糖基化终产物抗血清的制备及应用

以糖基化终产物的免疫学检测方法,检测血清或组织ＡＧＥｓ水平,为深入研究糖尿病并发症的机制打下基础。方法用纯化的ＡＧＥｓ－牛血清白蛋白免疫新西兰白兔,获取ＡＧＥｓ抗血清,用酶联免疫吸附法测定其效价,鉴定特异性;并用以检测糖尿病小鼠和糖尿病患者血清ＡＧＥｓ水平。     

晚期糖基化终产物在动脉粥样硬化中的作用

2型糖尿病患者动脉粥样硬化的发病率明显增高。糖尿病通过增加常规的危险因素(如血脂异常、高血压)或糖尿病特有的危险因子(如晚期糖基化终产物AGEs),促进动脉粥样硬化的发展。AGEs作为蛋白质或脂质与还原糖糖基化的终产物,在血管细胞中通过与RAGE结合促进炎症因子的表达,参与动脉粥样硬化的发展。近年来,关于AGEs及其受体(RAGE)对糖尿病动脉粥样硬化影响的研究较为深入。本文旨在对近年来有关AGEs/RAGE在糖尿病加速的动脉粥样硬化中作用的研究进展作一综述。     

甜荞麦种子提取物对糖尿病大鼠血浆及肾组织糖基化终产物的影响：剂量依赖性效应

目的：探讨具有降血糖、调血脂、改善糖耐量、抗氧化等作用的荞麦种子提取物对糖尿病大鼠血浆及肾脏中糖基化终产物形成的影响，以及量效关系效应。方法：实验于2004-03／07在华北煤炭医学院药理教研室完成。选用SD大鼠75只，随机分为5组，每组15只。①正常对照组未造成糖尿病模型，用9g／L的生理盐水80mg／kg腹腔注射。②模型对照组灌胃与正常对照组相同容积的常用水。③需造模的大鼠均禁食16h，腹腔注射链脲佐菌素80mg／kg，72h后取尾静脉血测血糖，凡空腹血糖≥15mmol／L作为糖尿病大鼠，并随机分4组，每组15只。养麦种子提取物0．1，0．2，0.4g／(kg&;#183;d)治疗组分别灌胃养麦种子提取物0．10，0．20，0．40g／kg。上述各组均每天给药1次，连续12周。末次给药后禁食12h，取尾静脉血测空腹血糖、测定血浆及肾组织匀浆上清果糖胺、糖基化终产物含量。空腹血糖测定采用葡萄糖氧化酶法。果糖胺测定按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒要求进行。糖基化终产物含量(荧光强度)测定采用荧光分光光度计完成。计量资料差异性测定采用τ检验。结果：纳入大鼠75只，每组15只，实验过程中因部分大鼠造模失败脱失，最终进入结果分析大鼠59只，正常对照组、模型对照组、荞麦种子提取物0．1，0.2，0．4g／(kg&;#183;d)治疗组分别为15，10，11，12，11只。①大鼠血糖及血浆和肾组织果糖胺含量：养麦种子提取物各剂量治疗组均明显低于模型对照组，且剂量越大，所测血及肾组织指标含量越低，呈显著剂量依赖性(P&;lt;0．05～0．01)；养麦种子提取物各剂量治疗组高于正常对照组，但无明显差异(P&;gt;0．05)；模型对照组高于正常对照组(P&;lt;0．01)。②血浆糖基化终产物水平：养麦种子提取物各剂量治疗组均低于模型对照组，随着其剂量增高，水平逐渐下降，但仅在0．40g／kg时差异明显(P&;lt;0．05)；肾组织糖基化终产物含量：养麦种子提取物各剂量治疗组均明显低于模型对照组，且剂量越大，含量越低，呈显著剂量依赖性(P&;lt;0．01)。结论：养麦种子提取物对糖尿病大鼠血浆、肾组织果糖胺的生成有明显抑制作用，对肾组织糖基化终产物产生的影响也如此，且呈显著量效关系；但对血浆非酶糖基化终产物产生抑制作用仅在高剂量时明显。     

脂质体槲皮素对糖尿病大鼠视网膜糖基化终产物生成及受体表达的影响

目的观察脂质体槲皮素（LQ）对糖尿病（DM）大鼠视网膜糖基化终产物（AGEs）生成及受体（RAGEmRNA）表达的影响。方法采用蒸发-高压均质法制备LQ悬浊液,链脲佐菌素（STZ）法诱导DM大鼠模型,并随机分为DM模型组、LQ低、中、高剂量及氨基胍灌胃组;连续给药12周后,免疫荧光法、RT—PCR方法分别检测DM大鼠视网膜中AGEs沉积情况及RAGEmRNA的表达。结果与DM模型组结果（AGEs：0．922±0．005;RAGEmRNA：1．192±0．098）比较,LQ各组及氨基胍组视网膜中AGEs沉积减少,RAGEmRNA表达也降低（P〈0．05）,以LQ中剂量组（AGEs：0．734±0．007;RAGEmRNA：0．724±0．028）降低最为明显（P〈0．01）。结论LQ可通过有效减少DM大鼠视网膜中AGEs的沉积,下调RAGEmRNA的表达。     

甜荞麦种子提取物对糖尿病大鼠血浆及肾组织糖基化终产物的影响剂量依赖性效应

目的探讨具有降血糖、调血脂、改善糖耐量、抗氧化等作用的养麦种子提取物对糖尿病大鼠血浆及肾脏中糖基化终产物形成的影响,以及量效关系效应.方法实验于2004-03/07在华北煤炭医学院药理教研室完成.选用SD大鼠75只,随机分为5组,每组15只.①正常对照组未造成糖尿病模型,用9g/L的生理盐水80 mg/kg腹腔注射.②模型对照组灌胃与正常对照组相同容积的常用水.③需造模的大鼠均禁食16 h,腹腔注射链脲佐菌素80 mg/kg,72 h后取尾静脉血测血糖,凡空腹血糖≥15 mmol/L作为糖尿病大鼠,并随机分4组,每组15只.荞麦种子提取物0.1,0.2,0.4g/(kg·d)治疗组分别灌胃荞麦种子提取物0.10,0.20,0.40g/kg.上述各组均每天给药1次,连续12周.末次给药后禁食12 h,取尾静脉血测空腹血糖、测定血浆及肾组织匀浆上清果糖胺、糖基化终产物含量.空腹血糖测定采用葡萄糖氧化酶法.果糖胺测定按南京建成生物工程研究所提供的试剂盒要求进行.糖基化终产物含量(荧光强度)测定采用荧光分光光度计完成.计量资料差异性测定采用t检验.结果纳入大鼠75只,每组15只,实验过程中因部分大鼠造模失败脱失,最终进入结果分析大鼠59只,正常对照组、模型对照组、荞麦种子提取物0.1,0.2,0.4g/(kg·d)治疗组分别为15,10,11,12,11只.①大鼠血糖及血浆和肾组织果糖胺含量荞麦种子提取物各剂量治疗组均明显低于模型对照组,且剂量越大,所测血及肾组织指标含量越低,呈显著剂量依赖性(P＜0.05～0.01);养麦种子提取物各剂量治疗组高于正常对照组,但无明显差异(P＞0.05);模型对照组高于正常对照组(P＜0.01).②血浆糖基化终产物水平荞麦种子提取物各剂量治疗组均低于模型对照组,随着其剂量增高,水平逐渐下降,但仅在0.40g/kg时差异明显(P＜0.05);肾组织糖基化终产物含量养麦种子提取物各剂量治疗组均明显低于模型对照组,且剂量越大,含量越低,呈显著剂量依赖性(P＜0.01)结论荞麦种子提取物对糖尿病大鼠血浆、肾组织果糖胺的生成有明显抑制作用,对肾组织糖基化终产物产生的影响也如此,且呈显著量效关系;但对血浆非酶糖基化终产物产生抑制作用仅在高剂量时明显.     

糖尿病鼠脑组织糖基化终产物受体mRNA的表达及二甲双胍对受损脑组织的保护

目的：测定糖尿病鼠脑组织糖基化终产物受体mRNA的表达水平和二甲双胍对其受体mRNA的调节作用。方法：实验于2004-03／06在中南大学湘雅二医院实验动物室完成。30只BALA/C小鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和二甲双胍治疗组，每组10只。正常对照组不做任何处理，糖尿病模型组和二甲双胍治疗组腹腔注射链脲佐菌素40mg／(kg&;#183;d)建立动物模型，连续5d。二甲双胍治疗组给予10mg／(kg&;#183;d)的盐酸二甲双胍治疗，1次／d，灌胃给药，共12周；糖尿病模型组给予注射用水0．5mL，时间同二甲双胍治疗组。应用反转录-聚合酶链反应法测定小鼠大脑组织糖基化终产物受体mRNA的表达，评估其在糖尿病发生氧化应激组织中的水平和其介采脑组织损伤的作用。结果：30只小鼠全部进入结果分析。①糖尿病模型组实验鼠大脑组织糖基化终产物受体mRNA呈高表达，其糖基化终产物受体／β-actin相对值明显高于对照组(0．153&;#177;0．054，0)。②应用二甲双胍治疗后，其大脑组织糖基化终产物受体mRNA表达较模型组显著减少，糖基化终产物受体／B-actin相对值显著低于糖尿病模型组(0．083&;#177;0.026，0．153&;#177;0．054．τ=2．296,P&;lt;0．05)。结论：糖尿病鼠大脑组织糖基化终产物受体mRNA呈高表达，而二甲双胍除降低血糖外，还可显著下调其大脑组织糖基化终产物受体mRNA的高表达，从而降低糖基化终产物受体介导的神经元细胞生物反应和脑组织的氧化应激损伤，保护高血糖及缺血缺氧状态下的受损脑组织。     

黄精多糖对糖尿病鼠心、肾组织糖基化终产物受体mRNA表达的调节

背景：黄精是一种传统的抗衰老中药，其有效成分黄精多糖具有降低血糖和糖化血红蛋白的作用。目的：采用反转录聚合酶链反应测定黄精多糖对蛋白非酶糖基化的关键物质一糖基化终产物受体mRNA表达的调节作用，为开发有效的蛋白非酶糖基化抑制剂和防治糖尿病及其并发症提供实验依据。设计：随机对照动物实验。单位：中南大学湘雅二医院老年病科，中南大学湘雅医学院附属海口医院心内科。材料：实验于2004-03／2004—06在中南大学湘雅二医院实验动物室完成。选用清洁级BALB／C小鼠30只．随机分为正常对照组、模型对照组、黄精多糖治疗组，10只／组。方法：模型对照组、黄精多糖治疗组腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，血糖≥8．0mmoL／L为造模成功。黄精多糖治疗组予以2mL/（kg&;#183;d）的黄精多糖，正常对照组、模型对照组予以注射用水0．5mL，1次／d灌胃给药，连续12周。给药完毕后断头处死小鼠，采用反转录-聚合酶链反应法测定各组实验动物心脏、肾组织糖基化终产物mRNA的表达。主要观察指标：①造模12周后各组小鼠大体情况观察。②造模前后各组小鼠血糖的变化。③各组小鼠心脏、肾组织糖基化终产物受体mRNA凝胶电泳图谱。④各组小鼠心脏、肾组织糖基化终产物受体的半定量测定。结果：实验选用30只小鼠，全部进入结果分析。①造模12周后各组小鼠大体情况观察：正常对照组体质量增加，活动自如；模型对照组出现消瘦、多尿、精神萎靡不振、反应迟钝等情况：黄精多糖治疗组多尿症状较轻，反应动作较模型对照组灵敏。②造模前后各组小鼠血糖的变化：正常对照组和模型对照组造模前后血糖基本相似（P〉0．05），黄精多糖治疗组造模12周后血糖显著降低【（10．05&;#177;1．16），（7．18&;#177;0．84）mmoL／L，P〈0．05]。③各组小鼠心脏、肾组织糖基化终产物受体mRNA凝胶电泳图谱：模型对照组小鼠心、肾组织糖基化终产物受体mRNA的表达较正常对照组增高，而黄精多糖治疗组的表达较模型对照组明显降低。④各组小鼠心脏、肾组织糖基化终产物受体的半定量测定：模型对照组心、肾组织糖基化终产物受体／β-aetin相对值显著高于正常对照组（P〈0．01）；而黄精多糖治疗组其相对值较模型对照组显著降低（0．760&;#177;0．121，0．998&;#177;0．202；0．609&;#177;0．146，0．765&;#177;0．113；P均〈0．05）。结论：黄精多糖除可降低血糖外，还可显著下调糖尿病鼠心、肾组织糖基化终产物受体mRNA的高表达，进而抑制糖基化终产物的结合位点及与其受体结合后的一系列细胞生物反应，保护高血糖时受损的靶器官和组织。     

谷胱甘肽对糖基化终产物诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖作用和还原型谷胱甘肽(GSH)对AGEs介导的动脉平滑肌细胞增殖作用的抑制机制。方法以体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞为实验模型,分为8组,每组12孔,每孔细胞密度1×105/ml,与不同浓度的AGEs共同培养,并用不同浓度的GSH干预。分别用噻唑蓝(MTT)比色法测定血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和用ELISA测定细胞的磷酸化p38丝裂原蛋白激酶(p-p38 MAPK)的浓度来探讨平滑肌增殖的机制和干预因素。结果 (1)AGEs对VSMC MTT吸光度的影响:经过AGEs干预,B、C、D组(吸光度值分别为0.43±0.15,0.49±0.16,0.48±0.18)与对照组比较,VSMC MTT的吸光度值增高(P<0.01)。但随着AGEs浓度增加,B、C、D组间MTT吸光度值差异无统计学意义(P>0.05)。(2)GSH对AGEs干预的VSMC MTT吸光度的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组(吸光度值分别为0.35±0.10,0.33±0.11,0.28±0.08)与AGEs(25 mg/L)对照组比较,MTT吸光度值下降(P<0.01)。但随着GSH浓度增加,F、G、H组组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)AGEs对VSMC内p-p38 MAPK的影响:经过AGEs干预后,p-p38 MAPK吸光度值增加(P<0.01),B组(0.65±0.17)、C组(0.85±0.26)、D组(0.94±0.17)分别为对照组(0.26±0.06)的2.5、3.2和3.6倍(P<0.01)。随AGEs浓度增加,C、D组与B组相比,p-p38 MAPK显著增加(P<0.01)。(4)GSH对AGEs干预的VSMC内p-p38 MAPK的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组(吸光度值分别为0.36±0.09,0.28±0.07,0.26±0.07)与B组即AGEs对照组比较,p-p38 MAPK吸光度降低(P<0.01),与对照组相比分别下降45%、56%和60%(P<0.01)。随着GSH浓度增加,G、H组与F组相比,p-p38 MAPK逐渐降低(P<0.01)。结论 (1)AGEs具有促进VSMC增殖的作用,其作用机理可能与激活了p-p38 MAPK信号传导通路有关。(2)GSH对AGEs介导的VSMC增殖具有抑制作用,其作用机制可能与抑制了p-p38 MAPK信号传导通路有关。     

饮食中晚期糖基化终产物对健康SD大鼠肾脏的影响

目的：观察食物中蛋白质的氨基与糖的醛基之间非酶性糖化反应的终产物晚期糖基化终产物对健康SD大鼠肾脏的影响。方法：实验于2005-03／07在南方医科大学肾内科实验室和南方医科大学附属南方医院动物实验中心完成。①分组及干预：选用健康雄性SD大白鼠40只，使用数字表法随机将大鼠分为两组：高晚期糖基化终产物饲料组，喂饲高晚期糖基化终产物饲料；低晚期糖基化终产物饲料组，喂饲低晚期糖基化终产物饲料。②高、低晚期糖基化终产物大鼠饲料的制作：普通大鼠饲料由广东省实验动物中心提供。高晚期糖基化终产物大鼠饲料加工方法：新鲜烤制的面包，取面包皮在烤箱烤180℃，2h，90℃，22h后，与普通大鼠饲料1：1混合压制成颗粒饲料；低晚期糖基化终产物大鼠饲料：新鲜烤制的面包，取面包芯室温自然风干后与普通大鼠饲料1：1混合后压制成颗粒饲料。③标本收集：分两批分别于干预后第2，3个月处死，收集24h尿液．腹主动脉抽血、留取部分肾组织。④检测指标：考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量；自动生化分析仪测定肾功能、血脂、血糖及白蛋白水平；肾组织经固定、脱水、石蜡包埋、切片后行苏木精-伊红和PAS染色，观察组织病理改变。结果：大鼠40只均进入结果分析。①高晚期糖基化终产物饲料组大鼠血清及肾组织匀浆羧甲基赖氨酸含量自高于后第2个月即开始增加，至第3个月显著高于低晚期糖基化终产物饲料组大鼠（血清：16．1，7．8μg／L；肾组织匀浆：31.3，14．2μg／g；P〈0．01）②至干预后第3个月，高晚期糖基化终产物饲料组大鼠24h尿蛋白含量显著高于低晚期糖基化终产物饲料组（54．54，11．51mg／24h，P〈0．01）。③干预后第3个月肾组织病理学观察显示，高晚期糖基化终产物饲料组大鼠肾小球体积增大，系膜基质增生，表现为肾小球PAS阳性染色面积占整个肾小球面积之比值增大，显著高于低晚期糖基化终产物饲料组（肾小球体积：1．59&;#215;10^6，1．02&;#215;10^6mm^3，P〈0．05；系膜基质：0．87，0．53，P〈0．05）。结论：高晚期糖基化终产物食物加重健康SD大鼠血循环和肾组织晚期糖基化终产物的潴留程度，增加肾组织损害，在肾小球肥大和硬化中起着关键性作用。长期食用富含晚期糖基化终产物的食物可能会对肾脏造成一定的损害。     

糖尿病鼠脑组织糖基化终产物受体mRNA的表达及二甲双胍对受损脑组织的保护

目的:测定糖尿病鼠脑组织糖基化终产物受体mRNA的表达水平和二甲双胍对其受体mRNA的调节作用。方法:实验于2004-03/06在中南大学湘雅二医院实验动物室完成。30只BALA/C小鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和二甲双胍治疗组,每组10只。正常对照组不做任何处理,糖尿病模型组和二甲双胍治疗组腹腔注射链脲佐菌素40mg/(kg·d)建立动物模型,连续5d。二甲双胍治疗组给予10mg/(kg·d)的盐酸二甲双胍治疗,1次/d,灌胃给药,共12周;糖尿病模型组给予注射用水0.5mL,时间同二甲双胍治疗组。应用反转录-聚合酶链反应法测定小鼠大脑组织糖基化终产物受体mRNA的表达,评估其在糖尿病发生氧化应激组织中的水平和其介采脑组织损伤的作用。结果:30只小鼠全部进入结果分析。①糖尿病模型组实验鼠大脑组织糖基化终产物受体mRNA呈高表达,其糖基化终产物受体/β-actin相对值明显高于对照组(0.153±0.054,0)。②应用二甲双胍治疗后,其大脑组织糖基化终产物受体mRNA表达较模型组显著减少,糖基化终产物受体/β-actin相对值显著低于糖尿病模型组(0.083±0.026,0.153±0.054,t=2.296,P<0.05)。结论:糖尿病鼠大脑组织糖基化终产物受体mRNA呈高表达,而二甲双胍除降低血糖外,还可显著下调其大脑组织糖基化终产物受体mRNA的高表达,从而降低糖基化终产物受体介导的神经元细胞生物反应和脑组织的氧化应激损伤,保护高血糖及缺血缺氧状态下的受损脑组织。     

血清糖化白蛋白与内源性分泌型糖化终末产物受体比值对糖尿病并发冠心病危险的评估价值

目的 测定糖尿病及糖尿病并发冠心病患者血清糖化白蛋白（GA）和内源性分泌型糖化终末产物受体（es-RAGE）水平,探讨GA与esRAGE比值对判断糖尿病并发冠心病和冠状动脉病变严重程度的价值。方法 入选单纯2型糖尿病患者64例（糖尿病组）,2型糖尿病合并冠心病患者70例（糖尿病合并冠心病组）,并根据冠状动脉病变支数分为三个亚组：一支病变组（22例）,两支病变组（19例）和三支病变组（29例）。以42例健康者为对照（对照组）。测定各组血清GA和esRAGE水平,计算GA/esRAGE比值。结果 糖尿病合并冠心病组GA（21.30±5.22）%和GA/esRAGE比值（2.03±2.26）明显高于单纯糖尿病组（19.11±4.45）%和（1.12±1.44）（均P〈0.05）及对照组（14.13±1.38）%（P〈0.01）和（0.90±1.77）（P〈0.05）,而糖尿病合并冠心病组esRAGE（0.21±0.17）明显低于单纯糖尿病组（0.32±0.30,P〈0.05）和对照组（0.56±0.57,P〈0.01）。GA/esRAGE比值与冠状动脉病变支数显著相关（rs=0.474,P〈0.001）。结论 GA与esRAGE比值对判断糖尿病时冠状动脉病变严重程度具重要临床价值。     

吡哆胺对体外晚期糖基化及其终产物形成的抑制作用

目的体外观察吡哆胺对晚期糖基化和晚期糖基化终产物(AGEs)形成的抑制作用。方法应用牛血清白蛋白-葡萄糖试验和N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖两种体外试验,观察吡哆胺对糖基化反应及AGEs形成的抑制效果。结果牛血清白蛋白-葡萄糖试验显示,吡哆胺对糖基化反应具有明显抑制效果。在50 mmol/L和200 mmol/L葡萄糖浓度下,当吡哆胺浓度为50 mmol/L时,相对抑制率均在50%以上。200 mmol/L吡哆胺对糖基化的抑制作用最强,其相对抑制率分别达到92.12%和86.73%。N-乙酰-甘氨酰-赖氨酸甲基酯-核糖试验证明,吡哆胺能明显抑制晚期糖基化产物AGEs的形成。随着吡哆胺剂量的增大,吡哆胺对AGEs形成的抑制作用明显增强。结论吡哆胺对体外晚期糖基化反应和AGEs形成有明显抑制作用。     

氧化应激和糖基化终末产物在2型糖尿病心肌病变中的作用及其相关性

目的研究氧化应激因素和糖基化终末产物(AGEs)在2型糖尿病(T2DM)心肌病变(DCM)的作用及其相关性。方法选择泰安地区的T2DM患者78例,根据超声心动图、冠状动脉造影等情况,分为单纯T2DM组40例,DCM组38例,另选取正常对照组(NC)40例。测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GHS-PX)等氧化应激指标和糖基化终末产物(AGEs),进行数据统计,并进行相关性分析。结果 T2DM组SOD、NO、GHS-PX较NC组均明显下降,MDA、AGEs则较NC组均明显升高;而DCM组较T2DM组SOD、GHS-PX明显下降,MDA、AGEs明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01),而血清NO水平T2DM组较NC组下降,DCM组再次升高,且高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论氧化应激因素和AGEs在DCM的进展中均有重要作用,促进DCM的发生和发展,且二者之间有相关性,SOD的下降和MDA的升高是AGEs的独立相关因素。     

Targeting the receptor for advanced glycation end products (RAGE) in type 1 diabetes

Type 1 diabetes (T1D) is one of the most common chronic diseases manifesting in early life, with the prevalence increasing worldwide at a rate of approximately 3% per annum. The prolonged hyperglycaemia characteristic of T1D upregulates the receptor for advanced glycation end products (RAGE) and accelerates the formation of RAGE ligands, including advanced glycation end products, high-mobility group protein B1, S100 calcium-binding proteins, and amyloid-beta. Interestingly, changes in the expression of RAGE and these ligands are evident in patients before the onset of T1D. RAGE signals via various proinflammatory cascades, resulting in the production of reactive oxygen species and cytokines. A large number of proinflammatory ligands that can signal via RAGE have been implicated in several chronic diseases, including T1D. Therefore, it is unsurprising that RAGE has become a potential therapeutic target for the treatment and prevention of disease. In this review, we will explore how RAGE might be targeted to prevent the development of T1D.     

糖基化终产物及脂代谢紊乱与糖尿病神经病变的相关分析

目的探讨糖基化终产物(advanced glycosyl end products,AGEs)及脂质代谢紊乱与糖尿病外周神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的关系。方法设立DPN病变组及无糖尿病神经病变组(NDPN),其中DPN患者84例,NDPN患者93例;对该177例2型糖尿病患者血清AGEs水平及脂质代谢各项指标检测结果进行回顾性分析。结果DPN组较NDPN患者的血清AGEs水平显著升高,(19.7±3.1)mg/L vs(14.4±2.4)mg/L(P<0.05),DPN组患者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和载脂蛋白B(ApoB)水平均显著高于NDPN组,分别为(5.6±1.8)mmol/L vs(3.1±1.2)mmol/L,(2.4±2.1)mmol/L vs(1.5±0.9)mmol/L,(3.7±0.9)mmol/L vs(2.1±0.7)mmol/L,(1.2±0.9)g/L vs(0.7±0.3)g/L(均P<0.05);DPN患者的尿微量白蛋白(U-MA)排泄率水平较NDPN组显著升高,(90.9±193.5)mg/g vs(28.4±35.4)mg/g(P<0.01);多因素线性相关分析显示血清AGEs水平血清TC、TG、ApoB和LDL-C水平呈正相关(r值分别为0.58、0.52、0.54和0.63,均P<0.01)。结论AGEs大量生成和堆积、脂质代谢紊乱及二者间的相互作用是2型糖尿病患者并发DPN的重要危险因素,提示AGEs、脂质代谢紊乱可能参与糖尿病神经病变的发生发展过程。     

Development of an automated immunoassay for advanced glycosylation end products in human serum

OBJECTIVE: Nonenzymatic reaction of protein and carbohydrate produce a series of brown fluorescent advanced glycosylation end products (AGEs). However, a convenient and rapid assay for serum AGEs level is currently unavailable.METHODS: We raised AGEs-specific polyclonal antibodies, which were used to develop a fully automated, noncompetitive, homogeneous, light-scattering immunoassay for serum AGEs.RESULTS: The assay requires a sample volume of 2 microL and takes a reaction time of 2 min. The coefficient of variation range from 1.8 to 6.1%, and the mean recovery rate was 98.6%. Comparative analysis shows moderate correlation with competitive ELISA (r = 0.8209, n = 52). The mean +/- SD concentration of AGEs in young and in older healthy subjects were 4.6 +/- 1.5 (n = 39) and 4.9 +/- 1.4 (n = 40), respectively. The level of AGEs was significantly higher in serum from patients with type II DM 7.8 +/- 4.8 (n = 89) than that from the normal subjects (p < 0.05).CONCLUSIONS: The automatic immunoassay for AGEs is appropriate for clinical use.     

糖尿病前期患者晚期糖基化终末产物受体与氧化应激的关系

目的 通过测定糖耐量正常者、糖尿病前期及糖尿病患者血浆可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)、内源性分泌型晚期糖基化终末产物受体(esRAGE)及氧化应激的水平,探讨糖尿病前期血浆sRAGE、esRAGE水平的变化与氧化应激的相关性,为深入了解糖尿病前期血管并发症的发病机制提供依据.方法 研究对象均行75 g标准口服葡萄糖耐量实验(OGTT)和胰岛素释放试验,按血糖水平分为糖耐量正常(NGT)组、糖尿病前期(Pre-DM)组、糖尿病(DM)组,采用酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测血浆sRAGE、esRAGE、8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α);硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA),羟胺法测定超氧物岐化酶(SOD),比色法测定血浆总抗氧化能力(TAOC).结果 Pre-DM组和DM组的sRAGE、esRAGE、SOD水平明显低于NGT组,Pre-DM组和DM组的8-iso-PGF2α、MDA水平明显高于NGT组,差异均有统计学意义(P＜0.05);Pre-DM组和NGT组的TAOC水平明显高于DM组(P＜0.05);血浆esRAGE水平与sRAGE、TAOC呈正相关(r=0.39、0.64,P＜0.05),与MDA呈负相关(r =-0.45,P＜0.05),与年龄、体质量指数(BMI)、收缩压、舒张压、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、8-iso PGF2α无明显相关性(P＜0.05).结论 糖尿病前期患者已发生sRAGE、esRAGE及氧化应激水平的改变,sRAGE、esRAGE在机体氧化应激与抗氧化防御平衡间可能发挥重要作用.     

晚期糖基化终产物在β样淀粉蛋白25-35诱导PC12细胞氧化损伤中的作用

目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)在β样淀粉蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞氧化损伤中的作用。方法将实验对象分为五组:10、20、304、0μmol/L四种浓度的Aβ25-35干预组和正常对照组。采用MTT法测定细胞生存率,采用ELISA法测定AGEs的含量。结果Aβ25-35诱导PC12细胞,细胞生存率为50%时,Aβ25-35浓度约为30μmol/L;与正常对照组相比,30μmol/L Aβ25-35干预组细胞生存率明显降低(P<0.001)、细胞内AGEs含量明显升高(P<0.05)。结论AGEs参与了β样淀粉蛋白25-35诱导PC12细胞氧化损伤的过程。