黄色素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究黄色素（ＳＹ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及其作用机制。方法 以培养的家兔ＶＳＭＣ为材料，采用细胞计数和＾３２Ｐ掺入法，研究了ＳＹ对ＶＳＭＣ的增殖及ＶＳＭＣ中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性的影响。结果 ＳＹ对血清刺激的ＶＳＭＣ的增殖具有抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。１．０ｇ／Ｌ达到最大抑制，抑制率为５４．６％，４ｄ（１．０ｇ／Ｌ ＳＹ）达到最大抑制，抑制率为５２．０％，超过４ｄ     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的研究表明,动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的独立危险因子,同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）,能通过促进血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖而影响AS的发生,但Hcy与VSMCs增殖之间的关系,目前并不清楚。本研究采用不同浓度的Hcy刺激原代培养的脐静脉VSMCs,分析Hcy对VSMCs增殖周期的影响。方法常规培养人脐带VSMCs,将培养的VSMCs分为,0、50、100、200、500及1000μmol／LHcy组,其中Opmol／LHcy组为对照组。当VSMCs细胞长满80％瓶底时,各组加入不同浓度的Hcy,继续培养细胞24h和48h,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,采用MTT法检测VSMCs的增殖活力,采用流式细胞技术分析VSMCs的增殖周期。结果当Hey刺激VSMCs24h和48h后,VSMCs的数目增多,细胞的活力增加（P〈0．05）;同时VSMCsS期细胞减少,G2／M期细胞增多,G0／G1细胞基本不变。结论1．Hcy可直接诱导VSMCs的增殖;2．Hcy促进VSMCs从S期向G2／M期转变。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞 (Vascularsmoothmusclecells ,VSMCs)的促增殖作用的量效和时效关系。方法　采用 4～ 10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。 0 .1,0 .5 ,1,3,10U/ml凝血酶刺激VSMCs 2 4h或 0 .5U/ml和 1U/ml凝血酶刺激VSMCs 0 ,1,6 ,12 ,2 4,48,72h ,采用MTS法和 β N 乙酰氨基己糖苷酶测定VSMCs细胞增殖率。结果　①不同浓度的凝血酶对VSMCs有明显促增殖作用 (P <0 .0 1) ;但凝血酶浓度为 0 .1～ 10U/ml在 2 4h时对VSMCs的促增殖作用无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;② 0 .5 (U/ml)和 1.0 (U/ml)两种浓度的凝血酶促VSMCs增殖相对于对照组 ,在各时间段均有明显促增殖作用 (P <0 .0 5 )。增殖曲线呈双峰样改变 ,1h和 2 4h峰值说明凝血酶对VSMCs的促增殖作用不仅有迅速而短暂的作用 ,而且有后发迟缓的作用。结论　①凝血酶浓度在 0 .1～ 10U/ml之间促VSMCs增殖无浓度依赖性 ;②凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变。     

茶多酚对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨茶多酚对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,应用不同剂量的茶多酚作用 2 4 h后 ,采用 MTS/ PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,茶多酚对血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P<0 .0 0 1)。流式细胞术检测结果表明 ,茶多酚可以使血管平滑肌细胞大部分处于 G0 / G1 期 ,与对照组相比有明显差异 (P<0 .0 5 ) ,并且可以诱导其凋亡。结论　茶多酚可明显抑制离体大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

青藤碱对家兔血管平滑肌细胞增殖的影响

研究青藏对血管平滑肌细胞增殖作用及ＤＮ合成的影响。方法采用内皮素刺激的离子体家兔血管平滑肌细胞增殖模型，细胞计数，氚－胸腺嘧啶核苷掺入方法。结果青藤碱明显抑制血管平滑肌细胞增殖反应及ＤＮＡ合成，呈剂量依赖关系。     

家兔血管成形术前后血小板对培养血管平滑肌细胞增殖的影响

探讨腔内血管成形术后再狭窄形成的部分机制。方法 对家兔腹主动脉粥样硬化狭窄估行ＴＡ，观察培养的ＴＡ前后及正常血管平滑肌细胞的细胞计数和＾１２５碘－尿嘧啶脱氧核苷参入变化。结果 ＴＡ后４０ｈ的ＶＳＭＣ数值较ＡＳ－ＶＳＭＣ增加不明显，但二者较正常ＶＳＭＣ明显增加。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响及叶酸的拮抗作用

目的探讨不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和细胞周期分布的影响及叶酸对Hcy的拮抗作用。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为6组:空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、2005、00μmol.L-1)和叶酸治疗组(Hcy100μmol.L-1+叶酸30μmol.L-1)。应用MTT法及流式细胞仪检测各组VSMCs增殖率及细胞周期。结果随着Hcy浓度的增加VSMCs的增殖率增加;Hcy作用后VSMCs G0/G1期细胞数降低;S期和G2/M期细胞数增加,处于DNA合成期的细胞数明显增加,而叶酸治疗组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),叶酸治疗组与Hcy 100μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy可通过对细胞周期的影响促进VSMCs的增殖,并在一定时间和浓度范围内呈明显的剂量依赖关系;叶酸对Hcy有拮抗作用。     

球囊血管成形术对兔血管平滑肌细胞增殖周期的影响

本实验对２６只髂动脉粥样硬化模型兔进行球囊血管成形术，应用流式细胞仪检测血管成形术后不同时期成形段血管平滑肌细胞增殖周期动力学改变。结果表明，血管成形术后４８～７２ｈ血管平滑肌细胞Ｓ期、Ｇ２期和Ｍ期细胞数即增加；术后２～４周达高峰；６周后不再增加，但部分血管增殖期细胞仍维持在高水平，提示平滑肌细胞增生是血管成形术后再狭窄的重要原因之一。     

七叶内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制及其机制

目的 观察七叶内酯(esculetin)对大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)增殖的影响并探讨其主要机制.方法 体外培养rVSMCs,观察不同浓度七叶内酯作用不同时间对rVSMCs增殖的影响.细胞计数及MTT检测rVSMCs的增殖;Western blot检测细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、蛋白激酶B(Akt)和Caspase-9的表达.结果 细胞计数和MTT结果均表明,随着药物浓度的增加(5、25、100μmol/L)和作用时间的延长(24、48、72 h),七叶内酯抑制rVSMCs增殖的作用逐渐增强,与空白对照组相比差异均有统计学意义;各浓度组七叶内酯均能显著抑制Akt、ERK1/2的磷酸化,促进Caspase-9的活化,并呈现出剂量依赖性.结论 在一定范围内,七叶内酯可呈剂量和时间依赖性抑制rVSMCs的增殖,其主要机制可能是抑制了Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK和Ras-P13K-Akt信号转导通路.     

辛伐他汀抗血脂代谢紊乱型大鼠血管平滑肌细胞增殖的实验观察

目的　观察辛伐他汀对血脂代谢紊乱型大鼠血脂水平的影响以及对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法　将 4 0只Wister大鼠分为空白对照组 ,模型组 ,辛伐他汀组 3组 ,喂饲高脂饲料造模 ,辛伐他汀组每天用西药辛伐他汀 (1.0ml 10 0g体重 ,1ml含药 0 .17mg) (浙江新昌京新制药有限公司 ,批号 :0 0 0 1175 )灌胃 ,以上各组共灌胃 10周 ,自由饮水 ,于实验第 77天全部处死取材。分别检测各组大鼠的总胆固醇 (TC) ,甘油三酯 (TG) ,低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C) ,高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)的含量 ,用PCNA标记法检测VSMC增殖率。结果　模型组的TC水平明显高于其他两组 (P <0 .0 1) ,LDL C的含量空白对照组和模型组差异有显著性。模型组的PC NA阳性细胞率明显高于其他两组 (P <0 .0 1)。经相关性分析显示 ,模型组VSMC增殖率与血清TG、TC含量呈正相关 ,其相关系数分别为r=0 .786 ,r=0 .6 96 ,经检验差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　西药辛伐他汀抑制内源性胆固醇的合成 ,为血脂调节剂 ,它通过降低血脂异常大鼠的TC含量 ,降低LDL C水平 ,还可能通过防止脂质的氧化 ,改善内皮功能 ,恢复内皮依赖性血管舒张反应 ,抑制VSMC的增生与迁移     

天麻注射液对主动脉平滑肌细胞增殖的影响

在家兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）离体培养基础上，应用细胞计数、３Ｈ－ＴｄＲ掺入及测定培养液中前列环素（ＰＧＩ２）产物含量的方法，探讨天麻注射液及其有效成分天麻素对ＶＳＭＣ增殖的影响及作用机理。结果表明：天麻注射液能明显抑制ＶＳＭＣ数目的增长和细胞对３Ｈ－ＴｄＲ的摄取，并可增加ＰＧＩ２水解产物６－Ｋ－ＰＧＦ１α的释放，但天麻素却未发现上述抑制ＶＳＭＣ增殖作用，提示天麻注射液的抗ＶＳＭＣ增殖作用与天麻素无关，而ＰＧＩ２产物含量增加可能是其机理之一。     

雷公藤内酯醇对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及其作用机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,细胞融合达60％时培养基中加入不同浓度的雷公藤内酯醇和雷帕霉素。采用细胞计数法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测VSMCs内c-fos mRNA表达水平。结果雷公藤内酯醇和雷帕霉素均明显抑制血清诱导的大鼠VSMCs增殖,阻断细胞由G0／G1期向S期转化;RT-PCR检测显示,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,c-fos mRNA表达明显减少。结论雷公藤内酯醇能明显抑制血清诱导的VSMCs增殖,而阻断细胞周期、下调原癌基因c-fos mRNA的表达可能是其药理机制之一。     

改良大鼠血管平滑肌细胞的原代培养

目的探讨提高大鼠血管平滑肌细胞原代培养效率的方法。方法采取组织块贴壁法进行原代培养,高糖DMEM培养基中加入血小板源性生长因子-B(platelet-derived growth factor-b,PDGF-B),用细胞形态学及免疫组织化学法对血管平滑肌细胞鉴定。结果原代培养,4～6天可见细胞长出,2周可以传代;传代培养,1周可以传代1次。镜下可见细胞以梭形为主,呈"峰-谷"状生长,免疫组化染色可见细胞浆内有大量染成棕黄色的肌丝。结论在采用组织块贴壁法进行培养时,加入PDGF-B培养,可获得纯度高、活性好的血管平滑肌细胞,并缩短了培养周期。     

白杨素抑制血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究白杨素对血小板源性生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及细胞周期调控机制。方法WST-1法测定VSMCs增殖,5-溴-2'-脱氧尿苷掺入法测定DNA合成,流式细胞术分析VSMCs细胞周期,Western blot法测定细胞周期关键调控因子周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CDK抑制物p27^kip1的表达。结果20ng/ml PDGF-BB显著增强VSMCs增殖及DNA合成,而白杨素呈剂量依赖性抑制PDGF-BB刺激的VSMCs增殖及DNA合成。12.5μmol/L白杨素预处理使PDGF-BB刺激的VSMCs阻滞于G₀/G₁期,并能显著降低VSMCs中CDK4和CDK6的蛋白表达水平,同时升高p27^kip1蛋白水平。结论白杨素抑制PDGF-BB刺激的VSMCs增殖,其机制可能与CDK4和CDK6表达下调而p27^kip1表达上调导致的细胞周期阻滞有关。     

血红素氧合酶-1对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)增殖的影响。方法大鼠主动脉平滑肌细胞株经复苏、传代培养后用于实验,设置空白对照组、HO-1诱导组、HO-1抑制组,后两组分别加用血晶素、锌原卟啉Ⅸ与细胞共同孵育,用Western blot法检测HO-1表达量,并检测HO-1活力;用MTT法检测RASMC增殖能力。同时,还观察了血晶素、锌原卟啉Ⅸ的细胞毒性作用。结果上调HO-1蛋白表达及升高HO-1活力能显著抑制血清刺激的RASMC增殖,反之,抑制HO-1蛋白表达及其活力则增强血清刺激的RASMC增殖。实验浓度的血晶素、锌原卟啉Ⅸ无明显细胞毒性作用。结论 HO-1蛋白高表达能有效抑制RASMC增殖。     

Ⅰ型内皮素受体反义寡核苷酸抑制人血管平滑肌细胞增殖

目的　研究Ⅰ型内皮素 (ET -1)受体 (ETA)反义寡核苷酸 (ODN)对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的影响。方法　培养人桡动脉 (humanradialartery ,HRA)的VSMCs ,通过四唑盐 (MTT)比色实验测定细胞的增殖 ,进而分别采用放射受体结合分析法和放射免疫法检测ETA蛋白表达和ET -1自分泌的情况。结果　ETA -ODN显著抑制VSMCs增殖 ,而且具有浓度和时间依赖性。ETA -ODN( 15 μmol L)具有时间依赖抑制ETA表达。ETA -ODN( 15 μmol L)作用 2 4、48h ,VSMCs的上清液ET -1水平以及VSMCs平均ET -1分泌水平 ,较对照组均显著降低 (P <0 .0 5 )。作用 72h ,ET -1分泌上清液水平继续降低 (P <0 .0 5 ) ,但是VSMCs平均ET -1分泌水平不但没有降低 ,反而高于对照组水平 (P <0 .0 5 )。结论　ETA -ODN通过减弱ETA表达和调节ET -1的自分泌抑制HRA的VSMCs增殖 ,提示对临床上血管移植术后的再狭窄有防治作用。     

血管平滑肌细胞与动脉粥样硬化关系研究进展

随着对血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化中研究的不断深入,逐步意识到细胞凋亡的存在及其相互之间的关系,对动脉粥样硬化的认识亦由从形态结构和生化组成等描述病变,发展为在细胞乃至分子基因水平上的深入研究,发现血管平滑肌细胞的增殖和凋亡在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。     

溶血性磷脂酰胆碱对培养的小牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

为探讨溶血性磷脂酰胆碱（Lysophosphatidylcholine,LysoPC）对培养的小牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用,采用原代培养的小牛胸主动脉平滑肌细胞,用细胞直接计数法、MTT比色法、流式细胞术,观察LysoPC对平滑肌细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,LysoPC在浓度小于（或等于）50μmol/L时呈剂量依赖性刺激平滑肌细胞增殖。结论:LysoPC可显著地诱导小牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖。提示LysoPC在动脉粥样硬化的发生中起重要作用。