槲皮素逆转白血病细胞株HL-60/ADM多药耐药的研究

目的探讨槲皮素(Que)逆转白血病细胞多药耐药在膜转运蛋白方面的机制。方法通过四唑蓝体外药敏法,检测Que对柔红霉素(DNR)的增敏作用,并以不同浓度作用于HL-60／ADM耐药株及相应敏感株HL-60;运用逆转录多聚酶链式反应和流式细胞术,检测HL-60／ADM和HL-60细胞株多药耐药相关基因1(MRP1)及其膜蛋白产物MRP1蛋白的表达情况;借助激光共聚焦显微镜,观察DNR在亚细胞水平的分布变化。结果20～40μmol／L终浓度的Que在体外能明显提高DNR对HL-60／ADM耐药株的敏感性,并能下凋MRP1基因及其膜蛋白产物MRP1的表达,使DNR回归于细胞核内,从而逆转多药耐药,而且对细胞本身无明显毒性作用。结论Que有可能成为蒽环类药物治疗白血病的有效且低毒的化疗增敏剂。     

康莱特逆转HL-60/ADR细胞耐药作用的研究

目的探讨康莱特逆转HL-60/ADR细胞耐药的可能性及其机理。方法①康莱特作用HL-60/ADR细胞一定时间后,MTT法检查阿霉素对该细胞的抑制效应;②康莱特作用HL-60/ADR细胞一定时间后,再用一定浓度的阿霉素作用该细胞一定时间,流式细胞仪检查该细胞内的阿霉素浓度;③康莱特作用HL-60/ADR细胞,流式细胞仪检测HL-60/ADR细胞P-170蛋白的表达。结果1mg/ml康莱特作用HL-60/ADR细胞96h,阿霉素对该细胞的抑制效应较对康莱特未作用的HL-60/ADR细胞抑制效应强,P<0.05。不同浓度的康莱特作用HL-60/ADR细胞96h后,再用1.5μg/ml的阿霉素作用6h,该细胞内的阿霉素荧光强度mean值(127.2土4.8)较对照组(77.8土7.2)高,P<0.05,且具有剂量依赖关系。1mg/ml康莱特作用HL-60/ADR细胞48h,HL-60/ADR细胞的P-170蛋白荧光强度mean值(432土79.3)较对照组(817土103.3)低,P<0.05。结论康莱特具有逆转HL-60/ADR细胞对阿霉素的耐药性,其机理可能与增加HL-60/ADR细胞内的阿霉素浓度,下调P-170蛋白表达有关。     

粉防己碱对人口腔上皮癌多药耐药KB-MRP1细胞株多药耐药性的逆转作用

背景与目的:粉防己碱(tetrandrine,Tet)是从中草药粉防已的根块中提取的双苄基异喹啉生物碱,具有逆转P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)作用.本研究探讨粉防己碱对人口腔上皮癌多药耐药细胞株KB-MRP1耐药的逆转作用及其可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对KB-3-1细胞和KB-MRP1细胞的增殖抑制效应;MTT法检测顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、阿霉素(adriamycin,ADM)、依托泊苷(etoposide,VP-16)对KB-3-1、KB-MRP1细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱时的变化;采用流式细胞仪检测细胞内ADM蓄积程度以及细胞凋亡.结果:1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对KB-3-1和KB-MRP1细胞无明显细胞毒性作用.KB-MRP1对VCR、ADM、VP-16和DDP的耐药倍数分别为21.23、38.39、12.47和1.31.加入1 μg/ml粉防己碱后,KB-MRP1对VCR、ADM、VP-16的耐药逆转倍数分别为4.96、5.85和4.27倍.加入1.5 μg/ml粉防己碱后,KB-MRP1对上述化疗药物的敏感程度提高更明显.1.5 μg/ml浓度的粉防己碱可明显提高ADM在KB-MRP1细胞内的蓄积,增强VCR诱导的KB-MRP1细胞凋亡.结论:粉防己碱可以逆转KB-MRP1细胞的多药耐药,逆转效果与药物浓度有关,逆转机制可能与增加细胞内化疗药物蓄积和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关.     

槲皮素对多药耐药细胞株KB-MRP的耐药逆转研究

目的:研究槲皮素(quercetin)对多药耐药细胞株KB-MRP的耐药逆转作用。方法:使用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度槲皮素对细胞株KB-MRP的抑制率,确定其非细胞毒性浓度。用MTT法分别检测阿霉素(ADM)、依立替康(CPT-11)、长春新碱(VCR)、环磷酰胺(CTX)对细胞株KB-3-1、KB-MRP以及使用槲皮素处理后的KB-MRP的半数抑制浓度(IC50)。通过流式细胞术检测KB-3-1、加入槲皮素前后KB-MRP细胞内的化疗药物阿霉素(ADM)的荧光强度以及加入槲皮素前后多药耐药细胞株KB-MRP的MRP1蛋白表达。结果:终浓度为0~40μmol/L的槲皮素对KB-MRP无明显细胞毒作用。KB-MRP对ADM、VCR、CPT-11均有不同程度的耐药但对CTX不耐药。使用20μmol/L槲皮素处理后KB-MRP对上述ADM、CPT-11、VCR的敏感度均有不同程度的提高,胞内的化疗药物阿霉素(ADM)的荧光强度增强。槲皮素的浓度提高至40μmol/L时,KB-MRP对上述药物的敏感程度提高更明显。流式细胞仪结果显示经槲皮素处理后KB-MRP细胞MRP1表达明显下降。结论:槲皮素可以逆转KB-MRP的多药耐药,逆转效果与剂量相关,逆转机制可能与MRP1的表达下调有关。     

FasL抗体对人白血病细胞株(K562/ADM)多柔比星耐药性的逆转作用

目的：探讨FasL抗体对K562／ADM细胞的多柔比星(阿霉素)耐药性的逆转作用及其可能机制。方法：以K562／ADM细胞为研究对象，设立了对照组、VER处理组、anti-FasL处理组及anti-FasL VER处理组，进行MTT、FCM、TUNEL、S-P免疫组化及RT-PCR检测。结果：anti-FasL或VER处理能增强K562／ADM细胞对ADM的敏感性，其ID50分为200ng／ml、6μg／ml；从细胞周期分析曲线可见上述各组细胞凋亡DNA含量呈逐渐上升趋势(分为7．42％、32．10％、49．29％、56．26％)，TUNEL染色结果亦然(原位凋亡率分为4．5％、36％、45％、58％)；anti-FasL可影响各组细胞FasL及bcl-2的表达，但不影响Pgp的表达。结论：采用anti-FasL．封闭肿瘤细胞FasL表达可逆转K562／ADM细胞的耐药性，并与VER处理有协同作用，它可能为一种新型的肿瘤耐药逆转疗法。     

大黄素对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/Adr的耐药逆转作用

目的：探讨中药成分大黄素(Emodin，EMD)对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／Adr的耐药逆转作用。方法：药物敏感试验采用四唑氮盐(MTT)比色法，P糖蛋白以Western-blot法检测。结果：EMD在0～20μmol／L浓度时作用14天后对MCF-7／Adr未见明显毒性作用；EMD在10μmol／L浓度时，其耐药逆转倍数为1．7倍。EMD在20μmol／L浓度时，处理MCF-7／Adr2、4、6和11天后，检测P糖蛋白发现自第4天起P糖蛋白表达下降，至第11天无法检测到P糖蛋白的表达。结论：EMD具有逆转MCF-7／Adr多药耐药性的作用，可明显下调P糖蛋白的表达，且逆转作用持久。     

人类白血病多药耐药细胞株K562/ADM、HL60/ADM的耐药性及耐药逆转的研究

目的：研究K562／ADM、HL60／ADM的耐药性及CsA对其耐药的逆转作用。方法：MTT比色法检测细胞耐药性及CsA对细胞耐药性的影响，流式细胞仪检测Pgp、MRP的表达及细胞内柔红霉素(DNR)的浓度。结果：K562／ADM、HL60／ADM对DNR、ADM、VCR、Har、VP16、MIT交叉耐药，对Acla和Ara—C基本不耐药。K562／ADM细胞Pgp过度表达，HL60／ADM细胞的MRP过度表达。CsA使K562／ADM、HL60／ADM细胞内药物浓度增加，逆转了K562／ADM、HL60／ADM的耐药性，而对K562、HL60的耐药性基本无影响。结论：两种不同耐药机制的细胞株对8种常用化疗药物的耐药谱相似，对Acla基本不产生耐药性，故在防止和克服多药耐药的基础上，Acla可能取代DNR、ADM。环孢菌素A(CsA)对两种不同耐药机制的细胞株的耐药性均有逆转作用，主要是通过增加胞内药物浓度来达到逆转作用。     

MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体逆转肺癌细胞多药耐药研究

目的：研究MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体与阿霉素脂质体对非小细胞肺癌多药耐药的逆转作用。方法：25％的戊二醛偶联MRK-16于阿霉素脂质体，制备MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体；以MTS测定细胞存活率，检测SPC—A1／TAX的耐阿霉素指数；以阿霉素脂质体与MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体作用于SPC—A1／TAX，设阿霉素组对照；研究两者对SPC—A1／TAX的体外细胞毒与多药耐药逆转作用；流式细胞仪检测用药后2．4、6小时后细胞内药物浓度。结果：免疫脂质体细胞杀伤率（48h）达67．7％，其多药耐药逆转指数达7．45；脂质体对细胞的杀伤率49．2％，逆转指数4．28；流式细胞仪检测细胞内药物浓度，6小时后阿霉素免疫脂质体组细胞内药物浓度是阿霉素组的18．34倍，脂质体组是阿霉素的10．1倍。结论：MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体、阿霉素脂质体在体外对非小细胞肺癌多药耐药具有-定的逆转作用。     

PHⅡ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外杀伤活性和逆转耐药作用

背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是恶性乳腺癌化疗失败的主要原因,而ABC转运蛋白家族的P-glycoprotein(P-gp)高表达是MDR的主要机制之一.因此研制能抑制P-gp表达及其功能的新型抗癌药是目前研究的热点.本研究旨在研究PH Ⅱ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外抗瘤活性及逆转耐药的作用.方法:采用MTT法检测PHⅡ-7、多柔比星(adriamycin,ADR)及二者联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7和耐药细胞株MCF-7/ADR的IC50值;采用流式细胞仪测定PH Ⅱ-7对MCF-7及MCF-7/ADR细胞凋亡的诱导作用;采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测PHⅡ-7对多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)表达水平的影响;通过流式细胞仪观察PHⅡ-7处理前后,MCF-7/ADR细胞内Rhodamine123浓度的改变,分析PHⅡ-7对p-gp外排功能的影响.结果:PH Ⅱ-7对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,IC50值分别为(6.07±0.85)和(5.51±1.22)μmol/L;低浓度PHⅡ-7与ADR联合应用能增强其细胞毒作用,二者具有协同作用.PHⅡ-7可诱导MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;在诱导凋亡过程中,PHⅡ-7可降低MCF-7/ADR细胞内mdrl基因的表达,抑制p-gp外排功能.结论:PHⅡ-7可诱导MCF-7/ADR凋亡,并具有对MCF-7相同的体外杀伤活性.PHⅡ-7可通过抑制P-gp的表达和功能逆转MCF-7/ADR耐药性.     

补骨脂素逆转K562/ADM多药耐药细胞系耐药性研究

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADM)多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转作用及其机制.方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数.结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对K562和K562/ADM无明显细胞毒作用,但与ADM联合用药可使ADM对K562/ADM的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低ADM对K562/ADM细胞的IC50值.结论:补骨脂素能逆转K562/ADM细胞的多药耐药.     

潘生丁对KB细胞株对多药耐药逆转作用的实验研究

目的：观察了潘生丁对ＫＢ细胞株多药耐药的逆转作用并对其作用机制进行探讨。方法：使用ＭＴＴ法检测比较ＫＢ母细胞和耐药细胞株对长春新碱（ＶＣＲ）的药物敏感度并观察潘生丁对耐药的逆转程度;用＾３Ｈ标记的ＶＣＲ检测细胞内药物浓度的变化。结果：潘生丁作用下,ＫＢ母细胞和耐药细胞株的药物敏感度均有增高并呈剂量相关关系,有ＭＰＰ表达的耐药细胞株对ＭＲＰ表达的耐药细胞株对ＶＣＲ的敏感度比母细胞株高１７倍,母细胞株     

甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转

目的:研究甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF7/Adr多药耐药multidrugresistanceMDR性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素ADR的浓度,流式细胞术测定细胞P糖蛋白Pgp的表达。结果:甲基莲心碱1～10μmol·L-1能不同程度地降低ADR对MCF7/Adr细胞的IC50。10μmol·L-1甲基莲心碱能显著提高ADR在MCF7/Adr细胞内的浓度,降低MCF7/Adr细胞Pgp的表达。结论:甲基莲心碱能逆转MCF7/Adr细胞的MDR,其机理与抑制Pgp的功能及其表达,增加细胞内ADR的积累有关。     

屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7／ADR多药耐药性的研究

目的：研究屈洛昔芬（DRO）对乳腺癌耐药细胞株（MCF7／ADR）多药耐药性（MDR）的影响。方法：应用MTT，半定量RT－PCR和免疫细胞化学染色，研究DRO对MCF7／ADR药物敏感性，耐药相关基因MDR1，谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π），拓扑异构酶Ⅱα（Topo Ⅱα)和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果：在20，10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7／ADR耐药性的逆转倍数分别为16，8和3倍，逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后，MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L),2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论：DRO具有较强的逆转MCF7／ADR耐药性的作用，其逆转机制是多途径的。     

多药耐药相关蛋白反义RNA对耐阿霉素人小细胞肺癌细胞株GLC4/ADR耐药性的调节

目的 构建表达多药耐药相关蛋白（MRP）反义RNA的真核表达载体,转染耐药细胞株,初步探讨其影响多药耐药（MDR）的作用机理。方法 以MRPcDNA为模板,应用PCR扩增MRPmRNA5′端（含起始子密码）及MRP mNRA3′端（含终止子密码）片段,通过定向克隆方法,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体。通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌（SCLC）耐阿霉素（ADR）的细胞株GLC4／ADR中,经G418筛选,得到分别含pcDNA3空载（MO）、MRP mRNA5′端为靶区的反义RNA（Ma),MRPmRNA3′端为靶区的反义RNA（Mb)的3个细胞克隆。检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结果 经RT－PCR检测,外源片段可获稳定表达。Ma细胞及Mb细胞中,MRP表达分别抑制约14．0％和83．0％,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加;对ADR的耐药倍数与对照细胞MO相比,分别下降9．5％和28．4％。虽然,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达,并使转染细胞内ADR浓度增加,从而逆转MRP介导的MDR。对于配合化疗,提高MRP高表达患者的疗效,具有潜在的应用意义。     

潘生丁对KB细胞株多药耐药逆转作用的实验研究

目的 :观察了潘生丁对KB细胞株多药耐药的逆转作用并对其作用机制进行探讨。方法 :使用MTT法检测比较KB母细胞和耐药细胞株对长春新碱 (VCR)的药物敏感度并观察潘生丁对耐药的逆转程度 ;用3H标记的VCR检测细胞内药物浓度的变化。结果 :潘生丁作用下 ,KB母细胞和耐药细胞株的药物敏感度均有增高并呈剂量相关关系 ,有MRP表达的耐药细胞株对VCR的敏感度比母细胞株高 17倍。母细胞株和耐药细胞株细胞内的药物蓄积均有明显增加。结论 :潘生丁能通过增加细胞内的VCR蓄积 ,显著提高KB细胞对药物的敏感度 ;耐药细胞株与母细胞株相比 ,有较大程度的逆转 ,可能与MRP的表达有关 ,有待进一步探讨     

两种儿茶素成分体外逆转人肝癌细胞 BEL-7404/ADR多药耐药性

背景与目的:儿茶素具有多种抗肿瘤的活性,目前,国内外尚未见儿茶素用于肝癌多药耐药性的研究.本研究拟探讨两种儿茶素成分表儿茶素没食子酸酯 (epicatechin gallate,ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯 (epigallocatechin gallate,EGCG)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制.方法: MTT法检测 ECG、 EGCG的细胞毒作用;荧光分光光度法检测细胞内化疗药物的含量; RT-PCR法检测 mdr1基因的表达.结果: ECG和 EGCG在 100 mg/L以下剂量时对耐药肝癌细胞株 BEL-7404/ADR的抑制率均小于 10%, 60 mg/L的 ECG和 14 mg/L的 EGCG分别与 0.8 mg/L的阿霉素 (adriamycin,ADM)合用能使 ADM对 BEL-7404/ADR的 IC50由 36 mg/L分别下降至 2.3 mg/L和 1.9 mg/L,增敏倍数分别为 15.8倍和 19.2倍,联合用药可使细胞内 ADM的浓度由 (0.76± 0.02)μ g/108cells～ (2.55± 0.17)μ g/108cells提高到 (2.04± 0.07)μ g/108cells～ (9.28± 0.59)μ g/108cells(P< 0.01),并使 mdr1表达与对照组相比分别下降了 27.6%及 41.3%,逆转肿瘤 MDR作用以 EGCG为强.结论: EGCG和 ECG具有体外逆转人肝癌细胞多 药耐药性的作用,可能与下调 mdr1表达、增加细胞内化疗药物的积累有关.     

磁性阿霉素纳米药物研制及其靶向性的实验研究

目的制备磁性阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（ADM-PBCA-MNPS），观察其在正常小鼠体内的靶向分布，为肿瘤的靶向治疗提供一种可能具有临床应用前景的新药。方法采用乳化聚合法制备ADM-PBCA-MNPS。24只昆明小鼠随机分为4组，作相应处理后，尾静脉注射不同药物，观察小鼠体内的靶向分布差异。结果本实验制得了稳定的纳米胶体溶液，平均粒径13．13nm，包封率90．73％，载药量10．68％。ADM-PBCA-MNPS在体外具有良好的磁场响应性，饱和磁化强度为0．558emu／g，且在磁场作用下体内靶向性显著，靶器官靶向指数是非靶器官的3．9倍。结论成功制备ADM-PBCA-MNPS，制备的纳米粒在正常小鼠体内呈靶向聚集分布。     

逆转剂半量联合对多药耐药白血病细胞的逆转作用

[目的]探讨逆转剂半量联合逆转多药耐药白血病细胞的效果.[方法]用MTT法和流式细胞术研究环孢菌素A(CsA)、他莫昔芬(TAM)及α-干扰素(IFN-α)逆转小鼠白血病细胞系P388/VCR的作用.[结果]CsA、TAM、IFN-α三种药物单独和联合应用对P388/VCR细胞系的多药耐药均有逆转作用,单用逆转效果依次为CsA＞IFN-α＞TAM;三者半量联合比两两半量联合逆转效果强,接近单独应用CsA,优于单独应用TAM和IFN-α.CsA可使多药耐药细胞系P388/VCR细胞内DNR含量增加.[结论] CsA、TAM及IFN-α三种药物对P388/VCR细胞的多药耐药均有逆转作用,将CsA和TAM半量联合或CsA、TAM及IFN-α三药半量联合与化疗药物同时应用可能更有利于白血病患者MDR的逆转.     

水杨酸钠对HL-60/VCR细胞多药耐药的部分逆转

目的 :研究水杨酸钠 (Na Sal)对HL 6 0 VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。方法 :采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术等方法 ,观察非甾体抗炎药Na Sal对HL 6 0 VCR细胞多药耐药的部分逆转作用。结果 :Na Sal对HL 6 0 VCR细胞的生长具有抑制作用并表现出剂量依赖性 ,1mmol L的非细胞毒剂量的Na Sal和化疗药物联合应用可以提高多种化疗药物的细胞毒性作用 ,逆转倍数为 1 0 1～ 3 2 6 ,相对逆转效率为 0 5 2 %～ 73 6 2 %。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素 (DNR)浓度发现 ,Na Sal并不增加HL 6 0 VCR细胞内DNR浓度。结论 :Na Sal能有效地部分逆转HL 6 0 VCR细胞的多药耐药性