中药鲜河蚌肉酶解工艺研究

目的:优选鲜河蚌肉的酶解法提取工艺。方法:采用单因素试验法考察影响酶解效果的主要因素,采用正交试验法对酶解时间、酶解温度、加酶量和酶解pH值进行优选,确定鲜河蚌肉酶解的最佳工艺条件。结果:鲜河蚌肉仿生酶解最佳工艺条件为在底物浓度为10%,采用2.0%的胰蛋白酶和2.0%的碱性蛋白酶,酶解温度为45℃,酶解pH值为8.0,酶解时间为3 h,鲜河蚌肉的水解度最高为32.56%。结论:优选出的鲜河蚌肉酶解提取工艺条件合理、可行、提取效率高。     

酶解牛肉工艺的研究

目的 研究木瓜蛋白酶和风味酶对牛肉进行分步酶解的最佳工艺参数.方法 本实验以木瓜蛋白酶和风味酶为水解酶对牛肉进行分步酶解,在单因素的基础上采用了正交试验对水解条件进行优化.结果 先用木瓜蛋白酶在加酶量为0.1%、料液比为3:1、温度为65 ℃、pH=7.0的条件下酶解1 h,再用风味酶在加酶量为0.4%、温度为55 ℃、pH=6.0的条件下酶解5h.结论 在此方法 下的牛肉水解物经美拉德反应生成的反应物肉香味更加浓郁,游离氨基酸含量较高.     

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取5′－磷酸二酯酶，酶活可达474U／mL。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸，得到5′－CMP、UMP、GMP、AMP4种单核苷酸。最佳反应条件为：底物RNA浓度为0.01g/mL，每毫升底物的酶用量为30U，酶解温度70℃，pH7.0，时间2h,5′－核苷酸转化率达80％。     

响应面法优化玉竹多糖的酶法提取工艺

[目的]优化酶法提取玉竹多糖的工艺.[方法]在单因素实验的基础上,采用响应面分析法对影响酶法提取玉竹多糖得率的主要因素(酶解时间、酶解温度和酶用量)进行优化,建立了影响因素与玉竹多糖得率之间的函数关系.[结果]玉竹多糖酶法提取的最佳工艺为:木瓜蛋白酶加酶量为6.5 g/L,酶解温度为50C、酶解时间为125 min,在此条件下,玉竹多糖得率达到100.89 mg/g,试验结果与模型预测值相符.[结论]Box-Behnken设计结合响应面分析法可以很好地对玉竹多糖酶法提取工艺进行优化.     

纤维素酶转化淫羊藿苷制备宝藿苷I的研究

目的 研究宝藿苷I的制备工艺。 方法 采用纤维素酶水解淫羊藿苷制备宝藿苷I,以转化率为指标,通过单因素考察pH值、温度、底物的浓度、酶用量、反应时间及金属离子对转化率的影响L9(34),正交试验优化制备工艺;采用MS, 1H-NMR、13C-NMR鉴定水解产物。 结果 酶解反应的最适条件为温度50 ℃、反应介质pH 5.2醋酸-醋酸钠缓冲液,底物浓度为10 mg/mL,酶与底物质量比1∶1,反应时间48 h,钠离子、钙离子、镁离子、锌离子、对酶解反应无显著影响(P>0.05),铁离子对酶解反应有抑制作用(P<0.01);反应产物相对分子质量为514,核磁图谱证实产物为宝藿苷I。结论 纤维素酶水解淫羊藿苷制备宝藿苷I,工艺简单可靠,反应条件温和,适合工业化生产。     

菊粉低聚糖的水解工艺研究

目的研究确立菊粉低聚糖的最佳水解工艺条件。方法采用酸法、酶法两种方式,分别设计单因素实验对菊糖提取液进行水解。结果酸法水解最佳工艺条件为水解温度80℃、水解时间30 min、pH=2.0;酶法最佳工艺条件为水解温度65℃、水解时间18 h、底物浓缩比1∶1、酶用量0.4 g。结论酸法水解优于酶法,转化率高且操作条件简单易行。     

依赖于靶点稳定性的药物亲和反应实验条件探索

目的：对依赖于靶点稳定性的药物亲和反应（DARTS）这一靶标发现新技术进行主要影响因素的探索,获得DARTS更适宜的实验条件。方法采用不同浓度的链霉蛋白酶（酶与蛋白质量比1∶100~1∶10000）对Jurkat细胞提取的蛋白混合物进行室温酶解,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和考马斯亮蓝染色,观察不同浓度链霉蛋白酶对蛋白混合物酶解的程度,以确定DARTS适宜的酶解浓度范围。在此基础上,以α-酮戊二酸为研究对象,采用DARTS联合SDS-PAGE,考察不同链霉蛋白酶浓度（酶与蛋白质量比为1∶500~1∶5000）和不同酶解时长（5~30 min）对DARTS结果的影响,获得适宜的酶解条件。选用靶标已知的麦考酚酸,采用上述实验所得的最适酶解条件进行DARTS,验证其可行性。结果采用不同浓度链酶蛋白酶对蛋白混合物进行酶解时,浓度为1∶100的条件下蛋白完全被水解,酶浓度为1∶10000对蛋白混合物无明显水解,酶浓度为1∶500~1∶5000较温和,约可水解蛋白混合物的30%~60%。链霉蛋白酶浓度为1∶1000时,α-酮戊二酸的DARTS中受保护的蛋白条带呈现效果最好;在该酶浓度条件下,适宜的酶解时长为15 min。将以上酶解条件（链霉蛋白酶浓度1∶1000、酶解15 min）运用于麦考酸的DARTS,在4~7×104处可见明显的保护条带,Western免疫印迹法验证结果显示,保护条带中含有麦考酚酸靶蛋白IMPDH 1。结论以α-酮戊二酸为研究对象,获得了蛋白混合物DARTS更适宜的实验条件。     

酶解辅助提取关黄柏生物碱的工艺研究

目的:考察酶解辅助提取技术对关黄柏生物碱提取率的影响,优选出总生物碱的最佳提取工艺条件.方法:采用正交实验,考察酶解辅助法在不同pH,不同温度,不同浸取时间对关黄柏中总生物碱提取率的影响.结果:优化酶解法的最佳提取工艺条件为:纤维素酶用量为0.9％,在pH4.5,35℃条件下酶解2.5h.酶解法可将总生物碱提取率提高约27％.结论:酶浸-回流法提取总生物碱方法可行,该方法提取时间短,提取率高,适合工业化生产.     

壳寡糖的酶法制备

通过还原端基、酶解产物聚合度、水解液调碱性后透光率的测定以及酶解产物的TLC、HPLC分析,研究了壳聚糖酶降解壳聚糖过程中壳聚糖浓度、酶用量、反应时间和pH对酶促反应速率和产物聚合度的影响。结果表明:壳聚糖酶在底物浓度0.03 g/mL、壳聚糖酶用量4~6 u/g、pH=5.8和水解200 min时,可得到以聚合度3~7为主的壳寡糖。     

林蛙皮的酶解工艺及抗氧化作用

目的 优选林蛙皮酶解制备工艺,并研究其抗氧化作用.方法 采用酶解法,通过单因素考察试验和L9(34)正交实验,以水解度作为考察指标,对酶解工艺进行筛选;通过林蛙皮酶解液对羟基自由基,超氧阴离子及DPPH自由基的清除作用,研究其抗氧化能力.结果 林蛙皮的最佳酶解工艺为:料液比1:15,pH 6.5,中性蛋白酶加入量为3000 U/g,45℃下水浴2 h,90℃灭酶10 min,离心,得林蛙皮酶解液,此酶解液对羟基、超氧阴离子及DPPH自由基的清除率在一定范围内随浓度的升高而加强.结论 通过正交实验,得到中性蛋白酶酶解林蛙皮的最佳生产工艺,工艺合理可行,其酶解液具有良好的抗氧化活性,为林蛙皮进一步的化学及药理研究奠定了基础.