Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

目的 研究Fractalkine（CX3CL1,FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组;（2）LPS组,细胞给予脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（3）ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（4）过表达FKN组;（5）ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（6）过表达FKN+LPS组,过表达 FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（7）过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组,过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;应用 CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）;EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。     

黄芩苷对脂多糖诱导牙周膜成纤维细胞表达炎症因子的影响

【】目的：探讨黄芩苷对脂多糖促人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响。方法：将培养后的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的黄芩苷处理,CCK8实验观察不同浓度黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性。将培养后的人牙周膜成纤维细胞分为空白对照组、LPS组、黄芩苷组和LPS+黄芩苷组。空白对照组仅加入2%胎牛血清的培养液;LPS组加入加入100μg/mLLPS ;黄芩苷组分别加入黄芩苷200、500ng/mL ;LPS+黄芩苷组加入100μg/mL LPS,同时分别加入黄芩苷 200ng/mL 、500ng/mL。24h收集细胞, 检测各组IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达的变化。结果： 500ng/mL浓度以下黄芩苷添加至细胞没有明显的细胞增殖毒性。单独加入黄芩苷200ng/mL和500ng/mL的黄芩苷组和空白对照组比较,IL-6、IL-8、IL-1β均无明显变化(P＞0.05)。 和空白对照组比较,LPS组IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05),同时加入LPS和200ng/ml黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而同时加入LPS和500ng/mL黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05) 结论：黄芩苷在低浓度时显示有抑炎作用,而在浓度增加达到500ng/mL时显示有促炎作用。     

创伤小鼠骨髓来源树突状细胞诱导T细胞应答的能力变化

目的：研究失血合并闭合性骨折小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）诱导异源T细胞应答能力的变化.方法：致伤后24h分离小鼠骨髓细胞,体外应用重组小鼠粒细胞/巨噬细胞-集落刺激因子（rmGM-CSF）诱导BMDC,通过混合淋巴细胞反应（MLR）检测未成熟、成熟树突状细胞（DC）诱导异源T细胞的应答能力,流式细胞术检测BMDC表面主要组织相容性复合物Ⅱ类分子（MHCⅡ）及共刺激分子CD40、CD80、CD86表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测脂多糖（LPS）刺激的BMDC培养上清中白细胞介素-12（IL-12）p40、IL-12p70以及白细胞介素-10（IL-10）水平的变化.结果：无论是否经过LPS诱导,创伤组小鼠BMDC介导的MLR值均明显低于对照组值（P〈0.05）,创伤组小鼠BMDC在LPS刺激前后的CD40表达均明显低于对照组[（4.0±1.0）%vs（22.0±3.5）%;（56.0±7.5）%vs（91.0±8.0）%,P〈0.01],但MHCⅡ、CD80和CD86表达在2组间差异无显著性.创伤组小鼠BMDC在体外经LPS刺激24h后其IL-12p40、IL-12p70分泌水平均明显低于对照组[（45.0±6.5）vs（78.0±6.8）ng/L;（9.0±1.0）vs（18.0±1.9）ng/L,P〈0.05],但创伤组小鼠BMDC分泌IL-10的能力与对照组相比差异无统计学意义.结论：创伤小鼠BMDC诱导T细胞应答的能力降低,该变化可能与其共刺激分子CD40表达降低及IL-12分泌不足有关.     

刺槐素对鞭毛蛋白诱导的小鼠骨髓巨噬细胞NLRC4炎症小体活化的影响

目的：研究刺槐素（Acacetin）对鞭毛蛋白诱导的小鼠骨髓巨噬细胞Nod样受体家族蛋白4(the nod-like receptor family card domaincontaining protein 4,NLRC4)活化的影响。方法：将小鼠骨髓巨噬细胞分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+鞭毛蛋白组及LPS+Acacetin+鞭毛蛋白组,对照组加入完全培养基,LPS组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h,LPS+鞭毛蛋白组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h后加入鞭毛蛋白（10μmol/L）刺激0.5 h;LPS+刺槐素+鞭毛蛋白组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h后再加入Acacetin(10μmol/L)处理0.5 h,最后加入鞭毛蛋白（10μmol/L）刺激0.5 h;采用WB检测细胞裂解液Pro-caspase-1和Pro-IL-1β的表达,上清液中caspase-1和IL-1β的蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α的含量,LDH检测试剂盒检测细胞上清液中LDH的活性。结果：与对照组相比,LPS+鞭毛蛋白组细胞上清液中c...     

皮质酮预处理对脂多糖激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的调节作用及鸡豆黄素A的保护作用

目的：研究皮质酮（CORT）预处理对脂多糖（LPS）激活小胶质细胞的NLRP3炎症小体是否有调节作用,鸡豆黄素A（BiochaninA）是否抑制其作用。方法：将常规培养的BV2细胞分为5组： Control组、CORT（50 ng/ml）组、LPS（10μg/ml）组、LPS（10μg/ml）+CORT（50 ng/ml）组、LPS（10μg/ml）+CORT（50 ng/ml）+ BiochaninA（5μM）组。除对照组外,各组先将入CORT（50 ng/ml）孵育2h,然后各组加入相应浓度的LPS（10μg/ml）和BiochaninA（5μM）共同孵育36h。采用MTT法检测细胞活力;采用DCFH-DA探针法检测ROS;采用Western-blot法检测各组细胞中5-HTT、ASC、Caspase-1、NLRP3、IL-6、GR、IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平。结果：与CORT（50 ng/ml）组和LPS（10μg/ml）组比较,CORT（50 ng/ml）+LPS（10μg/ml）组细胞活力增加,ROS的表达量也更高;与CORT（50 ng/ml）+LPS（10μg/ml）组比较,CORT（50 ng/ml）+ LPS（10μg/ml）+ BiochaninA（5μM）组细胞的活力降低,ROS的表达量也较低。Western-blot检测显示与CORT（50 ng/ml）组和LPS（10μg/ml）组比较,CORT（50 ng/ml）+LPS（10μg/ml）组细胞的5-HTT、ASC、Caspase-1、NLRP3、IL-6、GR、IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平均增加;与CORT（50 ng/ml）+LPS（10μg/ml）组比较,CORT（50 ng/ml）+ LPS（10μg/ml）+ BiochaninA（5μM）组上述蛋白表达量低。结论：CORT预处理对LPS激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的表达有上调作用,而BioA可以NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。     

白介素12在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

目的观察白介素12（IL-12）对γδT细胞表面L-选择素（CD62L）表达的调控作用。方法人外周血活化γδT细胞经诱导及扩增后,采用Mtb-Ag首次刺激和再次刺激,在细胞分孔培养时分别加入不同的细胞因子（IFN-γ、IL-12＋抗IFN-γ、IL-12＋抗IL-12、IL-12＋IFN-γ）和不同浓度（0、0.1 ng/mL、1 ng/mL）IL-12。收集各组培养第0、3、5、7天的细胞,流式细胞术检测γδT细胞表面CD62L的表达。结果 Mtb-Ag首次刺激和再次刺激后,IL-12组、IL-12＋抗IFN-γ组和IL-12＋IFN-γ组γδT细胞表面CD62L的表达量均较空白对照组显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;而IFN-γ组、IL-12＋抗IL-12组的CD62L表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。随着IL-12浓度的增加,γδT细胞表面CD62L的表达量增加,其中Mtb-Ag首次刺激后第3和5天时,0.1 ng/mL和1.0 ng/mL IL-12组CD62L表达量均明显高于阴性对照组（P〈0.05）,且1.0 ng/mL IL-12组明显高于0.1 ng/mL IL-12组（P〈0.05）,具有浓度依赖性;Mtb-Ag再刺激后CD62L的表达量下调,但在加入IL-12后CD62L表达的下调速度减缓,且1.0 ng/mL IL-12比0.1 ng/mL IL-12更能使CD62L表达维持在相对较高水平（P〈0.05）。结论 IL-12在γδT细胞活化时调控CD62L的表达并且具有浓度依赖性。     

黄芩苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2（JAK2）/信号转导和转录启动因子3（STAT3）信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组（不做干预）、LPS组（1 μg/mL LPS）和LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷组（1 μg/mL LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷）;酶联免疫吸附试验（ELISA）和活细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组：对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA［细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）］表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低（P＜0.05）,干预24 h LPS+10 μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高（P＜0.05）,选择干预24 h的LPS+10 μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10 μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化（P＜0.05）;与LPS+10 μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著（P＜0.05）,LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反（P＜0.05）。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关     

PTEN在多烯磷脂酰胆碱下调LPS诱导巨噬细胞炎症反应中的抑制作用

目的研究临床护肝药—多烯磷脂酰胆碱(polyene phosphatidyl choline,PPC)对LPS诱导巨噬细胞(macrophages, M?)炎症的调控作用以及第10号染色体上缺失的磷酸酶-张力蛋白同系物(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)在上述过程中的作用,初步明确PPC的抗炎效果及机制。方法将Raw264.7细胞铺于细胞培养板,分别加入PPC(20μg/mL)、LPS(100 ng/mL)、PPC(20μg/mL)+LPS(100 ng/mL)、PPC(20μg/mL)+SF1670(PTEN抑制剂,150 ng/mL)、PPC(20μg/mL)+LPS(100 ng/mL)+SF1670(150 ng/mL)以及等体积PBS,培养24 h后,收集细胞沉淀及培养上清,ELISA法检测上清中IL-6、IL-10、TNF-α含量;RT-PCR检测细胞中IL-6的mRNA相对表达量;Western blot检测细胞中PTEN的蛋白表达情况。结果相比PBS组,PPC组TNF-α、IL-6、IL-10分泌量无明显差异;相比LPS组,PPC+LPS组培养上清中TNF-α、IL-6水平明显降低(P0.001),而IL-10水平明显升高(P0.001)。相比LPS组,PPC+LPS组PTEN蛋白表达量明显上高。相比PPC组,PPC+SF1670组TNF-α、IL-6分泌或表达量明显升高(P0.05);相比PPC+LPS组,PPC+LPS+SF1670组TNF-α、IL-6分泌或表达水平明显升高(P0.05),而IL-10分泌量明显降低(P0.05)。结论 PPC可通过上调PTEN表达以抑制LPS诱导M?炎症反应。     

HT-29细胞Toll通路相关分子表达与调控的研究

目的 探讨HT-29结肠癌细胞系经细胞因子TNF-а、IL-1β、IFN-γ及脂多糖(LPS)刺激后,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白2(MD2)及人β防御素2(HBD2)在转录和蛋白水平的表达变化及其与NF-kB激活的关系.方法 HT-29细胞分为8组,分别加入RPMI 1640、TNF-а(20 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)、IFN-7(20 ng/mL)、LPS(50rig/mL)、TNF-а(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)干预.ELISA测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平,RT-PCR检测各组细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA水平,免疫印迹检测各组细胞TLR4和NF-kB蛋白表达.结果 细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达高于对照组(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,IL-8的表达进一步升高(P<0.01).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和MD2 mRNA的水平(P<0.01);HBD2 mRNA水平在IL-1β,LPS协同TNF-а、IL-1β、IFN-γ组升高(P<0.05).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和NF-kB蛋白表达(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,NF-kB蛋白表达进一步增高(P<0.05).结论 细胞因子(TNF-а、IL-1β、IFN-γ)能够增加肠上皮细胞(IEC)的TLR4和MD2表达、增强其对LPS的反应性,造成IEC对常驻菌的过度反应,从而启动或加重肠道炎症;炎症信号(IL-1β、LPS+TNF-а、LPS+IFN-γ)刺激可诱导IEC的HBD2基因转录表达,增强肠道获得性免疫反应,影响肠道炎症进程.     

干预协同刺激信号对反复自然流产患者Th1/Th2转换影响的体外研究

目的 探讨干预协同刺激信号对反复自然流产患者Th1／Th2转换的影响。方法 用人绒毛膜癌细胞株JEG-3制备滋养细胞抗原;用该抗原刺激反复自然流产患者外周血单个核细胞,并分为两组：实验组加入细胞毒性T细胞相关抗导4（CTLA4Ig,10μg／mL组和1μg／mL组）,对照组加IgG（10μg／mL组和1μg／mL组）,培养72h,分别取24h和72h上清液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测上清液中白介素2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）和白介索4（IL-4）的水平。结果 与同质量浓度的对照组相比,CTLA4Ig组产生的IL-4水平明显高于对照组（P〈0．05）,而产生的IL-2水平明显低于对照组（P〈0．05）,IFN-γ水平两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。与CTLA4Ig1μg／mL组相比,CTLA4Ig10μg／mL组产生的IL-4水平明显升高（P〈0．05）,IL-2水平明显降低（P〈0．05）,IFN-γ水平两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 CTLA4Ig能通过阻断CD80／CD86共刺激信号,使反复自然流产患者Th1／Th2细胞因子向Th2型细胞因子偏移。     

OXIDIZED HIGH-DENSITY LIPOPROTEIN PROMOTES MATURATION AND MIGRATION OF BONE MARROW DERIVED DENDRITIC CELLS FROM C57BL/6J MICE

Objective To explore the influence of oxidized high-density lipoprotein （oxHDL） on the maturation and migration of bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） from C57BL/6J mice.
Methods The C57BL/6J mice bone marrow cell suspension was prepared and purified. Recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating factor （rmGM-CSF） and recombinant interleukin-4 （rmlL-4） were used to promote monocytes to differentiate and suppress lymphocytes. Then 50μg/mL oxHDL was added to stimulate BMDCs, using 50μg/mL high-density lipoprotein （HDL） as homologous protein control, PBS as negative control, and 1 μg/mL lipopolysaccharide （LPS） as positive control. The CD86 and MHCII expression rates were detected with fluorescence-activated cell sorting （FACS）. Liquid scintillation counting （LSC） was used in mixed lymphocyte reactions （MLRs） to reflect the ability of BMDCs in stimulating the proliferation of homologous T cells, Levels of cytokines IL-12 and IL-10 were detected by ELISA. The cell migration was evaluated with the transwell system.
Results Compared with PBS group, the expressions of CD86 and MHCII, counts per minute of MLRs, secretion of IL-12 and IL-10, and number of migrated cells in oxHDL group and LPS group significantly increased （all P 〈 0.05）, while the increment was less in oxHDL group than LPS group. The number of migrated cells in oxHDL group was about twice of that in HDL group.
Conclusion OxHDL may promote the maturation and migration of BMDCs in vitro.     

丙泊酚对LPS激活人体中性粒细胞释放炎性细胞因子的影响及机制研究

目的观察丙泊酚对LPS激活后人体中性粒细胞（PMN）释放炎性细胞因子的影响。方法 20例健康志愿者外周静脉采血,分离PMN后每例分为5份,分别加入等量生理盐水（C组,对照组）、LPS组（终浓度为100 ng/L）、LPS＋丙泊酚2μg/mL组（P1组）、LPS＋丙泊酚4μg/mL组（P2组）、LPS＋丙泊酚8μg/mL组（P3组）的5组。孵育12 h后,ELISA法检测培养液中TNF-α、IL-8含量,Western blotting法检测核内p65蛋白含量。结果实验剂量的丙泊酚均可不同程度抑制LPS激活后培养液中TNF-α、IL-8的增高（P〈0.05）;2~8μg/mL浓度的丙泊酚可以显著增加LPS导致的核内p65含量的增加（P〈0.05）;丙泊酚的这种效应具有剂量依赖性。结论 2~8μg/mL浓度的丙泊酚可通过抑制p65的激活,显著减少PMN释放炎性细胞因子。     

丹参多酚酸盐负性调节小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及其部分免疫功能

目的:观察丹参多酚酸盐对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)成熟及其部分免疫学功能的影响。方法:小鼠BMDC体外培养时加入促成熟剂脂多糖(DCLPS)或同时加入脂多糖及丹参多酚酸盐(DCSV),其中丹参多酚酸盐设3个浓度:低浓度50μg/ml(SVL)、中浓度100μg/ml(SVM)、高浓度200μg/ml(SVH)。流式细胞仪分析各组细胞表面MHC-Ⅱ分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达;FITC-Dextran内吞实验分析各组DC抗原吞噬功能;酶联免疫吸附实验(enzyme linked i mmunosorbent assay,ELISA)检测各组DC培养液上清白细胞介素(interleukin,IL)-12 p40水平。[3H]-TdR掺入法检测各组DC体外混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reactions,MLR)刺激同种反应性T细胞的增殖能力;ELISA法测定MLR上清IL-10、IL-2、干扰素(interferon,IFN)-γ水平。结果:与DCLPS相比,SVL、SVM、SVH细胞表面M...     

氧化修饰性脂蛋白对C57BL/6J小鼠骨髓源性树突状细胞迁移的影响

目的:探讨氧化修饰性脂蛋白对C57BL/6J小鼠骨髓源性树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,BM-DCs)迁移的影响。方法:制备C57BL/6J小鼠骨髓细胞悬液,利用树突状细胞专用分离液和细胞粘附性差异去除杂细胞,用rmGM-CSF和rmIL-4使其分化为BMDCs。采用流式细胞术检测BMDCs CD86和MHCⅡ的表达率、免疫荧光技术检测BMDCs CD11c的表达率,以此来鉴定获得细胞为实验所需要的BMDCs。实验分为PBS阴性对照组、LDL组、ox-LDL组、HDL组、oxHDL组和LPS阳性对照组,采用动物实验和Transwell迁移系统分别观察各实验组中BMDCs在体内外的迁移能力。结果:获得的BMDCs CD86、MHCⅡ和CD11c的表达率明显升高,是实验所需的细胞;与相应的脂蛋白组相比,其氧化脂蛋白处理的BMDCs组有更多的细胞发生迁移。结论:氧化脂蛋白可促进C57BL/6J小鼠BMDCs发生迁移。     

丙泊酚抑制内毒素血症中巨噬细胞发生焦亡的分子机制

目的 探讨丙泊酚抑制巨噬细胞发生焦亡的分子机制。方法 提取小鼠骨髓来源巨噬细胞,分为对照组、脂多糖（LPS）+三磷酸腺苷（ATP）刺激组以及丙泊酚+LPS+ATP组。对照组不给予任何处理;LPS+ATP组先给予脂多糖(LPS) 1 μg/mL刺激4 h,再加三磷酸腺苷（ATP）4 mmol/L刺激1 h;丙泊酚+LPS+ATP组先同时给予50 μmmol/L丙泊酚+LPS 1 μg/mL刺激4 h,再加ATP刺激1 h。处理完毕则收集细胞培养上清液和细胞。分别通过CCK8、流式分析检测细胞活力,酶联免疫吸附测定法法检测细胞上清炎症因子IL-1β、IL-18含量;用免疫印迹检测细胞caspase-1蛋白表达及细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达;流式分析及免疫组化荧光检测细胞焦亡情况。结果 LPS+ATP可导致小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）活力显著降低（P<0.05）;炎症因子IL-1β、IL-18升高（P<0.05）;活化的caspase-1蛋白增加,细胞膜表面TLR-4表达升高（P<0.05）;予丙泊酚处理后,可改善LPS+ATP诱导的上述指标变化。结论 LPS+ATP可诱导BMDM发生焦亡,丙泊酚有效抑制这种细胞死亡,提示丙泊酚麻醉有益于临床脓毒症患者的手术,有效调节患者免疫状态。     

Rapamycin Modulates the Maturation of Rat Bone Marrow-derived Dendritic Cells

The purpose of the study was to observe the effect of rapamycin （RAPA） on the differentiation and maturation of rat bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） in vitro. BMDCs from Wistar rats were cultured with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 in the presence or absence of RAPA （20 ng/mL）, and stimulated with lipopolysaccharide （LPS） for 24 h before cells and supernatants were collected. Surface phenotype of BMDCs was flow-cytometrically detected to determine the expression of maturation markers, MHC class Ⅱ and CD86. Supernatants were analyzed for the production of IL-12 and IFN-γ cytokines by using ELISA. BMDCs were co-cultured with T cells from Lewis rats and mixed lymphocyte reaction was assessed by MTT method. The morphology of BMDCs stimulated with LPS remained immature after RAPA pretreatment. RAPA significantly decreased the CD86 expression, impaired the IL-12 and IFN-γ production of BMDCs stimulated with LPS, and inhibited the proliferation of allogeneic T cells. In conclusion, RAPA can inhibit the maturation of BMDCs stimulated with LPS in terms of the morphology, surface phenotype, cytokine production, and ability of BMDCs to stimulate the proliferation of allogeneic T cells in vitro.     

脂多糖及TOLL样受体4阻断剂对蜕膜细胞中孕激素受体、IL-1β及COX-2的影响

目的:研究脂多糖(LPS)或拮抗剂TOLL样受体4阻断剂(Toll-like receptor 4 antagonist,TLR4 mAb)作用于体外培养的蜕膜细胞后其孕激素受体(progesterone receptor,PR)、IL-1β及COX-2的表达改变,以探讨LPS及其拮抗剂对蜕膜细胞中PR的影响,以及PR与炎症因子之间的关系。方法:分离培养早孕人蜕膜细胞,将细胞培养至第4代时随机分为6组,对照组:仅加培养液。研究1组:加入终质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究2组:加入终质量浓度为1 μg/ mL TLR4 mAb。研究3组:加入终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb。研究4组:终质量浓度为1 μg/mLTLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究5组:终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。均培养24 h 后,采用RT-PCR半定量技术检测蜕膜细胞中PR,IL-1β及COX-2mRNA的表达情况。结果: LPS使蜕膜细胞中PR mRNA的表达下调(P<0.05),使IL-1β和COX-2 mRNA的表达上调(P<0.05);TLR4 mAb则使LPS作用后的蜕膜细胞中PR mRNA的表达上调(P<0.05)、IL-1βmRNA的表达下调(P<0.05);高质量浓度TLR4 mAb使COX-2 mRNA的表达下调(P<0.05)。结论:LPS作用于体外培养的人蜕膜细胞后,PR mRNA表达下调;IL-1β,COX-2的mRNA表达增加;使用TLR4 mAb后能拮抗LPS对蜕膜细胞中PR,IL-1β以及COX-2的作用。     

人脐带间充质干细胞来源外泌体促进小胶质细胞向M2极化

目的: 探讨人脐带间充质干细胞外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cells exosomes, hucMSC-Ex）在小胶质细胞极化态转化中的作用及机制,为临床治疗神经退行性疾病提供新的治疗策略。方法: 原代分离培养人脐带间充质干细胞,收集其条件培养基提取外泌体（exosomes）,电镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质印迹法对其形态特征、粒径大小及表面标志物进行表征;分别用PBS、LPS（1 μg/mL）、LPS（1 μg/mL）+hucMSC-Ex（100 μg/mL）处理小胶质细胞12 h,免疫荧光检测小胶质细胞特异性标志物钙结合蛋白Iba1的表达;蛋白质印迹法检测小胶质细胞M1/M2极化态标志物变化;qRT-PCR检测小胶质细胞IL-1β mRNA和IL-10 mRNA的变化;ELISA检测细胞条件培养基中细胞因子IL-1β和IL-10的分泌量。结果： hucMSC-Ex电镜下呈现典型膜性“杯盘”状结构,纳米颗粒跟踪分析结果显示粒径大小为（119.7±47.9）nm,蛋白质印迹法证实其表达CD9、CD63和CD81特征表面分子;免疫荧光结果显示,活化组（LPS组和LPS+hucMSC Ex组）钙结合蛋白Iba1相比于静息组（PBS组）表达高,且LPS+hucMSC-Ex组高于LPS组;蛋白质印迹法结合qRT-PCR结果显示hucMSC-Ex可能通过抑制NF-κB活化减少M1极化态标志物iNOS、IL-1β表达,上调M2极化态标志物Arg1、IL-10表达;ELISA结果表明相比于LPS组,LPS+hucMSC-Ex组分泌的炎症因子IL-1β减少、抑炎因子IL-10增加。结论： hucMSC-Ex可能通过抑制NF κB活化,促进小胶质细胞向M2极化而减少炎症反应。     

胸腺肽α1对小鼠机体免疫系统的影响

目的 探讨胸腺肽α1（Tα1）对正常小鼠机体相关免疫效应分子的作用及胸腺肽α1诱导特异性免疫耐受的机制。 方法 将BABL/c小鼠分为4组,正常对照组（无任何药物,n=5)、环孢素A（CsA）组（给予10 mg/kg CsA,n=20）、Tα1组（给予400 μg/kg Tα1,n=20）、CsA+Tα1组(CsA、Tα1剂量同前,n=20),每日腹腔注射1次,共14 d。分别于用药后第1、7、14、21 d各取5只（正常对照组取1只）采血取血清行液相芯片细胞因子（反映Th1、Th2和Th17功能）检测。处死小鼠后取脾脏,制备小鼠脾细胞悬液进行淋巴细胞培养,仍分为4组,除对照组外,其余3组分别加入0.25 mg/mL CsA、10 μg/mL Tα1、0.25 mg/mL CsA+10 μg/mL Tα1,培养3 d后检测细胞的生长增殖,以及培养上清液细胞因子的表达。 结果 BABL/c小鼠给予Tα1、CsA后,与正常对照组比较,白介素（IL）-1a、IL-2、IL-6、IL-17等炎性细胞因子降低（P<0.05）,而抑炎因子IL-10升高（P<0.05）,CsA和Tα1对细胞因子表达的影响相似（不同时间点及不同细胞因子两单药组间差异均无统计学意义）,CsA和Tα1联合用药可加强单用药作用。淋巴细胞培养3 d后,Tα1、CsA、CsA+Tα1组淋巴细胞增殖受抑制,与正常对照组比较,差异有统计学意义;培养细胞上清液细胞因子表达与正常对照组比较,各组IL-1α、IL-6表达下降,IL-10升高,差异均有统计学意义（P<0.05）,而IL-2、IL-17各组间差异无统计学意义。 结论 Tα1对小鼠正常机体免疫功能具有一定的调节作用,促使T细胞由Th1向Th2转化。     

川芎嗪对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性的保护作用研究

目的:观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)通透性变化和细胞骨架相关蛋白表达影响.方法:以体外培养的HUVECs为实验对象,将...