纤维连接蛋白和层粘连蛋白对瘤细胞移动性的影响

用琼脂糖滴扩散法分别观察在培养基内加入不同浓度的纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｎ）及地塞米松后，培养的人肺巨细胞癌细胞和肺腺癌细胞体外移动性的改变；同时用考马斯蓝Ｒ－２５０染色显示瘤细胞内微丝结构的变化。结果显示加入外源性Ｆｎ和Ｌｎ后，两株瘤细胞的移动性均增强，胞浆内近胞膜周围的微丝增多；地塞米松处理后，瘤细胞内Ｆｎ合成增加，细胞移动性降低，胞浆内微丝增多，杂乱弥漫分布。结果表明瘤细胞移动性的变化与细胞内微丝结构的变化有关。实验还观察到内源性Ｌｎ阳性的肺巨细胞瘤细胞的体外移动能力大于Ｌｎ阴性的肺腺癌细胞。     

体内外连续筛选建立人前列腺癌高转移细胞亚系及其生物学特性

目的 建立人前列腺癌小鼠转移模型,筛选前列腺癌高转移细胞亚系.方法 采用DU145细胞悬液原位注射法接种BNX小鼠,建立前列腺癌小鼠COI模型,取肺转移灶体外培养并采用侵袭小室体外筛选高侵袭性细胞,扩增后进行原位注射,如此将肺转移灶癌细胞在小鼠体传代2次,筛选高转移细胞亚系.结果 (1)原位细胞悬液注射法接种10只小鼠均成瘤,并都伴有肠系膜、腹股沟淋巴结,其中3只发现肺转移.(2)获得高转移前列腺癌细胞亚系DU145-M3,其侵袭能力强,肿瘤转移相关基因MAPK4和TIPM-2低表达,MMP-2高表达.结论 COI法是有效的前列腺癌转移模型制作方法;体内外连续筛选可获得高转移细胞亚系.     

细胞外基质对小鼠肺腺癌不同转移潜能细胞运动性的影响

利用体外实验方法，观察细胞外基质对ＬＡ７８５细胞系具不同转移潜能亚系体外移动能力的影响，将亚系瘤细胞形成的球体放入混有纤维粘连蛋白（ＦＮ）或层粘连蛋白（ＬＮ）之培养液中培养，培养不同时间进行瘤细胞移出距离测定。结果表明：ＦＮ或ＬＮ能促进转移潜能较强的ＬＡ５亚系和转移潜能较弱的ＬＡ１亚系的运动，其中以ＬＡ５亚系移动更快，说明ＦＮ或ＬＮ与肿瘤细胞侵袭转移能力有关，且高转移的瘤细胞与ＬＮ，ＦＮ的相互作用     

层粘连蛋白对腺样囊性癌细胞侵袭和转移的影响

目的研究层粘连蛋白(laminin,LN)与人涎腺腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,Acc)转移的关系。方法应用免疫组织化学染色,Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验,对人涎腺腺样囊性癌细胞系Acc-2和从其克隆出的肺高转移细胞株Acc-M进行比较研究。结果发现LN和层粘连蛋白受体(lamininreceptor,LNR)在Acc-M表达明显高于Acc-2。在加入外源性LN后,Acc-2体外移动性、粘附率均明显提高,而Acc-M无明显变化。结论层粘连蛋白在Acc转移和转移过程中起重要的调节作用。     

乳腺癌层粘连蛋白的免疫组织化学研究

本研究应用层粘连蛋白（ＬＮ）抗体，对２７例乳腺癌、５例乳腺良性病变进行了免疫组织化学研究。结果发现乳腺良性病变时，ＬＮ以均匀完整的线型阳性反应显示在乳腺导管及小叶基膜处。乳腺癌时，ＬＮ的染色表现为癌细胞胞浆内弥漫状阳性反应。２７例乳腺癌中，癌细胞ＬＮ染色强度不同，伴有转移的乳腺癌ＬＮ染色多数较强，强度在＋＋～的为７／１２（５８．３％）；不伴有转移的病例，ＬＮ染色多数较浅或为阴性，强度在＋＋～＋＋＋的病例为３／１５（２０％）。说明癌细胞内源性ＬＮ染色强弱与肿瘤转移密切相关，内源性ＬＮ的合成可能改变肿瘤细胞的浸润活性。     

层粘连蛋白总糖肽抑制小鼠黑色素瘤肝转移

层粘连蛋白总糖肽抑制小鼠黑色素瘤肝转移刘艺萍，周柔丽，张莎（北京医科大学细胞生物教研室１０００８３）在肿瘤转移过程中，癌细胞至少３次穿越基膜，癌细胞通过与基膜的主要功能成份层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）的识别、粘着并铺展于基膜是癌转移的关键环节之...     

转移性癌细胞对表皮生长因子和层粘连蛋白的反应及其三磷酸肌醇含量的测定

为探讨不同转移性癌细胞（ＭＦＣ和ＣＮＥ－２Ｚ）不同克隆细胞株的三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量、侵袭能力以及这些细胞对表皮生长因子（ＥＧＦ）和层粘连蛋白（ＬＮ）的反应性。方法利用放射性受体竞争结合法和人工基底膜（ｍａｔｒｉｇｅｌ）侵袭试验法进行了测定。结果显示了低转移性癌细胞比高转移性者的ＩＰ３含量高，对ＥＧＦ的反应性更大，但ＭＦＣ高、低转移性克隆细胞对ＬＮ的反应性差别无显著意义。而ＣＮＥ－２Ｚ高转移细胞比低转移者对ＬＮ的反应性更大。结论说明高、低转移性癌细胞在跨膜信息传递方面存在差别，深入研究其具体机制将有重要意义。     

卡介菌多糖核酸对肺癌细胞粘附及骨架结构的影响

目的　研究卡介苗多糖核酸 (BCG PSN)对肺癌细胞上粘附分子配体 (slex)表达及肺癌细胞质内骨架的表现特征的影响。方法　采用流式细胞仪及透射电镜观察BCG PSN对高转移人肺巨细胞癌 (PG)细胞和低转移人肺腺癌 (PAa)细胞上slex 表达的影响及胞质内骨架结构的变化。结果　①流式细胞仪分析提示PAa细胞slex 表达高 ( 66.8% ) ,PG细胞表达低 ( 5 .72 % )。经BCG PSN处理后 ,PAa细胞slex 表达呈浓度依赖下降。②超微结构观察 :PAa细胞微丝稀疏 ,PG细胞微管微丝减缺。BCG PSN处理后 ,PG细胞微丝较前丰富、完整 ,树样分布 ,PAa细胞仅见少量的微丝。结论　细胞内微管、微丝等细胞骨架成分的改变与癌细胞运动迁徙能力有关 ,BCG PSN对肺癌细胞粘附性的抑制环节不是细胞骨架介导的粘附强化 ,可能是粘附分子表达下降所致的粘附强化启动过程。     

反义寡核苷酸转染对胆管癌细胞侵袭能力的实验研究

目的　探讨层粘连蛋白受体反义寡核苷酸 (AS OD)对胆管癌细胞体外侵袭和转移能力的影响。方法　以层粘连蛋白受体反义寡核苷酸片段转染胆管癌细胞高转移性亚群 ,RT PCR和流式细胞仪检测转染前后细胞层粘连蛋白受体mRNA和蛋白的表达差异 ,体外粘附实验和侵袭实验检测转染前后细胞粘附和侵袭能力的改变。结果　反义寡核苷酸转染后可在mRNA水平和蛋白水平下调层粘连蛋白受体的表达 ,且下调作用呈剂量依赖性。与空白对照组及顺义寡核苷酸转染组比较相差均显著 (P<0 0 5 )。体外粘附和侵袭实验显示转染后细胞粘附和侵袭能力均较之转染前有显著下降 ,两者间相差均显著 (P <0 0 5 )。结论　层粘连蛋白受体反义寡核苷酸可降低胆管癌细胞体外侵袭和转移能力。     

层粘连蛋白与十二种人类癌系体外移动性的比较研究

以体外移植附代培养具有恶性肿瘤形态及生物学特性的十二种人癌系,即四系肺癌、三系胃癌,以及鼻咽癌、肝癌、宫颈癌、食管癌、人脑胶质细胞瘤各一系作为研究对象。以抗层粘连蛋白(Anti-LN)血清作酶标抗体间接法染色证明,其中一系人肺巨细胞癌呈内源性LN阳性,其体外移动能力最强,为十二种人癌系之冠,这种高移动性与体内的高转移性相一致。余十一系内源性LN均呈阴性,在琼脂糖滴与Boyden室中的滤纸上显示的移动能力均较低.     

人肺腺癌细胞在裸小鼠体内脑、骨、肌肉转移模型的建立

我们将人肺隙癌细胞系Anip-9代腹水型细胞，经裸小鼠体内传代和体外培养反复交替传代筛选．获得了Anip系列的亚系．给以代号(815、926．973)．然后对Anip-19代腹水型癌细胞和Anip系列的亚系进行转移能力比较。结果Anip系列亚系中Anip 973转移能力最强，并出现脑、骨、肌肉转移。而AniP 19代腹水型细胞未出现脑．骨．肌肉转移，肺转移率也低于Anip 973．     

细胞基质分子影响人颊癌细胞侵袭力的体外实验研究

为探讨人颊癌细胞侵袭性生物学行为的有关分子机制。采用体外人羊膜模型,以建株人颊癌细胞系ＢｃａＣＤ８８５为研究对象,观察了细胞外基质ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）活性分子层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ,ＬＮ）、纤粘连蛋白Ｉｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,ＦＮ）及其结合位点疗列肽ＲＧＤ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）对人癌细胞侵袭力的影响。结果表明,不同浓度的ＬＮ,ＲＮ（１０～５０ｍｇ／ｍｌ）均明显     

细胞外基质分子影响人颊癌细胞侵袭力的体外实验研究

为探讨人颊癌细胞侵袭性生物学行为的有关分子机制。采用体外人羊膜侵袭模型,以建株人颊癌细胞系ＢｃａＣＤ８８５ 为研究对象,观察了细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ）活性分子层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ,ＬＮ） 、纤粘连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,ＦＮ）及其结合位点序列肽ＲＧＤ（Ａｒｇ Ｇｌｙ Ａｓｐ） 对人颊癌细胞侵袭力的影响。结果表明,不同浓度的ＬＮ、ＦＮ（１０～５０μｇ／ｍｌ）均明显地增强了人颊癌细胞的侵袭力,并呈现出一定的剂量效应关系;ＲＧＤ不仅能降低颊癌细胞的侵袭力,而且能阻抑ＦＮ 的促颊癌细胞侵袭力。由此提示,ＬＮ、ＦＮ 可能是人颊癌细胞侵袭过程中的重要调节分子,利用ＥＣＭ分子结合位点序列肽有望成为一种新的抗癌侵袭转移治疗方法。     

层粘连蛋白,纤粘连蛋白对两株小鼠肝癌细胞实验粘附的影响

本文探讨了层粘连蛋白（ＦＮ）和纤粘连蛋白（ＬＮ）对两株细胞休外粘附的影响，以及与其转移能力的相关性，结果显示ＬＮ和ＦＮ对高转移的Ｆ细胞的附壁及淋巴结组织的粘附均有促进作用，而低转移和Ｐ细胞ＦＮ对基初期（３小时）附壁和淋巴结组织的占附有一定影响，提示瘤细胸质膜受体蛋白的表达与其转移能力密切相关。     

血管抑制素-2通过调控上皮细胞间质化促进宫颈癌细胞的增殖和转移

目的 探讨血管抑制素-2（VASH2）能否促进宫颈癌细胞在体外的增殖和转移及其可能的分子机制。方法 在外源性过表达和干扰内源性flotillin-1表达的宫颈癌细胞中,通过公共数据库结合RNA-seq挖掘分析差异表达基因;在宫颈正常上皮细胞（HcerEpic细胞）和宫颈癌细胞（HeLa、C-33A、Ca ski、SiHa和MS751）以及不同淋巴结转移状态的新鲜宫颈癌组织中检测VASH2的表达;运用慢病毒稳定表达载体构建外源性过表达VASH2和干扰内源性VASH2表达的宫颈癌细胞及对照细胞,并检测其增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成的情况;在上述细胞模型中检测上皮细胞间质化（EMT）过程关键分子及TGF-β的表达水平。结果 RNA-seq发现在外源性过表达flotillin-1的宫颈癌细胞中VASH2的表达上调（P<0.05）,而在抑制内源性flotillin-1表达的细胞中VASH2表达下调（P<0.05）,并在公共数据库中证实VASH2在有淋巴结转移的宫颈癌组织中相对于无淋巴结转移的癌组织呈高表达（P<0.01）。相对于HcerEpic细胞和淋巴结未转移的宫颈癌组织,VASH2在Ca Ski、SiHa、MS751细胞和有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达上调（P<0.05）;相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成能力增强,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞上述能力则受到抑制（P<0.05）;相对于对照细胞,外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中EMT过程的关键分子E-cadherin下调,N-cadherin、Vimentin和VEGF-C上调,而抑制内源性 VASH2 表达的宫颈癌细胞中 E-cadherin 上调,N-cadherin、Vimentin 和 VEGF-C 下调（P<0.05）;外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平上调,而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平下调（P<0.001）。结论 flotillin-1可能通过下游靶基因VASH2参与 TGF-β信号通路诱导EMT过程在体外促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成。     

层粘连蛋白在早妊小鼠子宫内膜中的表达

目的：观察层粘连蛋白（ＬＮ）在早妊小鼠子宫内膜表面上皮基膜和腺上皮基膜的表达。方法：免疫组织化学技术ＡＢＣ法。结果：妊娠第１～３天，子宫内膜上皮基膜和腺上皮基膜ＬＮ表达逐渐增强，妊娠第１天与对照组相似，妊娠第３天，ＬＮ表达最强；妊娠第４天，ＬＮ表达最弱，甚至呈阴性；妊娠第５、６天，ＬＮ表达由弱渐强。此变化过程中对系膜侧ＬＮ的变化与系膜侧相似。结论：ＬＮ在小鼠早妊期间的变化对促进子宫内膜表面上皮细胞和腺上皮细胞增殖、迁移、植入室形成及胚泡植入方面起重要作用。     

绿色荧光蛋白基因标记的肺癌细胞株的建立

目的 建立能稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的肺癌细胞株,为研究肺癌的浸润与转移机制打下基础.方法 利用逆转录病毒将EGFP导入人高转移肺癌细胞株95D,经过G418筛选和克隆化培养,用荧光显微镜及流式细胞仪检测EGFP基因在癌细胞体外的表达,绘制细胞生长曲线,检测细胞贴壁率等,观察稳定表达EGFP的癌细胞的细胞生物学行为有无改变.结果 携带EGFP的逆转录病毒能有效地感染95D细胞,筛选出的细胞能稳定、高效、持久地表达EGFP,与未感染的细胞比较,他们的生物学特性未改变.结论 人高转移肺癌细胞株95D/GFP-1的建立为研究肺癌侵袭和转移的发生机制提供了理想的细胞株.     

Pokemon基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达

目的 探讨pokemon基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况.方法 采用RT-PCR、Western blot检测pokemon基因在5种人非小细胞肺癌细胞系中的表达.结果 pokemon基因在肺腺癌细胞系A549和AGZY83-a、肺鳞癌细胞系HE-99、肺巨细胞癌细胞系95D中呈高表达,在肺腺癌细胞系PAa中未见表达.结论 非小细胞肺癌细胞系中存在pokemon的表达.     

层粘素在胆管癌细胞浸润过程中的作用

通过观察外源性层粘素对一株新近建立的胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９分泌Ⅳ型胶原酶及体外浸润能力的影响，旨在探讨胆管癌细胞浸润过程中的生物学机理，特别是ＬＮ及Ⅳ型胶原酶在浸润中的作用和意义。结果表明，不剂量的ＬＮ均明显刺激ＱＢＣ９３９细胞分泌Ⅳ型胶原酶，且５μｇ／ｍｌ剂量的ＬＮ即能显著增强ＱＢＣ９３９细胞的体外浸润能力。     

胃癌患者血清Ⅳ型胶原、层粘连蛋白含量的测定及其临床意义

目的 测定胃癌患者血清４型胶原（ＣｏｌⅣ）、层粘连蛋白（ＬＮ）含量，并探讨其临床意义。方法 应用放射免疫法测定３２例胃癌患者血清ＣｏｌⅣ、ＬＮ含量。结果 胃癌患者血清ＣｏｌⅣ与ＬＮ含量均明显高于正常人（Ｐ〈０．０５），有淋巴结转移的胃癌患者血清ＣｏｌⅣ与ＬＮ含量均明显高于元淋巴结转移的胃癌患者（Ｐ〈０．０５）。结论 胃癌患者血清ＣｏｌⅣ、ＬＮ含量变化与癌细胞浸润、转移等生物学行为有关，监测血清Ｃｏ