微RNA-219通过ERK 1/2通路改善炎症所致新生SD大鼠脑内少突胶质细胞成熟障碍

目的 建立新生SD大鼠炎症模型,初步探究微RNA-219(miR-219)促进少突胶质细胞成熟的机制。方法 将60只SD大鼠随机分为对照组、脂多糖（LPS）组（LPS 0.15 mg/kg腹腔注射）、LPS+miR-219 agomir组（LPS 0.15 mg/kg腹腔注射,miR-219 agomir 3μL侧脑室注射）、miR-219 antagomir组（miR-219 antagomir 3μL侧脑室注射）和LPS+miR-219 agomir+U0126组（LPS 0.15 mg/kg腹腔注射,miR-219 agomir 3μL侧脑室注射,U012630 mg/kg腹腔注射）。于大鼠出生第7天和第14天处死后取脑组织,采用qPCR检测脑组织中miR-219及炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测少突胶质细胞成熟标志物髓鞘碱性磷脂蛋白（MBP）和ERK1/2表达水平,免疫荧光检测大鼠胼胝体少突胶质细胞的数量。结果 与对照组相比,大鼠腹腔注射LPS后脑组织内IL-1β、TNF-α mRNA表达均升高（P<0.01）,miR-219表达减少（P...     

miR-219在新生SD大鼠炎症模型中通过ERK 1/2信号通路促进少突胶质细胞成熟

［］ 目的：建立新生SD大鼠炎症模型,模拟临床中新生儿合并炎症而导致的脑损伤,初步探究miR-219促进大脑少突胶质细胞成熟的机制,为进一步探讨新生儿合并炎症而导致的脑损伤发生机制提供参考。方法：采用Western-blot法检测少突胶质细胞成熟标记物MBP和ERK 1/2通路的mRNA转录和蛋白质表达水平,免疫荧光检测大鼠胼胝体少突胶质细胞的数量,并进一步观察ERK 1/2通路特异性抑制剂U0126对miR-219促少突胶质细胞成熟的影响。结果：与对照组相比,在使用miR-219 atagomir降低大鼠脑内miR-219的表达量后,MBP和ERK 1/2蛋白表达明显减少(P〈0.05),荧光结果显示胼胝体出少突胶质细胞数量明显减少。与炎症组相比,在使用miR-219 agomir增加大鼠脑内miR-219的表达量后,MBP和ERK 1/2蛋白表达明显增加(P〈0.05),荧光结果显示胼胝体出少突胶质细胞数量明显增加；使用ERK 1/2抑制剂U0126预处理后,MBP的表达明显减少(P〈0.05)。结论：在大鼠脑内miR-219对少突胶质细胞的促成熟作用是部分通过调控ERK 1/2通路活性发生的。     

新生大鼠视神经少突胶质细胞原代培养及鉴定

目的：探讨视神经少突胶质细胞的分离方法和体外培养条件，为研究视神经损伤修复及少突胶质细胞相关课题研究奠定基础。方法：新生大鼠视神经取材，以DMEM／F12为基础的化学限定性培养基进行组织块培养，并用少突胶质细胞特异性标记物GC鉴定细胞。结果：培养第3天，视神经周围出现少突胶质细胞生长，呈圆形或梭形，10d左右基本铺满盖玻片。免疫细胞化学检测该细胞为阳性细胞，纯度较高。结论：采用视神经组织并用化学限定性培养基能成功获取体外培养的少突胶质细胞、较传统方法有获得细胞量大、纯度高、操作简便易行等特点。     

纳洛酮对少突胶质细胞的保护作用

目的 研究纳洛酮(naloxone)对脂多糖(lipopolysacchar,LPS)激活的小胶质细胞诱导少突胶质细胞损伤的影响.方法 共培养大鼠小胶质细胞和少突胶质细胞,用LPS(1μg·mL-1)刺激小胶质细胞,随后用0.1μM纳洛酮进行干预,应用免疫组化方法观察计数少突胶质细胞.结果 仅用0.1μM纳洛酮处理细胞,细胞活性基本保持不变,而当小胶质细胞被LPS激活后,与之共培养的大量的少突胶质细胞死亡(P<0.01);小胶质细胞被LPS激活,给予0.1μM纳洛酮处理后,少突胶质细胞的活细胞数显著升高(P<0.05).结论 纳洛酮能够抑制LPS激活的小胶质细胞引起的少突胶质细胞的损伤.     

电针对大鼠脊髓损伤后损伤处远端少突胶质细胞的影响

目的 探讨电针对大鼠脊髓损伤后损伤处少突胶质细胞的影响,为探索电针治疗脊髓损伤提供实验依据.方法 将60只SD大鼠随机分为3组,即电针治疗组(EA)、脊髓损伤组(SCI)、对照组(SHAM),每组各20只大鼠.EA组接受SCI手术+EA治疗;SCI组接受SCI手术;SHAM组仅接受椎板切除术.在术后24 h,术后7d、14d、21d、28 d取脊髓损伤处组织行免疫组化染色,测定APC阳性细胞数的表达变化.结果 同一时间点不同组之间,少突胶质细胞数目比较,电针组明显高于其他组;组之间的对比差异有统计学意义(P＜0.05).电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,细胞数不断增长;不同时间点之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 电针能促使大鼠脊髓损伤后损伤处远端少突胶质细胞的增殖与分化.     

少突胶质细胞的研究进展

少突胶质细胞几乎不含神经细丝和糖原颗粒,但含有大量的微管。他们的突起和分支均较少。其主要功能是参与形成和维持髓鞘,其细胞有髓磷脂组成,含20％脂质和80％的蛋白质。中枢神经系统的髓鞘主要由它形成,它是除神经元和星型胶质细胞之外大脑中第三种重要的细胞类型。少突胶质细胞将突起发出至神经轴突,将他们与周围的细胞质隔绝,对神经冲动传导速度有重要影响。通过少突胶质细胞的研究对解决中枢神经系统脱髓鞘疾病厌神经干细胞移植、神经损伤后修复均具有重要临床意义。     

细胞因子对少突胶质细胞增殖的影响

目的：观察多种细胞因子对O2A细胞增殖的影响。方法：取分离纯化的少突胶质细胞,培养皿或96孔板中的细胞分别加入10ng／ml的各种细胞因子,7d后进行MTT测定或细胞计数。96孔板分组：无细胞的阴性对照,有细胞的空白对照,PDGF,bFGF,IL-6,IFN-β1,GDNF,PDGF＋bFGF,PDGF＋IL-6,PDGF＋GDNF,bFGF＋IL -6,bFGF＋GDNF,IL-6＋GDNF,PDGF＋bFGF＋IL-6,PDGF＋bFGF＋GDNF,PDGF＋bFGF＋IL-6＋GDNF共16组。培养皿分组除无细胞的阴性对照组外的15组。培养至9d。同时取出各组细胞,进行细胞计数和MTT测定。结果：各细胞因子处理组细胞数及MTT值均较对照明显增多。结论：细胞因子PDGF、bFGF、IL-6、IFN-β、GDNF以及它们之间的某些组合,可促进少突前体细胞增殖。这为细胞移植治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病及研究髓鞘形成、髓鞘再生的机理提供基础。     

少突胶质细胞对PC12细胞GAP-43表达的影响

目的 研究少突胶质细胞与神经元相互作用时神经元GAP－43的表达。方法 用分离培养的少突胶质细胞及其细胞碎片分别作用于培养的PC12细胞,于不同作用时相点在观察PC12细胞突起变化的同时检测PC12细胞内GAP－43mRNA的表达。结果 对照组PC12细胞GAP－43mRNA有较高的表达,在给予少突胶质细胞处理后早期,其表达水平即显著降低（P＜0．05）,一直到处理12h,其表达水平仍无明显的回复。结论 少突胶质细胞可能通过产生抑制性物质抑制神经元GAP－43的表达进而抑制中枢神经系统的损伤轴突的再生。     

人发角蛋白对脊髓损伤大鼠少突胶质细胞增殖分化效应的影响

目的探讨体内可降解生物材料人发角蛋白(HHK)植入急性冲击性损伤脊髓后,对神经再生过程中少突胶质细胞增殖分化效应的影响。方法采用改制Ⅱ型NYU装置,在建立大鼠急性冲击性脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠脊髓损伤部位,对植入后1、4、12、26周损伤脊髓组织进行光学和电镜结构观察。结果第1周时,损伤部位可见少突胶质细胞散在分布于大量浸润的炎症细胞中;第4周时,通过Mallory's磷乌酸苏木素染色,显示HHK周边呈层包绕的增生少突胶质细胞;第12和26周主要为神经再生和髓鞘重建过程,重建中的少突胶质细胞髓鞘内出现较大的空腔,髓鞘层状分离,并形成大小不一的髓鞘小体,重建髓鞘周边可见新生的少突胶质细胞。结论在急性冲击性脊髓损伤后神经再生过程中,HHK对少突胶质细胞的增殖分化及髓鞘再生修复有积极作用,为进一步综合研究HHK对脊髓损伤修复的作用提供了实验依据。     

脑室注射脂多糖建立小鼠认知行为障碍模型

目的：探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)单次脑室注射对C57小鼠认知功能的影响,以期建立中枢炎症的认知功能障碍小鼠模型。方法将40只C57小鼠分为空白对照组、LPS 10 ng组、LPS 100 ng组与LPS 2000 ng组,进行Morris水迷宫空间获得性训练后分别对脑室单次给予LPS 0 ng、10 ng、100 ng、2000 ng,给药后1 d进行空间探索实验,1~3 d进行工作记忆检测;另将40只C57小鼠分为空白对照组、LPS 10 ng组、LPS 100 ng组与LPS 2000 ng组,进行新物体识别实验,适应并受训后进行脑室给药,给药后1 d行新物体识别测试;取10只C57小鼠分为两组,分别对脑室给予人工脑脊液、LPS 2000 ng,6 h后取材检测海马IL-1β、TNF-α含量。结果与空白对照组相比,脂多糖给药组均引起小鼠在Morris水迷宫和新物体识别实验中认知功能下降,其中2000 ng LPS给药组分别引起水迷宫空间探索实验中小鼠穿台次数、平台周边距离、目标象限停留路程百分比均分别减少72%、46%、32%,工作记忆检测中登台潜伏期延长2倍;新物体识别实验中新物体探索时间、探索次数百分比分别降低22%、21%;ELISA结果显示,2000 ng LPS脑室注射导致海马IL-1β、TNF-α含量分别升高55%、41%。结论单次LPS (2μg)脑室注射可引起C57小鼠认知功能障碍,提示LPS导致炎性损伤可以作为小鼠认知功能障碍的候选模型。     

参麦注射液减轻大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤

目的 观察参麦注射液能否减轻大鼠重症急性胰腺炎(SAP)相关性肺损伤,并初步探讨其相关机制。方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、SAP模型组和参麦注射液干预组,每组10只。采用经胰胆管注射5%牛黄胆酸钠诱发SAP大鼠肺损伤模型,参麦注射液干预组在建模前10 min经尾静脉注射8 mL/kg参麦注射液。模型制作24 h后经心脏取血1 mL测定血淀粉酶,取胰腺组织及左肺组织用于病理学与免疫组织化学检测;取右肺组织匀浆后检测匀浆液中髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白介素1β(IL-1β)含量。结果 假手术组大鼠各项指标未见明显异常。SAP模型组大鼠经胰胆管注射5%牛黄胆酸钠24 h后,血浆淀粉酶明显升高,胰腺组织小叶结构严重破坏;肺泡结构破坏,肺泡内大量炎性细胞浸润;肺组织氧化应激指标MPO活性与MDA含量明显升高,炎性指标TNF-α、IL-1β含量亦升高,与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.01);肺组织ICAM-1与caspase-3呈强阳性表达。参麦注射液干预组大鼠各项指标均较SAP模型组减轻。结论 参麦注射液能减轻SAP相关性肺损伤的原发病及肺损伤,其对肺的保护作用与抗氧化损伤、抗炎症反应及抗凋亡等有关。     

高压氧对胆红素脑病新生鼠海马神经细胞凋亡和学习记忆的影响

目的 探讨高压氧对胆红素脑病新生大鼠的海马神经细胞凋亡和学习记忆的影响,明确高压氧是否对胆红素的神经毒性有保护作用.方法 5日龄SD大鼠145只,雌雄不限,完全随机法分为3组:生理盐水对照组、胆红素脑病模型组、高压氧十预组.分别于小脑延髓池内注射生理盐水或等量10 mg/ml胆红素溶液,免疫组化法和免疫荧光法分别检测各组海马神经元细胞色素C和Caspase-3表达的动态变化,TUNEL法检测细胞凋亡,水迷宫实验测试学习记忆能力.结果 高压氧干预后海马神经细胞在各时间点,细胞色素C和Caspase-3表达均明显低于模型组,高于对照组(P<0.05);高压氧干预组TUNEL阳性细胞率(27.2±1.8)%明显少于模型组(37.6±6.6)%(P<0.05);水迷宫实验:高压氧干预组在各时间点找到安全平台的潜伏期均明显短于模型组(P<0.05),穿越平台次数是模型组的8倍.结论 高压氧治疗可能通过抑制线粒体途径中细胞色素c和Caspase-3的表达抑制神经细胞凋亡,减轻胆红素对海马神经元的毒性,从而减轻胆红素相关性脑损伤所致的学习记忆障碍.     

miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制

目的 探讨miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制。 方法 将90只7周龄SD大鼠随机分为对照组(n=20)、七氟醚组(n=20)、七氟醚+NC mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组+vector组(n=5)、七氟醚+miR-138 mimic+pcDNA-LCN2组(n=5)。构建七氟醚诱导的大鼠认知障碍模型,七氟醚诱导的大鼠分别注射10 μL miR-138 mimic、NC mimic慢病毒悬液。采用Morris水迷宫实验分析潜伏期、跨台时间和游泳速度;HE染色检测海马神经元的病理变化;TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR)检测miR-138、脂质运载蛋白2（LCN2）的mRNA水平表达;双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-138和LCN2之间的关系;Western blotting 检测海马组织中LCN2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白水平;ELISA实验检测海马组织中IL-6、TNF-α、IL-1β。 结果 与对照组比较,七氟醚组中miR-138表达水平显著降低（P<0.05）;大鼠逃避潜伏期显著增加,穿越平台次数显著减少,海马神经元损伤,海马神经元凋亡数量显著增加,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平降低（均P<0.05）。与七氟醚+NC mimic组比较,七氟醚+miR-138 mimic组中大鼠逃避潜伏期减少,穿越平台次数增加,神经元病理损伤减轻,海马神经元凋亡数量显著减少,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平降低,Bcl-2水平升高,IL-1β、TNF-α、IL-6水平降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平升高（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因结果显示LCN2 是miR-138的靶基因,过表达LCN2可显著逆转miR-138对七氟醚诱导的认知障碍大鼠凋亡的作用（P<0.05）。 结论 miR-138靶向LCN2通过JAK2/STAT3通路对七氟醚诱导的认知障碍具有神经保护作用。     

异丙酚上调miR-21表达改善大鼠缺血/再灌注损伤学习记忆的机制

目的:研究异丙酚对大鼠缺血/再灌注损伤后学习记忆的影响及机制。方法:建立大鼠脑中动脉缺血(MCAO)模型,实验分为假手术组、模型组、异丙酚处理组、miR-21类似物组;水迷宫检测大鼠学习记忆;免疫印迹和免疫荧光检测损伤侧海马自噬相关蛋白表达;聚合酶链锁反应(QRT-PCR)检测miR-21的表达水平。结果:和假手术组比较,模型组海马组织miR-21水平下降(P<0.05),空间记忆下降,自噬性死亡相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达上升(P<0.05)。而异丙酚处理能够逆转中动脉缺血引起的miR-21的下降,改善学习记忆,下调Beclin1和LC3-Ⅱ的表达(P<0.05)。miR-21类似物也能阻止MCAO造模引起的miR-21的下降、改善学习记忆、阻止Beclin1和LC3-Ⅱ的表达(P<0.05)。结论:异丙酚通过上调miR-21从而阻止缺血再灌注海马细胞自噬性死亡和学习记忆下降。     

胆碱改善脂多糖诱导的小鼠中枢神经系统炎症反应及认知功能障碍

目的 观察胆碱对脂多糖(LPS)诱导的中枢神经系统(CNS)炎症反应及认知损伤的影响,并对其作用机制进行分析.方法 采用侧脑室注射LPS建立小鼠CNS炎症模型,随机分为生理盐水对照组、LPS组、LPS+胆碱40 mg/kg组、胆碱40 mg/kg组4组.药物干预组和药物对照组胆碱预处理3d,下午12、2和4 pm各1次腹腔注射,对照组和LPS组生理盐水预处理3 d(时间次数同上),胆碱给药贯穿整个实验.观察小鼠自发活动,测定小鼠空间学习和记忆能力.检测海马齿状回IBA-1蛋白表达情况,测定海马TNF-α、IL-1β水平,分析海马α7nAchR、MAPK p38蛋白和磷酸化p38蛋白表达情况.结果 与对照组相比,LPS组小鼠在水迷宫测试中穿台次数明显减少(P＜0.05),胆碱预处理后穿台次数显著上升(P＜0.05);与对照组相比,LPS组小鼠海马IBA-1蛋白(P＜0.0001)、TNF-α(P＜0.001)与IL-1β(P＜0.01)明显升高,胆碱干预后明显降低IBA-1蛋白(P＜0.05)和IL-1β(P＜0.05)的升高,部分抑制TNF-α的升高;LPS处理后p38MAPK磷酸化水平明显升高(P＜0.05),胆碱预处理后显著降低其磷酸化水平(P＜0.05);胆碱干预组α7nAchR表达与其他3组相比显著增高(P＜0.05).结论 胆碱可能通过激活αnAchR来抑制LPS诱导的小鼠海马p38MAPK磷酸化,对LPS诱导的CNS炎症以及认知功能障碍的小鼠具有保护效应.     

谷胱甘肽对内毒素致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 观察谷胱甘肽(GSH)在急性肺损伤(ALI)治疗中的保护作用,并探讨损伤与凋亡相关基因bcl-2及fas的可能机制.方法 动物随机分对照组、损伤纽、还原型谷胱甘肽干预组,每组6只;对照组及损伤组分别从股静脉注射生理盐水及脂多糖(LPS),并于注射前及后30,60,120 min时采集血样及肺组织样品;还原型谷胱甘肽干预组:注射LPS前1 h、即刻及后30 min股静脉注射还原型谷胱甘肽,余同内毒素组.检测各肺损伤指标,观察病理形态并作免疫组化染色.结果 各项指标干预组均较损伤组减轻;且越早应用GSH对肺脏的保护作用越强;肺组织匀浆中的GSH含量增高(P＜0.01).正常肺组织bcl-2及fas均有基础低表达,LPS致伤后较正常组表达增高,经GSH处理后表达减弱.结论 谷胱甘肽可能通过诱导bcl-2基因表达增高(P＜0.01)及抑制fas基因使其表达减少(P＜0.05),从而逆转凋亡,保护肺组织.     

表皮生长因子促进小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的实验研究

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响.方法 将生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在EGF浓度为0(对照)、0.5、1、2.5、5、10 ng/ml的培养液中进行体外培养,观察生殖泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的情况.将达到MⅡ期的卵母细胞进行体外受精,观察原核和胚胎发育情况.结果 EGF浓度为1、2.5、5、10 ng/ml组GVBD发生率高于对照组;EGF浓度2.5、5、10 ng/ml组PB1排出率高于对照组,其中EGF浓度5 ng/ml组的GVBD、PB1发生率最高(P＜0.01).卵母细胞在1、2.5、5、10 ng/ml EGF培养浓度下的退化率低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).卵母细胞的体外受精率、2-细胞和4-细胞胚胎的发生率在EGF浓度为5 ng/ml时明显高于对照组(P＜0.01).结论 EGF可促进GV期卵母细胞的成熟,对其受精能力和胚胎发展也有促进作用,也可能有抑制卵母细胞凋亡的作用,而EGF以上作用与剂量有关.     

心脉隆注射液对新生SD大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

目的初步探讨心脉隆注射液对新生SD大鼠海马神经干细胞增殖分化作用的影响。方法分离新生SD大鼠海马组织,采用无血清及单克隆培养方式获得大量神经干细胞,将不同浓度心脉隆注射液加入第3代神经干细胞单细胞悬液中有血清贴壁培养并分实验组和对照组,应用免疫荧光及细胞化学染色检测Nestin、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算MAP-2阳性细胞百分率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察心脉隆注射液对神经干细胞增殖能力的影响。结果海马NSCs在分化后,各心脉隆注射液干预组MAP-2阳性细胞比例均较空白对照组增高(P<0.05),MTT结果显示培养5 d后各药物组NSCs增殖能力均较对照组增强(P<0.05)。结论心脉隆注射液具有促进神经干细胞增殖并向神经元方向分化的作用。