CXCR6通过WNT/β-catenin通路促进结直肠癌增殖和侵袭

目的 检测CXCR6基因在结直肠癌(CRC)中的表达,分析其通过WNT/β-catenin通路促进增殖和侵袭对CRC的影响及作用机制.方法 收集2017-10-01-2019-09-01于河北医科大学第四医院手术的68例CRC患者(结肠癌48例、直肠癌20例)癌及癌旁组织(≥3 cm)标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应...     

CTNND1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究CTNND1调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,为胰腺癌精准治疗提供新理论依据。方法:通过生信分析验证CTNND1在胰腺癌和正常组织中的表达,免疫组织化学(IHC)和qPCR进一步验证。Transwell、划痕实验和细胞增殖试验用于研究CTNND1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测CTNND1对人胰腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:在胰腺癌细胞中敲低CTNND1可以抑制胰腺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路以及增殖、迁移和侵袭能力。加入LiCl(Wnt/β-catenin特异性激活剂)能部分恢复CTNND1敲低胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤显示,敲低CTNND1抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论:敲低CTNND1能从体内外通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌的增殖、迁移和侵袭及皮下成瘤能力。     

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT和细胞周期的实验研究

目的:探讨过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞上皮-间质转化和细胞周期的作用机制。方法:将课题组前期已成功转染过表达KLF4的BGC-823细胞分为KLF4过表达载体组(BGC823-OE组)、空病毒载体组(BGC823-NC组)和未经处理的BGC-823细胞组（BGC823-Ctrl组）。Western blot和qRT-PCR检测KLF4、EMT和Wnt信号通路相关蛋白和mRNA在三组细胞中的表达水平。CCK-8实验、划痕实验、Transwell迁移实验、平板克隆实验和流式细胞术观察各组细胞的增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和细胞周期变化情况。结果:Western blot和qRT-PCR实验结果显示BGC823-OE组KLF4蛋白和mRNA表达水平明显升高。上皮-间质转化的上皮标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白和mRNA表达水平降低。Wnt信号通路下游靶基因β-catenin和Cyclin D1的蛋白和mRNA表达水平降低。CCK-8增殖实验结果显示BGC823-OE组的增殖能力下降。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示BGC823-OE组的迁移能力下降。平板克隆结果显示BGC823-OE组的克隆能力下降。流式细胞术结果显示BGC823-OE组G0/G1期比例增高,S期比例降低。结论:过表达KLF4可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT及阻滞胃癌细胞的细胞周期。     

下调S100A2表达对结肠癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt信号通路的影响

目的 探讨S100钙结合蛋白A2(S100A2)在结肠癌增殖和侵袭迁移中的作用及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测S100A2在结肠癌组织和细胞系中的表达情况。选择SW480细胞并分为3组：对照组、siRNA-NC组(阴性对照)和siRNA-S100A2组(下调S100A2表达)。采用MTT、划痕实验和Transwell小室实验探究S100A2在结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移过程中的作用,qPCR和Western blotting检测干扰S100A2对Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。结果 与癌旁组织(1.00±0.05)或正常结肠上皮细胞株NCM460(1.00±0.07)比较,S100A2在结肠癌组织(1.66±0.07)和细胞SW620(1.38±0.10)、HT29(1.62±0.13)、LoVo(1.94±0.14)和SW480(2.03±0.08)中均高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-S100A2组的细胞活力及Wnt1、β-catenin和基质金属蛋白酶7水平低于对照组和siRNA-NC组(P<0.0...     

ABCA8通过调控Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究ATP结合盒亚家族A成员8(ABCA8)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用生物信息学分析ABCA8在CRC组织中的表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测临床CRC癌组织和CRC细胞系中ABCA8 mRNA表达水平。采用ABCA8基因过表达慢病毒感染SW480细胞,再将细胞分为对照(Blank)组、空载(Vector)组、ABCA8过表达(Oe-ABCA8)组、Vector+HLY78组和Oe-ABCA8+HLY78组,其中Wnt/β-catenin信号通路激动剂HLY78干预浓度为10μmol/L。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Transwell实验检测各组细胞迁移与侵袭细胞数量;Western blot法检测各组细胞中ABCA8、β-catenin、c-Myc和金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:ABCA8在CRC癌组织和CRC细胞系SW480、SW620、 HCT116和HT-29中均呈低表达水平。与Blank组比较,Oe-ABCA8组SW480细胞增殖活性显著降低(P<0.05),迁移与...     

lncRNA BCAR4通过调节Wnt/β-catenin信号通路对胃癌发生发展的影响

目的:探讨lncRNA BCAR4通过调节Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过实时定量PCR法检测lncRNA BCAR4在胃癌组织和胃癌细胞中的表达;免疫组化方法分析胃组织中c-myc和cyclin D1蛋白的表达;通过MTT、克隆形成和流式细胞术分别检测lncRNA BCAR4对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响,并通过Western blot法检测lncRNA BCAR4敲除前后对SGC7901细胞中c-myc、cyclin D1蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:相比于癌旁组织以及胃黏膜上皮细胞,lncRNA BCAR4在人胃癌组织和胃癌细胞中表达显著升高（P＜0.01）;同时,c-myc和cyclin D1蛋白的表达在胃癌组织和胃癌细胞中也有所增加,尤其在SGC7901胃癌细胞中上调最为显著（P＜0.01）; lncRNA BCAR4敲除能够显著降低细胞活力,促进细胞凋亡（P＜0.01）。lncRNA BCAR4敲除能够显著抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化（P＜0.01）,进而降低其下游增殖相关蛋白c-myc和cyclin D1的表达（P＜0.01）。结论:降低lncRNA BCAR4能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化,从而降低下游c-myc和cyclin D1蛋白表达,导致胃癌细胞的增殖抑制,促进细胞凋亡。     

AEBP1通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控EMT促进结肠癌细胞增殖迁移

目的:探讨脂肪细胞增强结合蛋白1（AEBP1）对结肠癌细胞增殖迁移的影响及其机制。方法:Oncomine数据库对结肠癌中AEBP1表达情况进行分析;GEPIA、ualcan数据库对AEBP1表达与结肠癌患者预后进行分析。分析AEBP1在正常结肠上皮细胞和结肠癌细胞中的表达情况。在HCT116细胞过表达AEBP1建立过表达细胞系,在过表达细胞系中对AEBP1进行敲降。利用CCK-8实验、克隆形成实验检测AEBP1对细胞增殖的影响;Transwell实验检测AEBP1对细胞迁移能力的影响。实时荧光定量PCR与免疫组化实验检测结肠癌组织及配对正常组织AEBP1表达水平,Western blot法检测过表达AEBP1的结肠癌细胞AEBP1、β-catenin、cyclinD1、c-myc、E-cadherin、Vimentin蛋白的水平。结果:结肠癌组织中AEBP1表达增加。高表达AEBP1与结肠癌患者总生存期、无病生存期负相关,高表达AEBP1与结肠癌患者肿瘤分期、淋巴转移相关。过表达AEBP1后,HCT116结肠癌细胞增殖加快,克隆形成数增加、Transwell迁移细胞数增加,在过表达细胞中敲降AEBP1后得到相反结果。过表达AEBP1后β-catenin,cyclinD1,c-myc,Vimentin蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达下降。结论:AEBP1在结肠癌中高表达并通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导EMT进程促进结肠癌细胞增殖迁移。     

LncRNA MALAT1通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭北大核心

目的:观察LncRNA MALAT1对Saos-2细胞自噬、增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:干扰LncRNA MALAT1在Saos-2细胞中的表达水平,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞技术检测细胞凋亡及周期情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移及侵袭改变,透射电镜观察自噬小体,Western Blot、RT-PCR检测自噬相关因子Beclin1、LC3、p62表达差异及LncRNA MALAT1对Wnt/β-catenin通路的影响。结果:干扰LncRNA MALAT1后,Saos-2细胞自噬水平明显升高,Beclin1、LC3表达水平明显升高(P<0.05),而p62的表达水平显著下降(P<0.05);细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(P<0.05),Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt3a、β-catenin的表达水平显著下降(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1可以通过激活Wnt/β-catenin通路调控Saos-2细胞自噬、增殖、迁移和侵袭。     

circLARP4对宫颈癌细胞中PTBP1/Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探讨circLARP4在宫颈癌中的作用及其对PTBP1/Wnt/β-catenin通路的调控作用.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circLARP4在正常宫颈细胞Ect1/E6E7和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、CaSki、MS751、ME180和C33A)中的表达水平.将SiHa细胞随机...     

CRABP2通过Wnt/β-catenin通路调控子宫内膜样腺癌细胞的增殖与侵袭

目的：探讨细胞视黄酸结合蛋白2(CRABP2)在子宫内膜样腺癌组织和细胞中的表达及其对子宫内膜样腺癌细胞增殖与侵袭的影响与其分子机制。方法：收集2020年6月至2021年4月在衡水市人民医院手术切除的子宫内膜样腺癌组织及配对正常子宫内膜组织,共24对;体外培养人子宫内膜样腺癌细胞An3ca、KLE。采用免疫组化分析及WB法检测子宫内膜样腺癌组织及正常子宫内膜组织中CRABP2的表达情况,采用WB法检测An3ca及KLE细胞中敲低CRABP2表达的效率,并以EDU法及Transwell实验检测敲低CRABP2表达后的An3ca及KLE细胞的增殖及侵袭能力,免疫荧光染色及WB法检测敲低CRABP2表达后的An3ca及KLE细胞中Wnt/β-catenin通路相关关键蛋白（β-catenin、c-Myc、cyclin-D1、MMP7及MMP9）的表达情况。以裸鼠体内成瘤实验观察敲低CRABP2表达对子宫内膜样腺癌细胞移植瘤生长和移植瘤组织中Ki67和β-catenin表达的影响。结果：与正常子宫内膜组织相比,CRABP2在人子宫内膜样腺癌组织中表达上调（P<0.01）。转染靶向CRAB...     

Oct-4、Wnt1和β-catenin在胃癌组织中的表达及临床意义

胃癌为发病率和死亡率均较高的1种恶性肿瘤。在全球范围内,在男性恶性肿瘤中胃癌发病率仅次于肺癌,占第2位,在女性中居第4位［1］。我国胃癌发病率在恶性肿瘤中居首位,年平均死亡率高达25．53／10万［2］。改善胃癌预后的关键在于早期发现与治疗。近年来由于胃癌的一、二级防治工作的大力开展,早期胃癌的检出率有所上升,但中、晚期胃癌患者仍占约70％［3］。因此,发现、确立可提示胃癌的检测指标,有助于指导临床及时对胃癌进行合理治疗,从而达到改善患者预后的目的。本研究通过测定Oct-4、Wnt1和β-catenin在胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中的临床意义。现报告如下。     

S100A4蛋白表达与胃癌侵袭转移关系的研究

目的：探讨Ｓ１００Ａ４蛋白产与胃癌侵袭转移的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测６２例胃癌患者的胃癌组织和３８例癌旁正常粘膜、２３例淋巴结转移癌及胃癌纱ＭＫＮ４５、ＢＧＣ８２３中Ｓ１００Ａ４蛋白表达,Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测胃癌细胞侵袭能力。结果：胃癌组织Ｓ１００Ａ４表达阳性率（７０．５９％）显著高于癌旁正常粘膜（１５．７９％）（Ｐ〈０．０１）。在弥温生长、低分化及未分化型、浸透浆膜、淋巴结转移阳性     

沉默YAP通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌BGC823细胞的凋亡

目的 本研究探讨Yes相关蛋白（YAP）对胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法 BGC823细胞中转染YAP小干扰RNA（YAP siRNA1、YAP siRNA2）,用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞中YAP表达,筛选干扰效果较好的YAP siRNA1做后续实验。MTT测定细胞增殖,平板克隆实验测定克隆形成能力,流式细胞术测定凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9活性,蛋白质印迹法检测β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白水平。用Wnt/β-catenin的激活剂处理下调YAP后的BGC823细胞,按照上述方法测定细胞增殖凋亡和克隆形成能力。结果 YAP siRNA1、YAP siRNA2下调BGC823细胞中YAP的转录和表达,YAP siRNA1对YAP表达的干扰效率较好。敲低YAP后的细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡率由（6.32±0.58）%升高至（32.71±2.64）%,Caspase-3、Caspase-9活性升高,β-catenin、c-myc、cyclinD1蛋白表达减少,与正常培养的BGC823细胞相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Wnt/β-catenin的激活剂处理可以部分逆转敲低YAP对BGC823细胞的凋亡、增殖、克隆形成能力和细胞中Caspase-3、Caspase-9活性的影响。结论 YAP敲低诱导胃癌细胞凋亡,且作用机制与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

BRCA1通过Wnt/β-catenin通路对非小细胞肺癌H1650细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨人乳腺癌易感基因1 (breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)通过Wnt/β-catenin通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H1650细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:采用WB法和qPCR法检测NSCLC细胞系A...     

NuSAP1通过Wnt/β-catenin/EMT通路促进三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭及其对预后的预测价值

目的:分析核仁纺锤体相关蛋白(NuSAP1)的表达对乳腺癌（BC）患者预后的影响,探讨三阴性乳腺癌(TNBC)细胞株的致瘤机制。方法:我们从癌症基因组图谱(TCGA)下载了乳腺癌(BC)的RNA-seq数据,用R软件在此数据中筛选出了NuSAP1基因及BC患者的临床资料。生存曲线用Kaplan-Meier-plotter绘制。建立阴性对照组（NC）、敲减NuSAP1组（sh-NuSAP1）、过表达NuSAP1组(sh-NuSAP1+ov-NuSAP1),用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK8)和Transwell法检测各组细胞增殖和侵袭能力。实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）和免疫印迹法（Western blotting）检测肿瘤细胞中NuSAP1、Wnt/β-catenin通路和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达。结果:NuSAP1在BC中表达上调。NuSAP1表达差异与多种临床病理因素有关,且NuSAP1表达越高,生存期越短。在MDA-MB-231和BT-549细胞中,与NC组相比,sh-NuSAP1组细胞增殖和侵袭能力下降,CyclinD1、Vimentin、Slug、Twist、Wnt3a和p-β-catenin的表达减少,而E-cadherin的表达显著增加。与sh-NuSAP1组相比,sh-NuSAP1+ov-NuSAP1组结果与上述相反。结论:NuSAP1是一种致癌基因,预测乳腺癌的不良预后,并通过Wnt/β-catenin和上皮-间充质转化（EMT）途径促进肿瘤进展。     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

ZNF436在胃癌中的表达及调控WNT/β-catenin对胃癌细胞迁移及侵袭的影响

目的 探讨锌指蛋白ZNF436在人胃癌细胞系和组织中的相对表达,及ZNF436对胃癌细胞MKN-28迁移和侵袭的影响和机制。方法 以人胃癌细胞系,胃癌、配对癌旁组织和正常人胃组织为研究对象;实时定量PCR和免疫组织化学法分析ZNF436在胃癌细胞系,胃癌、配对癌旁组织和正常人胃组织中的相对表达;在线数据分析ZNF436的表达与预后关系;ZNF436-siRNA(实验组)、NC-siRNA(对照组)质粒转染人胃癌MKN028细胞,转染后48 h实时定量PCR验证ZNF436的敲降效率,Transwell实验分析敲降ZNF436后对实验组细胞迁移和侵袭影响;裸鼠转移瘤实验验证ZNF436体内对细胞转移的影响;免疫蛋白印迹实验验证ZNF436对WNT/β-catenin信号通路的影响。结果 与正常胃上皮细胞系相比,ZNF436在人胃癌细胞系中高表达(P＜0.001);同时与癌旁组织和正常人胃组织相比,ZNF436在胃癌组织中高表达(P＜0.001);在线数据发现ZNF436的表达与胃癌的预后有关(P=0.0028);ZNF436基因表达越高,患者预后越差(P＜0.001);与对照组相比,实验组细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制(P＜0.001);实验组中裸鼠转移瘤的瘤大小和体积明显低于实验组(P＜0.001);低表达ZNF436后,WNT/β-catenin信号通路及其下游细胞因子明显受到抑制。结论 ZNF436作为潜在癌基因在人胃癌组织中表达上调,通过促进WNT/β-catenin信号通路参与胃癌的进程。     

血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其初步分子机制。方法 MTT法检测血根碱对肺腺癌细胞活性的影响;利用划痕和Transwell小室实验分析血根碱对细胞迁移、侵袭的影响;RT-qPCR和免疫印迹法检测不同浓度血根碱对Wnt/β-catenin通路相关基因和核心蛋白的影响。结果 与空白对照组比,血根碱（1~10 μmol/L）呈浓度-时间依赖性地抑制人肺腺癌细胞的活力（P<0.05）;低浓度1 μmol/L作用48 h后,A549和H1975细胞的迁移和侵袭能力明显减弱（P<0.01）;血根碱（1、2.5、5 μmol/L）可显著下调Wnt/β-catenin通路中核心分子β-catenin及上游磷酸化GSK3β、DVL2蛋白表达,进而抑制下游靶基因TCF/LEF,CyclinD1的mRNA水平（P<0.05）,并呈一定的浓度依赖性。结论 血根碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路起到抑制人肺腺癌细胞迁移、侵袭的作用。     

S100A4蛋白表达与肺癌的侵袭和转移

肺癌是最为常见的恶性肿瘤之一 ,且有逐年增加的趋势。虽然针对肺癌的综合治疗在不断加强 ,但是肺癌的 5年生存率只有 2 0 %左右[1] 。肺癌发生远处转移是影响其预后的重要因素。侵袭和转移是肺癌及其他恶性实体肿瘤的特性。分子生物学研究表明 ,肿瘤细胞的某些基因活性的改变及其表达产物在肿瘤的侵袭、转移等一系列病理过程中发挥着重要作用[2 ] 。最近 ,通过ｃＤＮＡ文库基因表达系列分析 (ｓｅｒｉａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ,ＳＡＧＥ)筛选出的Ｓ10 0Ａ4蛋白就是一个与肺癌等恶性肿瘤的侵袭、转移等病理过…