汉族人AGT基因5'-调控区序列分析

目的分析汉族人血管紧张素原（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎｇｅｎ,ＡＧＴ）基因５′－调控区多态性及其与原发性高血压的关联。方法应用ＰＣＲ产物单链构象的多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直接测序方法,鉴定１００例高血压患者和５０例正常血压对照者的血管紧张素原基因５′－调控区－１５５至＋２５ｂｐ核酸序列。结果（１）汉族人ＡＧＴ基因５′－调控区－２０位是腺嘌呤核苷酸（Ａ）,而白种人该位是胞嘧啶核苷酸（Ｃ）,这可能与种族相关联;（２）原发性高血压患者和正常血压对照者ＡＧＴ基因５′－调控区－４６位均存在Ｔ→Ａ单个碱基突变,但两组Ｔ→Ａ基因突变频率间差异无统计学意义。结论ＡＧＴ基因５′－调控区－４６位Ｔ→Ａ单个碱基突变与汉族原发性高血压不相关联,但ＡＧＴ基因５′－调控区－２０位为腺嘌呤核苷酸（Ａ）可能是汉族人的重要遗传标志之一。     

变性梯度凝胶电泳分析PAH基因外显子3突变

采用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳、限制性内切酶分析及ＤＮＡ直接序列分析等方法，对５８例南方地区中国人苯丙酮尿症（ＰＫＵ）的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子３进行了分析，发现９例ＰＫＵ患者外显子３存在突变，占ＰＫＵ患者的１５．５２％（９／５８），外显子３突变占ＰＡＨ基因突变的７．７６％（９／１１６），６例患者存在ＡｒｇｌｌｌＴｅｒ错义突变，该突变位点的基因内频率为５．１７％。结果提示中国南方和北方人群ＰＫＵ分子遗传学可能存在一定程度的差异。     

PCR-ASO技术对苯丙氨酸羟化酶基因外显子突变的分析

目的：检测苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可疑患者的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子７、１１、１２（Ｅ７、１１、１２）区域的点突变。方法：应用ＰＣＲ方法对６例可疑ＰＫＵ患者的ＰＡＨ基因Ｅ７、１１、１２区域进行扩增，再用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记的寡核苷酸探针（ＡＳＯ）杂交技术对其进行分析。结果：其中３例仅与含有Ｒ２４３Ｑ突变的异常探针杂交，不与正常探针杂交，说明其为Ｒ２４３Ｑ突变纯合子。结论：ＰＣＲ－ＡＳＯ探针可以特异地与ＰＡＨ突变位点杂交，是诊断ＰＫＵ的一种准确、可行的方法。     

云南经典型苯丙酮尿症基因Exon—11突变的检测

为了探讨云南省经典型ＰＫＵ基因突变特征,为基因诊断提供依据,应用ＰＣＲ－ＡＳＯ探针斑点杂交和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析技术,对１４个ＰＫＵ家系１４名患儿的ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ－１１进行检测。结果：检出两种突变Ｙ３５６Ｘ（ＴＡＣ→ＴＡＡ）和Ｖ３９９Ｖ（ＧＡＴ→ＧＴＴ）,突变频率均为７．１４％,前者略高于北方人群,后者低于北方人群。提示：云南ＰＫＵ患者ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ－１１突变不同于北方人群,这对提高云南省     

应用ARMS方法检测苯丙酮尿症致病基因的研究

应用ＡＲＭＳ方法对１６个中国ＰＫＵ家庭进行了常见ＰＡＨ致病基因的筛查。在３２个突变位点中，突变基因（点突变）检出率分别为：Ｅｘｏｎ７突变为５６．２５％、Ｅｘｏｎ６突变为１２．５％，Ｅｘｏｎ１２为６．２５％、Ｅｘｏｎ３为３．１３％和ｉｎｔｒｏｎ４切拼受端突变为９．３８％。由于该方法对突变的检出率已达到８７．５％、且简便、快速、不应用放射性同位素，故可作为产前诊断ＰＫＵ的一种手段。     

应用ARMS方法检测苯丙酮尿症致病基因的研究

应用ＡＲＭＳ方法对１６个中国ＰＫＵ家庭进行了常见ＰＡＨ致病基因的筛查。在３２个突变位点中，突变基因（点突变）检出率分别为：Ｅｘｏｎ７突变为５６．２５％、Ｅｘｏｎ６突变为１２．５％，Ｅｘｏｎ１２为６．２５％、Ｅｘｏｎ３为３．１３％和ｉｎｔｒｏｎ４切拼受端突变为９．３８％。由于该方法对突变的检出率已达到８７．５％，且简便、快速、不应用放射性同位素，故可作为产前诊断ＰＫＵ的一种手段。     

中国北方人PAH基因外显子6，12的突变研究

目的：检测北方人中苯丙酮尿症（ＰＫＵ）Ｋ本丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子６,１２中的突变。方法：应用聚合酶链反应－变性梯度凝胶电泳及直接测序方法,检测突变。结果Ｌ：中国北方人３４例ＰＫＵ患者外周血ＤＮＡ中鉴定ＰＡＨ基因外显子６,１２中的３种突变,Ｙ２０４Ｃ,Ｑ２３２Ｑ和Ｒ４１３Ｐ,其频率分别为５．９％,４．４％,５．９％。结论：本实验提示Ｑ２３２Ｑ可能为中国北方人中较常见的一种新突变,并可能为协     

胰激肽释放酶对糖尿病肾病的疗效观察

将１４８例糖尿病患者按尿白蛋白排泄率（ＵＡＥ）不同分为大量白蛋白尿组，微量白蛋白尿组和正常白蛋白尿组３组，每组随机分为治疗组和对照组。治疗组在维持原治疗基础上肽释放酶（ＴＰＫ），共８周；对照组不用ＴＰＫ及其它对尿蛋 影响的药物，测定服经前后ＵＡＥ的变化。结果：大量白蛋白尿组及微量白蛋白尿组８周后ＵＡＥ均较对照组明显下降，正常白蛋白尿组８周后治疗组ＵＡＥ无明显变化，对照组ＵＡＥ有或。提示ＴＰＫ能明显     

胰腺癌组织中K－ras基因点突变的研究

应用Ｔａｑ酶直接测序技术对９例胰腺癌标本及１例恶性胰岛细胞瘤标本进行了Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的检测。结果显示：９例胰腺癌中含Ｋ－ｒａｓ基因突变者５例。表现出２种突变类型，即ＣＣＡ→ＣＧＡ型４例；ＣＣＡ→ＣＡＡ型１例。相应氨基酸改变分别为：甘氨酸→丙氨酸；甘氨酸→缬氨酸。分析了在突变率及突变内容，上与国外学者不同的原因，探讨了检测Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的意义。     

检测苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复顺序进行苯丙酮尿症产前诊断

目的：应用聚合酶链反应检测苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因内高度多态的短串联重复顺序（ＳＴＲ），以兹建立简便易行的苯丙酮尿症（ＰＫＵ）产前诊断方法，杜绝苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患儿的出生，提高人口质量。方法：通过ＰＣＲ技术，对８个经典型ＰＫＵ家系２５个成员的ＳＴＲ等位片段进行了分析，完成８例ＰＫＵ高危胎儿的产前基因诊断。结果：１例胎儿患ＰＫＵ，２例胎儿正常，４例胎儿为突变ＰＡＨ等位基因携带者。结论：提出了易于推广的开展ＰＫＵ产前基因诊断的方案     

检测苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复顺序进行苯丙酮尿症产 …

目的：应用聚合酶链反应检测苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因内高度多态的短串联重复顺序（ＳＴＲ），以兹建立简便易行的苯丙酮尿症（ＰＫＵ）产前诊断方法，杜绝苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患儿的出生，提高人口质量。方法；通过ＰＣＲ技术，对８个经典型ＰＫＵ家系２５个成员的ＳＴＲ等位片段进行了分析，完成８例ＰＫＵ高危胎儿的产前基因诊断。结果：１例胎儿患ＰＫＵ，２例胎儿正常，４例胎儿为突变ＰＡＨ等位基因携带者。结论：提出了     

PCR循环测序法检测K-ras和HCV 5'非编码区基因变异

目的：建立一种简单、快速、可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析Ｋｒａｓ基因和ＨＣＶ５′非编码区基因的变异情况。方法：ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立了以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶、荧光标记的２′，３′双脱氧核苷三磷酸（ｄｄＮＴＰ）直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。应用该方法对人肺癌组织中的Ｋｒａｓ癌基因和丙型肝炎病毒５′非编码区（ＨＣＶ５′ＮＴＲ）进行了序列测定。结果：肺癌组织中的Ｋｒａｓ基因第１外显子第３５位碱基发生点突变（ＧＧＴ→ＧＡＴ）；属于高度保守区的ＨＣＶ５′ＮＴＲ存在基因变异。结论：ＰＣＲ循环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点，为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。     

胰腺癌组织中K—ras基因点突变的研究

应用Ｔａｑ酶直接测序技术对９例胰腺癌标本及１例恶性胰岛细胞瘤标本进行了Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的检测。结果显示：９例胰腺癌中含Ｋ－ｒａｓ基因突变者５例。表现出２突变类型，即ＣＣＡ→ＣＧＡ型４例；ＣＣＡ→ＣＡＡ型１例。相应氨基酸改变分别为：甘氨酸→丙氨酸；甘氨酸→缬氨酸。分析了在突变率及突变内容上与国外学者不同的原因，探讨了检测Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的意义。     

肝豆状核变性基因的一种新型错义突变

了解中国人肝豆状核变性患者基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）的突变情况，为该病的诊断和治疗提供依据。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡＴＰ７Ｂ基因的外显子片段，通过ＤＮＡ单链构象多态（ＳＳＣＰ）寻找突变，以ＤＮＡ测序予以鉴定。结果在１４１例肝豆状核变性患者中发现４例脑型患者的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带存在相同的异常迁移。ＤＮＡ测序均显示为第６６２密码子（ＴＣＣ）第二碱基发生由Ｃ→Ｇ的颠换，导致其编码的丝氨酸（Ｓｅｒ）变为半胱氨酸（Ｃｙｓ）。结论在４例脑型肝豆状核变性患者中，发现了一个未见报道的新突变类型（Ｓｅｒ６６２Ｃｙｓ）。     

心肌细胞缺氧通过激活AMPK促进GLUT4移位和葡萄糖摄取

目的：探讨心肌缺氧时ＡＭＰ激活的蛋白激酶（ＡＭＰＫ）激活对葡萄糖转运子４（ＧＬＵＴ４）移位和葡萄糖摄取的作用。方法：大鼠心室肌经５００μｍｏｌ／Ｌ腺嘌呤－９－β－Ｄ－阿糖呋喃腺苷（ａｒａＡ）处理后,分别与胰岛素、氰化钾、５－氨基咪唑－４－氨基甲酰－１－β－Ｄ核糖呋喃腺苷（ＡＩＣＡＲ）孵育,用放射性核素分析技术测定其葡萄糖摄取量和ＡＭＰＫ活力,应用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析心肌细胞ＧＬＵＴ４含量。结果：ＡＭＰＫ特异性激活剂ＡＩＣＡＲ和氰化钾可使心肌葡萄糖摄取增加（１倍和１．５倍）,但均受ａｒａＡ抑制。ＡＩＣＡＲ增加心肌ＡＭＰＫ活力和葡萄糖摄取,而ａｒａＡ则有抑制作用。心肌细胞质膜ＧＬＵＴ４分布明显增加而细胞器膜ＧＬＵＴ４分布相应减少。结论：氰化钾所致的心肌缺氧与ＡＩＣＡＲ一样可通过ＡＭＰＫ激活途径,促进ＧＬＵＴ４移     

凝血因子Ⅴ基因的一种新突变的发现与确证

目的：探讨先天性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺乏症的分子发病机制。方法：利用发色底物法检测血浆FⅤ凝血活性,采用PCR产物直接测序或T-A克隆后测序、限制性酶切分析先证者FⅤ基因,并进行了一个家系和FⅤ基因多态性频率研究。结果;先证者8号内含子3′端剪接位点存在AG→GG的突变,这在家系和100例正常对照人群的研究中得到证实。结论：FⅤ基因8号内含子3′端剪接位点的突变与先天性凝血因子Ⅴ缺乏症的发病有关。     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

干扰素疗法与HBV前C区点突变关系的初步研究

用错配引物聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析对１５例血清ＨＢｅＡｇ阳性性，ＨＢＶ－ＤＮＡ斑杂交阳性的慢性乙型肝炎患者进行了干扰素疗法与ＨＢＶ前Ｃ区基因１８９６位点突变之间系的观察。结果显示，治疗后ＨＢＶ野株和突变株的变化有四种类型，即Ｗ→Ｗ；Ｗ＋Ｍ→Ｗ＋Ｗ（３例）；Ｗ→Ｗ＋Ｍ（３例）；Ｗ＋Ｍ→Ｗ（１例）。     

侵袭性念珠菌血症致病菌耐唑类抗真菌药物 的基因突变位点筛查结果分析

目的：筛选侵袭性念珠菌血症致病菌的耐唑类抗真菌药物菌株并探讨其耐药机制。方法：收集２０１６ －０１～ ２０１８－０１ 我院侵袭性念珠菌血症病人体液,常规培养分离后得到念珠菌共 ５４ 株,进行体外药物敏感性试 验,筛选耐唑类抗真菌药物菌株。提取耐药菌株 ＤＮＡ,采取聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法扩增 ＥＲＧ ３、ＥＲＧ １１ 基因 片段并测序,与基因库提供的标准序列进行比对分析,确定基因突变位点,分析该突变是否与耐药有关。结果： 药敏试验筛选出 ４ 株白念珠菌和 ３ 株热带念珠菌为唑类抗真菌药物耐药菌株,白念珠菌 ＥＲＧ ３ 基因同义突变 ３ 个（Ｔ３８１ Ｃ,Ｔ４３２ Ｃ,Ｔ５１ Ｃ）,错义突变３ 个（Ｃ１０５２ Ｔ,Ｃ５２７ Ｇ,Ｃ５２７ Ａ）,ＥＲＧ １１ 基因同义突变３ 个（Ｔ４８５ Ａ,Ｃ７９５ Ｔ,Ｃ６３９ Ｔ）,错义突变 ６ 个（Ｔ３９４ Ｃ,Ｃ６１５ Ａ,Ｔ５４１ Ｃ,Ｇ１５４０ Ａ,Ｇ１４９６ Ａ,Ｇ１１８４ Ｃ）;热带念珠菌 ＥＲＧ ３ 基因同义 突变 ４ 个（Ａ３６６ Ｇ,Ｔ９１２ Ａ,Ｔ５３１ Ｃ,Ｃ５２８ Ａ）,错义突变 ４ 个（Ａ３３４ Ｇ,Ｔ３５ Ｇ,Ｃ５２７ Ａ,Ｃ８１５ Ａ）,ＥＲＧ １１ 基因同义 突变 ３ 个（Ｔ２２５ Ｃ,Ｃ６３９ Ｔ,Ｇ２６４ Ａ）,错义突变 ２ 个（Ａ３９５ Ｔ,Ｃ４６１ Ｔ）。结论：我院侵袭性念珠菌血症致病菌中, 白念珠菌和热带念珠菌存在一定比例的唑类抗真菌药物耐药性,其耐药机制与 ＥＲＧ ３、ＥＲＧ １１ 基因突变密切 相关。     

家族性糖尿病中线粒体tRNA~(Leu(UUR))基因突变的发生率及临床特点

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法，对１４０例有家族史的糖尿病患者的线粒体ｔＲＮＡ１ｅｕ（ＵＵＲ）基因ｎｔ３２４３Ａ→Ｇ突变进行筛查，结果发现６例（４．３％）该突变基因阳性者。总结其主要临床特征为：①呈母系遗传，②起病早（＜４０岁），③多消瘦（ＢＭＩ＜２４ｍｇ／ｍ２），④继发性口服降糖药失效需用胰岛素治疗，⑤多伴有神经性耳聋。本研究提示该突变在中国人家族性糖尿病群体中有较高的发生率；在临床上属于另一种糖尿病亚型。