Bikunin基因敲除小鼠卵丘-卵母细胞复合体形态学变化

目的研究野生型和bikunin基因敲除小鼠卵丘-卵母细胞复合体显微和超微结构变化。方法用扫描电镜和光镜对诱导排卵后野生型和bikunin基因敲除小鼠卵丘-卵母细胞复合体结构上的变化进行观察。结果 （1）光镜显示,野生型小鼠中,卵丘细胞紧密围绕在卵母细胞周围;bikunin基因敲除小鼠中,卵丘细胞松散地分布在卵母细胞周围。（2）电镜显示,野生型小鼠可见大量的纤维网格状结构,卵丘细胞亦可见;bikunin基因敲除小鼠中,卵丘细胞之间未见有网状结构,卵丘细胞紧密连接少。（3）bikunin基因敲除小鼠卵丘-卵母细胞数明显低于野生型。结论 bikunin基因敲除小鼠卵丘细胞之间、卵丘细胞与卵母细胞之间结构发生变化,卵丘-卵母细胞数明显下降,该现象可能与卵丘-卵母细胞复合体的功能密切相关。     

ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程

目的:利用国内医学研究常用ICR品系小鼠,在构建用于研究卵母细胞-卵丘细胞交互作用培养模型的基础上,研究卵母细胞及其产生的旁分泌因子生长分化因子9(GDF9)和骨形态发生蛋白15(BMP15)对排卵过程中的关键事件——卵丘扩展的调控作用?方法:通过显微手术制备摘除卵母细胞后的卵丘细胞复合体(OOX),并通过与卵母细胞共培养或GDF9和BMP15 处理研究卵母细胞及其特异释放的旁分泌因子对表皮生长因子(EGF)诱导卵丘扩展过程的调控?结果:成功构建了ICR小鼠OOX培养模型,发现卵母细胞及其释放的旁分泌因子GDF9和BMP15为EGF诱导卵丘扩展所必需?结论:ICR小鼠卵母细胞通过旁分泌机制促进排卵关键过程?     

小鼠卵丘-卵母细胞复合体CD44和间α胰蛋白酶抑制剂的表达

目的探讨CD44和间α胰蛋白酶抑制剂（ITI）在小鼠卵丘-卵母细胞复合体的表达及两者的相关性.方法应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重染色技术观察小鼠卵丘-卵母细胞复合体中CD44和ITI的分布.结果ITI在小鼠卵丘细胞外基质之间呈阳性表达,CD44存在于卵丘细胞膜表面.结论CD44和ITI的阳性表达可能在卵丘-卵母细胞复合体成熟中起重要作用.     

促性腺激素对小鼠卵巢多功能蛋白聚糖表达的影响

目的观察促性腺激素对野生型和bikurtin基因敲除小鼠多功能蛋白聚糖(PG-M)表达的影响。方法应用免疫组织化学法检测激素处理后PG—M在野生型和bikunin基因敲除小鼠中的表达。结果PG-M阳性表达分布于排卵前卵丘颗粒细胞层，给予促性腺激素后，其表达增强。bikunin基因敲除小鼠的PG-M阳性表达较野生型弱，但在激素调节诱导排卵后，PG-M仍分布在卵丘细胞表面。结论PG-M是卵泡发育中一种基质成分。促性腺激素增强排卵中PG—M表达。     

不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响

目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响，寻找最佳电融合参数。方法 将直径10～12mm的C57BL／6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下，构建供体核一卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者问的融合，并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4～8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动，变动范围分别是电场强度1000-2000kV／cm和脉冲时程40～160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核一卵母细胞复合体的融合率．而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内，供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异，并且融合后重组胚的激活，以及发育至2细胞、4～8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外，脉冲重复次数以1～2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。     

磷酸二酯酶5选择性抑制剂zaprinast对小鼠卵母细胞成熟的影响

目的研究磷酸二酯酶5(PDE5)选择性抑制剂扎普司托(zaprinast)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法采用小鼠卵母细胞自发成熟、促卵泡刺激素(FSH)诱导次黄嘌呤(HX)阻滞成熟以及卵泡卵母细胞成熟三种体外培养模型。结果10μmol/L的zaprinast不仅能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(COCs)和裸卵(DOs)的自发成熟(P<0.01),而且还能显著抑制FSH对HX阻滞的COCs的以及卵泡卵母细胞成熟的促进效应(P<0.01)。结论PDE5能促进小鼠卵母细胞的体外成熟。     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响

目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法：采用玻璃化冷冻技术,选取开放式载体与封闭式载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精,胚胎培养。结果：开放式载体冻存组存活卵数76.79%略高于封闭式载体冻存组72.98%,无统计学意义(P >0.05);两组内 COC 组的卵子存活率显著高于 DO 组,但有统计学差异(P <0.05),COC 组的受精率、囊胚率略高于 DO 组,无统计学差异(P >0.05)。结论：(1)封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。(2)卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

【目的】观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育。【方法】昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞。成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入，观察其受精和胚胎发育情况。【结果】卵子去核存活率为75．9％(362／477)，注核存活率为39．8％(143／359)，D1存活率为38．4％(138／359)。39．9％(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核，其卵裂率为80．7％(46／57)。大部分重构胚发育到2-3细胞停滞，其中2个分裂至4细胞，无囊胚形成。【结论】将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中，可以诱导极体排出，形成2原核 1极体的重构胚胎。重构胚胎大部分发育到2-3细胞即发生停滞，最多到达4细胞期，发育潜能差。     

不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响

目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响,寻找最佳电融合参数。方法 将直径10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者间的融合,并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4~8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动,变动范围分别是电场强度1000~2000kV/cm和脉冲时程40~160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核-卵母细胞复合体的融合率,而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内,供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异,并且融合后重组胚的激活,以及发育至2细胞、4~8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外,脉冲重复次数以1~2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。     

卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。     

2种人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的比较

目的比较直接接种人卵巢癌COCl细胞和COCl细胞经体内传代后接种Balb／c—nu裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的成瘤率。方法雌性突变系Banb／c—nu小鼠40只，分为对照组及实验组，每组20只。COCl细胞注射于裸鼠一侧背部皮下，对照组细胞培养后即接种，观察统计数据后处死，取瘤体制成单细胞悬液再接种于实验组裸鼠，比较两种不同方法接种的成瘤率，并观察成瘤时间、瘤重及肿瘤生长速度。结果实验组成瘤率为70％，对照组仅为30％。结论经过裸鼠体内传代后的COCl细胞用于制备人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型具有较高的成瘤率。     

肝间质成分层粘连蛋白和透明质酸的研究及临床应用

作者对肝脏内的细胞外间质成分层粘连蛋白和透明质酸进行了细胞学研究和病人血清含量检测，发现ＬＮ和ＨＡ可明显抑制人胎肝细胞的增殖和脯氨酸合成的参入，而在慢性肝病尤其是肝硬变病人血清中的含量明显高于正常人，并且和肝功能损害程度呈正相关。ＬＮ和ＨＡ联合诊断肝硬变的符合率为９０％。提示ＬＮ、ＨＡ在肝纤维化发生机制中可能起抑制作用，而在血清学方面可以作为判断慢性肝病损伤程度和诊断纤维化的指标。     

补肾化痰祛瘀方对铜负荷肝豆状核变性模型小鼠卵泡发育障碍的影响

目的探讨补肾化痰祛瘀方对铜负荷小鼠卵泡发育障碍的影响及其作用机制。方法将雌性C57小鼠随机分为6组,即正常组、铜负荷模型组、二巯丁二酸组、肝豆灵组、补肾化痰祛瘀方组、补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组,每组20只。采用高铜复制铜负荷小鼠模型,即以100 mg/kg硫酸铜(CuSO4·5H2O)每天上午同一时间灌胃1次,正常组用等量的生理盐水灌胃,共28 d。在给铜的第15天开始除正常组和模型组灌胃生理盐水外,其他4组每日分别灌胃给药,二巯丁二酸组0.16 g/kg、肝豆灵组1.2 g/kg、补肾化痰祛瘀方组1.5 g/kg、补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组,共14 d至给铜的第28天结束。运用促性腺激素促排方法检测小鼠排卵数,苏木精-伊红染色观察各级卵泡发育情况,电镜观察小鼠卵丘复合物超微结构,采用免疫荧光染色法检测卵丘复合物颗粒细胞Ki67的表达水平以观察细胞增殖情况。结果与正常组比较,各组小鼠排卵数、正常次级卵泡和窦卵泡数、正常线粒体数目和颗粒细胞Ki67表达水平显著减少(P<0.05);异常线粒体数目显著增加(P<0.05);补肾化痰祛瘀方组上述指标较模型组和肝豆灵组改善明显(P<0.05),补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组也优于二巯丁二酸组(P<0.05)。结论补肾化痰祛瘀方能增加铜负荷小鼠排卵数,促进铜负荷小鼠卵泡的发育,改善其线粒体超微结构,提高其卵丘复合物颗粒细胞的增殖能力。     

替米沙坦抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾脏Mtdh表达而减轻肾脏纤维化

目的研究原癌基因metadhein（Mtdh）在单侧输尿管梗阻肾脏的表达及替米沙坦对其表达和肾脏纤维化的影响。方法采 用单侧输尿管结扎梗阻建立肾间质纤维化小鼠模型和小管上皮细胞间质转分化模型。18只雄性C57小鼠随机分为假手术组, 单侧输尿管结扎梗阻、单侧输尿管结扎并替米沙坦干预组。MASSON染色观察肾脏病理改变;免疫组织化学和Western blot检 测各组细胞外基质蛋白纤连蛋白（FN1）、α平滑肌蛋白（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（ColⅠ）、钙连蛋白和Mtdh的表达情况;体外细胞 实验采用TGF-β1预刺激小鼠肾小管上皮细胞,并同时利用siRNA干涉下调Mtdh,Western blot检测上述蛋白表达变化。结果 模型组肾脏纤维化显著高于假手术组,FN1、α-SMA、Col Ⅰ和Mtdh表达显著升高（P<0.05）,钙连蛋白表达显著下降（P<0.05）; 替米沙坦干预后,肾脏纤维化病理减轻,FN1、α-SMA、Col Ⅰ及Mtdh表达显著下降（P<0.05）,钙连蛋白表达回升（P<0.05）。采 用si-Mtdh下调肾小管上皮细胞Mtdh后,FN1、α-SMA、Col Ⅰ表达均显著下降（P<0.05）,钙连蛋白表达回升（P<0.01）。结论替 米沙坦可抑制细胞基质蛋白生成,抑制Mtdh的表达,减轻小鼠肾脏纤维化。     

消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质材料支架的体外细胞相容性实验研究

目的研究一种新的骨替代材料——消旋聚乳酸／羟基磷灰石／脱钙骨基质(PDLLA/HA／DBM)骨细胞界面形态，评价其生物相容性。方法采用体外细胞培养技术，选用培养的人成骨细胞，通过光镜和扫描电镜等观察，了解细胞在材料中的生长情况和相互关系，并与消旋聚乳酸(PDLLA)及脱钙骨(DBM)相比较。结果随着培养时间的延长，细胞在PDLLA／DBM材料表面的密度增加，未见细胞死亡。细胞以锚状结构牢固地附着于材料表面，并分泌细胞外基质，覆盖并完全包裹材料颗粒。结论PDLLA／HA／DBM与人成骨细胞能早期形成骨性结合界面，具有良好的牛物相容性，可望成为一种新的具有前景的骨替代材料。     

透明质酸交联、酯化衍生物的制备及医学应用进展

透明质酸(Hyaluronan，HA)作为滑液和细胞外基质中一种丰富的糖氨聚糖成分，具有良好的生物相容性和生物降解性。然而，由于天然HA机械性能低，必须经化学修饰作用提高其化学和机械性能，才能作为生物材料广泛使用。本文综述了近年来对HA材料的交联、酯化两种重要化学修饰方法的研究成果，并介绍了这两大类HA衍生物作为新一类生物材料在组织工程、创伤愈合、手术防粘连、粘性补充物和药物释放等方面的应用情况和发展前景。     

人根尖乳头干细胞生成牙髓牙本质复合体的实验研究

目的应用组织工程方法,探讨人根尖乳头干细胞（SCAP）进行牙髓牙本质复合体再生的可能性。方法从牙根未发育完
全的健康阻生智齿中分离牙乳头,用组织贴块法培养SCAP。细胞分别在成骨诱导液中培养3周及普通培养基中培养60 d后,
用茜素红检测钙结节形成情况,免疫荧光法和RT-PCR检测成骨细胞标志物碱性磷酸酶（ALP）、骨涎蛋白（BSP）、骨钙素（OC）和
牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。选取5~6周雌性裸鼠6只,将SCAP与羟磷灰石/磷酸三钙（HA/TCP）复合培养作为实验组,仅
有HA/TCP作为对照组,分别植入同一只裸鼠背部皮下,左右侧各1个。8周后移植物行HE染色和免疫组化染色观察新生组织
情况。结果SCAP在体外经成骨诱导3周及普通培养基培养60 d后,茜素红染色阳性,且表达成骨细胞标志物ALP、BSP、OC
和DSP。实验组移植物8周后可见牙髓牙本质样结构形成,且紧靠牙本质样结构内侧的细胞DSP阳性表达,而对照组未见任何
硬组织形成。结论SCAP可应用于组织工程,进行牙髓牙本质复合体再生。