氧化低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞的影响

我们观察了经氯化铜氧化修饰所形成的氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞生长、释放肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的作用。结果发现，Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞４８ｈ、７２ｈ以及１０６ｈ，均有抑制该细胞生长的作用。刺激４８ｈ时，细胞对ＭＴＴ的摄入量（以Ａ５７０表示），与Ｏｘ－ＬＤＬ的浓度成反比（ｒ＝－０．９９５，Ｐ＜０．０１）。刺激１８ｈ的细胞上清对Ｌ９２９细胞（ＴＮＦ敏感株）的杀伤能力有所增强，上清中的ＬＤＨ含量明显升高。与未修饰的低密度脂蛋白相比，Ｏｘ－ＬＤＬ对系膜细胞表现出明显的毒性，在高脂血症肾损伤时具有重要意义     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

氧化低密度脂蛋白诱导人肾小球系膜细胞凋亡机制的研究

肾小球硬化的重要病理特征是进行性肾小球细胞外基质积聚和细胞的丧失。在肾小球炎症过程中 ,细胞过度凋亡导致细胞减少是肾小球硬化的重要原因[1] 。氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ -ＬＤＬ)是引起肾小球硬化的重要因素[2 ,3] ,低浓度的Ｏｘ-ＬＤＬ(<10 0 μｇ/ｍｌ)抑制系膜细胞增殖 ,促进系膜细胞凋亡[4 ] ,但Ｏｘ -ＬＤＬ诱导系膜细胞过度凋亡的机制尚不清楚。我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞进行实验 ,以探讨Ｏｘ-ＬＤＬ诱导系膜细胞凋亡的可能机制 ,为寻找延缓肾小球硬化的有效方法提供新思路。1　材料与方法1.1　实验材料　Ｂａｘ及Ｂｃ…     

血小板活化因子对人肾小球系膜细胞的影响

利用体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）观察了血小板活化因子（ＰＡＦ）对其增殖、释放肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的影响，发现ＰＡＦ在较低浓度时（１０－８和１０－７ｍｏｌ／Ｌ），对ＧＭＣ摄取四唑盐（ＭＴＴ）的影响甚微，而较高浓度时（１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ）则有明显的抑制作用。经ＰＡＦ刺激１８ｈ的ＧＭＣ上清，对ＴＮＦ敏感的Ｌ９２９细胞株的杀伤能力有所增强，在ＰＡＦ１０－７ｍｏｌ／Ｌ时达高峰。此外，高浓度的ＰＡＦ尚具有促进ＧＭＣ释放ＬＤＨ的作用。这些结果说明：ＰＡＦ可以通过多种机理损伤肾小球系膜细胞，在肾小球的炎症反应中起重要作用     

低密度脂蛋白对体外培养的人肾小球系膜细胞产生活性氧的影响

观察了人低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的人行小球系膜细胞（ＧＭＣ）Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－产生的影响，并与经ＬＤＬ刺激后ＧＭＣ的增殖水平及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平相比较，结果发现：经ＬＤＬ刺激３０ｍｉｎ，浓度≤１００ｍｇ／Ｌ时，ＬＤＬ能明显促进ＧＭＣ释放Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－，＞１００ｍｇ／Ｌ时，ＧＭＣ上清中该类物质的浓度并不随之增加。ＬＤＬ刺激ＧＭＣ释放Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－的浓度曲线与经ＬＤＬ刺激４８ｈ后ＧＭＣ的增殖曲线以及ＬＤＨ释放曲线相符合。说明ＬＤＬ除可直接影响ＧＭＣ增殖外，尚可通过对ＧＭＣ释放或产生活性氧和ＬＤＨ等炎性介质来间接损伤肾小球。     

LDL－阿克拉霉素复合物对白血病HL－60细胞的生长抑制作用

选择人急性早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０进行体外培养，以正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）作为对照细胞，观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对ＨＬ－６０细胞生长的影响、ＬＤＬ与抗癌药物阿克拉霉素（ＡＣＭ）复合物的入胞作用以及对ＨＬ－６０细胞株的选择性杀伤作用。结果表明：１．ＬＤＬ对ＨＬ－６０细胞的生长无明显影响；２．ＬＤＬ作为载体可增加ＡＣＭ进入ＨＬ－６０细胞的量，但对ＰＢＬ的影响不明显；３．ＬＤＬ载体可增强ＡＣＭ对ＨＬ－６０细胞的杀伤力，而对ＰＢＬ无明显影响。提示ＬＤＬ是脂溶性抗肿瘤药物的良好载体     

IL-1对肾小球系膜细胞增殖和周期素依赖激酶2表达的影响

目的 探讨白细胞介素－１（ＩＬ－１）对肾小球系膜细胞增殖及周期素依赖激酶２（ＣＤＫ２）表达的影响。方法 利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别采用噻唑蓝掺入法、流式细胞仪检测、免疫细胞化学等观察ＩＬ－１作用前后系膜细胞增殖民政部以及ＣＤ听表达变化。结果 ＩＬ－１可以明显促进系膜细胞增殖,同时伴有ＣＤ听表达增高。结论ＩＬ－１对系膜细胞有明显的促增殖春机制可能与影响ＣＤＫ２的表达有关。     

ApoE3／2血浆表型脂蛋白对淋巴细胞的作用

采用生化和细胞培养的方法观察了ＡｐｏＥ３／２表型血浆脂蛋白不同组分对植物血凝素（ＰＨＡ）诱导的淋巴细胞增生的影响，以及低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）对淋巴细胞产生白细胞介素２（ＩＬ－２）水平的影响。结果显示载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）３／２表型血浆脂蛋白均不同程度地抑制ＰＨＡ诱导的淋巴细胞的体外增生，并且ＬＤＬ和ＶＬＤＬ均可明显降低淋巴细胞产生ＩＬ－２的水平。实验提示脂蛋白抑制淋巴细胞产生ＩＬ－２可能是引起体外淋巴细胞增生抑制的一个重要原因。     

胰岛素和卡托普利对糖尿病大鼠肾小球系膜细胞的影响

目的　观察胰岛素和卡托普利对体外培养的肾小球系膜细胞生长的影响和白细胞介素６（ＩＬ－６）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）产生情况。方法以糖尿病大鼠模型对此进行研究。结果糖尿病大鼠（ＤＭ大鼠）系膜细胞其氚-胸腺嘧啶核苷（~３Ｈ－ＴｄＲ）掺入的每分钟记数值明显高于正常大鼠。加不同浓度胰岛素时ＤＭ大鼠和正常大鼠系膜细胞~３Ｈ－ＴｄＲ掺入的记数和上清液中ＩＬ－６的含量均分别较不加胰岛素时明显升高。加不同浓度卡托普利时，ＤＭ大鼠系膜细胞~３Ｈ－ＴｄＲ掺入的记数值和上清液中ＴＮＦ含量较不加组明显减低。结论对正常大鼠系膜细胞抑制作用只有在卡托普利１０~(－３)ｍｏｌ／Ｌ时才表现出来。胰岛素促进~３Ｈ－ＴｄＲ掺入和ＩＬ－６的产生，卡托普利抑制~３Ｈ－ＴｄＲ掺入和ＴＮＦ的产生。     

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及纤维连接蛋白基因表达的影响

目的：探讨体外培养条件下糖基化终产物（AGEs）对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）及纤维连接蛋白（FN）基因表达的影响。方法：用不同浓度体外制备的AGEs干预系膜细胞及同一浓度的AGEs干预细胞不同时间。应用RT-PCR检测细胞中CTGF和FN的mRNA水平。结果：随着AGEs干预浓度的增加或干预时间的延长,系膜细胞CTGF和FNmRNA水平与对照组相比显著上升。结论：AGEs可导致人肾小球系膜细胞CTGF和FNmRNA的表达增加,在糖尿病肾病的发生、发展中起一定作用。     

LDL和HDL对体外培养的人肾小球系膜细胞生长的影响

我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ），观察了低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和高密度脂蛋白（ＨＤＬ）对其增殖的影响。我们发现，经ＬＤＬ刺激４８ｈ，在浓度为５０～２００ｍｇ／Ｌ范围内，ＬＤＬ能促进系膜细胞增殖，且在１００ｍｇ／Ｌ时促进作用达高峰，ＭＴＴ掺入后细胞的Ａ值为０．２０８±０．０１９，较阴性对照（含５％脱脂小牛血清）０．０８５±０．０２４明显升高（ｔ＝８．０９２，Ｐ＜０．００１）。延长刺激时间至１０６ｈ，则高峰为２００ｍｇ／Ｌ，３Ｈ－ＴｄＲ掺入后的ｍｉｎ－１数为３０１０±３２４．５６，是阴性对照（１４３２．３４±５７０）的２倍多（ｔ＝４．２４１，Ｐ＜０．０１）。但当ＬＤＬ浓度＞２００ｍｇ／Ｌ时，细胞增殖水平均有所下降，甚至显示出轻度抑制作用。用２０％脱脂血清取代全脂血清，细胞增殖明显降低，Ａ值由０．４２２±０．０９降至０．１０２±０．０４２（ｔ＝７．８６，Ｐ＜０．００１）；在脱脂血清中重新加入２０ｍｇ／Ｌ和１００ｍｇ／Ｌ的ＬＤＬ，Ａ值上升为０．３３５±０．０５７和０．６４±０．０９８，分别为脱脂血清的３．２８和６．２７倍（ｔ值分别为８．０３和１１．９７，均Ｐ＜０．００１）。而不同浓度的ＨＤＬ对细胞显示有     

高密度脂蛋白的氧化修饰的特征及对低密度脂蛋白氧化的影响

研究高密度脂蛋白（ＨＤＬ）氧化修饰后对其结构及对低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化的影响。在体外用Ｃｕ＾２＋氧化人血浆ＨＤＬ，观察其蛋白和脂质部分的变化，并测定在ＨＤＬ条件下ＬＤＬ氧化的何苦充代巴比妥酸值（ＴＢＡＲＳ）。结果：氧化ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬＯ）的ＴＢＡＲＳ值升高，色氨酸残苦（Ｔｒｐ）的特征荧光吸收强度降低且λｍａｘ（发射）从３３５ｎｍ升至３４１ｎｍ，紫外吸收增高，琼脂糖凝胶是泳迁移增快，ＬＤＬ氧     

肌肽对高糖作用下肾小球系膜细胞的影响

目的探讨肌肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞MCs生长的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）,分为正常对照组（NG）、高糖组（HG）、高渗甘露醇组（HM）、正常糖加20 mmol/L肌肽组（NG＋C20）和高糖加20 mmol/L肌肽组（HG＋C20）5组。采用MTT法测定肾小球系膜细胞24 h、48 h的增殖情况。结果在24 h、48 h时间段,在与正常对照组相比高糖组出现明显的增殖现象（P〈0.01或P〈0.05）;高糖加20 mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著的抑制作用（P〈0.01）。结论肌肽通过抑制高糖条件下肾小球系膜细胞的增殖来对糖尿病肾病起到保护作用,为糖尿病肾病的防治提供新途径。     

转化生长因子大黄酸对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白功能的影响

目的 对人肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白－１（ＧＬＵＴ１）进行鉴定。研究ＧＬＵＴ１的作用特点,ＴＧＦ－β１对其影响以及大黄酸的干预作用。方法 分别用ＲＴ－ＰＣＲ,免疫荧光染色,流式细胞仪和［＾３Ｈ］－２脱氧葡萄糖摄入率,对系膜细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达,蛋白质分布和功能进行鉴定。观察不同浓度ＴＧＦ－β１在加或不加大黄酸的情况下对系膜细胞葡萄糖摄入以及ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达的影响。结果 人类肾小球系膜     

白血病低密度脂蛋白受体研究进展

白血病低密度脂蛋白受体研究进展（０６７０００）解放军２６６医院王延荣（４３００３８）解放军西南医院张翼军低密度脂蛋白受体（ＬＤＬ～Ｒ）在７０年代由ＧＤ－ｌｄｓｔｅｉｎ和Ｂｒｏｗｎ在人成纤维细胞上发现，其功能是摄取胆固醇，供细胞生长发育，以及降解血浆中...     

当归对氧化低密度脂蛋白所致血管内皮细胞损伤的保护作用

通过培养人脐静脉内皮细胞,观察当归对氧化低密度脂蛋白（ｏｘ ＬＤＬ）损伤的内皮细胞（ＥＣ）乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的漏出量及扫描电镜下ＥＣ形态结构的影响,并观察当归在体外对Ｃｕ２＋诱导的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的作用。结果显示：在作用２４ｈ后,ｏｘ ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出明显增加,超微结构明显受损。当归＋ｏｘ ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出显著减少,超微结构基本正常。在体外,当归能明显抑制Ｃｕ２＋介导的ＬＤＬ氧化,且随着当归浓度的增高显示抑制作用增强。结果表明：当归对ｏｘ ＬＤＬ所致血管ＥＣ损伤具有保护作用,其机制可能与当归抗氧化作用有关。     

当归对氧化低密度脂蛋白所致血管内皮细胞损伤的保护作用

通过培养人脐静脉内皮细胞,观察当归对氧化低密度脂蛋白损伤的内皮细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的漏出量及扫描电镜下ＥＣ形态结构的影响,并观察当归在体外对Ｃｕ＾２＋诱导的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的作用。结果显示;在作用２４ｈ后,ｏｘ－ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出明显增加,超微结构明显受损。当归＋ｏｘ－ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出显著减少,超微结构基本正常。     

反义细胞周期D1蛋白抑制肾小球系膜细胞增殖研究

目的探讨细胞周期蛋白（Ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１在肾小球系膜细胞增殖机制中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白在系膜细胞内表达;建立了表达ＣｙｃｌｉｎＤ１反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体基因转移系统;利用ＭＴＴ法、流式细胞术对基因转录的系膜细胞的增殖状况进行观察。结果（１）体外培养的系膜细胞核内存在ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白;（２）外源基因经逆转录病毒载体高效转导系膜细胞,并高效表达反义ＲＮＡ;（３）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１转导后的系膜细胞对内皮素１刺激的增殖反应不明显,而正常细胞（１８小时０２５９±００８０,６小时０１００±０００７）和空载体转导细胞（１８小时０２７８±００２０,６小时００９７±０００８）有显著效应（Ｐ＜００１）;（４）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１抑制细胞从Ｇ１期进入Ｓ期。结论ＣｙｃｌｉｎＤ１是肾小球系膜细胞周期Ｇ１期进展的关键调控蛋白,反义ＣｙｃｌｉｎＤ１基因转导系膜细胞能明显抑制内皮素１的促增殖作用。     

精-甘-天-丝四肽对肾小球系膜细胞凋亡相关基因的作用

目的探讨精氨酸－甘氨酸－天门冬氨酸－丝氨酸（ＲＧＤＳ）四肽对肾小球系膜细胞凋亡相关基因白细胞介素－１β－转化酶（ＩＣＥ）和ｂｃｌ－２表达的影响,为利用ＲＧＤＳ四肽调控系膜细胞的增殖与凋亡提供实验理论依据。方法合成ＲＧＤＳ四肽,采用经典的肾小球系膜细胞培养方法进行体外研究;碘化丙啶染色法观察凋亡细胞细胞核的固缩、碎裂现象;琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体ＤＮＡ的断裂现象;逆转录－聚合酶链反应技术检测凋亡相关基因ＩＣＥ和ｂｃｌ－２的表达变化。结果与ＲＧＤＳ四肽孵育１０小时后,肾小球系膜细胞出现了典型的凋亡征象,诸如细胞核固缩、碎裂和ＤＮＡ梯形条带等;同时,ＲＧＤＳ四肽处理组的ＩＣＥ和ｂｃｌ－２表达亦明显高于对照组。结论在ＲＧＤＳ四肽诱导的肾小球系膜细胞凋亡过程中,ＩＣＥ和ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡可能具有重要的调节作用。     

糖基化低密度脂蛋白对血管内皮的损伤作用

目的探讨糖基化低密度脂蛋白对血管内皮的实验性损伤作用。方法以体外非酶糖基化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞（ＥＣ）共同培养，以低密度脂蛋白（ＬＤＬ）作对照，观察内皮细胞结构及功能的改变。结果糖化ＬＤＬ２５０μｇ／ｍｌ可引起ＥＣ超微结构改变，增殖率减低（Ｐ＜０．０５）。培养上清液中血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）活性降低（Ｐ＜０．０５），ＶｏｎＷｉｌｌｂｒａｎｄＦａｃｔｏｒ（ＶＷＦ）值升高（Ｐ＜０．００１），而糖化ＬＤＬ１２５μｇ／ｍｌ、７５μｇ／ｍｌ与ＬＤＬ对ＥＣ的作用无差异。结论在体外，糖基化ＬＤＬ２５０μｇ／ｍｌ可引起ＥＣ损伤，糖化ＬＤＬ在体外对触发动脉粥样硬化的发生、发展有重大意义。