TGF-β1通过JAK2/STAT3信号对胃癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨TGF-β1通过JAK2/STAT3信号对胃癌细胞侵袭和转移的影响。 方法 将10%FBS/F12 配制成的0 μg/L（0 μg/L组）、1.0 μg/L（1.0 μg/L组）、10 μg/L（10 μg/L组）、50 μg/L（50 μg/L组）四种浓度的 TGF-β1加入BGC-823细胞中,根据HE染色观察细胞的形态,RT-PCR、Westernblot法检测JAK2 、STAT3表达与蛋白的变化。流式细胞术、细胞克隆实验检测细胞凋亡情况,细胞克隆情况。 结果 在0 μg /L组中,细胞核呈椭圆形,形状规则,且细胞排列松散。随着TGF-β1浓度增加,细胞开始逐渐增多,细胞多为圆形,多个细胞聚集,出现巨核细胞或多核细胞,50 μg/L组与其他组相比细胞数量最多（P＜0.05）。经0、1.0、10、50 μg/L的TGF-β1处理后细胞中JAK2与STAT3的表达水平,发现0 μg/L组JAK2、STAT3表达最低（P＜0.05）,随着TGF-β1的浓度增加,JAK2、STAT3表达也增加（P＜0.05）。0 μg/L组JAK2与STAT3蛋白表达最低,50 μg/L组JAK2与STAT3蛋白表达最高,随着TGF-β1浓度增加JAK2与STAT3蛋白也明显上升,蛋白表达与浓度成正比（P＜0.05）。不同浓度TGF-β1处理后,0 μg/L组细胞凋亡最多,50 μg/L组细胞凋亡最少,随浓度增加依次减少（P＜0.05）。细胞克隆实验检测发现在0 μg/L组BGC-823的单克隆群数最少,而50 μg/L组细胞单克隆群数显著增加,随着TGF-β1浓度增加BGC-823单克隆形成率有上升趋势（P＜0.05）。结论 TGF-β1通过活化JAK2/STAT3信号传输路径,增强胃癌细胞的浸润和转移。     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.     

人正常肝细胞LO2感染HBV后表达CCL22

目的探讨感染HBV的人正常肝细胞LO2表达趋化因子CCL22的机制。方法首先用HBV病毒感染LO2细胞,通过ELISA检测细胞IL-32表达情况;之后用外源人类重组IL-32蛋白刺激人急性单核细胞白血病细胞THP-1或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,通过ELISA检测TNF-α表达情况;其次用外源人类重组TNF-α蛋白刺激LO2细胞或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,使用特异性抗体通过Western blot检测CREB蛋白磷酸化情况,并通过ELISA检测趋化因子CCL22的表达情况。结果 HBV诱导LO2细胞表达IL-32;病毒诱导的IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α(P0.05);TNF-α诱导LO2细胞活化CREB通路(P0.05);CREB通路活化后促使LO2表达趋化因子CCL22(P0.05)。结论 HBV感染与THP-1共培养的LO2细胞可表达CCL22,其机制可能是HBV诱导LO2细胞表达IL-32,之后IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α,进而TNF-α促进HBV感染的LO2细胞表达趋化因子CCL22。     

银杏内酯K通过抑制小胶质细胞介导的炎性反应保护髓鞘

目的:研究银杏内酯K(GK)能否通过抑制小胶质细胞介导的炎性反应保护髓鞘。方法:C57BL/6雄性小鼠随机分为正常(Normal)组、双环己酮草酰双腙(Cuprizone,CPZ)组和银杏叶内酯K组(GK组),通过免疫荧光染色评估各组髓鞘脱失程度和小胶质细胞的活化情况,Western blot和ELISA检测各组脑组织细胞因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)的表达情况。结果:与正常组相比,CPZ成功诱导了小鼠胼胝体广泛的髓鞘脱失(P0.001),并引起了小胶质细胞的活化和炎性细胞因子iNOS、TNF-α及IL-6的升高(P0.001)。与CPZ组相比,GK组有效阻止了髓鞘脱失(P0.01),抑制了小胶质细胞的活化(P0.01)。同时GK组下调了促炎细胞因子iNOS、TNF-α和IL-6(P0.05),上调了抗炎细胞因子Arg-1、IL-10、和TGF-β(P0.05)。结论:GK通过抑制小胶质细胞介导的炎性反应保护髓鞘。     

β-谷甾醇缓解LPS诱导的急性肺损伤大鼠炎症反应和纤维化

【摘要】 目的 探讨β-谷甾醇（β-sitosterol)对脂多糖（LPS)诱导的急性肺损伤大鼠炎症反应和纤维化的改善作用。方法采用LPS法构建急性肺损伤大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为健康对照组、模型组、模型+β-sitosterol组（5、10、20 mg/kg),每组12只。采用TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡,ELISA检测外周血炎性因子白细胞介素（IL-1β、IL-4、IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的含量,肺天狼星红染色观察肺组织病理变化,western blotting和RT-PCR检测肺组织中增殖标记物Ki67、半胱天冬酶3（Cas-3）、iNOS、IL-4、α-平滑肌蛋白（α-SMA)、转化生长因子β（TGF-β）及纤维连接蛋白（FN)的表达。结果与健康对照组比较,模型组大鼠肺组织出现细胞凋亡、炎性细胞浸润和纤维化,肺组织中Ki67蛋白的相对表达量下调,外周血IL-1β、TNF-α、iNOS、IL-4、IL-10、肺组织中切割后Cas-3（cleaved Cas-3）/Cas-3水平、iNOS、IL-4 mRNA及蛋白、α-SMA、TGF-β及FN蛋白的相对表达量上调（均P<0.05）;与模型组比较,10、20 mg/kg β-sitosterol组外周血IL-4、IL-10、肺组织中Ki67蛋白的相对表达量、IL-4 mRNA及蛋白的表达上调（均P<0.05）,外周血IL-1β、TNF-α、iNOS、肺组织中cleaved Cas-3/Cas-3水平、iNOS mRNA及蛋白、α-SMA、TGF-β及FN蛋白的相对表达量下调（均P<0.05）。结论β-谷甾醇可能通过抑制肺组织细胞凋亡、降低炎症反应及减轻纤维化,改善LPS诱导的急性肺损伤。     

白细胞介素-23在急性肝损伤模型中调控Kupffer细胞M1型极化的作用机制

目的探讨IL-23在急性肝损伤模型中调控Kupffer细胞M1型极化的作用机制。方法体外培养Kupffer细胞,用佛波酯（PMA）、脂多糖（LPS）和重组人IFN-酌诱导其M1型极化,将Kupffer细胞分为IL-23+anti-IL-23组、IL-23组、对照组;采用流式细胞术检测M1型细胞比例,采用ELISA法检测一氧化氮合酶（iNOS）、TNF-α、IL-6的水平,采用Westernblot法检测JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平。将小鼠分为anti-IL-23组、IL-23组、模型组、对照组,采用四氯化碳诱导小鼠肝损伤;采用ELISA法检测小鼠肝脏组织中iNOS、TNF-琢、IL-6的水平,免疫组织化学染色检测CD11c+的表达情况,HE染色观察小鼠肝脏病理改变,Westernblot法检测小鼠肝脏组织中JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平。结果IL-23组中M1型细胞的比例为（12.05±1.32）%,而IL-23+anti-IL-23组中M1细胞的比例为（7.55±1.08）%,对照组中M1型细胞的比例为（8.32±1.32）%,IL-23组明显高于对照组（P＜0.05）。IL-23组中iNOS、TNF-α、IL-6水平均明显高于对照组（均P＜0.05）,而IL-23+anti-IL-23组中iNOS、TNF-琢、IL-6水平均明显低于IL-23组（均P＜0.05）。IL-23组中JAK1、p-JAK1、STAT1以及p-STAT1蛋白表达水平均明显高于对照组（P＜0.05）;而IL-23+anti-IL-23组JAK1、p-JAK1、STAT1以及p-STAT1蛋白表达水平均明显低于IL-23组（P＜0.05）。对照组小鼠iNOS、TNF-α、IL-6水平较其余3组均为低（均P＜0.05）;而模型组iNOS、TNF-α、IL-6水平较IL-23组、anti-IL-23组均为低（P＜0.05）。对照组小鼠肝组织中未见CD11c+的表达,而模型组小鼠CD11c+表达明显,IL-23组小鼠CD11c+的表达较模型组增高。对照组小鼠肝组织无明显损伤或细胞炎症反应;而模型组小鼠肝组织出现明显的炎症反应和细胞损伤;IL-23组小鼠肝组织损伤较模型组明显;而anti-IL-23组小鼠肝组织损伤较IL-23组减轻。与对照组比较,IL-23组、模型组小鼠JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平较明显升高（均P＜0.05）;anti-IL-23组、IL-23组JAK1、p-JAK1、STAT1及p-STAT1蛋白表达水平与模型组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论IL-23可以促进Kupffer细胞M1型极化,在急性肝损伤患者中发挥促炎作用。     

肝脏CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞在小鼠急、慢性肝损伤中的表达差异及意义

目的探究肝内CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（regulatory T cell,Tregs）在急、慢性肝损伤中的表达差异及意义。方法使用四氯化碳（carbon tetrachloride,CCL4）一次或多次给予C57BL/6J小鼠腹腔注射,分别制备急性（24 h）和慢性肝损伤（6周）模型,对照组小鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液。病理切片Masson染色观察不同模型小鼠肝内病理变化情况,运用流式细胞分析法和免疫荧光检测小鼠肝内Tregs的表达。Real-time PCR检测小鼠肝内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、白细胞介素-1β（interloukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-10、转化生长因子-β（transforming growth factor,TGF-β）的表达。结果 Masson染色显示急性肝损伤小鼠的肝细胞大片坏死伴出血,慢性肝损伤小鼠肝脏假小叶形成,同时Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达增加。流式细胞分析显示Tregs在急性和慢性组小鼠肝脏表达都有升高,但在慢性组升高的幅度比急性组大（P〈0.01）,与免疫荧光结果一致。肝内抑制性细胞因子IL-10、TGF-β在慢性肝损伤组升高显著（P〈0.05）,而促炎因子IL-1β、IL-6在急性肝损伤组升高显著（P〈0.01）。结论肝内Tregs在急、慢性肝损伤中表达不同。在急性肝损伤中,尤其是急性肝损伤恢复期,Tregs部分增加,抑制炎性反应扩散,促进机体恢复;在慢性肝损伤中,Tregs表达显著增加,形成免疫耐受,抑制免疫清除,肝纤维化形成。     

参苓白术散对胃癌Ⅳ期患者外周血CD4+CD25+Tregs的影响

目的 探讨参苓白术散对胃癌Ⅳ期患者外周血CD4+CD25+Tregs、Foxp3 mRNA及血清细胞因子IL-10、TGF-[β1的影响.方法 将40例胃癌Ⅳ期患者随机分为观察组、对照组各20例.对照组予对症支持治疗,观察组对症支持治疗同时予参苓白术散治疗,治疗4 w后观察两组患者外周血CD4+CD25+Tregs、单核细胞Foxp3 mRNA及血清IL-10、TGF-β1浓度的变化.结果 治疗后观察组患者外周血CD4+CD25+Tregs、单核细胞Foxp3 mRNA及血清IL-10、TGF-β1浓度均显著降低(P＜0.05),对照组治疗后各项指标无明显变化(P＞0.05),两组治疗后比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 参苓白术散能降低胃癌Ⅳ期患者外周血CD4+CD25+Tregs和单核细胞Foxp3 mRNA的表达,降低抑制性细胞因子IL-10、TGF-[β1浓度,具有免疫调节作用.     

Hp感染对胃黏膜FOXP3和TGF-β1及IL-10表达的影响

目的研究Hp感染对胃黏膜FOXP3、TGF-β1、IL-10表达的影响。方法采用原位杂交和ELISA法检测Hp感染与未感染患者胃黏膜活检组织中FOXP3m RNA、TGF-β1m RNA的表达和IL-10的含量;用ELISA法检测胃黏膜上皮细胞GES-1与Hp共培养后的TGF-β1、IL-10含量。结果 (1)Hp感染阳性患者胃黏膜组织中FOXP3m RNA、TGF-β1m RNA的阳性表达率及IL-10的含量较Hp感染阴性患者明显增高(分别为P0.05、P0.05和P0.01);(2)Hp感染阳性患者胃黏膜组织FOXP3m RNA的表达与TGF-β1m RNA和IL-10的表达呈正相关(分别为P0.05和P0.01);(3)胃黏膜上皮细胞GES-1与Hp共培养1h后,TGF-β1及IL-10的表达量均较阴性对照组明显增高(P0.05)。结论 Hp感染可上调胃黏膜局部CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞,诱导胃黏膜细胞分泌TGF-β和IL-10,从而抑制胃粘膜局部免疫,促进Hp的免疫逃逸和持续性感染。     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.