STIP1基因沉默对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨磷酸化应激诱导蛋白1基因沉默(si-STIP1)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人成骨细胞(hFOB1.19细胞)和人骨肉瘤细胞系(U2OS、MG63和SaoS-2细胞),采用实时定量PCR和蛋白印迹法测定磷酸化应激诱导蛋白1(STIP1)在各细胞中的表达水平。si-STIP1及阴性对照(si-NC)转染U2OS细胞48 h,采用CCK-8法测定细胞增殖,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,采用蛋白印迹测定细胞MMP2和MMP9及IGF1R/PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。结果与hFOB1.19细胞相比,U2OS、MG63和SaoS-2细胞的STIP1基因和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。与si-NC组相比,si-STIP1组U2OS细胞的增殖活性、迁移率、侵袭率均显著降低(均P<0.05),MMP2、MMP9、p-IGF1R、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论 STIP1基因沉默抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移,其可能机制是通过调控IGF1R/PI3K/AKT信号通路实现。     

Id1基因对人骨肉瘤细胞恶性逆转向成骨分化的影响

目的 探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation factor 1,Id1)对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响.方法 用重组腺病毒调控MG63细胞中Id1过表达后,RT-PCR及Western blot检测验证Id1的表达情况,CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,ALP读数法检测成骨分化早期指标ALP的活力.结果 AdId1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量增高,AdsiId1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量降低(P＜0.05);Id1过表达后,MG63细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力等恶性生物学行为均增强,G1期细胞比例降低,Id1表达量下调后则逆转MG63细胞的恶性生物学行为,G1期细胞比例增高(P ＜0.05);Id1表达量下调后,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高(P＜0.05).结论 抑制Id1基因表达可以促使骨肉瘤的恶性生物学行为逆转并诱导骨肉瘤细胞发生成骨分化.     

阻断Notch信号通路抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖的实验研究

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养骨肉瘤MG-63细胞株;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0 μmol/L)对骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用;透射电镜下观察不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞形态的影响;流式细胞术结合AnnexinV-FITC/PI双染分析不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞Notch1、HES1基因表达.结果 不同浓度的DAPT作用于骨肉瘤MG-63细胞后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05),1.0μmol/L DAPT即抑制细胞生长,随着DAPT浓度增加抑制效果明显增强,呈显著的浓度依赖关系,且随着DAPT作用时间延长,抑制效果也明显增强.细胞凋亡结果分析表明,DAPT能浓度依赖性地诱导骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡.RT-PCR显示随着DAPT量的增加,Notch 1、HES 1 mRNA的表达逐渐下降(均P＜0.05).结论 DAPT对骨肉瘤MG-63细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用可能与下调MG-63细胞中Notch 1、HES 1 mRNA的表达有关.     

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨 miR-125b-5p 调控 RAB3D 在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过 qRT-PCR 检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达明显下调（P<0.05）。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p 表达量升高,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中 RAB3D 的蛋白表达量下降（P<0.05）;miR-125b-5p 表达量降低,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P<0.05）,而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断（P<0.05）。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

LPAR1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨溶血磷脂酸受体-1(LPAR1)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:应用基因集富集分析(GSEA)方法分析LPAR1的表达与细胞恶性表型的关系.LPAR1质粒及其空载对照转染人骨肉瘤细胞MG63、U2OS.CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测细胞的增殖、凋亡、转移及侵袭能力.建立体内裸鼠移植瘤,观察LPAR1对瘤体生长的影响.Western blotting法检测mTOR/AKT信号通路激活的情况.结果:LPAR1在骨肉瘤中低表达;GSEA分析结果显示,负调控细胞增殖、周期、迁移和侵袭和肿瘤转移基因集富集以及细胞凋亡基因集富集在LPAR1高表达组.与空载体组相比,LPAR1组人骨肉瘤细胞MG63、U2OS的细胞活力、克隆形成率、迁移和侵袭能力及Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2、pmTOR/mTOR、pAKT/AKT表达均明显下降,细胞凋亡率及BAX蛋白表达明显上升(P＜0.05).与空载体组相比,LPAR1组裸鼠的瘤体体积、质量明显下降,瘤体组织中的LPAR1蛋白表达上调(P＜0.05).结论:LPAR1在骨肉瘤中低表达,过表达LPAR1可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭及裸鼠成瘤,其机制可能是通过抑制AKT信号通路来实现.     

组织蛋白酶S对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 探讨组织蛋白酶S(Cat S)对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在调控机制。方法 以正常成骨细胞(hFOB)和人骨肉瘤细胞(SAOS2和MG63)作为研究对象,将Cat S小干扰RNA(si-Cat S)和阴性对照序列(si-NC)转染至SAOS2和MG63细胞中以改变Cat S在人骨肉瘤细胞中的表达。将实验细胞分为4组：hFOB组(hFOB细胞)、Control组(未转染的SAOS2或MG63细胞)、si-NC组(转染了si-NC的SAOS2或MG63细胞)和si-Cat S组(转染了si-Cat S的SAOS2或MG63细胞)。RT-PCR和Western blot法检测Cat S在SAOS2和MG63细胞中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测敲低Cat S对SAOS2和MG63细胞增殖活性的影响;划痕和Transwell实验分别检测敲低Cat S对SAOS2和MG63细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot实验检测敲低SAOS2对SAOS2细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和Caspase-3)和Wnt/β-catenin通路相关蛋白(LRP5、β-ca...     

lncRNA CASC19靶向miR-490-3p调控骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

【摘要】 目的 探讨lncRNA CASC19对骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。 方法 实验设置si con组、si CASC19组、pcDNA组、pcDNA CASC19组、miR con组、miR 490 3p组、si CASC19+anti miR con组、si CASC19+anti miR 490 3p组;qRT PCR检测miR 490 3p和CASC19的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。 结果 骨肉瘤细胞MG63、U2 OS、OS187中miR 490 3p低表达,CASC19高表达（P＜005）;过表达miR 490 3p或干扰CASC19表达可抑制骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移和侵袭。CASC19靶向调控miR 490 3p的表达,抑制miR 490 3p表达能逆转干扰CASC19对骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移、侵袭的抑制作用。 结论 lncRNA CASC19可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR 490 3p有关,将可为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。     

lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的 探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法 收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例，qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后，通过CCK-8实验评估细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞MG-63迁移与侵袭能力。基于TARGET数据库，根据患者骨肉瘤组织中DIO3OS表达水平分为高表达组与低表达组，Kaplan Meier生存分析评估DIO3OS表达水平与患者预后的关系。结果 qRT-PCR结果显示，骨肉瘤组织及细胞中DIO3OS表达下调。敲降DIO3OS表达时，CCK-8实验结果表明骨肉瘤细胞MG-63增殖能力增加，划痕实验和Transwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加(P<0.05)。过表达DIO3OS后，CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果显示，MG-63细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，DIO3OS高表...     

miR-99a抑制物对骨肉瘤细胞生物行为学的影响

目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响。方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较。培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99ainhibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06)(P<0.01)。3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P<0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P<0.05)。miR-99ainhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P>0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调。结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/MMP-2蛋白表达而实现的。     

人骨肉瘤细胞系MG63体外增强单核细胞的迁移及侵袭能力

目的:观察骨肉瘤细胞对单核细胞侵袭能力的影响,探讨肿瘤浸润单核细胞协助肿瘤侵袭的作用.方法:利用transwell体外模型检测骨肉瘤细胞系MG63条件培养基作用下人单核细胞系Thp-1迁移及侵袭能力的变化;明胶酶谱方法检测MG63细胞条件培养基作用后Thp-1细胞表达MMP-9的改变.结果:与阴性对照组对比,MG63细胞条件培养基明显增强了Thp-1细胞迁移及侵袭能力;而且MG63细胞条件培养基对Thp-1细胞具有趋化作用.明胶酶谱结果提示MG63细胞条件培养基作用后Thp-1细胞表达MMP-9增强.结论:骨肉瘤细胞MG63能够增强单核细胞Thp-1的迁移及侵袭能力,并可能是通过增强单核细胞MMP-9的表达而实现的.     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。     

α干扰素增强骨肉瘤细胞对依托泊苷敏感性的实验研究

目的探讨α干扰素(IFN-α)在人骨肉瘤U2OS和MG63细胞中对依托泊苷敏感性的作用及其机制。方法采用IFN-α和依托泊苷单独或联合处理骨肉瘤U2OS和MG63细胞72 h,应用流式细胞术和DNA Ladder检测细胞凋亡的变化,Western blot法检测PARP、p53、MDM2、Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞术表明IFN-α在p53正常的U2OS细胞中明显增强依托泊苷诱导的凋亡(P<0.05),却对依托泊苷诱导p53突变的MG63细胞凋亡无明显影响(P>0.05);DNA Ladder表明与单药组相比,IFN-α与依托泊苷联用72 h在U2OS细胞出现明显的DNA梯形条带,而在MG63细胞中无此现象;Western blot结果表明在U2OS细胞中联合用药组出现PARP的明显裂解活化,并且IFN-α明显增强依托泊苷引起的p53信号通路p53、MDM2、Bax等凋亡基因的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,而在MG63细胞中则无此现象。结论 IFN-α能够通过激活p53依赖性信号通路增强依托泊苷诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡,联合应用IFN-α和传统化疗药物如依托泊苷可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。     

miR-4306通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭

目的: 研究miR-4306在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法: 选取人成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞Saos-2、MNNG/HOS CI #5,采用qRT-PCR检测miR-4306表达水平。将miR-4306 mimics和阴性对照分别转染至骨肉瘤细胞Saos-2和MNNG/HOS CI #5,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭,蛋白质免疫印迹检测细胞内上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）标志蛋白表达水平。通过在线靶基因预测网站Targetscan、Starbase预测miR-4306靶基因可能为富含AT序列特异性结合蛋白2（special AT rich sequence binding protein 2, SATB2）,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR 4306 mimics、LV SATB2共转染至骨肉瘤细胞中,检测细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT标志蛋白表达水平变化。结果: 与人成骨细胞hFOB 1.19比较,骨肉瘤细胞Saos 2、MNNG/HOS CI #5中miR-4306表达明显降低（P均＜0.01）。转染miR-4306 mimics后,骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,N-钙黏蛋白、血管内皮生长因子表达水平显著降低,E 钙黏蛋白表达水平显著升高（P＜0.05或＜0.01）。SATB2是miR-4306下游的直接靶标;与miR-4306 mimics+LV-NC组比较,miR-4306 mimics+LV-SATB2组部分逆转miR-4306对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的影响。结论: miR-4306在骨肉瘤细胞中呈低表达,其可通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。     

Expression of Beclinl in Osteosarcoma and the Effects of Down-regulation of Autophagy on the Chemotherapeutic Sensitivity

To explore the expression of Beclin1 in osteosarcoma and investigate the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity to cisplatin (DDP),the expression of Beclin1 in 28 specimens of osteosarcoma (group A) and 19 specimens of normal bone tissues (group B) were immunohistochemically detected. The expression of Beclin1 mRNA in MG63 cells treated with different concentrations of DDP was examined with RT-PCR. After down-regulation of autophagy in MG63 cells by an autophagy inhibitor,3-methyladenine (3-MA),the cell proliferation inhibition rate of MG63 cells treated with DDP was evaluated by using the MTT assay. The positive rates of Beclinl were 67.85% in group A and 94.73% in group B. Its expression was lower in osteosarcoma than in normal bone tissues,with a significant difference found between them (P＜0.05).RT-PCR showed that the expression of Bcclin1 mRNA in the cells treated with high-dose DDP were higher than that in the non-treated cells,and no significant difference in the expression of Beclin1 mRNA was found between the cells treated with low-dose DDP and the non-treated cells. There was a positive correlation between the level of Beclin1 mRNA expression and the concentration of DDP.MTT assay showed that the proliferation inhibition rates of the cell treated with 3-MA and DDP combined were substantially increased when compared with those treated with DDP alone (P＜0.01).This study demonstrated that autophagy may be implicated in the carcinogenesis of osteosarcoma,and DDP may induce autophagy in the MG63 cells. It also suggests that the down-regulated autophagy could increase chemotherapeutic sensitivity of DDP to osteosarcoma.     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的 探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM 2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P＜0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P＜0.05)。 结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

丝氨酸/苏氨酸激酶31对骨肉瘤恶性生物学行为的影响

目的 观察丝氨酸/苏氨酸激酶31(STK31)在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤恶性生物学行为的影响.方法 收取15例骨肉瘤组织标本及瘤旁正常组织标本,利用免疫组织化学技术、实时定量PCR技术和Western blot技术检测肿瘤组织及瘤旁正常组织中STK31的表达;构建STK31敲除质粒pGenesil-STK31-shRNA,以骨肉瘤细胞系MG63细胞为靶细胞转染pGene-sil-STK31-shRNA或对照质粒pGenesil-1,通过CCK8细胞活性实验,检测STK31对MG63细胞增殖能力的影响;Tanswell实验观察STK31对骨肉瘤细胞迁移能力的影响.结果 免疫组织化学显示肿瘤组织中STK31表达明显高于瘤旁正常组织;实时定量PCR检测骨肉瘤STK31 mRNA的表达量显著高于瘤旁正常组织[(3.65±0.83)vs.(1.05±0.14),P＜0.05];Western blot显示肿瘤组织中STK31蛋白表达显著高于瘤旁正常组织(P＜0.05);CCK8细胞活性实验显示敲除STK31后MG63细胞增殖能力明显降低,36 h后与对照组相比[(1.71±0.17)vs.(1.39±0.11),P＜0.05],72 h后与对照组相比](2.15±0.21) vs.(1.54±0.14),P＜0.05],差异均有统计学意义;Tanswell实验显示转染pGenesil-STK31-shRNA后,MG63细胞迁移能力明显受到抑制[(13±4)个vs.(55±8)个,P＜0.05].结论 STK31在骨肉瘤组织中的表达升高,具有增加骨肉瘤细胞生物学活性的作用.     

腺病毒介导BMP-2和BMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用研究

目的 研究骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用.方法 分别用重组腺病毒AdBMP-2、AdBMP-6和AdGFP感染骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶(ALP)活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化.结果 与感染AdGFP的相应骨肉瘤细胞株(对照组)相比,分别感染AdBMP-2和AdBMP-6的两种骨肉瘤细胞株的细胞存活率随时间延长逐渐降低,凋亡率逐渐增加,细胞穿膜数逐渐减少,ALP活性逐渐增加.结论 BMP-2和BMP-6可以抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移,并诱导它们凋亡和向成骨细胞分化.     

不同侵袭潜能的骨肉瘤细胞中抑癌基因IDH1的表达

目的 观察抑癌基因IDH1在不同侵袭能力的人骨肉瘤MG-63、U20S细胞株中的差异表达。方法培养人骨肉瘤细胞MG-63、U20S,以实时定量PCR、免疫细胞化学染色法检测MG-63、U20S细胞中IDH1基因mRNA及蛋白的表达情况;体外侵袭实验测定两骨肉瘤细胞株的侵袭能力。结果IDH1基因mRNA及蛋白在不同侵袭能力的骨肉瘤细胞株中存在差异表达,其在低侵袭力细胞株U20S中的表达量明显高于高侵袭力细胞株MG-63中的表达量（P〈0．01）。结论IDH1的表达与骨肉瘤细胞的侵袭能力呈负相关,其可作为判断骨肉瘤侵袭能力有价值的指标。     

Twist调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法Real-time PCR 及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-siTwist腺病毒感染 细胞,细胞生长曲线检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂直迁移及侵袭能力。 Ad-Twist及Ad-siTwist感染Luc标记的143B细胞,制备胫骨近端骨肉瘤模型,活体成像动态观察细胞在体内的生长。结果在 骨肉瘤细胞中Twist 的基础表达显著高于C3H10 细胞（P<0.05）,其中在143B细胞表达最高,MG63 细胞次之,TE85 细胞中最 低,Twist的表达水平与骨肉瘤细胞的恶性程度呈正相关。Ad-Twist及Ad-siTwist感染细胞分别能显著提高或降低骨肉瘤细胞 中Twist的mRNA及蛋白水平的表达（P<0.05）。生长曲线结果显示Twist过表达能显著促进骨肉瘤细胞的增殖,而抑制Twist的 表达后,骨肉瘤细胞的增殖能力降低（P<0.05）。Transwell实验发现Twist过表达后,3种骨肉瘤细胞迁移或侵袭至小室的细胞 数明显增多,而抑制Twist的表达可降低骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力（P<0.05）。143B细胞具有良好的体内成瘤能力,Twist过表 达促进143B细胞在裸鼠体内生长,活体成像动态观察荧光信号显著高于对照组,抑制Twist表达可显著抑制细胞在裸鼠体内生 长,信号明显弱于对照组。结论Twist可增强骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力。