黄芪注射液对糖尿病大鼠肾脏BMP-7和CTGF表达的影响

目的观察黄芪注射液对糖尿病大鼠肾脏骨形成蛋白7(BMP-7)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法高脂高糖饲料喂养6周并注射STZ建立大鼠糖尿病模型,将成模的大鼠随机分为模型组和黄芪治疗组,并设正常对照组。各组大鼠干预8周。检测血糖(BG),计算肾质量/体质量(KI),放射免疫法检测24 h尿蛋白排泄率(UAER),全自动生化分析仪检测血总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG),免疫组化法测定大鼠肾脏BMP-7和CT-GF蛋白表达情况,实时荧光定量PCR法检测大鼠肾脏BMP-7和CTGF mRNA表达情况。结果与正常对照组相比,模型组KI、BG、TC、TG、UAER显著增高,肾组织BMP-7蛋白和mRNA表达均明显下降,CTGF蛋白和mRNA表达均明显升高;与模型组比较,黄芪治疗组TC、TG、KI及24 h UAER显著降低,肾组织BMP-7蛋白及mRNA表达升高,而CTGF蛋白及mRNA表达明显下调。结论黄芪注射液对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与恢复肾组织BMP-7表达,降低肾组织CTGF过度表达有关。     

参附注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏肝细胞生长因子及骨形态发生蛋白-7表达的影响

目的探讨单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化发生过程中肝细胞生长因子（HGF）和骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的表达以及参附注射液对其的影响。方法采用单侧输尿管结扎（UUO）制造梗阻性肾病模型,将56只大鼠随机分为假手术组、手术组（UUO）和治疗组（UUO＋参附注射液处理）,术后第7、14日观察肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法检测肾组织HGF和BMP-7的表达。结果（1）与假手术组相比,手术组肾间质明显纤维化,HGF的表达在术后第7日明显增加,第14日较第7日减弱;与手术组相比,治疗组肾间质纤维化明显减轻,而且HGF的表达在术后第7日明显上调,第14日较第7日上调更明显,差异显著。（2）与假手术组相比,手术组肾间质BMP-7的表达在术后第7、14日逐渐减弱;与手术组相比,治疗组BMP-7的表达在术后第14日明显上调,差异显著。结论参附注射液可以上调肾组织HGF和BMP-7的表达,减轻肾小管-间质纤维化,发挥肾保护作用。     

丹芪合剂对DM大鼠肾小管BMP-7及其受体表达的影响

目的 观察丹芪合剂和依那普利对糖尿病(DM)大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及其受体ALK-3表达的影响,探讨丹芪合剂的药理机制.方法 将SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病丹芪合剂组(C组)和糖尿病依那普利组(D组).以链脲佐菌素复制DM大鼠模型.于实验12周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,PAS染色观察肾组织的形态结构变化;免疫组化检测肾小管上皮细胞BMP-7和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7和ALK-3 mRNA水平.结果 ①B组的血糖、甘油三酯和总胆固醇、血肌酐、肾脏指数均显著高于A组并出现明显的蛋白尿,C和D组上述指标除血糖外均明显低于B组.②免疫组化结果显示BMP-7蛋白高表达于A组肾小管上皮细胞胞浆,FN仅有少量表达;B组BMP-7蛋白的表达明显减少,FN表达却明显增多;C和D组肾小管上皮细胞BMP-7蛋白表达显著高于B组,但低于A组,同时FN的表达减少.③RT-PCR结果显示,与A组相比,B组肾皮质BMP-7表达明显减少,且ALK-3 mRNA未见表达,C和D组BMP-7及其受体ALK-3 mRNA表达均显著高于B组,D组ALK-3 mRNA表达甚至高于A组.结论 丹芪合剂和依那普利可能通过促进内源性BMP-7及其受体ALK-3的表达,使FN的沉积减少,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用.     

补肾益骨方对去势大鼠成骨细胞增殖及BMP-2表达的影响

目的:观察补肾益骨方对去势大鼠成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为A(模型组)、B(治疗组)、C(阳性对照组)、D(正常对照组)四组,每组10只,前3组行完整双侧卵巢摘除术,D组行假手术,术后常规饲养12周,再分别予以生理盐水、补肾益骨方水提液、α-D3水溶液及生理盐水灌胃治疗12周,处死大鼠,取右胫骨上端做病理切片,通过HE染色观察成骨细胞增殖、免疫组化染色观察BMP-2表达。结果:治疗组成骨细胞数量明显增加,而且通过免疫组化染色发现BMP-2棕色深染的阳性细胞比例明显高于模型组。结论:补肾益骨方能促进成骨细胞分化、增殖,加速骨形成,具有治疗骨质疏松的作用。推测骨中BMP-2含量增加是其重要的治疗机理之一。     

接骨膏对家兔骨折愈合BMP-7表达的研究

目的:探讨土家族药接骨膏在家兔骨折愈合中对BMP-7表达的影响。方法:48只日本大耳白兔制作左侧桡骨3mm骨缺损模型,随机分为接骨膏实验组(简称实验组)和模型对照组(简称对照组),每组24只。实验组给予接骨膏外敷治疗,对照组不予治疗。于术后2W、4W、6W处死实验动物,每组动物处死前行DR摄片,然后取骨标本组织切片,分别进行HE染色和免疫组化检测以观察骨折愈合情况和BMP-7在治疗过程中的变化。结果:与对照组比较,实验组骨痂出现时间较早,数量多,骨痂阴影密度高,且骨性愈合时间和骨髓腔再通较早;实验组纤维连接和纤维骨痂形成较早,成骨细胞数量较多,骨痂及骨性愈合出现时间较对照组早,骨痂面积大,生长速度较快;免疫组化MOD值与对照组差异有显著性(P<0.01)。结果表明,以5.0g/kg(体重)接骨膏外敷能明显促进家兔骨折局部BMP-7表达和骨痂形成,有效的促进骨折愈合。结论:接骨膏通过促进骨折局部BMP-7的表达是促进骨折愈合的重要作用机制。     

降氮汤对5/6肾切除大鼠肾小球CTGF表达的影响

肾小球硬化是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾衰的共同通路 ,及早阻止甚或逆转肾小球硬化对防治终末期肾衰有重大意义。在肾小球硬化的发病机制中 ,细胞因子网络始终是人们研究的热点。通过中和或抑制某些细胞因子以阻止促炎症细胞因子网络已成为今后肾脏病治疗的重要方向。近年来的大量研究显示中药在这一领域有巨大潜力。结缔组织生长因子(CTGF)作为一种新发现的生长因子在转化生长因子β(TGFβ)的诱导下有促进肾小球硬化的作用 ,其作用日益受到重视。〔1〕 本研究旨在观察中药降氮汤对 5 6肾切除大鼠肾小球CTGF表达的影响 ,以探讨…     

扶肾降浊方对肾小管间质损害大鼠抗纤维化因子HGF、BMP-7的影响

[目的]探讨扶肾降浊方对系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠肾小管间质损害的疗效机制。[方法]在Ms PGN动物模型基础上,延长造模时间至20周,使其自然发展为肾小管间质损害模型。实验设中药组、西药组、模型组及空白组。中药组给予扶肾降浊方,西药组给予贝那普利,模型组和空白组给予生理盐水,连续20周,分别于实验第12、16和20周末取材,采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测大鼠肾组织抗纤维化因子肝细胞生长因子(HGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)m RNA及蛋白表达水平。[结果]模型大鼠肾组织HGF、BMP-7m RNA和蛋白表达下调,扶肾降浊方随着给药周期的延长可部分逆转间质损害造成的上述m RNA和蛋白表达异常。[结论]扶肾降浊方对Ms PGN大鼠肾小管间质损害保护作用机制可能与调节抗纤维化因子HGF、BMP-7 m RNA和蛋白表达有关。     

益肾胶囊对慢性肾衰大鼠肾小球系膜增殖硬化的影响

目的:观察益肾胶囊对慢性肾衰大鼠肾小球系膜增殖硬化的影响。方法:采用灌胃法给予7/8肾切除慢性肾功能衰竭大鼠益肾胶囊,观察给药后大鼠肾脏病理学变化。结果:与灌服生理盐水的未治疗组大鼠相比较,益肾胶囊能明显阻抑系膜细胞及系膜基质的增殖,减轻肾小球全球硬化、节段硬化、球囊粘连及肾小球代偿性肥大;降低 IgM、Fib 系膜区沉积及 TGF-β系膜区表达(P<0.05或P<0.01)。结论:该方能减轻7/8肾切除大鼠肾小球系膜增殖硬化程度。     

补肾清利活血法对大鼠残肾细胞外基质影响的实验研究

目的：探讨补肾清利活血法延缓肾小球硬化的有效性和作用环节。方法：在５／６肾切除残肾模型大鼠的基础上，运用免疫组织化学及常规病理等方法观察补肾清利活血法对肾小球细胞外基质（ＥＣＭ）蓄积及其部分调控机制的影响。结果：残肾模型大鼠术后１周开始给予补肾清利活血中药，术后５周血肌酐（ＳＣｒ）、尿素氮（ＢＵＮ）、尿蛋白显著降低；病理结果示ＥＣＭ多种成分（Ⅰ和Ⅳ型胶原、层粘连蛋白）的蓄积显著减少，肾小球内细胞数     

参地降糖颗粒对胰岛素抵抗伴高血压模型大鼠胰岛素敏感性的影响

目的观察参地降糖颗粒对胰岛素抵抗伴高血压模型大鼠胰岛素敏感性的影响及其作用机制。方法6周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组。空白组给予正常喂养,其余大鼠给予高果糖餐喂养(FFR)6周建立胰岛素抵抗伴高血压模型。中药组给予4周参地降糖颗粒(3.24g.kg-1.d-1);各组每周测定血压,12周时以正常血糖高胰岛素钳夹法(GC法)对各组进行胰岛素敏感性指标M值的评价;检测下肢两侧比目鱼肌和上肢两侧长指伸肌中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果参地降糖颗粒对FFR大鼠的M值有明显的提高作用(P0.01);对骨骼肌组织中TNF-α有明显的降低作用(P0.01)。结论参地降糖颗粒对FFR大鼠的胰岛素抵抗有显著的改善作用,其机制可能与降低骨骼肌组织中TNF-α含量有关。     

丹芍化纤胶囊含药血清对大鼠肝星状细胞Gremlin和BMP7表达的影响

目的:观察丹芍化纤胶囊(DSHX)含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC)Gremlin和骨形态发生蛋白7(BMP7)表达的影响,探讨该药治疗肝纤维化的可能机制。方法:将20只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组5只,分别经DSHX低剂量(0.5 g·kg-1),DSHX高剂量(1.0 g·kg-1),扶正化瘀胶囊(0.8 g·kg-1)及生理盐水ig 5 d,2次/d,其后股动脉取血制备大鼠DSHX含药血清、扶正化瘀胶囊含药血清及生理盐水血清,4组血清分别干预体外培养的HSC-T6,用MTT比色法测定各组HSC的增殖效应,ELISA法测培养液上清Ⅰ型胶原(ColⅠ),Ⅲ型胶原(ColⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的含量,免疫细胞染色法检测各组HSC内转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,采用RT-PCR法检测各组HSC Gremlin,BMP7 mRNA的表达,Western blot检测各组HSC Gremlin,BMP7蛋白的表达。结果:与生理盐水血清组比较,DSHX低、高剂量组含药血清均可显著抑制大鼠HSC的增殖(P0.05),抑制率与扶正化瘀胶囊血清组相当;DSHX低、高剂量血清组培养液上清ColⅠ,ColⅢ与α-SMA的含量明显减少(P0.01,P0.05);HSC内TGF-β1蛋白的表达强度显著降低(P0.01),与扶正化瘀胶囊血清组相当。与生理盐水血清组比较,DSHX低、高剂量血清组Gremlin mRNA及蛋白表达显著下降,而BMP7 mRNA及蛋白表达显著增多(P0.01),与扶正化瘀胶囊血清组相当。结论:丹芍化纤胶囊可抑制体外培养的大鼠HSC增殖与活化,减少细胞外基质的合成,对大鼠肝纤维化有潜在的治疗作用,其机制可能与下调HSC Gremlin,上调BMP7的表达有关。     

糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松症大鼠骨组织中BMP6/BMP7mRAN及蛋白表达的影响

目的:研究糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨组织中BMP6/BMP7的mRNA和蛋白表达,揭示糖皮质激素骨质疏松症的发病机理,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法:用糖皮质激素注射的方法复制骨质疏松症模型,用纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的补肾中药高、低剂量对实验大鼠治疗8周,以骨疏康颗粒、盖天力钙片作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组。用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠骨组织中BMP6/BMP7mRNA和蛋白表达。结果:正常大鼠骨组织可以在基因、蛋白水平表达BMP6及BMP7,模空组大鼠骨组织中的BMP6/BMP7 mRNA和蛋白表达水平明显的下降。纳米钙补肾中药高、低剂量组、盖天力组、骨疏康组,用药8周后,与模空组相比较,均可上调骨组织中BMP6/BMP7 mRNA和蛋白的表达水平。结论:纳米钙补肾中药通过调控大鼠骨组织中BMP6/BMP7 mRNA和蛋白表达,抑制骨吸收,促进骨形成,从而对糖皮质激素性骨质疏松症有一定的防治作用。     

燧心胶囊对慢性心力衰竭大鼠凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的:以慢性心力衰竭大鼠为研究对象,测定心肌组织Bcl-2、Bax mRNA水平及其蛋白表达,以探究燧心胶囊干预心室重塑的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型对照组、地高辛组、卡托普利组、燧心胶囊低剂量组、燧心胶囊高剂量组。采用腹主动脉缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭模型,连续给药12周。Real time PCR检测心肌细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA、Bax mRNA水平;免疫组化法观察大鼠心肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与模型对照组比较,卡托普利组、燧心胶囊低、高剂量组大鼠Bcl-2 mRNA水平及其蛋白表达增高,Bax mRNA水平及其蛋白表达降低,Bcl-2/Bax则显著性增高,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。其中燧心胶囊高剂量组对Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白的调控程度较低剂量组显著(P0.05)。结论:高剂量燧心胶囊能够调控凋亡基因Bcl-2和Bax mRNA水平及其蛋白表达,抑制心肌细胞程序性死亡,延缓心力衰竭的进程。     

鳖甲煎丸对肺纤维化模型大鼠外周血CTGF表达的影响

目的：探讨鳖甲煎丸对肺纤维化模型大鼠外周血结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法：SD大鼠50只随机分为生理盐水对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、鳖甲煎丸中剂量组、鳖甲煎丸高剂量组,采用博莱霉素气管内注入制备肺纤维化模型,造模后各组分别用生理盐水、西药、中药灌胃,第3、14、28天乙醚麻醉后毛细玻管眼眶静脉丛采血,ELISA法检测CTGF表达明显减少,与模型对照组比较有显著性差异（P〈0.05）。结果：模型对照组外周血中CTGF表达明显增加,第14天鳖甲煎丸中、高剂量组外周血CTGF的表达。结论：鳖甲煎丸可抑制肺纤维化模型大鼠外周血CTGF的表达,可能是抗肺纤维化作用的机制之一。     

蒙药风痛灵胶囊抗炎、镇痛作用的实验研究

目的:观察风痛灵胶囊的抗炎、镇痛作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜致大鼠足肿胀、棉球致大鼠肉芽肿实验,观察风痛灵胶囊的抗炎效果;通过小鼠热板实验、小鼠扭体实验观察该药对疼痛的影响。结果:风痛灵胶囊可明显降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀及大鼠棉球肉芽肿(P0.05);对小鼠热板致痛和醋酸致痛有显著的减轻作用(P0.05)。结论:风痛灵胶囊具有明显的抗炎、镇痛作用。     

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻大鼠CTGF基因调控的影响

目的 探讨抗纤灵冲剂防治肾间质纤维化可能的作用靶点及分子生物学机制.方法 将72只SPF级SD大鼠中54只行经典单侧输尿管结扎,制备UUO大鼠模型,造模成功后分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦组.药物干预后分批于14d,21d,28d处死,留取左侧肾组织,运用PCR Array法,检测肾间质纤维化基因CTGF的阳性表达.结果 各时间点模型组CTGF基因水平分别较假手术组上调7.12倍、8.26倍及6.55倍,均＞2倍,具有非常显著差异.各时间点抗纤灵组CTGF基因表达分别比模型组下调1.79倍、1.63倍、1.63倍,下调均＞1.5倍,具有明显差异.结论 抗纤灵冲剂作用靶点及分子生物学机制之一是有效诱导CTGF基因表达下调而发挥抗肾间质纤维化效应.     

化痰软坚祛瘀法干预肾小球硬化实验研究

目的：观察化痰软坚祛瘀法对肾小球硬化的干预作用并初步探讨其作用机制。方法：用化痰软坚祛瘀药干预肾小球硬化大鼠模型，用苦味酸法和二乙酰-肟法检测大鼠血清肌酐、尿素氮水平，HE、PAS、Masson染色法观察肾组织病理学变化，SABC法和免疫荧光法检测肾组织纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）的表达。结果：化痰软坚祛瘀药能降低模型大鼠血清肌酐、尿素氮水平，改善肾组织病理学变化，并能减少FN、LN在肾组织的沉积。结论：本实验提示化痰软坚祛瘀法能有效保护模型大鼠肾功能，延缓肾小球硬化病变进程，该作用与其抑制肾小球细胞外基质的过度积聚有关。