碘缺乏、甲状腺功能减退对仔鼠海马RKC活性及表达的影响

目的 :研究碘缺乏、甲状腺功能减退对仔鼠海马蛋白激酶C活性的影响 ,并测定碘缺乏、甲状腺功能减退大鼠仔鼠海马组织c -fos、c-jun的表达 ,以探讨碘缺乏、甲状腺功能减退调节脑发育的机制。方法 :分别选用低碘饲料及他巴唑诱导建立低碘及甲减大鼠动物模型 ,收集生后 30d时仔鼠海马组织 ,测定海马细胞浆、细胞膜PKC活性。免疫组织化学S -P法染色 ,观察生后 30d时低碘组、甲状腺功能减退组 (甲减组 )及对照组大鼠仔鼠海马c-fos、c -jun表达情况并进行图像分析。结果 :生后 30d低碘组和甲减组仔鼠海马胞液PKC活性略低于对照组 ,而胞膜PKC活性稍高于对照组 ,低碘组、甲减组仔鼠海马胞膜PKC活性与胞浆PKC活性比值 (1. 4 1± 0 .12 ,1. 19± 0 . 14 )较对照组 (0 . 6 5± 0. 0 9)升高 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。生后 30天低碘组和甲减组仔鼠海马组织c -fos、c-jun灰度值均显著高于对照组P <0 .0 1) ,提示其表达水平明显降低。结论 :碘缺乏、甲状腺功能减退可引起仔鼠海马胞浆PKC向胞膜的转运 ,并可降低仔鼠海马组织原癌基因c -fos、c-jun表达 ,进而影响神经系统及智力发育 ,可能是低碘、甲减引起海马损害导致学习记忆功能减退的机制之一。     

PHOSPHORYLATION OF CYTOCHROME P4502E1 (CYP2E1) BY CALMODULIN DEPENDENT PROTEIN KINASE PROTEIN KINASE C AND cAMP DEPENDENT PROTEIN KINASE

Phosphorylation of pure cytochrome P4502E1 (CYP2E1) was achievedin vitro using Ca²⁺/calmodulin-dependent protein kinase II (CaMkinase II), protein kinase C (PKC) and cAMP-dependent proteinkinase (PKA). The stoichiometry and time-course of phosphorylationwere determined. CaM kinase II was the most efficient enzymecapable of catalyzing this phosphorylation reaction: the maximumincorporation of ³²PO₄ was 0.8 mol/mol CYP2E1 in 20 min. PKAphosphorylated a maximum of 0.7 mol of ³²PO₄/ mol of cytochromewithin 60 min. The phosphorylation by PKC reached a maximumof 0.19 mol of ³²PO₄/mol of cytochrome and this occurred withina few minutes of incubation. Limited digestion by S. aureusV8 protease (SAP) of CYP2E1, which had been phosphorylated byeither PKA and PKC, yielded a single major phosphopeptide withan M_r of approximately 18,000. Limited digestion of CYP2E1,that had been phosphorylated by CaM kinase II, yielded phosphorylatedpolypeptides with M_r of approximately 18,000 and 15,000. Theseresults raise the possibility that these three kinases may beinvolved in the regulation of CYP2E1.     

花色苷通过腺苷一磷酸激活蛋白激酶减少肝脏HepG2细胞的脂肪积聚

目的探讨花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)对HepG2细胞脂肪含量的影响以及可能机制。方法HepG2细胞分别用1、10、100μmol/LCy-3-g处理1h,设置对照,检测腺苷一磷酸激活蛋白激酶(AMPK)及其磷酸化水平、肉碱脂酰转移酶-I(CPT-I)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化水平、AMPK活性、甘油三酯含量以及脂肪酸氧化水平。结果与对照组相比,显著上调CPT-I蛋白的表达水平,显著增强AMPK的活性,显著促进AMPK蛋白磷酸化,但对AMPK蛋白表达水平无影响,显著减少HepG2细胞内的甘油三酯含量,10、100μmol/LCy-3-g能显著促进ACC的磷酸化,100μmol/LCy-3-g能显著促进HepG2细胞脂肪酸氧化。结论花色苷Cy-3-g可以减少HepG2细胞脂肪积聚;其机制可能与调节HepG2细胞AMPK-ACC-CPT-I信号通路,促进脂肪酸氧化有关。     

二氧化硒诱导的正常肝细胞株及肝癌细胞株的凋亡

目的 :　研究中毒剂量二氧化硒 ( Se O2 )对正常肝细胞 HL- 770 2及肝癌细胞 SMMC-772 1的影响。方法 :　用流式细胞术观察不同浓度硒对两种细胞的损伤作用及对两种细胞 Bcl- 2 ,P5 3蛋白表达的影响。结果 :　 30 μmol/L的硒作用 48h可以明显抑制正常肝细胞株 HL- 770 2及肝癌细胞株 SMMC- 772 1的增生与活力 ,诱导两种细胞的凋亡 ,且两种细胞伴随着不同程度的 Bcl-2蛋白的下调及 P5 3蛋白的上调。结论 :　中毒剂量的 Se O2 诱导正常肝细胞 HL- 770 2和肝癌细胞 SMMC- 772 1的凋亡 ,且这种诱导凋亡作用是无选择性的 ,但两种细胞调亡的机制有一定区别。     

植酸对人肝癌细胞株HepG_2细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法以体外培养人肝癌细胞株HepG2为研究对象,应用流式细胞仪检测不同浓度IP6作用24h后对HepG2周期的影响;以免疫细胞化学法检测IP6对细胞周期相关蛋白cyclinD1、Rb、P27表达的影响;RT-PCR法检测IP6对HepG2细胞cyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果经IP6作用处理的HepG2细胞的细胞周期发生G1期阻滞。免疫细胞化学结果显示:与对照组比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1蛋白的表达(F=225.02,q=15.20-25.35,P<0.05),上调Rb(F=63.31,q=2.77-13.06,P<0.05)、P27蛋白的表达(F=254.75,q=4.71-25.71,P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1(F=672.34,q=16.41-41.99,P<0.05)和CDK4 mRNA(F=108.35,q=5.32-16.27,P<0.05)的表达。结论 IP6对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低cyclinD1、CDK4水平,上调Rb、P27蛋白的水平而作用于G1-S限制点,使HepG2细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

2型糖尿病脉压与微量白蛋白尿及高敏C反应蛋白的相关性研究

[目的]对2型糖尿病患者脉压与微量白蛋白尿及高敏C反应蛋白的相关性进行研究。[方法]对300例2型糖尿病患者进行24h动态血压监测,计算24h平均脉压,根据24h的平均脉压水平分为2组,进行微量白蛋白尿及高敏C反应蛋白检测,并进行相关性分析。[结果]2组间的平均脉压、微量白蛋白尿以及高敏C反应蛋白之间差异均具有统计学意义(P﹤0.05),并且具有相关性。[结论]2型糖尿病患者的平均脉压与微量白蛋白尿以及高敏C反应蛋白之间具有相关性。     

嗜中性活性肽-2(73)在人肝癌细胞株表达验证及分析

[目的]研究NAP-2(73)蛋白在人肝癌细胞株SMCC-7721和人肝正常细胞株HL-7702的表达差异,并初步探讨NAP-2(73)对肝癌作用的相关机制.[方法]运用蛋白免疫印迹(WB)对NAP-2(73)在人肝癌细胞株SMCC一7721和人肝正常细胞株HL-7702中的表达情况进行再验证,RT-PCR法检测NAP-2(73)mRNA水平的表达.[结果]验证结果证实,在肝癌细胞株中NAP-2(73)呈阳性表达,而在正常肝细胞株中无表达.Real-time PER结果显示肝癌细胞株中NAP-2(73)mRNA表达比正常肝细胞株增加了7倍.[结论]实验结果验证了初筛结果的可信性和生物信息学的分析和推测,提示NAP-2(73)可能是肝癌相关标志物.     

重离子束与X射线辐照对人舌鳞癌细胞周期影响的比较

[目的]研究重离子和X射线辐照对人舌鳞癌Tb细胞周期影响的规律。[方法]采用X射线和离子束分别辐照人舌鳞癌Tb细胞,X射线照射剂量为0、2、4、6、8Gy;重离子照射剂量为0、0.5、1、2.0、4.0Gy。PI荧光探针标记,流式细胞仪检测不同剂量组受照后在6h、12h、24h的细胞周期变化。[结果]人舌鳞癌Tb细胞在X射线照射后,2.0Gy组激活G1期检测点,而4.0、6.0、8.0Gy组激活G2期检测点。重离子照射后,Tb细胞G2/M期阻滞明显增加,阻滞程度具有剂量和时间依赖性,并且0.5、1Gy组细胞在12～24h时间点出现"崩溃"现象,细胞阻滞解除;2Gy和4Gy组细胞表现为明显的G2/M阻滞,未出现"崩溃"现象。在2Gy辐照时对细胞G2期阻滞率达到70%,相当于6GyX射线辐照。[结论]重离子和X射线对人舌鳞癌细胞周期影响不同,小剂量重离子束具有较高的生物学效应。     

肥胖与非肥胖型多囊卵巢综合征患者血清C反应蛋白水平及意义

[目的]探讨肥胖与非肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清中C反应蛋白(CRP)的变化及与胰岛素抵抗的关系。[方法]将56例PCOS患者按体重指数(BMI)分为非肥胖PCOS组(22例)和肥胖PCOS组(34例),46例正常妇女分为非肥胖对照组(19例)和肥胖对照组(27例)。测定血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、CRP浓度。[结果]PCOS组LH、LH/FSH、T、FINS显著高于对照组,胰岛素敏感指数(ISI)显著低于对照组,两组CRP水平无统计学差异。肥胖PCOS组和肥胖对照组血清CRP水平均显著高于各自的非肥胖组。血清CRP水平与BMI、FINS呈正相关,与ISI呈负相关。[结论]PCOS患者不存在慢性亚临床炎症,心血病风险仅限于合并肥胖或胰岛素抵抗的PCOS患者。     

2型糖尿病患者颈动脉硬化与超敏C反应蛋白关系的临床分析

[目的]探讨C反应蛋白(CRP)与2型糖尿病患者颈动脉硬化的关系。[方法]选择经颈动脉彩超检查的50例2型糖尿病合并颈动脉硬化患者作为病例组,50例单纯2型糖尿病患者作为对照组,均测定血清hsCRP,并分析与颈动脉内膜中层厚度、颈动脉粥样硬化斑块之间的相关性。[结果]病例组血清hsCRP显著高于对照组。有颈动脉斑块的hsCRP显著高于颈动脉内中膜正常与增厚的hsCRP。[结论]血清hsCRP与2型糖尿病患者颈动脉硬化的发生有关,CRP在2型糖尿病患者颈动脉硬化中起重要作用。     

血清胱抑素C与超敏C反应蛋白联检诊断早期糖尿病肾损伤的价值

目的探讨血清胱抑素C(CysC)及超敏C反应蛋白(HS-CRP)联合检测对糖尿病早期肾损伤的临床诊断价值。方法采用全自动生化分析仪测定82例2型糖尿病和50例正常健康人的血清胱抑素C与超敏C反应蛋白含量。结果2型糖尿病组CysC和HS-CRP含量明显高于正常健康人组(p<0.01),且联合检测阳性率达82.9%,明显高于单项检测。结论CysC及HS-CRP是糖尿病早期肾损伤的敏感指标,联合检测更为敏感。     

血清高敏C反应蛋白与代谢综合征患者早期肾脏损伤相关性分析

[目的]探讨代谢综合征(MS)患者早期肾损害与血清高敏C反应蛋白的关系。[方法]选取我院2006年2月~2010年7月收治的73例代谢综合征患者的临床资料,分为MS1(39例)、MS2(34例)两组,MS1组患者肾功能正常,MS2组患者伴早期肾功能损害,选取35例健康人作为对照,记为对照组,对所有受测人群的年龄、性别、血脂、血压、血糖进行分类总结,对患者的血清超敏C反应蛋白,肾功能损害指标进行监测,观察血清C反应蛋白与代谢综合征患者肾功能损害程度的关系。并对肾功能早期损害患者进行系统性干预,观察干预效果。[结果]MS2组患者血清超敏C反应蛋白(9.23±0.52)mg/L,MS1组患者血清超敏C反应蛋白(1.75±0.38)mg/L,对照组患者超敏C反应蛋白浓度(0.18±0.12)mg/L,代谢综合征患者尿白蛋白排泄率、血肌酐与血清超敏C反应蛋白在一定范围内成正相关。对MS2组患者进行干预治疗后,患者的尿白蛋白排泄率、血肌酐与血清超敏C反应蛋白明显下降,治疗前后差异有统计学意义(P﹤0.05)[结论]代谢综合征患者血清超敏C反应蛋白出现不同程度的升高,与肾损害呈正相关,血清高敏C反应蛋白可以作为判断代谢综合征患者病情进展的有效指标。     

慢性乙肝患者苦参素治疗前后C3、C-反应蛋白水平与HBVDNA含量变化

目的测定慢性乙肝患者苦参素治疗前后及慢性乙肝对照、正常对照补体C3、C-反应蛋白水平,分析苦参素治疗后HBVDNA阴转者和HBVDNA未阴转者治疗前后C3、CRP水平变化。方法补体C3、C-反应蛋白定量用免疫比浊法检测,在全自动生化分析仪完成,HBVDNA用实时萤光定量分析法进行检测。结果①慢性乙肝患者血清中C3水平明显低于正常人群(p<0.001),CRP水平明显高于正常人群(p<0.001);②慢性乙肝患者经苦参素治疗后,无论HBVDNA是否阴转,C3水平均明显升高,CRP水平均明显降低;③慢性乙肝患者苦参素治疗后HBVDNA阴转者和HBVDNA未阴转者C3、CRP水平无明显差别。结论①CRP能很好地反映抗病毒治疗前后肝炎炎症活动状态,补体C3能很好地反映抗病毒治疗前后患者免疫功能改变;②苦参素的抗病毒作用可能与其抗炎和免疫调节作用密切相关。     

维生素C和紫杉醇联合作用对乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的研究维生素C(VC)与紫杉醇联合作用,对人乳癌MCF-7细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 MTT法检测细胞增殖,激光共聚焦观察自噬,流式细胞术测定细胞周期分布和凋亡率变化。结果 VC单独作用,可促进MCF-7的增殖;紫杉醇单独作用及与VC联合作用均可抑制MCF-7的生长,并将细胞阻滞在G2期及诱导细胞凋亡;紫杉醇与VC联合作用对细胞增殖的影响,与二者的用药顺序有关,紫杉醇作用24后联合应用VC,可协同抑制MCF-7的增殖,并且,紫杉醇的IC50最低,即MCF-7对紫杉醇的敏感性最高。结论紫杉醇与VC联合作用对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,与二者的用药顺序有关,其作用的机制与影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡有关。     

4-HYDROXYPYRAZOLE: EFFECT ON GLUTATHIONE LEVELS AND ON THE INCORPORATION OF L-[U-14C]VALINE INTO PROTEIN IN ISOLATED RAT HEPATOCYTES

Isolated rat hepatocyles (8-12x10⁶ cells/ml) were incubatedin Waymouth's medium in the presence of L-[U-¹⁴C]valine(0.01µCi/ml). Valine incorporation into protein as well asthe total amount of glutathione (reduced and oxidized) in thecell suspension were determined after 1, 2 and 3 hr of incubation.When incubated for 3 hr, 4-hydroxypyrazole (0.5 and 1 mM) decreased(by about 20% and 40% respectively) valine incorporation intocellular as well as into secreted protein. The increment inglutathione level during incubation (3 hr) of hepatocytes wasdecreased by 35% when 4-hydroxypyrazole (1 mM) was present inthe incubation medium. Such a change was found to be neitherATP-dependent nor associated with malonaldehyde production orcellular leakage. Pyrazole at a high concentration (10 mM) decreasedthe rate of valine incorporation into protein by 20% only, whilethe level of glutathione remained unchanged. These results suggestthat the inhibition of protein biosynthesis after administrationof the alcohol dehydrogenase inhibitor pyrazole to rats maybe mediated by 4-hydroxypyrazole and that the decrease in glutathionelevel caused by 4-hydroxypyrazole could contribute to the hepatotoxicityof this latter compound.     

乳清蛋白肽改善C57BL/6J小鼠学习记忆功能研究

[目的]探讨乳清蛋白肽对C57BL/6J小鼠学习记忆能力的影响。[方法]60只雄性断乳小鼠随机分为1个阴性对照组和低(0.225%)、中(0.45%)、高(1.35%)3个乳清蛋白肽干预组,每组15只动物,连续喂养30d。然后依次进行跳台、穿梭箱及Morris水迷宫3个行为学实验,分别检验动物的被动回避、主动回避及空间记忆能力。[结果]跳台实验结果显示,与对照组相比,3个乳清蛋白肽干预组训练后24h和d5的平均潜伏期和错误次数差异均无统计学意义;穿梭箱实验结果显示,0.225%和0.45%乳清蛋白肽干预组的整体电击次数显著少于对照组(P﹤0.05),3个乳清蛋白肽干预组的电击时间均明显少于对照组(P﹤0.05),3个乳清蛋白肽干预组的主动回避时间均明显多于对照组(P﹤0.05);Morris水迷宫实验结果显示,1.35%乳清蛋白肽干预组找到平台所经过的路程显著少于对照组(P﹤0.01),3个乳清蛋白肽干预组的动物穿越平台次数均显著多于对照组(P﹤0.05)。[结论]一定剂量的乳清蛋白肽能够改善C57BL/6J小鼠的学习记忆能力。