的疗效探讨

目的:探讨罗格列酮(Rosiglitazone)对有胰岛素抵抗的多囊卵巢患者促排卵治疗的影响.方法:133例临床上有PCOS(多囊卵巢综合征)表现的不孕患者通过OGTT(口服葡萄糖耐量实验)、胰岛素及C肽释放实验,检出胰岛素抵抗(IR)患者81例.将81例病人随机分为A、B、C三组,分别给予促排卵药、罗格列酮、罗格列酮与促排卵药合用,共治疗2个月经周期,比较三组用药前后及用药后三组间的Homa IR(胰岛素抵抗指数)、FFA(游离脂肪酸)、TNFα(肿瘤坏死因子)和排卵率的变化.结果:用罗格列酮治疗前后患者的Homa IR指数、血清FFA和TNFα明显下降(P＜0.05).罗格列酮与促排卵药合用排卵率明显优于单用促排卵药(P＜0.05)和单用罗格列酮(P＜0.005).结论:罗格列酮能有效地改善胰岛素抵抗,提高促排卵成功率.     

谈文学审美过程对医务人员自身素质的影响

文学是为满足人的审美需求而产生、存在和发展的。文学以其对美的寻求、揭示、建构和表现,丰富着人们的精神世界,彰显着自身存在的价值。正如席勒所说：＂审美是人性的完成＂。文学和医学是两种互补的认识方式,文学可以说是医学的原动力。文学审美过程是促使医务人员自我完善的过程,可以提高医务人员的综合素质;促进医务人员的医患伦理建构。     

探索病案质检工作的新模式

目的通过探讨病案质检工作的新思路、新方法,以达到提高病案质量,从而提高医疗质量的目的。方法运用现代医院管理的理论知识,结合病案质检的实际将理论知识融于实践之中。结果改进了病案质检的工作模式,由单一质检转变为多元化工作模式。结论环节病历质量、终末病历质量都得到了很大提高,同时强化了临床的质量意识和自我保护意识。     

常见脉象寸口部光电血管容积图的参数分析

为了研究不同脉象与血管容积图的关系,应用“BC－4型”定量式光电血管容积仪对432例受检者（包括正常脉象和10种常见病脉）进行寸口脉光电血管容积图检测,同步进行血流动力学参数分析。结果表明,与正常脉象比较,种种病脉在寸口脉血管容积图上均显示出各种脉象的参数特征,而血流动力学指标的变化反映了不同脉象形成的心血管病理生理特点。提示寸口部光电血管容积图参数为各类病理脉象的临床诊断提供了客观化依据。     

参加死亡病例讨论对死亡病案质控的意义

目的提高死亡病案质量、医疗质量和医护人员的法律意识。方法质量控制等有关人员参加死亡病例讨论,找出问题缺陷、总结经验、吸取教训。结果发现病案首页项目填写错误或漏填较普遍,病历不能及时完成,讨论流于形式,医师自我保护意识差。结论质控人员参加死亡讨论,有利于医护合作、医药配合、科室协作、提高病历质量及医疗质量。     

对七情病因概念的形成分析

七情作为病因概念,首见南宋·陈无择<三因方>.一般对这一概念来源的讨论,多仅追溯到<黄帝内经>中有关情志致病的论述,而对于七情病因概念中可能存在的"非<内经>"内容,讨论甚少.通过分析<三因方>中与 "七情"有关的论述,笔者认为,陈无择的七情病因概念,由<素问·举痛论>"九气"、<诸病源候论>"七气"、<礼记>"七情"以及宋明理学心性论等多种元素构成.探讨这一问题,对于认识中医学概念的建构规律,正确理解和改造现代中医学七情概念有重大意义.