原发性高血压患者血清NO、NOS及其亚型水平的分析

目的:测定原发性高血压患者外周血中血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及其亚型水平,探讨NO/NOS系统参与血压调节的可能机制.方法:原发性高血压患者135例,正常对照组35例.采用化学法检测所有病例外周血的一氧化氮(NO)、总NOS、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和结构型一氧化氮合酶(cNOS)水平并作统计学分析.结果:高血压组NO、NOS、iNOS和cNOS水平均低于正常对照组,且差异具有显著性意义(分别为:P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01);iNOS/cNOS比值与正常对照组相比无显著差异(P＞0.05);对照组和高血压组的NOS浓度与iNOS和cNOS浓度均呈显著正相关;高血压组的cNOS水平与iNOS水平呈显著负相关.结论:高血压患者NO、NOS及其亚型浓度值可以作为临床评估高血压的参考指标;iNOS在正常人体内有表达;在高血压情况下,机体有通过增加iNOS的表达来弥补cNOS水平的病理性降低、调控NOS总体水平从而调节和平衡血压的趋势.     

睡眠剥夺对大鼠一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的：探讨睡眠剥夺对大鼠脑组织一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）影响。方法：采用小平台水环境法（Flower Pot)制作大鼠睡眠剥夺模型，采用化学法和酶法观察不同时间睡眠剥夺后大鼠额叶、海马、中脑和下丘脑NO含量及NOS活性变化。结果：与正常对照组及大平台组比较，大鼠在SD后额叶和海马的NO含量及NOS活性增高，有显著性差异（P＜0．01－0．05），其余脑区无显著性差异（P＞0．05）。随着剥夺时间的延长，额叶和海马NO含量及NOS活性增高更加明显。结论：睡眠剥夺可致NO及NOS升高，可能与其学习障碍有关，NO可能参与大鼠的睡眠调节。     

免疫性肝损伤中诱导型一氧化氮合酶的细胞来源

采用胶原酶-链霉蛋白酶灌流法对免疫性肝损伤大鼠肝实质细胞与枯否细胞进行分离与原代培养,Griess反应法检测细胞培养上清中一氧化氮（NO）生成量的变化。结果显示在刺激条件及细胞数量同等情况下,肝实质细胞NO生成量显著高于枯否细胞;肿瘤坏死因子（TNFα）单克隆抗体可拮抗枯否细胞由细菌脂多糖（LPS）刺激所致NO生成的增加,而对卡介苗（BCG）所致NO生成无显著影响。提示免疫性肝损伤中NO生成主要源于肝实质细胞;LPS通过使枯否细胞释放TNFα对NO生成进行调节。     

机械挤压对大鼠血管内皮细胞一氧化氮合酶表达的调节作用

目的 :探讨机械挤压大鼠腿部致微循环改变与一氧化氮合酶 (NOS)表达之间的关系。方法 :采用间歇性气囊挤压袋 (IPC)挤压大鼠腿部。将 2 5只雄性SD大鼠随机分为 4个IPC实验组和 3个模拟组 ,4个IPC组分别挤压 0 .5、1、 5h和挤压 1h再等待 4h,3个模拟实验组处理方法与IPC组相同但不挤压。应用RT PCR、WestenrBlot和免疫组化方法检测了IPC作用前后 ,挤压部位的肌肉———胫前肌 (AT)和未挤压部位的肌肉———提睾肌 (CM)中内皮细胞型一氧化氮合酶 (eNOS)的表达。结果 :在IPC作用的不同时间段上 ,eNOSmRNA和蛋白在AT和CM中均有显著上升 ,在IPC作用 1h ,然后再等待 4h的实验组中 ,eNOSmRNA和蛋白又恢复至正常对照水平。结论 :IPC产生的机械压力增加了血管内皮细胞的剪切力 ,刺激该细胞NOS合成增加 ,进而增加了NO产物的释放量 ,使血管扩张 ,改善了局部微循环。     

限制活动慢性应激大鼠脑组织NO、NOS含量变化的研究

慢性应激对脑海马损害已得到证实[1,2 ] 。急性应激障碍和创伤后应激障碍 (ＰＴＳＤ)表现出记忆、学习等认知障碍及行为障碍 ,可能与脑边缘系统功能受损有关。病理生理机理尚不清楚 ,氧自由基对脑细胞毒性作用可能参与发病[3 ] 。近些年来研究说明ＮＯ是体内重要的自由基 ,在中枢神经系统具有重要的生理和病理作用 ,在生理情况下参与信息传递 ,在病理情况下对神经细胞具有毒性作用。本研究通过建立应激大鼠模型 ,检测大脑额叶、海马、下丘脑组织ＮＯ含量和ＮＯＳ活力的变化 ,探讨其在应激过程中及应激障碍发病中的作用。1　材料和方法1.1　…     

Nitric Oxide Synthase Expression in Macrophages of Histoplasma capsulatum-Infected Mice Is Associated with Splenocyte Apoptosis and Unresponsiveness

Splenic macrophages from Histoplasma capsulatum-infected mice express inducible nitric oxide synthase (iNOS), and the iNOS expression correlates with severity of the infection. We examined whether production of NO is responsible for apoptosis and the anti-lymphoproliferative response of splenocytes from mice infected with H. capsulatum. In situ terminal deoxynucleotidyl transferase nick end labeling revealed apoptotic nuclei in cryosections of spleen from infected but not normal mice. Splenocytes of infected mice were unresponsive to stimulation by either concanavalin A or heat-killed H. capsulatum yeast cells. Splenocyte responsiveness was restored by addition to the medium of N^G-monomethyl-l-arginine, a known inhibitor of NO production. The proliferative response of splenocytes from infected mice was also restored by depletion of macrophages or by replacement with macrophages from normal mice. In addition, expression of iNOS returned to its basal level when the animals had recovered from infection. These results suggest that suppressor cell activity of macrophages is associated with production of NO, which also appears to be an effector molecule for apoptosis of cultured splenocytes from infected mice.

Nitric oxide (NO) has been reported to induce apoptosis in many cells including smooth muscle cells (20), oligodendrocytes (27), pancreatic β cells (11), melanoma cells (35), thymocytes (7), B lymphocytes (4), and macrophages (2). Fehsel et al. recently demonstrated apoptosis in freshly isolated thymocytes after exposure to NO (7). In the same report, they also showed apoptotic foci in close proximity to blood vessels after lipopolysaccharide treatment. Capillary endothelial and dendritic cells adjacent to apoptotic foci stained strongly for inducible nitric oxide synthase (iNOS), suggesting that NO may be the mediator for thymic apoptosis (7). Data from another laboratory also showed that cloned thymic stromal cell monolayers eliminate thymocytes in vitro through production of NO (26). Furthermore, apoptosis has been suggested as a mechanism by which the immune system replenishes itself and maintains homeostasis (30).The dimorphic fungus Histoplasma capsulatum is a facultative intracellular pathogen of the macrophage (32). Although it is not an obligate intracellular pathogen, the organism is found almost exclusively inside host cells during histoplasmosis (5). In our in vitro studies, H. capsulatum exhibits uninhibited growth in normal unstimulated murine macrophages (32). In activated macrophages, either peritoneal macrophages and cells from the Raw 264.7 line stimulated by gamma interferon (IFN-γ) or splenic macrophages stimulated by IFN-γ and lipopolysaccharide, growth of the fungus is inhibited (13, 18, 32). Furthermore, the anti-histoplasma activity of macrophages is dependent on the expression of iNOS and the production of NO (14, 18). However, the significance of NO production in immunoregulation of histoplasmosis is not clearly defined.In this study, we examined whether NO can act as a regulator of apoptosis in lymphoproliferative responses of splenocytes from H. capsulatum-infected mice. We showed that iNOS was induced in splenic macrophages during active infection and the expression of iNOS coincided with active infection. We also observed by in situ terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) nick end labeling (TUNEL) of spleen sections that apoptosis occurred in immune cells in the spleens of infected mice but was minimal in control mice. The link between apoptosis and NO production was established by inclusion of N^G-monomethyl-l-arginine (NMMA) in the culture medium. Inhibition of NO production reduced the amount of apoptosis in splenocyte culture. Thereby, we also confirmed the findings of Zhou et al. (36) that production of NO by splenocytes of H. capsulatum-infected mice suppressed the splenic lymphocyte proliferative response. In addition, we showed that macrophages were mediators of splenocyte unresponsiveness through the NO that they produced and that NO production was associated with apoptotic changes in cultured splenocytes from infected mice.     

内皮型一氧化氮合酶基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达

根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达,并以GAPDH为内标,用内参比法作RT-PCR定量。结果表明：eNOS基因在新生大鼠心、肾、脑等组织皆有表达,脑中最多、肾脏次之、心脏较少;在培养的新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中,检测到eNOS基因的表达,其中在心肌细胞的表达高于非心肌细胞;培养基中不同的血清浓度对心肌细胞和非心肌细胞的oNOS基因表达无明显影响。     

内皮型一氧化氮合酶基因Glu298Asp多态性与原发性高血压的关系

目的探讨中国大连人群eNOs基因Glu298Asp多态性与原发性高血压的关系。方法选取277名高血压患者及547名血压正常者,提取基因组DNA,使用聚合酶链反应(PCR)及限制性片段长度多态性(RFLP)分析确定eNOs Glu298Asp多态性。进行两组问的比较并使用Logistic,回归分析年龄、性别、家族史、TC、TG、BMI及基因型对高血压的影响。结果基因型频率及等位基因频率在高血压和对照组的分布无差异。高血压组氨基酸298位GG、GT、TT基因型频率分别为84．1％、14．4％、1．4％,在对照组为85．6％、13．5％、0．9％(P=O．73)。Asp等位基因的频率在高血压组及对照组分别为8．7％和7．7％,(P=0．50)。对年龄、性别和BMI及有无家族史进行亚组分析也未发现基因型的分布在各组间有差异。采用隐性遗传模型把GG和GT基因型合并,GG GT和TT基因型的分布在两组间仍未发现有显著差异(P=0．49)。Logistic回归显示年龄、BMI、家族史及饮酒是高血压发病的独立危险因素,OR值分别为1．09(P<0．001)、1．28(P<0．001)、9．53(P<0．001)和2．26(P<0．05)。结论本实验显示年龄、BMI、家族史及饮酒是高血压的独立危险因素。eNOs基因Glu298Asp突变可能不是大连人原发性高血压的主要易感基因。     

抑制一氧化氮合成酶对大鼠睡眠及5－羟色胺神经元免疫反应的影响

采用多导描记及免疫组化方法，观察了侧脑室和腹腔给予硝基左旋精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）对慢性植入电极大鼠睡眠量及中缝背核５－羟色胺（５－ＨＴ）神经元免疫阳性反应的影响。结果表明：Ｌ－ＮＮＡ显著抑制慢波睡眠和快眼动睡眠，与对照相比较，觉醒时间延长。脑室给予Ｌ－ＮＮＡ使中缝背核５－ＨＴ神经元阳性细胞增多。提示一氧化氮合成抑制所致的睡眠抑制可能与中缝背核５－ＨＴ神经元免疫阳性反应增强有关。     

低剂量γ射线辐照对血清一氧化氮及一氧化氮合酶水平的影响

目的：观察低剂量γ射线照射人离体外周血对血清中一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）水平的影响。方法：采集10份健康献血员全血，肝素抗凝，然后采用γ射线照射，照射剂量率为17Gy／min，总吸收剂量为1Gy，分别于照射前及照射后1h，2h采用分光光度法检测血清中NO含量和NOS活性。结果：经γ射线照射1h后，血清中NO及NOS水平与照射前比较明显升高（P〈0.01）；照射后2h，血清中NOS水平与照射后1h比较无统计学差异（P〉0、05），但是还明显高于照射前的水平（P〈0．01）；在照射后2h，血清中NO含量与照射后1h比较明显降低（P〈0.01），但仍明显高于照射前水平（P〈0．01）。结论：采用剂量为1Gy的γ射线照射外周血，可引起血清中NO水平及NOS活性的显著升高．从而为低剂量辐照自体血回输对肿瘤的辅助治疗提供了理论支持。     

Effects of Nitric Oxide on Respiratory Activity in Bulbospinal Preparation From Rat Fetus

Experiments on bulbospinal preparations isolated from rat fetus (gestation days 18 and 21) showed that exogenous and endogenous NO can stimulate respiratory rhythm generation and change spectral characteristics respiratory discharges.     

妊娠高血压综合征胎盘微循环的改变及一氧化氮的调节作用

为了探讨一氧化氮对妊娠高血压综合征（妊高征）胎盘微循环的调节作用，利用彩色多普勒超声测定妊高征患者（妊高征组）及正常晚孕妇（对照组）子宫动脉及脐动脉最大收缩期与舒张末期血流速度之比，即Ｓ／Ｄ值，并观察了部分病例胎盘绒毛血管的超微结构改变，并测定了胎盘组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性。结果显示，中、重度妊高征患者的胎盘绒毛血管有不同程度的改变，妊高征组胎盘组织ＮＯＳ活性与脐动脉Ｓ／Ｄ值呈负相关（Ｐ＜０．０５）。结果提示，妊高征组胎盘微循环的异常改变可能与胎盘组织ＮＯＳ活性降低有关。     

急性应激时大鼠脑内一氧化氮及一氧化氮合酶的变化

目的：探讨急性应激状态下脑内一氧化氮（NO）含量和一氧化氮合酶（NOS）活性的变化及意义。方法：采用放免法测定强迫游泳应激后1、3小时的大鼠额叶、海马、中脑和下丘脑内NO含量和NOS活性。结果：应激结束后1小时，海马和下丘脑内NO含量和NOS活性均显著增高（t分别为2．32、2．61，P均＜0．05）。应激结束后3小时，额叶、海马、中脑和下丘脑内NO含量均显著增高（t分别为3．57、4．26、3．88、4．93，P均＜0．01），NOS活性均显著性增高（t分别为2．32、2．61，P均＜0．05）。结论：急性应激状态下，各脑区的NOS活性增加，产生的NO可能介导了神经毒性作用。     

冠心病患者不对称二甲基精氨酸和同型半胱氨酸对一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

目的探讨冠心病患者不对称二甲基精氨酸(ADMA)和同型半胱氨酸(Hcy)对一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)的影响。方法冠心病患者60例和健康体检者30例,测定其ADMA、Hcy、NOS和NO以及血糖、血脂等。结果冠心病组和对照组的ADMA分别为(1.30±0.58)μmol/L和(0.57±0.18)μmol/L、Hcy分别为(31.53±13.26)μmol/L和(20.98±6.39)μmol/L、NOS分别为(5.06±1.82)μ/mg蛋白和(7.03±1.37)μ/mg蛋白、NO分别为(2.56±0.95)nmol/L和(4.21±1.12)nmol/L,两组之间的差异显著(P<0.01)。经相关分析,NOS和NO分别与ADMA和Hcy呈负相关(P<0.05)。结论冠心病患者ADMA和Hcy显著增高,NOS活性降低和NO水平下降与ADMA和Hcy增高有关。     

雌孕激素与子宫内膜的一氧化氮合酶

NO(NitricOxide) /NOS(NitricOxideSynthase)在雌性生殖生理功能方面如卵泡发育、激素分泌、胚胎着床、维持妊娠、促进分娩及内膜周期性变化、细胞凋亡等方面都具有重要作用。有关子宫内膜NOS的表达及调控机制仍存在异议。三种NOS神经型NOS(neuronalNOS ,nNOS)、内皮型NOS(endothelialNOS ,eNOS)和诱导型NOS(inducibleNOS ,iNOS)在内膜不同部位和时期呈强弱不等的表达 ,生理作用也不尽相同 ,且与雌孕激素对内膜的调节 ,内膜周期性变化关系密切。本文就NOS在子宫内膜的活性表达及其与雌孕激素关系的研究进行综述。     

病毒性肝炎中一氧化氮合酶调节的分子生物学机制

研究发现一氧化氮(NO)参与肝细胞的多项生理功能的调节,参与各种肝病的病理过程。一氧化氮具有潜在的抗病毒活性,一氧化氮合酶(NOs)作为产生一氧化氮的限速酶,不但参与一氧化氮的生成,还与一氧化氮的各种生理功能密切相关。了解与阐明肝细胞中一氧化氮合酶的分子生物学作用调节机制,有利于揭示病毒性肝炎的发病机理     

一氧化氮对血管紧张素Ⅱ介导的小鼠入球动脉收缩功能的影响

目的 观察NO对血管紧张素Ⅱ介导的入球动脉收缩功能的影响,探讨其机制.方法 使用分离的微灌注的入球动脉行等张收缩试验,给予L-NAME及血管紧张素Ⅱ等血管活性物质,观察入球动脉内径的变化.利用NO荧光探针DAF-FM观测入球动脉内皮NO释放情况.结果 L-NAME (10-4mol/L) 时间依赖性的引起入球动脉的收缩,作用60 min后动脉内径减少了35.2 %.在灌注状态下,内皮NO荧光强度持续增加,60 min后达70 %;L-NAME明显抑制内皮NO的释放速率(从29 %降到5.7 %).血管紧张素Ⅱ(10-14 ～ 10-6 mol/L)浓度依赖性的引起入球动脉收缩,最大收缩强度达41 %;L-NAME预处理能够增强入球动脉对于Ang Ⅱ的收缩反应,10-10mol/L Ang Ⅱ收缩动脉直径达46 %(没有L-NAME时为8.5 %),10-8 mol/L时为66 %(没有L-NAME时为41%).结论 灌注产生的血管剪切力是刺激NO释放的重要因素,内皮功能的完整性及NO在调控Ang Ⅱ介导的入球动脉收缩方面发挥重要的作用,NO生物利用度下降可能是肾脏疾病时入球动脉阻力增高的重要机制.     

一氧化氮合酶(NOS)在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的检测膀胱移行细胞癌中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达,并分析其表达与肿瘤病理特性的关系.方法采用免疫组织化学技术检测35例膀胱移行细胞癌标本、12例癌旁粘膜标本及8例正常膀胱粘膜标本中一氧化氮合酶三种亚型的表达情况.结果 35例肿瘤标本中nNOS、iNOS、eNOS阳性表达率分别为74.3%、85.7%、42.9%,膀胱移行细胞癌中iNOS表达较正常膀胱粘膜增高.但移行细胞癌、癌旁粘膜、正常粘膜三组间nNOS及eNOS表达无差别.nNOS、iNOS、eNOS表达与膀胱移行细胞癌分期分级可能无相关性.结论 iNOS在膀胱移行细胞癌中表达增高,可能参与膀胱移行细胞癌的发生发展.     

Immunolocalization of the Inducible Nitric Oxide Synthase Isoform in Human Fetal Membranes

PROBLEM: Nitric oxide (NO) synthesized by fetal membranes may protect the fetus from maternal infection or immune challenge or have a tocolytic effect on myometrium. The sites of synthesis and enzymes responsible for NO production in human fetal membranes remain unidentified. METHOD OF STUDY: Fetal membranes were obtained from four groups of patients: term (>37 weeks gestation) or preterm (<37 weeks gestation), both either in labor or not in labor. Frozen sections of membrane rolls were immunostained for inducible (iNOS) and endothelial (eNOS) nitric oxide synthase isoforms and the monocyte/macrophage marker CD14. RESULTS: Positive iNOS immunostaining was found in fibroblasts of amnionic and chorionic mesenchyme and in decidual macrophages identified by CD14 from all four groups of tissues. No iNOS immunostaining was seen in amnion epithelium or chorion trophoblast. Very intense iNOS staining was seen with evidence of monocyte/macrophage invasion of membranes. eNOS immunostaining was only found in decidual vascular endothelium. CONCLUSIONS: Constitutive expression of iNOS in decidual macrophages and fetal membrane fibroblasts may form an immune barrier against maternal insult. In chorioamnionitis, macrophage recruitment and NO expression may be part of the maternal immune response.     

一氧化氮合酶（NOS）在成年猫脊髓的分布

采用ＮＡＤＰＨｄ 酶组化方法,观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性产物在猫脊髓的分布。结果显示：ＮＯＳ的阳性反应物主要分布于脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元内。其它部位除中央管附近及腹角见个别ＮＯＳ阳性神经元及纤维外,几乎未见ＮＯＳ阳性染色。表明在本实验条件下所显示的脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元内的ＮＯＳ阳性产物可能主要与三种类型ＮＯＳ（神经活性ＮＯＳ,诱导性ＮＯＳ,内皮源性ＮＯＳ）中的神经活性ＮＯＳ关系密切。本文结果还提示Ⅱ板层神经膨体和神经元内的ＮＯＳ可能与Ⅱ板层的某些生理功能有关。