肾缺血预处理对兔未成熟心肌Bcl-2, Bax,Fas蛋白表达的影响

目的:探讨肾缺血预处理(RIP)对兔未成熟心肌细胞凋亡和Bcl-2, Bax, Fas蛋白表达的影响. 方法:24只幼兔采用Langendorff离体心脏灌注模型,随机分为正常对照组(C)、心脏缺血/再灌注组(I/R)和肾缺血预处理组(RIP),每组8只,测定各组未成熟心肌细胞凋亡和Bcl-2, Bax, Fas蛋白表达. 结果:RIP组与I/R组比较,心肌细胞凋亡率明显减少[(4.19±1.13)% vs (12.30±2.10)%, P<0.01],DNA片段梯光密度明显减少(57 350±1765 vs 135 200±3370, P<0.01), Bcl-2表达增多(33 525±1026 vs 12 385±860, P<0.01), Bax(8640±768 vs 32 472±1128, P<0.01)和Fas(8936±912 vs 32 100±1260, P<0.01)表达明显减少. 结论:RIP可减少缺血再灌注后兔未成熟心肌细胞凋亡和影响Bcl-2, Bax, Fas蛋白的表达.     

载脂蛋白J对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的 观察载脂蛋白J(ApoJ)对缺氧/复氧(H/R)诱导的乳鼠心室肌细胞损伤的影响及其相关的信号传导通路.方法 用携带ApoJ基因的重组腺病毒感染乳鼠心肌细胞使ApoJ高表达.利用三气培养箱建立H/R模型,SOD类似物Mn(Ⅲ)TBAP和真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)去磷酸化抑制剂Salubrinal提前预处理,将心肌细胞分成对照组、H/R组、ApoJ组、ApoJ+ H/R组、Mn(Ⅲ)TBAP+H/R组、Salubrinal+ H/R组.利用MTT法检测细胞的存活率;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、凋亡蛋白酶半胱天冬酶-3/7 (caspase-3/7)及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性;Westernblot检测ApoJ、氧化酶Nox2 /gp91 phox、内质网特异性凋亡蛋白caspase12、CHOP的表达及eIF2α的磷酸化水平.结果 ApoJ基因重组腺病毒转染后,心肌细胞ApoJ蛋白高表达.与对照组相比,H/R组细胞存活率和SOD的活性明显下降,LDH的漏出量及caspase-3/7的活性升高,Nox2/gp91phox、caspase-12、CHOP蛋白的表达明显升高,eIF2α的磷酸化水平升高.与H/R组相比,ApoJ组、Mn(Ⅲ)TBAP组及Salubirnal组LDH的漏出量及caspase3/7的活性明显降低,ApoJ高表达使细胞存活率和SOD的活性显著升高,Nox2/gp91 phox、caspase-12、CHOP蛋白的表达明显下降,而eIF2α的磷酸化水平显著升高.结论 ApoJ通过抗氧化应激及内质网应激的作用,减轻H/R诱导的心肌细胞损伤.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ抑制高磷诱导血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ)对高磷诱导的小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的抑制作用.方法 体外培养小鼠血管平滑肌细胞,先分正常对照组、高磷组(HP,2.6 mmol/L),观察高磷对VSMCs的影响,再分为正常对照组、高磷组(HP,2.6 mmol/L)、罗格列酮组(RGL,10 μmol/L)、高磷(2.6 mmol/L)±罗格列酮(10 μmol/L)组(HP+RGL),观察PPARγ激动剂罗格列酮对高磷诱导的VSMCs钙化的抑制作用.茜素红S(alizarin red S)染色观察高磷对细胞钙盐沉积的影响.Western blot检测PPARγ、血管平滑肌22alpha蛋白标志物(SM22α)、骨形成蛋白2(BMP2)和成骨特异性转录因子2(Runx2)的表达变化.结果 与正常对照组相比,高磷处理后的VSMCs的钙盐沉积明显升高[(0.08 ±0.02)vs(0.19 ±0.03),P＜0.01],成骨细胞标志物BMP2[(0.26 ±0.02) vs (0.74±0.03),P＜0.01]及Runx2表达[(0.29 ±0.03) vs (0.91 ±0.04),P＜0.01)],明显升高.同时PPARγ[(0.93±0.04)vs(0.58±0.02),P＜0.05]及平滑肌细胞标志物SM22α表达减少[(1.02±0.09) vs(0.77±0.03),P＜0.05],而加入罗格列酮后,高磷状态下VSMCs的钙盐沉积明显降低[(0.19±0.02) vs(0.12±0.03),P＜0.05],PPARγ[(0.63 ±0.04)vs(0.85 ±0.03),P＜0.05]和SM22α[(0.69 ±0.02) vs(0.99±0.03),P＜0.01]表达明显上升,相反,BMP2[(1.02±0.04) vs (0.48±0.05),P＜0.01]及Runx2[(1.00 ±0.06) vs (0.67 ±0.03),P＜0.01]的表达则明显受抑.结论 高磷诱导VSMCs向成骨细胞分化和钙化可能与下调PPARγ的表达有关,而罗格列酮可通过激活PPARγ抑制高磷状态下VSMCs钙化的发生.     

核转录因子YY1对缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨核转录因子阴阳1 (yin yang 1,YY1)对体外缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制.方法 体外分离培养新生大鼠心肌细胞,利用无糖培养基及含95％ N2+5％ CO2混合气体的缺氧装置(Billups-rothenberg)诱导建立缺血缺氧心肌细胞凋亡模型,通过建立过表达YY1重组质粒并将其转染入心肌细胞内,观察YY1对缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响.实验分为对照组、YY1组、缺血缺氧组、缺血缺氧+YY1组、缺血缺氧+LY294002组、缺血缺氧+YY1+LY294002等6组(n=4).CCK-8法检测各组心肌细胞活力,TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况,fQT-PCR检测YY1 mRNA表达水平,Westem blot法检测YY1、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-Aktser473)及生存素(Survivin)蛋白表达水平.结果 与对照组相比,缺血缺氧组在缺血缺氧刺激6h后心肌细胞活力下降、凋亡率明显增高[(0.55 ±0.02) vs (1.14±0.02)、(38.25 ±1.65)％ vs (1.38±0.15)％,P＜0.01].缺血缺氧前预转染YY1重组质粒后,与缺血缺氧组相比,缺血缺氧+YY1组心肌细胞活力上升、凋亡率降低、p-Aktser473和Survivin蛋白表达增加[(0.78 ±0.03) vs (0.55 ±0.02)、(14.50±1.56)％ vs (38.25±1.65)％、p-Aktser473相对灰度值:(0.82±0.03) vs (0.28 ±0.03)、Survivin相对灰度值:(0.93 ±0.02) vs (0.36±0.02),P＜0.01].经PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂LY294002干预后,缺血缺氧+ YY1+LY294002组与缺血缺氧+YY1组相比,心肌细胞活力下降、凋亡率增加、p-Aktser473和Survivin蛋白表达显著降低[(0.62 ±0.02) vs (0.78 ±0.03)、(27.75±1.12)％vs (14.50±1.56)％,p-Aktser473相对灰度值:(0.43 ±0.02)vs(0.82±0.03),Survivin相对灰度值:(0.27 ±0.02) vs (0.93 ±0.02),P＜0.01].结论 核转录因子YY1可抑制缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡,且该作用与PI3K/Akt信号通路的激活相关.     

多巴胺受体和脂筏对高血压患者细胞NADPH氧化酶的作用

目的 探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH氧化酶即Nox)亚单位在高血压患者肾脏近曲小管细胞中的表达及其活性变化,以及多巴胺受体和脂筏在其中的调节作用.方法 细胞分为正常组和高血压组,未经任何药物刺激的两组细胞分别作为正常对照组和高血压对照组,采用葡萄糖浓度梯度超速离心法提取细胞膜的脂筏和非脂筏区蛋白,经Western blot检测Nox亚单位蛋白的表达,光泽精化学发光法动态测定细胞膜Nox的活性.结果 多巴胺受体激动剂fenoldopam明显减少gp91phox在正常对照组[(17±3.3)%]和高血压对照组[(20±3.4)%,P<0.05]细胞膜脂筏区域的表达,降低正常对照组p22phox[(15±2.0)%,P<0.05]、p67phox、rac1在脂筏区的表达,但不能减少高血压对照组p22phox、p67phox、rac1蛋白的表达;胆固醇耗竭剂β-CD减少正常对照组gp91phox、p22phox在脂筏区的表达,不能减少高血压对照组Nox亚单位的表达;高血压对照组Nox的基础活性是正常对照组的5倍.结论 高血压患者肾脏近曲小管细胞具有较高的Nox亚单位的活性,多巴胺受体和脂筏对Nox亚单位的抑制作用减弱.     

氢气对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡的抑制作用

目的探讨氢气(H2)饱和培养液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞凋亡的影响。方法人脐静脉内皮细胞株EA-hy926分为:ox-LDL组,ox-LDL+不同浓度H2组和正常对照组;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内ROS水平;Western blot检测NF-κB p65蛋白水平。结果 ox-LDL+H2组(氢浓度0.6 mmol/L)与ox-LDL组相比,细胞凋亡率明显降低[(2.48±0.21)%vs(4.01±0.39)%,P<0.01],细胞内ROS含量减少[(2.05±0.22)vs(5.32±1.04),P<0.01],NF-κB p65蛋白水平降低[(0.29±0.02)vs(0.66±0.07),P<0.01],且上述作用随H2浓度增加而增强。结论 H2饱和培养液可减少ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡,其机制可能与减少ROS含量和抑制NF-κB激活有关。     

Rab32对小鼠肝细胞系AML12细胞内脂质代谢的影响

目的 探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响.方法 常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组) ,利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组) ,正常细胞设为对照组.Western blot检测各组细胞中Rab32蛋白表达水平;尼罗红染色后,激光共聚焦显微镜观测各组细胞内的脂滴数量和面积;定量试剂盒检测各组细胞内甘油三酯及总胆固醇水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 与对照组比较,过表达组AML12细胞中Rab32蛋白表达水平显著上调,而Rab32敲除组细胞中Rab32蛋白表达水平显著下调(P＜ 0.01);过表达组AML12细胞内脂滴数量[过表达组vs对照组: (21.91 ±14.32) vs (33.89 ± 17.31) ,P＜ 0.01]及面积[过表达组vs对照组: (16.82 ± 14.37) μm2 vs (22.27 ±14.10) μm2,P＜ 0.01]显著减少,每毫克蛋白甘油三酯[过表达组vs对照组: (104.03 ± 12.28) nmol vs(130.94 ± 4.21) nmol,P＜ 0.01]及胆固醇水平[过表达组vs对照组: (46.92 ± 1.26) μg vs (81.11 ±0.65) μg,P＜ 0.01]显著降低;而Rab32敲除组细胞内脂滴数量[(58.23 ± 42.28) ]及面积[(53.31 ±36.33) μm2]较对照组显著增加(P＜ 0.01) ,其每毫克蛋白甘油三酯[(159.03 ± 8.85) nmol]及胆固醇水平[(93.38 ± 3.33) μg]显著增高(P＜ 0.01) .3组细胞凋亡水平差异无统计学意义(P＞ 0.05) .结论 Rab32促进小鼠肝细胞AML12胞内脂质代谢.     

狼疮肾炎病人尿蛋白刺激肾小管上皮细胞发生表型改变和Ⅰ型胶原的表达上调

目的 探讨狼疮性肾炎尿蛋白引起肾小管间质纤维化的发生机制.方法 收集初发狼疮性肾炎病人的尿液(6例)提纯总蛋白,体外与HK-2细胞培养不同时间(0、1、2、12、24、48 h),应用逆转录-聚合酶链式反应法检测HK-2细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达;应用Western印迹及间接免疫荧光法检测TGF-β1、COL Ⅰ及α-SMA的蛋白表达.结果 狼疮性肾炎尿蛋白可以刺激HK-2细胞TGF-β1、COL Ⅰ及α-SMA mRNA及蛋白表达上调[(0,48 h分别为TGF-β1 mRNA 0.39±0.03 vs 0.27±0.02(P＜0.01),TGF-β1蛋白0.37±0.03 vs 0.27±0.04,(P＜0.01);COL Ⅰ mRNA 0.38±0.02 vs 0.22±0.03,(P＜0.01),COLⅠ蛋白0.44±0.03 vs 0.19±0.02,(P＜0.01);α-SMA mRNA 0.66±0.04 vs 0.44±0.03,(P＜0.01),α-SMA蛋白0.43±0.02 vs 0.24±0.03,(P＜0.01)].结论 狼疮性肾炎尿蛋白诱导HK-2细胞发生表型转化及产生细胞外基质增多,可能是肾间质性纤维化的发生机制之一.     

阿司匹林抗动脉粥样硬化作用的机制探讨

目的 观察阿司匹林对动脉粥样硬化(AS)家兔血管壁核因子-κB(NF-κB)-DNA结合活性、环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达、AS斑块面积和血管内膜厚度的影响,探讨阿司匹林的抗AS作用机制.方法 36只雄性新西兰大耳白兔被随机分为正常对照组(NC)、高脂对照组(HC)和阿司匹林组(HC+A).实验结束时,分别用酶法、固相酶联免疫吸附实验、电泳移动迁移技术、免疫组化技术、形态学方法检测3组兔的血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平、主动脉组织中NF-κB-DNA结合活性、COX-2蛋白表达及各组主动脉新生内膜厚度和AS斑块面积.结果 HC与HC+A组的血脂和hs-CRP水平、NF-κB-DNA结合活性、COX-2蛋白表达、动脉新生内膜厚度和粥样斑块面积均明显大于NC组(P＜0.05～0.01);HC+A组的血脂水平与HC组相比差异无统计学意义(P＞0.05),但HC+A与HC组的hs-CRP水平[(5.14±0.32)μg/ml vs(9.39±0.79)μg/ml,P＜0.05]、NF-κB-DNA结合活性[(14.6±2.7)μg/ml vs(32.4±4.7)μg/ml,P＜0.05]、COX-2蛋白表达[(0.342±0.02 vs 0.572±0.061,P＜0.05)]、血管新生内膜厚度[(165±24)μm vs(337±64)μm(P＜0.05)]和AS斑块面积[(24.3±7.6)% vs(49.5±21.3)%,(P＜0.05)]相比差异有统计学意义.结论 阿司匹林可通过抑制NF-κB-DNA结合活性、降低hs-CRP水平、减弱COX-2蛋白表达而发挥抗AS作用.     

热休克预处理对大鼠心肌细胞凋亡和金属硫蛋白表达的影响

目的:探讨热休克预处理对大鼠心肌细胞凋亡和金属硫蛋白表达的影响.方法:将体外培养的大鼠心肌细胞随机分为3组:对照组(C组)、H2O2损伤组和热休克预处理组,检测心肌细胞的凋亡、心肌细胞Caspase-3活性,并用Western blotting检测线粒体中细胞色素C和金属硫蛋白的表达.结果:与对照组相比,H2O2损伤组心肌细胞凋亡数目增加(P＜0.01),Caspase-3活性明显增高(P＜0.01),线粒体中细胞色素C和金属硫蛋白的蛋白表达量明显增高(P＜0.01),而给予热休克预处理的心肌细胞的凋亡数量和坏死细胞数较H2 O2损伤组明显下降(P＜0.01),参与细胞凋亡执行的Caspase-3活性明显降低(P＜0.01),细胞色素C和金属硫蛋白的蛋白表达量持续升高(P＜0.01).结论:热休克预处理能够抑制心肌细胞凋亡,增加对心肌起保护作用的金属硫蛋白的表达,减少线粒体细胞色素C的释放,从而对心肌细胞起保护性作用.     

亚临床甲状腺功能减退症患者血浆对氧磷酯酶1活性与氧化应激状态的评价

目的 评价亚临床甲状腺功能减退症(subclinical hypothyroidism,SCH)患者血浆对氧磷酯酶1(paraoxonase 1,PON1)活性及氧化应激状态,以及PON1与氧化应激的关系.方法 测定56例亚临床甲减患者与48例年龄相匹配的健康体检者血浆PON1活性、血脂水平、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)含量、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力,并进行相关性分析.结果 亚临床甲减患者血浆PONl[(142 4±56)kU/L]和SOD[(83.2±26.1)U/ml]明显低于对照组PON1[(167±60)kU/L,P<0.01]和SOD[(93.1±28.2)U/ml,P<0.05];MDA[(14.10 4±3.01)μmol/L]和ox-LDL[(596.2±68.1)μg/L]的水平明显高于健康对照组MDA[(10.25±3.34)μmol/L,P<0.01]和ox-LDL[(467.2±60.1)μg/L,P<0.01].亚临床甲减患者血浆PON1活性与SOD呈显著正相关(r=0.302,P<0.05),与ox-LDL(r=-0.398,P<0.01)及MDA(r=-0.401,P<0.01)呈显著负相关.结论 亚临床甲减患者活性氧(ROS)产生的增加导致氧化环境的改变,可能使血浆PON1活性显著降低.PON1可能通过降低抗氧化能力机制参与了亚临床甲状腺功能减退症的病理、生理过程.     

急性有机磷农药中毒患者血浆脂质过氧化产物水平及PON1活性研究

目的研究急性有机磷农药中毒患者血浆中脂质过氧化产物（ox-LDL和LPO）水平及PON1活性的变化。方法测定34例急性有机磷农药中毒患者（病例组）与33例健康体检者（对照组）血浆中ox-LDL、LPO水平与PON1活性,并进行对比分析及相关性研究。结果急性有机磷农药中毒患者血浆中ox-LDL（[701.3±298.2）μg/L]与LPO（[14.20±5.36）nmol/ml]水平均较对照组[ox-LDL（458.3±171.2）μg/L,LPO（8.33±3.76nmol/ml）]显著增高（P〈0.05）,而急性有机磷农药中毒患者血浆PON1活性（[79.6±28.4）U/ml]则显著低于对照组（[135.1±57.5）U/ml],两组间差异具有统计学意义（P〈0.05）。相关性分析发现,急性有机磷农药中毒患者血浆PON1活性与ox-LDL和LPO呈负相关性（r=-0.368,P〈0.05;r=-0.597,P〈0.01）。结论急性有机磷农药中毒患者体内ox-LDL及LPO浓度显著升高,而PON1活性显著下降,提示患者体内氧化/抗氧化体系失衡,易于发生脂质过氧化损伤,可能加速病程的进展。     

SIRT1激动剂通过降低ACAT1表达抑制平滑肌泡沫细胞形成

目的 探讨沉默信息调节因子1 (silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cell,VSMC)泡沫化的作用和相关的分子机制.方法 用组织贴块法体外培养原代VSMC,用80μg/mL ox-LDL刺激VSMC诱导泡沫细胞形成.检测SIRT1在ox-LDL刺激不同时间(24、48、72 h)的表达变化.SIRT1的活性调控分别应用SIRT1激动剂(SRT1720,SRT,1μmol/L)和抑制剂(nicotinamide,Nic,100 μmoL/L)进行干预.干预24 h后采用Western blot检测VSMC过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(A-cholesterol acyhransferase 1,ACAT1)的蛋白表达,干预48 h后采用油红O染色检测细胞内脂质沉积和泡沫细胞形成情况.应用PPARγ激动剂(Rosiglitazone,RSG,50 μmol/L)和抑制剂(GW9662,10 μmol/L)调控PPARγ的表达,Western blot检测VSMC中ACAT1的表达.结果 ①ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中,SIRT1蛋白表达在48 h降低约47％ (P ＜0.01);油红O染色显示,SRT可以抑制VSMC泡沫细胞形成,而Nic可逆转SRT的抑制作用;②ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中ACAT1的表达显著增加[(2.77±0.70),P＜0.01],SIRT1激动剂SRT可显著抑制ACAT1的表达[(0.90±0.27),P＜0.01],而SIRT1抑制剂Nic可阻断这一作用,升高ACAT1的表达[(2.25±0.37),P＜0.05];③ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中PPARγ的表达减少[(0.73±0.12),P＜0.05],SIRT1激动剂SRT可上调VSMC中PPARγ的表达[(0.98±0.16),P＜0.05],SIRT1抑制剂Nic抑制PPARγ的表达[(0.47 ±0.13),P＜0.01];④PPARγγ激动剂RSG可抑制ACAT1的表达[(0.73±0.09),P＜0.01],而PPARγ抑制剂GW9662则上调ACAT1表达[(1.68±0.09),P＜0.01].结论 SIRT1通过上调VSMC中PPARγ表达而抑制ACAT1表达,从而抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫样变.     

心钠素对高血压大鼠动脉平滑肌细胞离子泵活性和基因表达的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞膜(ASMC)Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α,亚单位、Ca+-ATP)酶亚型1(PMCA1)mRNA表达的影响.方法 对SHR大鼠,予不同浓度ANP和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)干预,通过放射免疫、生化酶学和逆转录-聚合酶链反应等方法,检测ASMC的ANP、AngⅡ含量,ATP酶活性及其mRNA表达变化并设WKY大鼠为对照.结果 SHR大鼠ANP含量比WKY大鼠下降[(7.3±2.4)pg·10-6比(19.3±3.3) Pg·10-6,P＜0.01],Ang Ⅱ含量增加[(57±4)pg·10-6比(44±4) pg·10-6,P＜0.01],Na+,K+-ATP酶、Ca2+-A11)酶活性及Na+,K+-ATP酶α1亚单位、PMCA1 mRNA表达均显著降低[Na+,K+-ATP:(4.3±0.8) μmol·h-1·mg-1比(5.3±1.0) μmol·h-1·mg-1,Ca2+-ATP酶:(3.2±0.7)μmol·h-1·mg-1比(4.5±0.7) μmol·h-1·mg-1,α1亚单位:0.524±0.025比0.704±0.116,PMCA1:0.193±0.030比0.547±0.045](P＜0.05～P＜0.01).ANP可增加SHR大鼠Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α1,亚单位及PMCA1 mRNA表达(均P＜0.01),Ang Ⅱ则抑制Ca2+-ATP酶活性和PMCA1 mRNA表达(P＜0.05～P＜0.01),仅1×10-7 mol/L AngⅡ抑制Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性及其mRNA表达的效应.ANP也能拮抗AngⅡ对WKY大鼠Ca2+-ATP酶活性及PMCA1mRNA表达的效应,对Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达无影响(P＞0.05).结论 高血压大鼠ASMC两种ATP酶活性和基因表达下降与局部ANP和AngⅡ分泌异常有关,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性和基因表达的效应.     

NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法H2O2 构建氧化应激模型,将实验分为正常 组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂（DPI）组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）改变, Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果H2O2 对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H2O2 700 μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%（P<0.05）,ROS升高2倍（P<0.05）。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20% （P<0.05）,ROS下降至正常水平（P<0.05）。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H2O2 浓度逐渐升高,而抑制 剂组表达接近正常水平。结论H2O2 可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。     

糖化血清蛋白在预测下肢创伤性骨折病人近期预后中的价值

目的:探讨糖化血清蛋白（GSP）在预测下肢创伤性骨折病人近期预后中的价值。方法:选取129例下肢创伤性骨折病人（骨折组）,根据病人预后分为2个亚组,有效组104例,无效组25例;另选60名健康志愿者作为对照组。采集3组的血清标本,检测GSP、空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和降钙素原（PCT）水平,Spearman相关系数分析GSP与炎症介质的相关性。以GSP ≥ 400 μmol/L为临界值,将129例病人分为2个亚组,其中GSP ≥ 400 μmol/L组45例,GSP<400 μmol/L组84例,比较2组术后并发症发生率。结果:骨折组GSP水平为（451.4±12.6）μmol/L,明显高于对照组的（159.7±10.8）μmol/L （P<0.01）,3项血糖指标亦均高于对照组（P<0.05~P<0.01）。无效组GSP水平为（673.2±24.8）μmol/L,有效组为（299.0±7.1）μmol/L,有效组GSP水平显著低于无效组（P<0.01）,HbA1c水平低于无效组（P<0.05）,但FPG和2hPG差异均无统计学意义（P>0.05）。有效组和无效组病人炎症介质水平均明显高于对照组（P<0.01）;无效组病人炎症介质水平显著高于有效组（P<0.01）。骨折病人GSP与hs-CRP、TNF-α、IL-6、PCT均呈正相关关系（P<0.05）。GSP ≥ 400 μmol/L组术后并发症发生率为24.44%,明显高于GSP<400 μmol/L组的4.76%（P<0.01）。结论:下肢创伤性骨折病人存在GSP水平的改变,且其改变与IL-6、TNF-α等炎症因子及术后并发症密切相关,对评估预后有一定的临床价值。     

可溶性环氧化合物水解酶抑制剂对脂肪细胞脂质代谢及分泌功能的影响

目的 观察可溶性环氧化合物水解酶抑制剂(tAUCB)对脂肪细胞摄取与降解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及分泌功能的影响.方法 分别用1、10、50和100μmol/L tAUCB干预已刺激分化成熟的脂肪细胞24 h,0 μmol/L tAUCB干预作为空白对照组,分别在加人tAUCB前1 h加入过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂(GW9662)5μmol/L.采用125Ⅰ放射配基法测定脂肪细胞对ox-LDL的摄取与降解;实时定量-PCR和Western印迹分别测定脂肪细胞PPARγ和CD36mRNA及蛋白的表达;ELISA检测脂肪细胞培养液中脂联素(ADP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 tAUCB呈剂量依赖性地促进ox-LDL的摄取与降解,tAUCB(10、50、100 μmol/L)干预,其摄取ox-LDL分别为(35.6±1.1)ng/mg、(39.8±1.6)ng/mg、(42.6±1.4)ng/mg;降解量为(2879±54)ng/mg、(3082±56)ng/mg、(3226±68)ng/mg,显著高于空白对照组[(28.9±1.2)ng/mg、(2791±54),ng/mg均P＜0.05];加入GW9662后,其ox-LDL摄取量分别下降为(30.6±1.3)ng/mg、(31.1±1.7)ng/mg、(32.1±1.8)ng/mg.降解量下降为(2788±53)ng/mg,(2824±70)ng/mg,(2874±70)ng/mg,与单独加入相应浓度tAUCB组相比差异有统计学意义(P＜0.05).tAUCB呈剂量依赖性地增加脂肪细胞CD36和PPARγmRNA及蛋白的表达,并且降低脂肪细胞分泌TNF-α,增加抗炎因子ADP的浓度,而GW9662明显抑制tAUCB的上述作用.结论 tAUCB可通过上调PPARγ促进脂肪细胞CD36的表达,从而增加细胞对ox-LDL的摄取与降解,同时可能通过上调PPARγ的表达而调节ADP,TNF-α等脂肪炎症因子的分泌.

Abstract：

Objective To observe the effects of soluble epoxide hydrolase inhibitors-tAUCB on the uptake and degradation of ox-LDL in adipocytes. Methods 3T3-L1 preadipocytes were induced into differentiation and maturation. After a 24-hour starvation, the cells were stimulated with 1O0 ng/ml LPS and then tAUCB at various concentrations(0-100 μmol/L)were added for 24 h, or preincubated with the PPARγ (peroxisome proliferators activated receptor gamma) antagonist GW9662 (5 μmol/L). And the 0 μ mol/LtAUCB-treated group was taken as the blank control group. Then the uptake and degradation of ox-LDL in cells were measured by radioligand assay. The mRNA expressions of PPARγ and CD36 were detected by real-time PCR ( polymerase chain reaction). And the intracellular levels of protein expression of PPARγand CD36 were detected by Western blot. While ADP and TNF-α in supernatant were detected by ELISA. Results tAUCB could dose-dependently increase the uptake and degradation of ox-LDL in adipocytes. When stimulated with 10, 50, 1O0 μmol/L tAUCB, the uptake levels of ox-LDL were (35. 6 ±1.1 ) ng/mg, (39. 8 ± 1.6) ng/mg, (42. 6 ± 1.4) ng/mg cell protein and the degradation levels of ox-LDL (2879 ±54)ng/mg, (3082 ± 56)ng/mg, (3226 ± 68 )ng/mg cell protein. And they were significantly higher than those of the control group ( 28.9 ± 1.2) ng/mg、 (2791 ± 54) ng/mg respectively ( all P ＜ 0.05 ).However, after preincubation of GW9662, the uptake of ox-LDL were decreased to (30.6 ± 1.3) ng/mg,(31. 1 ± 1.7)ng/mg, (32. 1 ± 1.8 ) ng/mg cell protein whereas the degradation of ox-LDL decreased to (2788 ± 53 ) ng/mg, ( 2824 ± 70 ) ng/mg, ( 2874 ± 70) ng/mg cell protein. And the difference was statistically significant when it was compared with the corresponding tAUCB-treated group. With the rising concentration of tAUCB, tAUCB could dose-dependently increase the mRNA and protein expression of CD36 and PPARγ. tAUCB could dose-dependently decrease the levels of TNF-α and increase the levels of ADP in adipocytes. GW9662 could significantly inhibit those effects of tAUCB and reduce the uptake and degradation of ox-LDL and the expression of PPARγand CD36 in adipocytes. Conclusion tAUCB can upregulate the PPARγ expression in adipocytes and promote the uptake and degradation of ox-LDL in adipocytes via PPARγ-CD36 pathway. Meanwhile, the levels of ADP and TNF-α may be mediated through the activation of PPARγ.     

Studies on arsenic trioxide induced mice melanoma Cloundman S91 cell apoptosis

INTRODUCTION ArsenichasalonghistoryofuseinChineseandwesternmedicine,buthasbeenoutofuseinthe mid20thcenturybecauseoftheunacceptablesideef fects.There emergenceofarsenictrioxideinclinicaluse isduelargelytopurificationofthiscompoundfromtra ditionalmixturesandtheAs2O3definitionofeffective,low doseregimensforthetreatmentofacutepromyelo cyticleukemia(APL)[1].Recently,theapoptosis As2O3inducedhasbeenobservedinmanycancercell lines,includingesophagedcarcinoma,gastriccancer,neuroblastomalymphoid…