钙离子在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞自噬反应中的作用

目的：采用钙释放抑制剂联合化疗药物作用于宫颈癌HeLa细胞,探讨钙离子（Ca²⁺）在肿瘤细胞自噬反应中的作用,为辅助肿瘤治疗和药物研发提供依据。方法：选择处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,随机分为对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂联合2-APB组（联合组）。MTT法检测HeLa细胞生存率,钙离子荧光探针法检测HeLa细胞胞浆和线粒体中游离Ca²⁺水平,共聚焦显微镜检测HeLa细胞中自噬相关蛋白LC3和P62的共定位情况。结果：MTT法检测,与对照组比较,顺铂组和联合组HeLa细胞生存率明显降低（P<0.05）;与顺铂组比较,联合组HeLa细胞生存率明显升高（P<0.05）。钙离子荧光探针法检测,与顺铂组比较,联合组细胞株胞浆和线粒体中游离Ca²⁺水平及LC3和P62蛋白共定位荧光强度明显降低。结论：化疗药物可诱导肿瘤细胞发生自噬,联合钙释放抑制剂给药可以降低肿瘤细胞自噬水平,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

大蒜素联合顺铂对大鼠膀胱肿瘤生长抑制和诱导凋亡的实验研究

目的:评价大蒜素联合顺铂治疗SD大鼠膀胱肿瘤的效果,探讨其作用机制.方法:膀胱灌注N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导建立SD大鼠膀胱肿瘤模型,于第14周对5组荷瘤大鼠分别腹腔注射牛理盐水,顺铂,不同浓度大蒜素,顺铂 大蒜素.每次注射0.2ml,隔日1次.共7次,其间观察实验动物生存状态.全部注射完毕后处死大鼠,称取膀胱总重量,对肿瘤组织进行常规石蜡切片,HE染色,光镜观察,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:生理盐水组、不同浓度大蒜素组、顺铂 大蒜素组的大鼠体重均随鼠龄的增长而增加,而顺铂组大鼠在停药后随鼠龄的增长体重明显降低,与其他各组比较,差异显著.顺铂 大蒜素组大鼠膀胱的总重量显著小于其他各组.TUNEL法原位检测发现各组均出现不同程度的肿瘤细胞凋亡,大蒜素 顺铂组尤为明显.结论:大蒜素联合顺铂可共同诱导细胞凋亡发挥协同效应,抑制膀胱肿瘤的生长.并且能改善大鼠的生存状态.     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

人胃癌细胞BGC-823顺铂耐受后hMSH2蛋白表达下降

[目的 ]初步探讨耐药性产生与错配修复蛋白hMSH2表达的关系 ,以证明其功能丧失是肿瘤细胞产生耐药性的机制之一。[方法 ]1.逐步递增顺铂浓度、间歇作用体外诱导法 ,诱导人胃癌细胞株BGC - 82 3产生顺铂耐受性 ;2 .MTT法检测耐药指数并用免疫细胞化学法检测耐受前后肿瘤细胞表达耐药相关蛋白LRP、GST -π的差异 ;3.免疫细胞化学法检测耐受前后肿瘤细胞表达hMSH2蛋白的差异。[结果 ]与BGC - 82 3相比 ,经耐药诱导所产生的BGC - 82 3/cDDP细胞出现了对顺铂的耐受 ,耐药指数为 3.93;且LRP和GST -π蛋白表达增强 (P <0 .0 1) ,hMSH 2蛋白的表达明显减弱 (P <0 .0 1)。[结论 ]错配修复基因hMSH2蛋白功能降低导致的肿瘤细胞基因不稳定性可能是肿瘤细胞耐药性产生的原因之一。     

紫杉醇联合顺铂治疗癌症的护理

紫杉醇是从紫杉树中提取的萜烯植物制品,属新型广谱高活性抗癌药,其独特的作用机制是促进微管聚合并稳定微管结构,从而诱导肿瘤细胞凋亡.[1]顺铂为无机铂的金属络合物,属于细胞周期非特异性药物,可抑制DNA合成,它们的联合应用有协同作用,能提高疗效.我科对89例癌症患者采用紫杉醇与顺铂联合治疗,取得了良好的效果,并对其治疗护理如下.     

顺铂通过活性氧协同抗hDR5抗体诱导食管癌细胞凋亡

目的：探讨顺铂与抗死亡受体5（DR5）激动性抗体mDRA-6联合应用对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及作用机制.方法：顺铂、抗体mDRA-6单独或联合作用于食管癌细胞,用流式细胞术检测药物的细胞毒作用、食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡、细胞内活性氧水平、以及线粒体膜电位的变化;在荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化及DR5表达.结果：顺铂和抗体mDRA-6对食管癌细胞均具有细胞毒作用,并具有剂量依赖性,而且顺铂明显提高食管癌细胞对抗体mDRA-6细胞毒的敏感性.顺铂、抗体mDRA-6单独或联合应用均导致食管癌细胞呈现典型细胞凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,mDRA-6和顺铂均诱导食管癌细胞凋亡,而且顺铂明显提高细胞对mDRA-6诱导细胞凋亡的敏感性;顺铂增强食管癌细胞表面及胞内的DR5表达,提高细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位.结论：顺铂主要通过活性氧激活细胞内线粒体细胞凋亡信号传导途径以及增强DR5表达,与抗体mDRA-6联合协同诱导食管癌细胞凋亡.研究结果对进一步探讨抗DR5激动性抗体及TRAIL的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义.     

卡铂和KN-93可抑制胶质瘤和黑色素瘤对Fas介导的细胞凋亡的耐受

目的 研究调控肿瘤细胞对Fas诱导细胞凋亡耐受的分子机制,探求神经胶质瘤和黑色素瘤中能克服FasL或CH-11耐受的机制.方法 检测16个肿瘤细胞株对CH-11诱导的细胞凋亡的敏感性,然后选取2个敏感的和2个耐受的肿瘤细胞株,分析它们的Fas介导的死亡诱导信号复合物(DISC).用CaMKⅡ抑制物KN-93和化疗药物卡铂处理耐受细胞并检测它们对CH-11耐受肿瘤细胞的作用.结果 敏感肿瘤细胞中,细胞凋亡起始的caspase-8向DISC募集,caspase-8在DISC中被激活,产生其活性形式,从而激活死亡信号转导途径下游的效应蛋白酶,如caspase-3和DNA断裂因子45.在CH-11耐受细胞中,DISC中发现了c-FLIP蛋白,从而抑制caspase-8裂解.在耐受细胞中,c-FLIP蛋白表达和磷酸化、CaMKⅡ酶的活性均增高.用KN-93和卡铂对耐受细胞处理,减少了c-FLIP蛋白的表达,抑制c-FLIP的磷酸化,恢复了CH-11的敏感性.结论 KN-93和卡铂抑制肿瘤细胞c-FLIP蛋白表达及磷酸化,修复CH-11诱导的细胞凋亡,可能为恶性肿瘤的治疗提供新组合治疗策略.     

理冲生髓饮有效组分对卵巢癌干细胞调控相关基因及顺铂耐药性的影响及其作用机制研究

背景　本课题组前期对理冲生髓饮有效组分进行了抗卵巢癌的研究,结果表明中药复方可以抑制卵巢癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,减少癌细胞黏附,抑制血管新生,由此提出理冲生髓饮有效组分可以逆转卵巢癌干细胞耐药这一假说。目的　探讨理冲生髓饮有效组分对卵巢癌干细胞调控相关基因及顺铂耐药性影响及其作用机制。方法　2017年10月—2018年4月,选取BALB/C裸鼠48只,构建卵巢癌SKOV3荷瘤鼠模型,将裸鼠分为空白组（给予0.9%氯化钠溶液,12只）、顺铂组（给予顺铂,12只）、中药组（给予理冲生髓饮有效组分混合物,12只）、中药+顺铂组（除给予理冲生髓饮有效组分混合物外同时给予顺铂,12只）。于造模第8天开始给药,共给药18 d。最终空白组死亡4只裸鼠,顺铂组死亡3只裸鼠,中药组死亡1只裸鼠,中药+顺铂组死亡1只裸鼠。绘制各组肿瘤生长曲线。给药结束后处死裸鼠,制备肿瘤组织,HE染色观察肿瘤病理学特征,免疫荧光染色观察肿瘤CD44+、CD117+、CD44、CD117、CD133细胞情况,PCR检测肿瘤Nanog、Oct4、ABCC1 mRNA表达水平,免疫组化法检测肿瘤Nanog、Oct4、ABCC1表达水平。结果　各组在给药第1~7天肿瘤生长速度均逐渐增快;在给药第7~10天中药组和中药+顺铂组肿瘤生长速度明显变慢,而空白组和顺铂组肿瘤生长速度较快;中药组和中药+顺铂组肿瘤在第13天生长体积达到高峰,之后逐渐下降,而空白组和顺铂组肿瘤生长速度仍逐渐增快。顺铂组肿瘤细胞数目明显减少,体积缩小,核分裂象可见,可见大量肿瘤细胞凋亡,间质纤维组织明显增生;中药组肿瘤细胞数目减少,肿瘤组织呈较明显的片状坏死,间质中纤维组织和纤维细胞增生;中药+顺铂组肿瘤细胞数目明显减少,可见大量肿瘤细胞凋亡,间质纤维组织明显增生。肿瘤中可见少量CD44+、CD117+、CD133、CD44、CD117细胞。顺铂组、中药组、中药+顺铂组肿瘤Nanog、Oct4 mRNA表达水平高于空白组（P<0.05）;中药组肿瘤Nanog mRNA表达水平高于顺铂组、中药+顺铂组（P<0.05）;中药+顺铂组肿瘤ABCC1 mRNA表达水平低于空白组、顺铂组、中药组（P<0.05）。顺铂组、中药+顺铂组肿瘤Nanog表达水平低于空白组（P<0.05）;中药组肿瘤Oct4表达水平低于空白组、顺铂组（P<0.05）;中药组、中药+顺铂组肿瘤ABCC1表达水平低于空白组、顺铂组（P<0.05）。结论　理冲生髓饮有效组分可通过下调ABCC1及其mRNA表达水平,增高肿瘤细胞中药物浓度,还可通过影响卵巢癌干细胞特性和顺铂敏感性,从而逆转卵巢癌对顺铂的耐药性。     

维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

半乳糖凝集素3与恶性肿瘤顺铂耐药相关性的研究进展

研究表明,肿瘤细胞中半乳糖凝集素3的高表达可能是导致肿瘤细胞对顺铂耐药的原因之一。本文就顺铂处理后半乳糖凝集素3在肿瘤细胞中表达的变化及半乳糖凝集素3与顺铂耐药的关系及其可能的相关机制进行综述,以进一步指导恶性肿瘤尤其是晚期及复发恶性肿瘤的临床治疗。     

维生素C增加入宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用，流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长，将肿瘤细胞阻滞在G0／G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用，细胞生长抑制率显著提高，凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

氨磷汀对顺铂和环磷酰胺诱导正常细胞毒性的保护作用

目的 :评价氨磷汀对顺铂和环磷酰胺诱导正常细胞毒性的保护作用及对化疗药物抗肿瘤作用的影响。方法 :用MTT法测定顺铂对体外培养的Hela、Ho 8910肿瘤细胞的抑制作用 ,实验组加顺铂前 3 0min经氨磷汀处理 ,对照组则不需处理 ,比较两组细胞增殖的抑瘤率。同时观察注射顺铂、环磷酰胺前 3 0min注射氨磷汀与不注射组小鼠骨髓有核细胞的微核率。结果 :用 60 0mg·L- 1 氨磷汀在体外加顺铂前 3 0min加入Hela、Ho 8910肿瘤细胞 ,和对照组比较两组的肿瘤细胞增殖没有差异(P >0 .0 5 ) ;而体内实验得到 ,顺铂、环磷酰胺腹腔注射正常小鼠前 3 0min注射氨磷汀与不注射氨磷汀比较 ,单独用顺铂、环磷酰胺的小鼠骨髓有核红细胞微核率高于氨磷汀保护组 (P <0 .0 5 )。结论 :氨磷汀腹腔注射正常小鼠可明显降低顺铂、环磷酰胺引起正常小鼠的细胞毒性 ,同时氨磷汀不影响顺铂对Hela、Ho 8910肿瘤细胞的化疗疗效。     

顺铂通过调控P53及P21表达水平影响HepG2细胞衰老及周期阻滞(英文)

目的化疗药物能够通过诱导肿瘤细胞衰老从而发挥治疗效果。顺铂作为最常用的化疗药物能否诱导肝癌细胞发生加速性衰老目前尚不清楚。方法使用MTT法和克隆形成试验检测不同剂量顺铂对HepG2细胞增殖的影响;分别用流式细胞仪及衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测细胞周期及衰老情况;RT-PCR检测TP53、P21及P19基因的mRNA表达水平,Western blotting检测P53和P21蛋白表达水平。结果顺铂能够诱导HepG2细胞出现不可逆的生长停滞及细胞周期阻滞。2.0μg/ml顺铂作用于HepG2后衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性,并呈现时间依赖性。在顺铂诱导衰老过程中,P19基因表达水平升高,在诱导48 h后达到峰值后逐渐下降,而P53和P21表达水平则持续升高。结论本研究提示顺铂能够诱导肝癌细胞出现衰老样表型,这一结果为进一步探讨其抗肝癌机制提供了基础。     

转录因子与顺铂耐药关系的研究进展

顺铂是治疗实体肿瘤的常用药物之一,但肿瘤细胞对顺铂的耐药是目前肿瘤治疗中遇到的一大难题。近年来,随着顺铂耐药分子机制研究的深入,已发现一些转录因子如p53/p73、c-Myc、YB-1等与顺铂耐药相关。本文综述了转录因子与顺铂耐药的研究进展。     

七氟醚联合顺铂激活IP3R-1依赖的人神经母细胞瘤细胞凋亡

目的 探讨吸入七氟醚对低浓度顺铂预处理的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖活性的影响,并讨论相关机制。方法 建立低浓度顺铂预处理细胞模型,噻唑蓝比色法检测不同浓度梯度七氟醚对SH-SY5Y细胞增殖活性的影响,利用Western blotting检测Caspase-3和LC3Ⅱ蛋白表达,利用钙成像技术分析细胞内钙离子浓度变化。结果 低浓度顺铂预处理后,0.6%七氟醚对SH-SY5Y细胞增殖活性未产生影响,但可诱导细胞LC3-Ⅱ表达增加,而1.7%七氟醚显著抑制SH-SY5Y细胞增殖活性(P<0.01),诱导LC3-Ⅱ和Caspase-3表达增加(P<0.01),并且增加胞内钙离子浓度(P<0.01);当部分干扰IP₃R-1表达后,1.7%七氟醚诱发的LC3-Ⅱ和Caspase-3表达减少(P <0.05)。结论 1.7%七氟醚诱导低浓度顺铂预处理SH-SY5Y增殖活性的降低,可能与IP₃R-1介导胞内钙离子浓度变化致细胞凋亡增加以及自噬水平增强有关。     

未折叠蛋白反应通过自噬抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡

目的：研究未折叠蛋白反应对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法：在采用二硫苏糖醇和衣霉素诱导未折叠蛋白反应的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析未折叠蛋白反应对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响及其机制。结果：二硫苏糖醇和衣霉素预处理促进顺铂诱导的自噬反应并抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡,抑制自噬反应明显削弱二硫苏糖醇和衣霉素预处理对顺铂作用下肝癌细胞的保护作用。结论：未折叠蛋白反应能够通过促进自噬抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。     

基于UHPLC/Q-TOF MS联用技术的顺铂肾毒性代谢组学研究

目的 构建顺铂诱导的急性肾损伤小鼠模型,利用代谢组学方法,筛选顺铂诱导急性肾损伤的潜在生物学标志物,进一步探索其可能形成机制。方法 通过对小鼠腹腔注射顺铂溶液,建立急性肾损伤的实验动物模型;利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UHPLC/Q-TOF MS)技术对健康对照组及急性肾损伤模型组的血清进行代谢轮廓分析,通过多元统计分析方法对两组间的数据进行分析,筛选顺铂诱导小鼠急性肾损伤的潜在生物学标志物。结果 主成分分析结果表明,模型组与对照组有明显的分离趋势,显示小鼠血清的内源性代谢物发生了较为显著地变化,进一步分析筛选,得到40种顺铂诱导急性肾损伤的差异代谢物,涉及氨基酸代谢、脂肪代谢、糖类代谢、三羧酸循环等多种代谢途径。结论 应用代谢组学的方法可以初步筛选顺铂诱导急性肾损伤的差异代谢物,并对其涉及的生物通路进行归属,初步探索顺铂肾毒性的形成机制。     

枸杞多糖对顺铂所致人胚肾细胞毒性的拮抗作用

目的 研究枸杞多糖(LBP)对顺铂所致人胚肾细胞(HEK293)毒性的保护作用,并探讨其可能的机制.方法 体外培养HEK293,将细胞分组,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察LBP、顺铂对HEK293细胞生长的影响及LBP对顺铂所致细胞毒性的保护作用.硫代巴比妥酸TBA法检测各组的细胞MDA浓度.比色法观察LBP对顺铂诱导细胞内谷胱甘肽耗竭的影响.结果 顺铂能使细胞内MDA浓度明显升高,细胞活性降低,细胞死亡率升高;加入LBP后,在一定范围内MDA浓度明显降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低.结论 LBP对顺铂诱导的HEK293细胞损伤具有保护作用,其机制可能与LBP强抗氧化功能、淬灭自由基的功能有关.     

顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用

目的:观察顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法:不同浓度紫杉醇(0、0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml和5μg/ml)作用于SHG-44细胞,MTT法检测顺铂对SHG-44细胞的增殖抑制作用;克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化。结果:顺铂有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,顺铂可提高3 Gy、6 Gy照射24 h后SHG-44细胞的凋亡率。结论:顺铂对人胶质瘤SH-44细胞具有杀伤及放射增敏作用。其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增加其杀伤肿瘤作用。