阿霉素单用及联用维拉帕米对OS732细胞毒性作用的机制

目的 探讨阿霉素对OS732细胞的毒性作用，维拉帕米是否对阿霉素有增效作用及其作用机制。方法 用MTT法检测肿瘤细胞存活率，比较单用阿霉素及联用维拉帕米对OS732细胞的毒性作用；以流式细胞仪方法检测阿霉素及联用维拉帕米诱导后不同时间点OS732细胞多药耐药指标（Pgp,TopoⅡ和GSTπ）表达情况；以琼脂凝胶电泳法观察阿霉素单用及联用维拉帕米诱导后不同时间点OS732细胞抽取DNA的电泳图；流式细胞仪方法检测阿霉素及联用维拉帕米诱导后OS732细胞凋亡相关因子CD95及Bax蛋白的表达情况。结果 （1）随阿霉素的浓度递增，OS732细胞的存活率呈下降趋势，即阿霉素对OS732细胞生长抑制率呈浓度相关性。同剂量阿霉素对OS732细胞随作用时间延长，细胞存活率下降，但这种趋势并不随时间延长而等幅递增。维拉帕米增强阿霉素对OS732细胞的毒性作用。（2）阿霉素可使OS732细胞获得性耐药，且这种获得性耐药与Pgp,TopoⅡ和GSTπ有关。Pgp和GSTπ表达存在相关性。阿霉素诱导后OS732细胞Pgp和GSTπ表达随时间延长而上调。维拉帕米延缓乃至下调了Pgp的表达。而对TopoⅡ及GSTπ无类似作用。（3）促进肿瘤细胞亡是阿霉素的抑瘤机制之一，且与Fas介导的细胞凋亡途径有关。与Bax途径无关。阿霉素诱导的OS732细胞凋亡呈时间依赖性。维拉帕米可促进阿霉素诱导的OS732细胞凋亡。结论 维拉帕米使阿霉素对OS732细胞的毒性作用增强。临床上应用阿霉素化疗时，更宜选用持续性静脉滴注给药，且以维持48h为宜。阿霉素作用后，OS732细胞获得性耐药与Pagp,TopoⅡ和GST－π有关。阿霉素对OS732细胞毒性作用与它能促进细胞凋亡有关，而维拉帕米延缓Pgp介导的多药耐药的同时促进阿霉素诱导的细胞凋亡。因此，通过促进肿瘤细胞凋亡来实现肿瘤化疗多药耐药的逆转是一条有效途径，本研究为进一步进行肿瘤分子这治疗的研究提供实验基础。     

阿霉素单用或联用维拉帕米对OS732细胞的毒性作用

目的 探讨阿霉素单用及联用维拉帕米对骨肉瘤细胞株（OS732细胞）的毒性作用。方法 用MTT比色法检测按不同浓度梯度阿霉素或联用维拉帕米干预OS732细胞24，48，72h 后的细胞活性；用流工细胞仪检测阿霉素单用及联用维拉帕米干预OS732细胞2，12，24，48及72h后Fas抗原（CD95）表达率，结果 阿霉素对OS732细胞的毒性作用呈剂量依赖关系，但并不随时间增加等幅增加，无细胞毒作用的维拉帕米对阿霉素有增效作用。结论 联用维拉帕米对阿霉素的增效作用可能与促细胞凋亡作用有关。     

康莱特联合顺铂高效杀伤骨肉瘤细胞

目的 研究康莱特联合顺铂对骨肉瘤细胞的杀伤作用及其相关机制，探寻骨肉瘤的中西医结合化疗方案。方法 免疫组化及RT—PCR方法检测不同浓度康莱特作用下骨肉瘤OS732细胞的Fas表达，并将康莱特与顺铂单独及联合应用于OS732细胞，采用MTT法检测细胞毒性作用，流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例，相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变。结果 康莱特可上调OS732细胞的Fas表达并诱导凋亡，10μL／mL康莱特与1μg／mL顺铂合用于OS732细胞的抑制率与各自单用时相比明显提升（P〈0．01）。细胞形态观察及凋亡率测定也显示，康莱特与顺铂联用可诱导更多OS732细胞凋亡。结论 康莱特可协同顺铂高效杀伤骨肉瘤细胞，这可能与康莱特上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

γ干扰素上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其相关机制。方法将IFN-γ应用于体外培养的骨肉瘤OS732细胞,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜、荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变。并采用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测不同浓度IFN-γ作用下OS732细胞的Fas表达。结果IFN-γ对OS732有显著抑制作用,细胞形态观察及凋亡率测定也显示,IFN-γ可诱导骨肉瘤细胞凋亡;IFN-γ可上调OS732细胞的Fas表达,且调节作用呈浓度依赖性(P<0.01)。结论IFN-γ可诱导OS732细胞凋亡,这可能与其上调OS732细胞的Fas表达有关。     

5aza2dc联合化疗药物诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨氮杂脱氧胞苷(5aza2dc)联合化疗药物对骨肉瘤疗效的影响。方法:5aza2dc、阿霉素(DOX)及两药联用处理人骨肉瘤OS732细胞24h和48h,MTT法测试细胞毒性,倒置相差显微镜、透射电镜下形态学观察。结果:0.2μmol/L的5aza2dc与1PPC的DOX联合应用24h后,肿瘤抑制率明显高于单用药组(P<0.01)。联用48h见大量细胞脱落悬浮于培养液中。电镜观察可见核固缩、核染色质边集及凋亡小体。结论:骨肉瘤OS732细胞对5aza2dc不敏感。DOX增强OS732细胞对5aza2dc的敏感性。     

抗甲胎蛋白单链抗体与阿霉素联合对人肝癌细胞Huh7增殖的抑制作用

探讨抗人甲胎蛋白(AFP)单链抗体和阿霉素(DOX)单用或联用对人肝癌细胞Huh7细胞增殖的抑制作用。采用MTT法检测抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联合作用对Huh7细胞增殖的影响;采用Annexin V/PI荧光双染法检测抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联合作用对Huh7细胞凋亡的影响;采用PI单染法检测抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联合作用对Huh7细胞周期分布的影响。结果表明,抗AFP单链抗体、阿霉素单药组与联用组均能有效抑制Huh7细胞增殖,呈剂量依赖性,且两药联用具有协同效应;抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联用均可诱导细胞凋亡且抗AFP单链抗体(40 μg/mL)与阿霉素(0.25 μg/mL)联合组凋亡率明显高于单独给药组,具有统计学意义(P<0.05);抗AFP单链抗体(40 μg/mL)单独作用后,Huh7的细胞周期阻滞于G₀/G₁期,阿霉素(0.25 μg/mL)单独作用Huh7的细胞周期阻滞于S期,而当两种药物联用时,Huh7的细胞周期被阻滞于G₂/M期,抑制细胞增殖。     

丙戊酸钠增强阿霉素的体外抗乳腺癌作用

目的观察丙戊酸钠对阿霉素体外抗乳腺癌Hs578T细胞作用的影响。方法Western blot 检测缝隙连接蛋白Cx43 的表
达;MTT法检测阿霉素的细胞毒性;Annexin V/PI双染法观察阿霉素对细胞早期凋亡的影响;Hochest 33258荧光染色法检测阿
霉素对细胞晚期凋亡的影响。结果Western blot结果显示丙戊酸钠可以显著增强缝隙连接蛋白Cx43的表达（P<0.01）;MTT结
果表明在细胞间缝隙连接功能形成的条件下,丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞存活率显著低于阿霉素组（P<0.01）;Annexin V/PI
双染法显示丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞早期凋亡率显著高于阿霉素组（P<0.01）;Hochest 33258荧光染色结果显示丙戊酸钠
联用阿霉素组的细胞晚期凋亡率显著高于单用阿霉素组（P<0.01）。结论丙戊酸钠可显著增强阿霉素的细胞毒性及其诱导的
细胞凋亡作用,其机制可能与增强缝隙连接通讯功能有关。
     

蟾蜍灵联合阿霉素对人肺癌A549细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：探讨天然药物蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影 响。方法：采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT )法观察蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对A549细胞增 殖的影响;采用赫斯特(Hoechst 33342)染色法观察细胞核形态变化;采用流式细胞仪检测蟾蜍灵、阿霉素以及两者联 用对A549细胞凋亡和细胞周期的影响;采用Western印迹检测凋亡蛋白的表达。结果：蟾蜍灵和阿霉素单独用药均能 抑制A549细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖关系;与蟾蜍灵和阿霉素单独用药相比,1,20,100 nmol/L蟾蜍灵分别 与1.0 μg/mL阿霉素联合作用A549细胞24,48,72 h的抑制率显著升高(均P<0.05)。蟾蜍灵和阿霉素均可在一定程度上 诱导细胞凋亡,两药联用后诱导细胞凋亡作用显著增强。蟾蜍灵和阿霉素联用可将细胞周期阻滞在S期,并上调凋亡 蛋白caspase-3的表达。结论：蟾蜍灵联合阿霉素可显著抑制A549细胞的增殖,其抗肿瘤的机制可能与诱导细胞凋亡、 细胞周期S期阻滞及凋亡蛋白caspase-3的上调有关。     

雷公藤甲素对人骨肉瘤细胞阿霉素耐药株的逆转作用及机制研究

目的:探讨雷公藤甲素(TPL)体外给药对人骨肉瘤细胞阿霉素(ADR)耐药株(U2 OS/ADR)多药耐药(MDR)的逆转作用及可能机制.方法:使用人骨肉瘤细胞株U2 OS,利用浓度递增法建立耐药骨肉瘤细胞U2 OS/ADR模型.设置空白组、对照组、TPL组和维拉帕米阳性对照组(VER组).CCK-8法测定TPL处理对U...     

R-型维拉帕米逆转肿瘤细胞多药耐药的实验研究

目的 :检测 R-型维拉帕米 (R- Verapamil)体外逆转肿瘤细胞多药耐药的作用及动物毒性 ,探讨 R-型维拉帕米成为未来化疗增敏剂的可能性。　方法 :细胞毒性的测定用 MTT法 ,细胞内阿霉素积蓄的测定用荧光分光光度法。动物毒性试验用 BAL B/ c小鼠腹腔注射法。　结果 :1 .2 5 μm ol/ L 的 R-型维拉帕米即可显著增加耐药 KBv2 0 0细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性 (P<0 .0 1 ) ,其效应与作用浓度有关。在增敏和增加细胞内阿霉素积蓄方面 ,R-型维拉帕米与混旋维拉帕米效果一样 ,但 R-型维拉帕米的动物毒性低于混旋维拉帕米。　结论 :1 .2 5 μm ol/ L 的R-型维拉帕米能部分逆转耐药 KBv2 0 0细胞的多药耐药性。此浓度能被人体所接受。R-型维拉帕米有望成为未来的化疗增敏剂     

艾迪协同依托泊苷诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究中药制剂艾迪对骨肉瘤化疗的增效作用及其相关机制.方法 将艾迪与依托泊苷单独及联合应用于骨肉瘤OS732细胞,用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变,免疫细胞化学技术分析凋亡相关蛋白Fas表达.结果 艾迪与依托泊苷对骨肉瘤细胞都有剂量依赖性杀伤作用,艾迪浓度达到25μ 1/mL时,细胞抑制率为38.47％,再增加艾迪浓度抑制率不再明显改变,但如与1μg/mL依托泊苷合用将使细胞抑制率进一步提升为51.62％(P＜0.01).细胞超微结构观察及凋亡率测定也显示,艾迪与依托泊苷联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡,且联用时骨肉瘤Fas表达明显提升(P＜0.01).结论 艾迪与小剂量依托泊苷合用与单用依托泊苷相比可更高效杀伤骨肉瘤细胞,此作用与上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关.     

塞来昔布与阿霉素对Raji细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的：观察塞来昔布(celecoxib)单用及联合阿霉素(adriamycin, ADM)对Raji细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法测塞来昔布单用或联合阿霉素干预后Raji细胞的增殖率;流式细胞技术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测caspase-9 mRNA变化;免疫组织化学法检测caspase-9蛋白的表达。结果：20~100 μmol/L塞来昔布干预Raji细胞后,随药物浓度增高细胞增殖率减低,凋亡率增高(P＜0.05)。联合阿霉素干预后细胞增殖率减低,凋亡率增高,与塞来昔布单用比差异有统计学意义(P＜0.05);且伴随细胞caspase-9 mRNA和蛋白的表达增高。结论：塞来昔布可抑制Raji细胞增殖,呈剂量和时间依赖;可诱导Raji细胞凋亡,伴有caspase-9的激活;塞来昔布联合小剂量阿霉素后以上作用增强。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

钙通道阻滞剂维拉帕米对甲基苯丙胺所致大鼠小脑神经细胞凋亡的抑制作用

目的:研究维拉帕米对甲基苯丙胺(MA)导致神经细胞损伤的影响,探讨维拉帕米的保护机制.方法:采用MTT法,乳酸脱氢酶(LDH)法,观察MA的神经毒性作用.运用DNA电泳法、流式细胞仪法,观察MA致神经细胞凋亡的作用,并研究了维拉帕米的保护作用.结果:(1)MA(0.25～3.00mmol/L)作用48 h和60h,能增加大鼠小脑神经细胞系R2细胞LDH的漏出率,分别为48.2%～89.3%和62.5%～97.3%,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.01),活细胞明显减少;应用流式细胞仪检测,在G1峰前出现亚二倍体峰,MA所致R2细胞凋亡呈一定的时间依赖性和剂量依赖性.DNA电泳图谱则表现出典型的梯状条带.(2)维拉帕米(0.5～5.0 μmol/L)减少MA导致的R2细胞LDH的漏出率,改善细胞形态,对MA诱导R2细胞凋亡有明显的抑制作用.结论:维拉帕米对MA诱导的神经细胞凋亡具有保护作用,MA神经毒性作用可能与L型电压依赖性钙通道有关.     

丁酸钠与顺铂联用对非小细胞性肺癌细胞生长的抑制作用

目的 研究丁酸钠和顺铂联合作用对非小细胞性肺癌A549细胞增殖的影响及作用机制.方法 采用CCK-8细胞计数法测定丁酸钠、顺铂联用对A549细胞增殖活性的影响,流式细胞法检测细胞周期和细胞凋亡的改变,RT-PCR法检测p21基因的表达.结果 丁酸钠、顺铂联用可抑制A549细胞增殖且呈剂量依赖性,联用后的IC50降低至5.44 μmol/L,与单用DDP的IC50(10.25 μmol/L)相比降低了46.93%(P＜0.01).联用可使细胞周期阻滞于G0/G1期,同时诱导细胞凋亡和p21基因表达的上调.结论 丁酸钠与顺铂联用能抑制A549细胞生长,其作用机制与促进细胞凋亡及诱导p21基因表达有关.     

双氢青蒿素逆转人结肠癌耐药细胞耐药性的研究

【目的】评价双氢青蒿素逆转人结肠癌细胞HCT8/ADR耐药性的能力,研究其逆转耐药的机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术分别进行细胞毒性、细胞凋亡实验评价双氢青蒿素和阿霉素联合用药的药效,采用Western blot法研究逆转耐药的机制。【结果】双氢青蒿素和阿霉素联用后对人结肠癌耐药细胞有较高的毒性,能诱导耐药细胞凋亡,增强耐药细胞的自噬。【结论】双氢青蒿素能逆转耐药性,恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。     

参麦注射液对白血病细胞多药抗药性逆转作用的实验研究

目的:以多药抗药细胞系k 5 6 2 /Adr为对象,研究参麦注射液无细胞毒性的剂量,能否逆转该细胞对阿霉素(Adr)及长春新碱(Vcr)的抗药性。方法:MTT法验证细胞的多药抗药性(MDR) ;MTT法计算药物对细胞的毒性作用;选用无毒性作用的三个剂量及两个药物与细胞作用的时间点,研究是否具有逆转作用及其与剂量和时间的关系。用流式细胞术检测细胞膜表面p -糖蛋白的表达变化。结果:k 5 6 2 /Adr细胞对阿霉素及长春新碱的抗药倍数分别为14 .37和70 7.88;对细胞的毒性历时4 8小时及72小时无明显变化(P >0 .0 5 ) ;选用4 8小时及72小时两个时间点,分别以0 .2mg/ml、0 .5mg/ml及1mg/ml三个无毒剂量试验,发现注入参麦注射液(SM)的k 5 6 2 /Adr细胞对阿霉素的抗药性具有部分的逆转效果,并且具有一定的剂量依赖性,未见明显的时间依赖性。而对Vcr的抗药性未见明显的逆转效果。其逆转机理与部分下调细胞膜表面p -糖蛋白的高表达有关。     

阿霉素诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡及其机制

目的研究阿霉素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法不同时间和不同剂量的阿霉素处理SMMC-7721细胞,以RT-PCR和Western blot法分别分析阿霉素处理后各分子的mRNA和蛋白表达的变化。结果阿霉素处理可以明显抑制细胞生长;使细胞呈明显凋亡改变;诱导多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]水解;诱导caspase-3和caspase-9的转录水平上调。阿霉素处理可诱导人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN)的转录和蛋白水平升高,可能使细胞进入凋亡过程。一旦细胞发生凋亡,PTEN转录和蛋白水平下降;随之诱导FAK转录和蛋白表达水平降低。结论阿霉素可以通过涉及caspase-3的途径诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡。阿霉素诱导的凋亡对PTEN、局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达及FAK磷酸化均有明显影响。     

穿山龙总皂苷通过Nrf2信号通路对阿霉素诱导MPC-5细胞氧化应激损伤保护作用研究

目的 探讨穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用及其机制研究。方法 通过阿霉素诱导MPC-5细胞建立细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,考察阿霉素对MPC-5细胞的毒性及穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞凋亡的影响;采用探针DCFH-DA检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内活性氧（ROS）的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）试剂盒检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内氧化应激因子的影响;采用Western Blot法检测MPC-5细胞内相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达以及细胞质、细胞核和细胞整体内核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)蛋白的表达。结果 与空白组相比,阿霉素模型组中细胞活力显著降低（P<0.01）;细胞内MDA含量、ROS含量、细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,SOD活性、GSH-Px含量显著降低（P<0.01）;细胞核和细胞总体中Nrf2蛋白表达显著升高（P<...     

γ－干扰素合并维甲酸对维甲酸耐药细胞的作用机制

目的　寻求解决维甲酸(ATRA)耐药问题的新途径。方法　光镜、NBT还原实验及免疫荧光间接法观察NB4及其耐药细胞MR-2单用及联用ATRA、γ-干扰素(IFNγ)后细胞形态学、细胞分化及PML蛋白表达的变化。结果　IFNγ单用及与AFRA联用对两种细胞的生长均有抑制作用,IFNγ能诱导PML蛋白的表达,ATRA与IFNγ联用能部分诱导耐药细胞分化 结论 IFNγ通过诱导PML蛋白的表达而抑制细胞生长,ATRA与IFNγ联用部分诱导耐药细胞分化的作用可能与两药各自不同的信号传递途径发生交叉激活有关。