丙酸睾酮预处理对HIBD新生鼠脑细胞神经生长因子表达的影响

【目的】观察丙酸睾酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)大脑皮质和海马区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达及神经细胞凋亡的影响,并探讨其保护作用机制。【方法】新生3日龄SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=24),HIBD组(n=24),T预处理组(n=24)。T预处理组大鼠于3日龄时给予T预处理。HIBD组和T预处理组大鼠于7日龄时进行HIBD模型制作。于HI后12、24、72h、7d观察各组脑组织病理形态及应用Nissl染色法测定神经元数目而间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于HI后24、72h、7d制作石蜡切片,用免疫组化SABC法观察NGF在各组大鼠大脑皮质和海马表达的动态变化。【结果】HI后24、72h和7d,正常对照组和HIBD组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量阳性细胞表达,而T预处理组大鼠于HI后24h和72h NGF表达水平明显增高(P<0.05)。正常对照组和HIBD组大鼠海马区偶尔可见NGF免疫阳性细胞表达,T预处理组大鼠海马区于HI后72h出现NGF免疫阳性细胞表达轻微增多,与正常对照组和HIBD组比较差异均有显著性(P<0.01)。【结论】丙酸睾酮预处理可明显见减轻大脑皮质神经细胞凋亡、增加HIBD新生大鼠脑皮质和海马区NGF表达,从而发挥神经保护作用。     

缺氧缺血新生大鼠海马ERK的变化及GM1的影响

目的:观察新生大鼠缺氧缺血性(HI)脑损伤后脑细胞凋亡的情况,进一步研究HI脑损伤后海马细胞外信号调节激酶(ERK)的变化,探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对HI新生大鼠的脑保护作用。方法:选择新生7日龄Sprague-Dawley大鼠108只,随机分为3组:缺氧缺血组(HI组,36只),假手术对照组(Control组,36只),缺氧缺血+神经节苷脂组(GM1组,36只)。采用结扎右侧颈总动脉并吸入低氧混合气体制备HIBD模型,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测大脑海马CA1区p-ERK的表达。结果:新生大鼠HI后脑细胞存在凋亡,GM1治疗能减少细胞凋亡。HI组、Control组和GM1组凋亡细胞数分别为(8.41±1.27)、(39.25±2.02)和(11.10±1.79),HI组阳性细胞数明显高于Control组和GMl组(P<0.05),GM1组与Control组比较阳性细胞数无明显差异(P>0.05)。HI组和GMl组p-ERK表达皆为阳性,两组比较HI组表达更强(P<0.05),Control组未见有p-ERK表达。结论:GM1可减少HI脑损伤后脑细胞凋亡,影响p-ERK表达,对缺氧缺血(HI)新生大鼠的脑具有保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠Caspase-12的表达及参附注射液对其的影响

目的:研究新生大鼠缺氧缺血脑损伤后海马神经元细胞Caspase-12的表达及参附注射液对其的影响,探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后可能的凋亡机制及参附注射液的作用机制。方法:新生7天SD大鼠随机分为假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附治疗组(SF组),每1组均设3、6、12、24 h及3、7天6个亚组,每个亚组8只,用Rice法制备新生大鼠HIBD模型,取右侧海马脑组织匀浆,RT-PCR检测Caspase-12 mRNA的表达,Western-blot检测Caspase-12蛋白表达,TUNEL法检测凋亡形态变化。结果:S组Caspase-12 mRNA表达最低,C组和SF组Caspase-12 mRNA均在12 h达到峰值,SF组Caspase-12 mRNA在6、12、24 h及3天较C组表达明显下降(P<0.01);Caspase-12蛋白表达S组最弱,HI后3hC组和SF组较S组明显增加(P<0.01),24 h达到峰值,7天仍较S组高(P<0.01),SF组表达在12、24 h及3天较C组显著降低(P<0.01);TUNEL法显示HI后3 h C组和SF组脑海马即出现少量凋亡细胞,随时间延长凋亡细胞呈增多趋势,24 h达高峰后开始下降;SF组24 h及3、7天均明显低于C组(P<0.05)。结论:缺氧缺血后脑海马神经元细胞Caspase-12表达增加,细胞凋亡增加,Caspase-12参与了新生大鼠HIBD后神经元损伤的凋亡机制,参附注射液能下调Caspase-12的表达,从而起到对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

白藜芦醇甙对HIBD新生大鼠海马p-ERK及p-CREB表达影响

目的:探讨白藜芦醇甙对HIBD新生大鼠ERK通路及p-CREB的作用。方法:选择新生7日龄SD大鼠21只,随机分为假手术对照组(NS组)、阴性对照组(NG组)、缺氧缺血组(HI组)、白藜芦醇甙干预组(PD组)。通过结扎左颈总动脉及通入8%的氧气2 h制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,蛋白质免疫印迹法测定缺氧缺血后24 h大鼠海马p-ERK,p-CREB表达。结果:蛋白质免疫印迹结果显示,HI组大鼠海马区的p-ERK,p-CREB蛋白表达相对灰度值明显要高于NS组(P<0.01),而PD组大鼠海马区的p-ERK,p-CREB蛋白表达相对灰度值同HI组和NS组相比均明显增强(P<0.01)。结论:缺氧缺血性脑损伤后,新生大鼠大脑海马区p-ERK及p-CREB表达增加,表明MAPK/ERK信号通路被激活,应用白藜芦醇甙干预能够进一步增强HIBD新生大鼠大脑海马p-ERK及p-CREB的表达,对于缺氧缺血后新生大鼠大脑具有神经元保护作用。白藜芦醇甙可能通过作用于MAPK/ERK/CREB信号转导通路完成神经保护作用。     

丙酸睾酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机制研究

目的 观察丙酸睾酮（testosterone propionate．T）预处理对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生鼠皮质及海马区雄激素受体（androgen receptor，AR）表达及神经细胞坏死和凋亡的影响，探讨其保护作用的可能机制。方法 新生3d龄SD大鼠随机分为3组，①正常对照组（n=24）；②HIBD组（n==24），③T预处理组（n=24）。T预处理组大鼠于3d龄时给予T预处理。HIBD组和T预处理组大鼠于7d龄时进行HIBD模型制作。于缺氧缺血（HI）后12h，24h，72h，7d观察各组脑组织病理形态及应用Nissl染色法测定神经元数目，间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于HI后24h，72h，7d制作石蜡切片，用免疫组化法观察各组大鼠大脑皮质和海马AR表达的动态变化。结果 HIBD组大脑皮质和海马区细胞数明显比正常对照组减少，差异有显著意义（P＜0．05），而T预处理组神经元坏死较HIBD组有所减轻，差异有显著意义（P＜0．05），缺血侧（左侧）神经细胞排列较整齐、结构较完整，神经元变性、坏死程度均较HIBD组轻，细胞凋亡少见。HI后24h，72h和7d，正常对照组和HIBD组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量AR阳性细胞表达，而T预处理组大鼠于HI后24h和72hAR表达水平明显增多（P＜0．05）。结论 T预处理可明显增加HIBD新生大鼠脑皮质和海马区AR的表达水平，减轻神经细胞凋亡，从而发挥神经保护作用。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元Bax、Bcl-2表达的影响

目的:探讨参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,把实验分成两部分:①观察缺氧缺血后3、7、14、28天各组的体重变化以及各组28天内生存率;②观察缺氧缺血前2h,缺氧缺血后2、12、24h,3、7、14、28天各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。每组实验随机分为4组:假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附预处理组(P组)、参附治疗组(SF组)。结果:SF组和P组较C组Bax表达明显下调(P<0.05,P<0.01),而Bcl-2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),生长发育和生存情况明显好于C组。结论:参附改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其生存率;可明显下调新生大鼠HIBD后海马神经元Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白的表达。     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后VEGF及NF-κB表达的影响

目的对7日龄缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)大鼠进行促红细胞生成素干预,并对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的变化情况进行检测分析。方法将75只SD新生大鼠按照随机数字表分为三组:1)假手术组取颈部正中切口,接着游离左侧颈总动脉,并进行切口缝合;2)HIBD组分离左侧颈总动脉,接着游离血管并行结扎,缝合后放入含氧量为8%的环境中2h;3)EPO处理组游离并结扎左侧颈总动脉,随后放于含氧量为8%的环境中2h,并腹腔内注射rhEPO 1次(剂量:5 000U/kg)。于6、12、24、72h后分别留取脑标本,并对脑组织中VEGF及NF-κB的表达情况进行检测。结果 1)与假手术组对比,HIBD组和EPO处理组中VEGF的表达有明显增高(P0.05);2)HIBD组NF-κB表达高于假手术组(P0.05),HIBD组高于EPO处理组(P0.05)。结论促红细胞生成素有增高VEGF蛋白表达、降低NF-κB蛋白表达作用,这一机制可能对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤起保护作用的机制之一。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织铁元素含量的变化及其意义

目的探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织铁元素含量的变化及其意义。方法将7d龄健康新生SD大鼠62只,随机分为正常对照组(n=14)、假手术组(n=14)及HIBD模型组(n=34)。HIBD模型组新生大鼠采用改良Rice方法行左侧颈总动脉永久性结扎,2h后将新生大鼠置于37oC恒温水浴的1L有机玻璃缺氧舱中,输入氧浓度为8%±0.1%的氮氧混合气体持续缺氧2h,观察缺氧缺血后24h内神经行为变化及24、48、72h脑组织病理改变,并用干湿法测定24h脑含水量。应用全谱直读等离子体发射光谱仪测定HIBD大鼠脑组织铁元素含量。结果HIBD模型组新生大鼠神经行为异常发生率为94.12%,正常对照组和假手术组未发生神经行为异常。HIBD模型组左侧脑组织出现明显的病理改变。HE染色可见神经元损伤和神经胶质细胞增生;正常对照组和假手术组脑组织未见异常。HIBD模型组左侧脑含水量较右脑、正常对照组和假手术组显著增加(P<0.01)。HIBD大鼠左侧脑组织中铁元素含量显著高于正常对照组、假手术组及右侧脑组织(P<0.05);正常对照组、假手术组及右侧脑组织铁元素含量比较,差异无显著性(P>0.05)。结论脑组织中铁元素含量的增加是导致缺氧缺血性脑损伤的可能机制之一。维持铁代谢的稳态对防治铁超载引起的脑损伤具有重要意义。     

血红素加氧酶-1在HIBD新生大鼠海马神经元的表达研究及纳洛酮的干预作用

目的:研究新生大鼠脑缺氧缺血后不同时间点血红素加氧酶-1(hemeoxygen-ase,HO-1)、Caspase-3在海马神经元中的动态变化及纳洛酮注射液的干预作用,进一步探讨HO-1、Caspase-3在新生大鼠缺氧缺血后神经损伤过程中的可能机制及纳洛酮注射液对神经系统保护的作用。方法:新生7天龄SD大鼠随机分为3组:假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、纳洛酮干预组(N),每组按照观测的时间点不同分为3、6、12、24 h和3、7天6个亚组,每个亚组8只,用Rice法制备新生大鼠HIBD模型。在每个时间点将大鼠断头取右侧海马脑组织匀浆,用Western blot方法测不同时间点HO-1、Caspase-3动态变化;用TUNEL染色法检测相应时间点脑海马CA1区细胞凋亡。结果:①Western蛋白印迹S组海马HO-1表达很弱,各时间点表达无差异(P>0.05);C组和N组右侧海马HO-1在HI后3h即明显增加(P<0.01),HI后24 h海马HO-1蛋白表达达到峰值,3天后明显下降,7天接近S组,但仍较正常偏高(P<0.01);N组在12、24 h和3、7天海马HO-1表达均较C组高(P<0.01)。②在HI后3 h,C组和N组右侧海马Caspase-3即明显增加(P<0.01),HI后24 h海马Caspase-3蛋白表达达到峰值,3天后明显下降,7天接近S组(P=0.519);N组在12、24 h、3天海马HO-1表达均较C组低(P<0.01)。③Tunel显示S组各时间点右侧海马CA1区仅见少量凋亡细胞,HI后3 h C组和N组右侧海马神经元凋亡细胞数即明显增加(P<0.01),24 h达到高峰,3天开始下降,7天时仍高于S组(P<0.01);N组凋亡数在24 h、3、7天这3个时间点上均较C组明显下降(P<0.01)。结论:HI后脑海马组织细胞中HO-1蛋白、Caspase-3表达均是增加的,两者表达趋势相一致,在时间上吻合,表明HO-1、Caspase-3参与了新生大鼠HI后细胞凋亡的病理过程;纳洛酮注射液能够上调HO-1的表达,抑制Caspase-3活化,减少神经元凋亡,从而起到对HIBD新生大鼠保护作用。     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的:探讨促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的保护作用及其可能的机制。方法:新生7天大鼠随机分3组:假手术组、HIBD模型组和EPO治疗组(HIBD+EPO组)。观察缺氧缺血后脑组织含水量、病理改变、免疫组织化学检测凋亡因子Bcl-2的表达以及脑萎缩程度。结果:EPO治疗能显著减轻缺氧缺血侧(左侧)大脑半球水肿、病理学改变和大脑半球萎缩程度。左大脑半球含水量降至(85.93±1.19)%,显著低于HIBD模型组(86.75±0.87)%(P<0.05),左脑组织萎缩比(14.95±14.15)%,显著低于模型组(28.26±19.39)%(P<0.01)。HIBD+EPO组大鼠缺血侧皮层Bcl-2阳性细胞表达较HIBD模型组及假手术组均显著增多。结论:EPO对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用,其机制与提高抑制细胞凋亡的发生有关。     

核因子-κB对阿霉素肾病大鼠肾小球细胞凋亡的影响

目的探讨核转录因子κB（NF-κB）对阿霉素肾病大鼠肾小球细胞凋亡的影响。方法SD雄性大鼠分成两大组，A组（假手术组）6只，B组（硬化组）6只。采用右肾切除加尾静脉注射阿霉素制成肾小球硬化动物模型。分别在8周、9周两个不同时上间点，应用免疫组化检测肾组织Caspase-3、NF—κBp65的表达，TUNEL检测肾小球细胞凋亡指数。结果在不同的时间点，B组NF-κB阳性表达指数比A组明显增高（P〈0.05）；肾小球系膜细胞（MC）凋亡指数、Caspase-3的表达与NF-κB呈正相关关系。结论NF-κB参与肾小球系膜细胞凋亡的调控，促进肾小球硬化的进程。     

NAC对感染性早产小鼠胎盘TLR4和NF-κB的表达影响

目的：探讨感染性早产小鼠胎盘Toll样受体4（TLR4）和核转录因子-kappaB p65（NF-κBp65）的表达以及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对表达的影响。方法：利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组化方法检测早产小鼠胎盘TLR4、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达,以及NAC干预后早产率、TLR4和NF-κB p65的表达变化。结果：对照组TLR4、NF-κB p65少量表达,而早产小鼠模型组两种蛋白表达都显著升高（P〈0.05）;NAC预防组和模型组相比,TLR4表达无明显变化,而NF-κB p65表达明显减少（P〈0.05）,并且早产率下降明显（P〈0.05）;NAC治疗组和模型组两种蛋白的表达差异无统计学意义。结论：NAC可以降低小鼠的早产率以及NF-κB p65在胎盘的表达。     

NF-κB及MIF在育龄期妇女子宫内膜息肉中的表达

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与育龄期妇女子宫内膜息肉(EPs)发病的关系及其在EPs中表达的相关性。方法:收集宫腔镜手术中42例子宫内膜息肉患者的子宫内膜息肉、息肉周围内膜组织及22例中隔子宫患者正常内膜组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测NF-κBp65及MIFmRNA的表达,免疫组织化学S-P法检测NF-κBp65及MIF蛋白的表达。结果:EPs中NF-κBp65及MIF mRNA的表达均高于同期息肉周围内膜及正常子宫内膜(P<0.05),与正常子宫内膜相比,息肉周围内膜中NF-κBp65及MIF mRNA的表达均增强(P<0.05)。NF-κBp65及MIF蛋白在3组中均有表达,均以息肉组中的表达最强,息肉周围内膜组织中的表达次之,3组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κBp65及MIF mRNA在EPs中的表达呈正相关(r=0.694,P<0.05),NF-κBp65及MIF蛋白在EPs中的表达呈正相关(r=0.37,P<0.05)。结论:NF-κB和MIF可能与育龄期妇女EPs的发病机制有关,协同参与了EPs发生发展的病理变化。     

NF-κBp65、EGFR、P16在宫颈腺癌中的表达及临床意义

目的:研究NF-κBp65、EGFR及P16在宫颈腺癌中的表达及其意义。方法:应用免疫组化法检测宫颈腺癌及正常宫颈组织中NF-κBp65、EGFR及P16蛋白表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果:在宫颈腺癌组织中NF-κBp65、EGFR及P16蛋白表达率与正常宫颈组织中的NF-κBp65、EGFR及P16表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);NF-κBp65蛋白的表达与淋巴管浸润及淋巴结转移有关(P<0.05),与其他病理参数无关(P>0.05);EGFR蛋白的表达与临床病理参数均无关(P>0.05);P16蛋白的表达与组织学分级有关(P<0.05),与其他病理参数无关(P>0.05)。NF-κBp65的表达与EGFR的表达呈正相关(r=0.359,P<0.05),NF-κBp65的表达与P16的表达无相关性(r=-0.307,P>0.05),EG-FR的表达与P16的表达呈正相关(r=0.379,P<0.05)。结论:NF-κBp65、EGFR及P16蛋白的表达与宫颈腺癌的发生和进展有一定的相关性,P16蛋白可以作为宫颈腺癌早期诊断的肿瘤标记物。     

PG490在EAE中的靶向作用机理研究

目的探讨PG490在EAE中的干预作用及作用途径。方法把45只SD大鼠随机分为三组即正常对照组、模型组及PG490干预组。分别采用免疫组化及ELISA的方法观察NF-κBp65及COX-2的含量变化,同时观察干预前后临床学评分及病理变化。结果 PG490干预后模型鼠临床评分及病理学的变化均较干预前有所改善;干预前后NF-κBp65及COX-2的含量变化相比较有显著性差异（p〈0.05）。结论 PG490能够减轻EAE模型的临床症状,其作用机理可能为通过产生抑制性细胞因子,进而影响NF-κBp65及COX-2等炎症途径效应。     

银杏叶提取物对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后Survivin表达的影响

目的观察银杏叶提取物（extract of ginkgo biloba,EGB）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemic braindamage,HIBD）后缺血侧脑组织Survivin表达的影响,探讨其神经保护机制。方法健康7日龄Sprague—Dawley新生大鼠72只随机分为假手术组（n=24）、对照组（n=24）及EGB治疗组（n=24）。采用经典的PAce法制成HIBD模型,应用TUNEL法检测细胞凋亡情况。并采用免疫组织化学二步法检测Survivin表达的变化。结果与假手术组相比,对照组伤后1、3、7、14d的细胞凋亡数及Survivin表达水平均明显升高（P〈0．01）;与对照组相比,EGB治疗组伤后7、14d的细胞凋亡数明显降低（P〈0．01）,且在伤后1、3d的Survivin表达明显升高（P〈0．05）。结论EGB可促进抗凋亡因子Survivin的表达而减少HIBD后的细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

银杏叶提取物对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后Survivin表达的影响

目的观察银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后缺血侧脑组织Survivin表达的影响,探讨其神经保护机制。方法健康7日龄Sprague-Dawley新生大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、对照组(n=24)及EGB治疗组(n=24)。采用经典的Rice法制成HIBD模型,应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,并采用免疫组织化学二步法检测Survivin表达的变化。结果与假手术组相比,对照组伤后1、3、7、14d的细胞凋亡数及Survivin表达水平均明显升高(P<0.01);与对照组相比,EGB治疗组伤后7、14d的细胞凋亡数明显降低(P<0.01),且在伤后1、3d的Survivin表达明显升高(P<0.05)。结论EGB可促进抗凋亡因子Survivin的表达而减少HIBD后的细胞凋亡,发挥神经保护作用。