沉默Chk1基因对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡敏感度的影响

目的探讨siRNA沉默Chk1基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡和细胞周期的影响,评价其作为姜黄素治疗胃癌增敏靶点的有效性。方法采用RNAi技术在胃癌细胞SG-7901中将Chk1基因沉默,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达的变化,采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡及细胞周期变化的影响。结果转染Chk1 siRNA后,胃癌细胞SGC7901中Chk1蛋白表达受抑制,明显低于对照组(P＜0.05)。FCM检测结果显示,si-Chk1组较空白对照组G₂/M期百分比有所降低(P＜0.05),si-Chk1+Curcumin组G₂/M期比例明显低于Empty vector+Curcumin组(P＜0.05)。siRNA沉默Chk1基因使姜黄素诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.1)%上升到(28.9±1.8)%。结论siRNA沉默Chk1基因可明显消除G₂/M期阻滞,并显著增强姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的敏感度,提示Chk1可作为姜黄素治疗胃癌的有效增敏靶点。     

siRNA沉默DNMT1对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响

目的 靶向人DNMT1（DNA methyltransferase 1, DNMT1）构建RNA干扰载体,研究其对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法 靶向DNMT1基因设计三条短发夹状RNA(short hairpin RNA, shRNA) 的寡核苷酸片段,构建重组体pGCsi-DNMT1,转染至乳腺癌细胞株MCF-7,定量PCR 法检测DNMT1 mRNA表达水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT 法检测细胞生长情况;Annexin V/PI双染法观察细胞凋亡情况;定量PCR 法分析沉默DNMT1基因后对RASSF1A、p16、p21、p27及ERβ基因表达的影响。结果 在构建的靶向DNMT1的shRNA重组质粒pGCsi-DNMT1中,成功筛选到pGCsi-T3能显著下调DNMT1的表达。实时定量PCR检测结果证实重组质粒pGCsi-DNMT1对乳腺癌MCF-7细胞中DNMT1基因的转录有明显的抑制作用。MCF-7细胞转染后,pGCsi-DNMT1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖;大量细胞发生凋亡;细胞周期分析可见S期明显减少,而G₁/G₀期细胞显著增加;定量PCR检测到乳腺癌细胞中RASSF1A、p16、p21及ERβ基因mRNA表达水平明显升高,而p27基因表达水平未见明显变化。结论 重组质粒pGCsi DNMT1能特异有效地抑制MCF-7细胞内DNMT1的表达、 抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并可通过抑制DNMT1的活性来解除相关基因启动子区的高度甲基化状态,从而促进肿瘤相关基因的表达,提示DNMT1可作为乳腺癌基因治疗的新靶标。     

siRNA干扰Chk1抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究

背景与目的：细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase1,Chk1）与肿瘤的关系及其在肿瘤发生、发展及治疗中的作用是目前研究的热点。为探索Chk1在人类肿瘤细胞中对生长增殖活性和细胞周期的调控作用,本研究旨在观察siRNA干扰Chk1基因对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。方法：采用RNAi技术抑制BGC823细胞中Chk1表达,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达情况,实验分为未转染组、脂质体组和Chk1siRNA转染组三组。然后采用MTT法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。结果：Western blot检测结果显示,Chk1siRNA转染24h后,BGC823细胞中Chk1蛋白相对灰度值为0.11±0.08,明显弱于未转染对照组的0.66±0.21和脂质体转染组的0.70±0.25（P〈0.05）,而未转染对照组和脂质体转染组之间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。转染Chk1siRNA的BGC823细胞其Chk1蛋白表达量下降了83.1%。MTT法检测结果显示,Chk1蛋白表达缺失可导致BGC823细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为48.1%（P〈0.05）。FCM法检测结果显示,Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,未转染组24和48h后细胞在G0/G1期为48.3%和50.2%,转染Chk1siRNA组细胞在转染24和48h后G0/G1期增加至63.9%和66.1%,增殖指数（PI）由51.7%（24h）和49.8%（48h）减少至36.2%（24h）和34.4%（48h）。结论：Chk1siRNA转染可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关。     

RhG-CSF对乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响

目的：探讨人重组粒细胞集落刺激因子（RhG-CSF）对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖作用的影响。方法：体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,将含不同浓度RhG-CSF的培养液与MCF-7细胞共同培养不同时间,采用MTT比色法计算细胞生长增殖率;Anexxin V/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率。实验结果用SPSS.v16.0软件分析。结果：不同浓度RhG-CSF处理细胞后,可以显著促进MCF-7细胞株的增殖（P〈0.01）,且当浓度为10μg/L时增殖作用最强。同时各浓度的RhG-CSF亦可抑制MCF-7细胞凋亡（P〈0.01）。结论：RhG-CSF可以显著促进人乳腺癌细胞株MCF-7增殖。当浓度小于10μg/L时,增殖呈浓度依赖性。大于10μg/L时,增殖能力反而逐渐下降。同时RhG-CSF亦可抑制MCF-7细胞凋亡。     

RhG-CSF对乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响

目的:探讨人重组粒细胞集落刺激因子(RhG-CSF)对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖作用的影响。方法:体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,将含不同浓度RhG-CSF的培养液与MCF-7细胞共同培养不同时间,采用MTT比色法计算细胞生长增殖率;Anexxin V/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率。实验结果用SPSS.v16.0软件分析。结果:不同浓度RhG-CSF处理细胞后,可以显著促进MCF-7细胞株的增殖(P<0.01),且当浓度为10μg/L时增殖作用最强。同时各浓度的RhG-CSF亦可抑制MCF-7细胞凋亡(P<0.01)。结论:RhG-CSF可以显著促进人乳腺癌细胞株MCF-7增殖。当浓度小于10μg/L时,增殖呈浓度依赖性。大于10μg/L时,增殖能力反而逐渐下降。同时RhG-CSF亦可抑制MCF-7细胞凋亡。     

MSTI基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的：探讨MST1（mammalian sterile 20-like kinase1）基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响。方法：构建含有标签蛋白FLAG的MSTI质粒pCMV-FLAG-MST1；将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine2000的介导下转染MCF-7细胞，通过Western印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况；分别在转染后12、24、36和48h通过MTF法观察MST1对细胞增殖的影响；转染后36h加入5-溴-2’脱氧尿嘧啶（bromodeoxy uridine，BrdU），通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响；转染后36h加入顺铂，作用14h后通过AnnexinV检测其对细胞凋亡的影响。结果：成功构建pCMV—FLAG-MST1质粒；MTT及BrdU检测显示，转染pCMV—FLAG-MST1质粒后MCF-7细胞增殖明显受到抑制；AnnexinV检测结果提示，高表达MST1后，细胞的凋亡率相对增高。结论：在乳腺癌细胞MCF-7中高表达MST1，不仅可以抑制细胞增殖，还可以促进细胞凋亡。     

REGgamma基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋白酶体激活因子REGgamma(REGγ)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的作用.方法:构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ,通过脂质体转染将REGγ基因导入MCF-7,以G418(800mg/L)连续筛选获得稳定高表达REGγ基因的细胞株,以转染空载体和未转染细胞作为对照.分别利用MTT法及免疫细胞化学方法检测各组细胞PCNA的表达分析REGγ基因对细胞增殖的影响;以Caspase-3分光光度法及AnnexinV-FITC的流式细胞仪(FCM)来检测细胞凋亡的变化;以透射电镜(TEM)观察细胞超微结构的改变.结果:获得稳定转染且高表达REGγ的细胞株.经Western Blot检测转染REGγ基因的细胞(实验组),其REGγ蛋白表达明显高于对照组细胞(P＜0.05);未转染组、空载体组和实验组细胞的倍增时间分别为34.6、35.1、26.7h.提示实验组细胞倍增时间缩短;MTT法绘制生长曲线提示实验组细胞生长明显加速;免疫细胞化学检测PCNA结果显示,未转染组、空载体组和实验组细胞的染色灰度值分别为89.61±14.32、87.95±16.38、133.47±8.14,表明实验组细胞PCNA表达明显增强(P＜0.01);Caspase-3分光光度法检测显示,实验组细胞的OD值普遍低于对照组(P＜0.05);Annexin V-FITC的FCM检测显示,实验组细胞的凋亡率明显低于对照组(P＜0.01);TEM观察实验组细胞表现为核仁肥大,线粒体、高尔基体丰富或扩张,未见凋亡小体形成.结论:REGγ基因具有促进乳腺癌MCF-7细胞增殖并抑制其凋亡的作用.     

siRNA沉默HYAL1基因表达对人乳腺癌细胞生长和增殖的影响

背景与目的：有研究证实透明质酸酶（hyaluronidase,Hyase）与人乳腺癌的恶性潜能相关。本研究拟探讨RNA干扰是否能有效抑制Hyde基因HYAL1的表达以及人乳腺癌细胞的生长和增殖。方法：体外化学合成HYAL1序列特异性双链RNA（dsRNA）,在脂质体（SiPORT Lipid）的介导下转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30。荧光共聚焦显微镜下观察转染效率,RT-PCR分析HYAL1 mRNA的表达,MTT测定细胞的增殖,流式细胞仪测定细胞周期。结果：（1）HYAL1-siRNA能有效地封闭HYALl基因的表达．使HYAL1 mRNA相对水平明显降低（P〈0．05）;（2）HYAL1-siRNA能明显抑制细胞增殖（P〈0．05）;（3）HYAL1-siRNA使细胞周期G0／G1期细胞百分比明显增加,S期的细胞百分比显著减少（P〈0．05）。结论：siRNA-HYAL1能有效抑制人乳腺癌细胞株HYAL1基因的表达,抑制细胞增殖,将更多的细胞阻滞在G0／G1期。     

他莫昔芬对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制

目的 探讨他莫昔芬(TAM)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制.方法 采用对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,以无血清无酚红高糖DMEM培养基对其进行24 h的培养,然后将其分别接种并分为对照组(无血清无酚红高糖DMEM培养基)、TAM组(含有1μmol/L TAM的无血清无酚红高糖DMEM培养基),采用Western blot法、RT-PCR法检测两组MCF-7细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达水平,采用Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力.结果 TAM组MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均明显高于对照组,VEGF、MMP-9、MMP-2 mRNA相对表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);TAM组MCF-7细胞的侵袭能力相对数明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01).结论 TAM可能发挥类雌激素功能,促进乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力,这与其提高MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2表达水平有关.     

共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制的研究

目的:研究2种共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)单体--顺9,反11-CLA(cis 9,trans11-CLA, c 9,t11-CLA)和反10,顺12- CLA(trans10,cis12-CLA, t10,c12-CLA) 诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制.方法:采用MTT法检测CLA对MCF-7细胞的生长抑制作用,锥虫蓝染色绘制CLA作用后MCF-7细胞的生长曲线;荧光显微镜观察及FCM检测MCF-7细胞的凋亡和细胞周期的改变;RT-PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞PPARγ、Bcl-xL和Bcl-xS mRNA以及PPARγ、Bcl-2、Bax和caspase-3的蛋白表达.结果:2种CLA单体均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western印迹法检测结果显示,2种CLA单体均可以提高PPARγ、Bcl-xS mRNA和PPARγ、Bax、caspase-3蛋白的表达,降低Bcl-xL mRNA和Bcl-2蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);且2种CLA单体对PPARγ与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3的表达影响呈剂量和时间依赖性及同步相关性.结论:c 9,t11-CLA和t10,c12-CLA对乳腺癌MCF-7细胞具有抑制生长和促凋亡的作用,CLA可能作为PPARγ的配体通过激活PPARγ-Bcl-2-caspase-3细胞凋亡信号通路而实现抑制肿瘤细胞生长的作用.     

ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的　探讨环氧合酶-２（ＣＯＸ-２）选择性抑制剂ＮＳ-３９８对乳腺癌细胞ＭＣＦ-７增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法　用不同浓度ＮＳ-３９８作用ＭＣＦ-７细胞后,采用四甲基唑蓝法（ＭＴＴ）检测ＮＳ-３９８对ＭＣＦ-７细胞增殖的抑制率;流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞周期、细胞凋亡以及ＣＯＸ-２、Ｂｃｌ-２和Ｂａｘ蛋白的表达;用放射免疫分析（ＲＩＡ）检测培养液上清中前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）含量。结果　ＮＳ-３９８可显著抑制ＭＣＦ-７细胞的生长,并随药物的浓度升高、时间延长其抑制作用增强。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７Ｇ_０／Ｇ_１期细胞显著增多（Ｐ＜０.０１）,Ｓ期及Ｇ_２／Ｍ期细胞显著减少（Ｐ＜０.０１）,并引起显著的细胞凋亡。ＮＳ-３９８使ＭＣＦ-７细胞ＣＯＸ-２和Ｂｃｌ-２表达显著降低（Ｐ＜０.０１）,而Ｂａｘ表达显著增高（Ｐ＜０.０１）,并使ＭＣＦ-７细胞产生的ＰＧＥ２显著降低（Ｐ＜０.０１）。结论　ＮＳ-３９８可抑制乳腺癌细胞ＭＣＦ-７的增殖并可诱导其凋亡,其作用机制可能通过抑制ＣＯＸ-２活性,使ＰＧＥ_２产量降低,从而下调Ｂｃｌ-２表达及激活Ｂａｘ表达。     

辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀（SVA）体外对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及其可能的机制。 方法 选用人乳腺癌MCF-7细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度SVA（0、3.25、6.25、12.5、25、50和100 μmol／L）处理MCF-7细胞24、48、72 h后的增殖抑制作用,荧光染色法观察SVA（0、2和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的凋亡形态学变化,流式细胞仪测定SVA（0和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的细胞周期变化,免疫印迹法分析SVA（0、2、4和8 μmol／L）处理MCF-7细胞72 h后细胞内Bcl-2和Bax蛋白水平的表达。结果 不同浓度SVA处理不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受到抑制,且增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性;荧光显微镜观察发现SVA能够诱导MCF-7细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期显示,SVA阻滞MCF-7细胞于G0／G1期。免疫印迹 结果 显示,SVA处理组的Bcl-2蛋白表达水平低于对照组,Bax蛋白表达水平明显高于对照组,且随SVA浓度的增高,Bcl-2蛋白水平逐渐降低,Bax蛋白水平逐渐升高。结论 SVA对人乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞周期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

MST1 基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨 MST1 ( mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响.方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western 印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48 h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入5-溴-2'脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入顺铂,作用14 h后通过Annexin Ⅴ检测其对细胞凋亡的影响.结果:成功构建 pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后 MCF 7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高.结论:在乳腺癌细胞MCF 7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡.     

MCF—7细胞球对加热和放射的敏感性

目的 :观察中等加热温度和低剂量放射对 MCF- 7单层细胞和细胞球的细胞杀伤作用。材料与方法 :通过测量 MCF- 7单层细胞及不同大小细胞球 (70μm、2 0 0μm、4 0 0μm、70 0μm)来观察细胞杀伤作用。用流式细胞仪来测量 4 1℃加热过程中的细胞周期变化 ,用克隆形成法来计算细胞生存率。结果 :MCF- 7细胞球 4 1℃加热后其生存率低于单层细胞 ,而 4 3℃加热后其生存率则高于单层细胞。 4 1℃加热过程中发生热耐受。同时本组实验发现 MCF- 7单层细胞和细胞球对放射敏感性相差不大。结论 :在4 1℃加热过程中 ,发生 G1阻滞 ,这与加热杀伤的敏感性有关     

新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的 探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg／ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MCF 7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg／ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度（IC₅₀）为1763 μg／ml。0.5～3.0μg／ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg／ml新藤黄酸处理MCF 7细胞48h后早期凋亡率为3.7％,总凋亡率为7.2％,72h早期凋亡率为6.7％,总凋亡率为13.7％;3μg／ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5％,总凋亡率为71.7％,72h早期凋亡率为76.9％,总凋亡率为81.5％。0.5、1.0、1.5 μg／ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白 FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论 新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。     

乳腺癌干细胞相关亚群细胞周期分析

目的：流式细胞仪分选乳腺癌细胞系MCF-7的肿瘤干细胞相关SP亚群（side population，SP），并检测SP和非SP细胞周期。方法：MCF-7细胞悬液经Hoeehst33342染色，流式细胞仪分选SP和非SP后，乙醇固定，PI染色，流式细胞仪检测细胞周期。结果：SP细胞在MCF-7细胞中占4％，Vempamil阻断后比例减为0．5％。SP细胞中S／G2／M期细胞最低，仅占7．9％，而非SP细胞增殖期比例相对高，S／G2／M期细胞约占34．2％。未分选细胞中S／G2／M期细胞比例居中，为22．9％。结论：人乳腺癌细胞系MCF-7含SP亚群，比例约为4％，且SP细胞多处于静止期，具有一般干细胞的特性。     

乳腺癌干细胞相关亚群细胞周期分析

目的:流式细胞仪分选乳腺癌细胞系MCF-7的肿瘤干细胞相关SP亚群(side population,SP),并检测SP和非SP细胞周期。方法:MCF-7细胞悬液经Hoechst33342染色,流式细胞仪分选SP和非SP后,乙醇固定,PI染色,流式细胞仪检测细胞周期。结果:SP细胞在MCF-7细胞中占4%,Verapamil阻断后比例减为0·5%。SP细胞中S/G2/M期细胞最低,仅占7·9%,而非SP细胞增殖期比例相对高,S/G2/M期细胞约占34·2%。未分选细胞中S/G2/M期细胞比例居中,为22·9%。结论:人乳腺癌细胞系MCF-7含SP亚群,比例约为4%,且SP细胞多处于静止期,具有一般干细胞的特性。     

ERβ1对乳腺癌MCF-7细胞Efp基因表达的抑制作用

目的 了解雌激素受体β1（ERβ1）对雌激素敏感性指状蛋白（Efp）基因的调节作用,为进一步探讨ERβ对Efp基因的调控机制奠定基础.方法 应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞中,再用Western blot检测转染细胞中Efp蛋白表达的变化.MTT比色试验观察ERβ1真核表达质粒转染后MCF-7细胞增殖活性的变化.结果 外源性ERβ1真核表达质粒组MCF-7细胞较未转染组MCF-7细胞Efp蛋白表达明显减弱.ERβ1基因转染后的MCF-7细胞的增殖活性降低.结论 ERβ1基因的表达可以抑制人乳腺癌MCF-7细胞中Efp基因的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖能力,可能在乳腺肿瘤发生、发展机制中具有重要的作用.     

PCDGF shRNA对乳腺癌细胞系MCF-7增殖凋亡和VEGF表达的影响

背景与目的：畸胎瘤细胞源性生长因子（PC cell-derived growth factor,PCDGF）是调节乳腺癌细胞增殖和凋亡的重要因子,然而其作用机制目前尚不清楚。本研究通过构建并体外转染针对PCDGF的shRNA,分析PCDGF对乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及细胞中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法：RT-PCR法检测PCDGF在4种乳腺癌细胞系中的表达,构建含2条shRNA的RNAi质粒,脂质体转染质粒于MCF-7细胞中,MTT法检测转染前后细胞增殖变化,ELISA法检测VEGF表达。结果：被检测的4种乳腺癌细胞中均有不同程度的PCDGFmRNA表达,转染shRNA质粒对MCF-7细胞PCDGF mRNA表达抑制率为59．8％;转染质粒后MCF-7细胞增殖受到抑制,实验组早期细胞凋亡率为30．41％,晚期细胞凋亡率为35．38％;阴性对照组早期细胞凋亡率为3．69％,晚期细胞凋亡率为15．39％。同阴性对照质粒相比,转染阳性质粒的MCF-7细胞VEGF的表达抑制率为47．2％。结论：PCDGF调节MCF-7细胞的增殖、凋亡和VEGF的表达。