HIV-1包膜糖蛋白gp120小分子抑制剂的研究进展

人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1, HIV-1)包膜糖蛋白gp120与CD4的结合是病毒侵入细胞的第一步,干扰此过程就能阻止病毒识别靶细胞而抑制其复制,因此HIV-1 gp120作为HIV-1生命周期中的重要靶标,针对该靶标的药物已成为当前抗艾滋病药物研发的热点。其中, gp120小分子抑制剂BMS-626529经前药策略修饰后得到的磷酸酯前药福替沙韦(fostesavir)已分别于2020年和2021年被美国和欧洲批准上市用于治疗具有多重耐药性HIV-1感染的成年患者。该篇综述从药物化学的角度重点描述了靶向gp120-CD4相互作用环节的各种结构类型小分子抑制剂的研究进展,以期为gp120抑制剂的研究提供启发。     

人CCR5受体与CD4抗原和HIV-1包膜糖蛋白gp120复合物的分子模型(英文)

目的:研究人CCR5与CD4抗原和HIV-1包膜糖蛋白gp120的相互作用。方法:人CCR5受体的结构保守区由SYBYL软件中的Biopolymer模块建立,非保守区由LOOP SEARCH方法建立。将得到的结构模型与CD4抗原和gp120结合形成复合物。结果:人CCR5受体既可以与CD4抗原相互作用,也可以和gp120相互作用,其N-末端残基通过静电和氢键方式与CD4相互作用,并深埋在一个疏水中心里,被碱性基团包围。而且有7个氨基酸残基通过范德华作用、疏水性作用和氢键与6个gp120残基相互作用。结论:该模型将有助于设计作用更强的抗艾滋病药物。     

由HIV-1包膜疫苗诱导的对HIV-1gp120和HLA-Ⅰ类分子重链的交叉反应性应答

作者发现鼠单克隆抗体(McAb)M38能与Ⅰ型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)gp120和人白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子重链相结合,证明HIV-1与HLA之间具有分子相似性.本文研究了HIV包膜疫苗接种者能否产生抗gp120和HLAⅠ类交叉反应性抗体.研究对象为18～60岁健康志愿者,HIV-1血清学试验阴性,在6个月内未接受过血液制剂,细胞HIV培养阴性.志愿者分     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。     

重组HIV-1_(SF-2)gp120可增强表达HIV-1基因的重组金丝雀痘病毒活疫苗免疫诱导的细胞因子应答

作者对 72名未感染 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )者注射不同疫苗后产生的 Th1和 Th2型细胞因子应答水平进行了比较。其中 2 0人为对照 ,52人用重组金丝雀痘病毒HIV- 1活疫苗 v CP2 0 5或重组 HIV- 1 SF- 2gp1 2 0疫苗单独免疫 ,或用以上两种疫苗联合免疫。分别在免疫前以及第 2 8、84、1 6 8、2 73和 36 4天免疫后 1 4天采血分离外周血单个核细胞 ( PBMC)培养 ,同时分别用 rp2 4、rgp1 6 0和 SF- 2 rgp1 2 0抗原刺激细胞 ,用ELISA检测培养上清中的细胞因子 :即 Th1细胞分泌的γ干扰素 ( IFN-γ)、白细胞介素 2( IL- 2 ) ,T…     

新生儿接种重组HIV-1 gp120疫苗后的特异性抗体应答

不少感染 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV-1 )的孕妇由于未得到药物治疗而使 1 0 %～1 3%的新生儿感染 ,在发展中国家母乳喂养导致婴儿在出生后两年内的 HIV感染率达到 1 6 % ,本研究旨在探索接种疫苗使婴儿获得保护的有效和可行的途径。　　作者以母亲感染 HIV的 52名初生婴儿为对象 ,建立原始免疫组 ,在出生时 ,第 4、第1 2和第 2 0周肌肉注射重组 HIV- 1 gp1 2 0疫苗 ,MF59为佐剂 ,按 5、1 5和 50 mg分为三个剂量组 ,每组 1 6～ 1 8人。以 MF59作对照。同时 ,建立加速免疫组 ,对母亲感染 HIV的 1 0名初生婴儿在出生时、第 2、第 8和…     

用裸RNA免疫小鼠产生抗天然HIV-1包膜糖蛋白单克隆抗体

作者介绍了使用西门利克森林病毒（ＳＦＶ）这一新型表达系统产生具有天然构型的１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）包膜（Ｅｎｖ）糖蛋白，以及用裸ＳＦＶ－ｇｐ１６０ＲＮＡ免疫小鼠制备抗Ｅｎｖ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和对１２ＨＺ杂交瘤细胞系进行鉴定的结果。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增全长ＨＩＶ－１ＨＸＢ２ｅｎｖ基因并将其插入ｐＳＦＶ－１载体的ＢａｍＨＩ位点，构建表达载体ＰＳＦＶ－ｇｐ１６０．纯比后采用电穿孔技术将ＳＦＶ－ｇｐｌ６０ＲＮＡ转染ＢＨＫ－２１细胞。以蛋白印迹法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫荧光法检测Ｈ…     

HIV-1感染早期重复免疫gp160:对T细胞增殖应答的评价

细胞免疫功能在控制１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）感染中可能起重要作用。作者在长达５年的现场试验中比较了重组ｇｐ１６０疫苗与安慰剂组对ＨＩＶ－１抗原、记忆抗原及有丝分裂原的Ｔ细胞增殖应答。 将受试者随机分为４组,进行疫苗和安慰剂接种,在０、７、３０天分别用ＶａｘＳｙｎ１６０μｇ或磷酸铝安慰剂肌肉注射,之后每２个月注射一次直至６２个月。于接种前及接种后间隔一定时间收集血样、分离外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）用于淋巴细胞增殖试验。部分样品冷藏备用。以［３Ｈ］胸苷掺入法测定对重组ｇｐ１６０及ｐ２４、…     

通过接种剂量及接种程序调节对重组HIV-1_(MN)gp160疫苗的免疫应答

已知1型人类免疫缺陷症病毒（HIV-1）包膜糖蛋白含有诱导T细胞记忆的表位,能够诱生抗包膜糖蛋白中和抗体、其他功能性抗体及抗HIV-1细胞毒性T细胞（CTL）应答。研究证实重组包膜糖蛋白能在健康人中诱导这些形式的体液和细胞免疫应答,然而疫苗诱导的中和抗体对实验室适应株有很强的活性,抗HIV-1CTL活性不太强。作者评价了含有HIV-1_(MN)株包膜糖蛋白（MNrgp160）氨基酸序列的候选rgp160疫苗的安全性和免疫原性。     

疫苗诱导的抗天然及重组HIV-1包膜糖蛋白抗体

作者采用多中心、随机、双盲法,对以1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)LAV株gp160重组痘苗活病毒初免、再用杆状病毒表达的HIV-ILAV重组gp16O候选疫苗加强免疫所诱生的能识别感染细胞表面表达的天然外膜糖蛋白的抗体进行了测定.     

用CpG ODN使有Th2型免疫背景的小鼠对缺失gp120的HIV-1灭活病毒产生Th1型免疫应答

作者用血吸虫感染预先存在 Th2型免疫背景的小鼠 ,证实共同使用含有胞苷酸鸟苷 ( Cp G)免疫刺激序列的寡脱氧核苷酸( ODN)和缺失 gp1 2 0的 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )灭活病毒颗粒 ( HIV- 1免疫原 ) ,能诱生强的 Th1型抗 - HIV- 1免疫应答 ,并克服 Th2型应答的倾向。　　试验分两组 ,第一组 :所有小鼠感染曼氏血吸虫尾蚴后 5周 ,经皮内注射 IFA或含0 .1、1或 1 0 μg HIV- 1抗原的 IFA(不加或加2 5μg或 50 μg ODN1 82 6 ) ,每组 5只小鼠。 2周后 ,用相同方法加强免疫一次 ;再过 2周 ,杀死小鼠 ,检测寄生虫感染、细胞因…     

HIV-1 gp120真核表达载体的构建及表达

目的模拟HIV-1包膜糖蛋白天然构象,在真核细胞中高效表达三聚体包膜糖蛋白。方法本研究以原代HIV-1分离株06044包膜为研究对象,将不含信号肽序列的包膜gp120基因克隆至含有人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽序列的真核表达载体上,构建单体形式gp120蛋白表达载体;或将其克隆至含有tPA信号肽序列和蛋白质三聚化模序MTQ的真核细胞表达载体上,构建三聚体形式gp120蛋白表达载体。gp120重组表达载体体外瞬时转染293T细胞,westernblot检测表达情况。结果获得gp120蛋白单体和三聚体的真核细胞表达载体peT．06044gp120m／co和pcT-06044gp120T／co;重组质粒瞬时转染293T细胞后westernblot分析,在变性条件下,两组细胞培养上清均检测到单体形式gp120蛋白;非还原条件下,peT．06044gp120T／co转染组的细胞培养上清中检测到三聚体、二聚体和单体三种形式gp120蛋白,其百分比分别为76％、14％和10％。结论本研究成功构建了HIV-1原代06044株包膜gp120单体和三聚体表达载体,并在哺乳细胞中成功表达了gp120单体和三聚体蛋白。     

以金丝雀痘病毒为载体的HIV-1疫苗单独或联合使用gp120免疫的安全性和免疫原性评价

作者在 2期临床研究中考核了金丝雀痘病毒的 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV- 1 )抗原在高危和低危受试者中的安全性和免疫原性。　　重组金丝雀痘病毒 AL VAC v CP2 0 5表达的 HIV- 1基因产物 ,包括 HIV- 1 L AI株gag基因表达的 p55多蛋白 ,HIV- 1 LAI株中可表达蛋白酶活性的 pol基因部分 ,HIV-1 MN株的部分 env基因表达的 gp1 2 0 ,HIV- 1 L AI株的 gp4 1跨膜区。试验中同时使用重组 gp1 2 0亚单位以提高抗体和辅助性T细胞应答。　　试验采用双盲法进行 ,分别在 0、1、3、6月于左臂肌肉注射 v CP2 0 5或安慰剂 ,于右臂注射 gp…     

1型人类免疫缺陷症病毒攻击经重组包膜糖蛋白gp120免疫的黑猩猩

作者研究了1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)的重组包膜糖蛋白(rgp120)对黑猩猩的免疫原性和预防HIV-1感染的能力。免疫所用的rgp120系从gD-env-trunc细胞系的培养液中提纯。前4次免疫接种所用的rgp120系通过外源凝集素亲和层析和凝胶渗透层析纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(NaDodSO_4/PAGE)离析后用银染法测得终产品的纯度为50%。第5次和末次接种所用的抗原为经抗rgp120单克隆抗体免疫亲和层析制备的纯度更高的制剂,NaDodSO_4/PAGE测得其纯度约为95%。疫苗采用标准     

对HIV-1 env DNA疫苗免疫应答的遗传学控制

含有编码1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)env蛋白的HIV-1特异性DNA疫苗可诱导强的体液和细胞介导免疫应答。作者用不同品系的小鼠研究了HIV-1特异性DNA疫苗诱导抗体产生及迟发型超敏反应(DTH)的遗传学控制。     

用加入QS-21的亚单位疫苗诱导HIV-1gp120特异的交叉反应性CTL应答

如果1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)包膜蛋白诱导的免疫应答对免疫显性变异性表位具有特异性,那么,包膜蛋白的抗原性变异可能会限制其在疫苗中的应用。作者制备了含有来源于两个HIV-1变异株的免疫应答的能力进行了评估。     

用HIV-1MN株重组gp120免疫血清阴性志愿者诱导的抗HIV-1中和抗体

人类免疫缺陷症病毒(HIV)MN、SF-2和Ⅲ B株是广泛用于制备疫苗的三株病毒株.1型HIV(HIV-1)糖蛋白(gP)120和gp41在病毒感染过程中起重要作用,是HIV 疫苗的首选组份.本文报道了美国圣路易斯大学艾滋病疫苗评价中心进行的HIV-1重组gp120疫苗的安全性与免疫原性的临床试验结果.