miR-152-5p对肝癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制

目的 探讨miR-152-5p对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 采用RT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞HepG2中miR-152-5p差异表达。将HepG2细胞系进行脂质体转染并分为：NC mimics组、miR-152-5p mimics、NC inhibitor组和miR-152-5p inhibitor组,采用RT-PCR检测细胞中miR-152-5p的表达水平,采用CCK-8法和EdU法检测各组细胞的活力及增殖能力,利用流式细胞术及Western blotting检测各组细胞凋亡率以及细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3的表达水平。HepG2细胞系进行脂质体转染并分为：NC inhibitor组、miR-152-5p inhibitor组、miR-152-5p inhibitor+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)组,应用Western blotting、EdU法和流式细胞术检测细胞PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K(p-PI3K/PI3K)、AKT(p-AKT/AKT)的磷酸化水平、增殖...     

CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的 探讨CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响.方法 构建shRNA CD98载体转染至B16-F10细胞,将细胞随机分为3组:Con-trol 组、shRNA-NC组、CD98-shRNA3组进行后续实验.克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Tran-swell 检测细胞侵袭;Western blot 检测 CD98、Ki67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达水平.结果 与Control组比较,CD98-shRNA3组CD98蛋白表达水平降低(P＜0.05),克隆形成率降低(P＜0.05),Ki67、PCNA蛋白表达水平降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3值升高(P＜0.05),侵袭细胞数降低(P＜0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT值降低(P＜0.05).结论 沉默CD98可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制黑色素瘤B16-F10细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡.     

吴茱萸碱抑制PI3K/AKT通路诱导小细胞肺癌H1688和H446细胞凋亡

目的 探讨PI3 K/AKT通路在吴茱萸碱(evodiamine,EVO)诱导小细胞肺癌H1688和H446细胞凋亡中的作用.方法 分别以不同浓度(1、5、20 μmol/L)和不同作用时间(3、6、12、24、48 h)的EVO处理H1688和H446细胞,Western blot检测p-AKT的表达水平.以EVO分别作用于经过PI3 K/AKT通路激活剂IGF-1或抑制剂LY294002预处理后的H1688和H446细胞,Western blot检测p-AKT蛋白的表达.将EVO作用于IGF-1预处理的H1688细胞后,Annexin-V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达水平.以不同浓度的EVO处理H1688细胞,Western blot检测t-AKT、PTEN蛋白表达,RT-PCR检测AKT mRNA表达.结果 与对照组相比,不同浓度和不同作用时间的EVO处理后H1688和H446细胞中p-AKT表达水平下降(P＜0.05).而IGF-1可减弱EVO下调H1688和H446细胞p-AKT的作用(P＜0.05),并降低EVO在H1688中的增殖抑制和凋亡诱导作用.EVO与LY294002下调p-AKT蛋白的效果差异无统计学意义(P＞0.05).EVO对H1688细胞t-AKT蛋白和AKT mRNA的表达无影响,EVO可明显上调PTEN的表达(P＜0.05).结论 抑制PI3 K/AKT通路活性是EVO诱导H1688和H446细胞凋亡的重要机制之一.     

miR-15b通过靶向LPAR3抑制子宫内膜癌细胞PI3K/AKT信号通路活化

【摘要】 目的 探讨miR-15b靶向溶血磷脂酸受体3（LPAR3）调控PI3K/AKT信号通路对子宫内膜癌细胞（HEC-1B）增殖的影响。方法 生物信息学分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与LPAR3之间的靶向结合作用;将HEC-1B细胞分为NC组、miR-15b mimic组、miR-15b inhibitor组、siRNA-LPAR3组和miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组,实时荧光定量PCR和Western blot检测miR 15b、LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（AKT）在HEC 1B和人子宫内膜上皮细胞（HEEC）中的表达水平;噻唑蓝（MTT）法检测HEC-1B的细胞活力;流式细胞术检测HEC-1B的细胞周期分布;Transwell测定法检测HEC-1B的细胞迁移和侵袭能力。结果 LPAR3为miR-15b的靶基因;与HEEC组相比,HEC-1B组中LPAR3、PI3K和AKT mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而miR-15b表达显著降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组细胞PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组细胞LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,抑制miR-15b的表达后,上述现象被逆转(P＜0.05)。与miR-15b inhibitor组相比,miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论 miR-15b可能通过靶向LPAR3抑制HEC-1B的PI3K/AKT信号通路活化,从而抑制HEC-1B细胞的增殖。     

PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响

目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达。结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力。     

PI3K/AKT抑制剂联合放射对CNE-1细胞Ku70、Ku80表达的影响

目的:分析体外研究磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号转导通路抑制剂(LY294002)联合放射对鼻咽癌细胞CNE-1Ku70、Ku80mRNA表达的影响,探讨PI3K/AKT抑制剂影响放射敏感性的机制。方法:体外培养人鼻咽癌细胞CNE-1,取指数生长期细胞分为四个实验组:对照组(A)、单纯放射组(B)、单纯药物组(C)、加药联合放射组(D);RT-PCR检测各组Ku70、Ku80mRNA的表达水平。结果:RT-PCR结果显示,放射后Ku70mRNA的表达增高,而抑制剂LY294002单纯作用CNE-1细胞后Ku70mRNA的表达水平无改变,但联合放疗后,可以降低放射后的Ku70mRNA的表达水平(P0.05);本实验中Ku80mRNA的表达水平在各实验组中未观察到明显改变。结论:LY294002联合放疗可抑制Ku70表达,通过减少CNE-1细胞DNA损伤后的再修复影响放射敏感性。     

结肠腺瘤癌变过程中PI3K/AKT/mTOR信号通路表达谱的改变

目的探讨结肠腺瘤恶性转化过程中PI3K/AKT/mTOR信号通路分子表达谱的改变。方法采用表达谱PCR芯片技术对PI3K/AKT/mTOR信号通路的主要分子进行实时荧光PCR检测,分析其在结肠低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及腺癌中的表达。结果 PI3K/AKT/mTOR信号通路在大肠腺瘤恶性转化中发生多位点基因mRNA表达改变,以3条子通路PI3K亚基P85与细胞迁徙调节因子、AKT/PI3K家族及调节因子、mTOR信号途径多基因表达改变为主。其中结肠癌变过程c-FOS和PTEN可能为PI3K/AKT/mTOR通路中关键基因改变,在癌变过程中发挥重要作用。结论 PI3K/AKT/mTOR信号通路分子在大肠腺瘤癌变过程中基因表达谱异常,该通路关键基因可望成为临床治疗的分子靶点。     

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

Survivin和PI3K、AKT在寻常型银屑病皮损角质形成细胞中的表达及其相关性

目的 探讨凋亡抑制蛋白Survivin和PI3K、AKT在寻常型银屑病(PV)进行期斑块状皮损角质形成细胞(KCs)中的表达水平及作用.方法 临床上收集22例PV患者进行期斑块状皮损以及18例正常皮肤组织.采用免疫组织化学、Western blot和real-time quantitative PCR等方法检测22例PV患者进行期斑块状皮损和18例正常皮肤组织中KCs的Survivin、PI3K和AKT表达,并分析它们在PV皮损KCs中的相关性.使用小干扰RNA(siRNA)在HaCaT细胞中沉默AKT,并通过Western blot实验检测Survivin的表达水平.结果 PV皮损KCs中Survivin、PI3K和AKT的蛋白表达水平均高于正常皮肤组织.PV皮损KCs中Survivin和PI3K mRNA表达成正相关(r=0.4510;P=0.0351);PV皮损KCs中Survivin和AKT mRNA表达成正相关(r=0.4423;P=0.0393);在HaCaT细胞中,沉默AKT后可引起Survivin的表达下调.结论 凋亡抑制蛋白Survivin与PI3K/AKT信号通路可能参与了PV的发生与发展.     

miR-21通过激活PI3K/Akt信号通路对缺氧诱导的大鼠心肌细胞活性的作用机制

目的 探讨miRNA-21通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对缺氧诱导的大鼠心肌细胞活性的作用机制.方法 正常心肌细胞为A组,缺氧心肌细胞分别分为B组,C组(缺氧心肌细胞转染miRNA-21mimics)及D组(缺氧心肌细胞转染miRNA-21 inhibitor),PCR检测4组细胞中miRNA-21、PI3K、Akt mRNA表达,M T T检测心肌细胞活力,Hoechst荧光及流式细胞仪检测凋亡,Western blot检测PI3K/Akt蛋白及磷酸化表达.结果 与B组相比,C组miR-21表达明显升高(t=15.693,P<0.001),D组表达明显降低(t=10.062,P<0.001);心肌细胞培养24 h后,B组与A组相比活力明显降低(t=16.971,P<0.001),C组心肌细胞活力高于B组(t=14.310,P<0.001),D组心肌细胞活力低于B组(t=8.639,P<0.05);B组凋亡率较A组相比上升(t=14.470,P<0.001),与B组相比,C组心肌细胞凋亡率降低(t=10.690,P<0.001),D组心肌细胞凋亡率升高(t=25.050,P<0.001);与A组相比,B组心肌细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白、mRNA表达均下降(P<0.001),C组上述蛋白及mRNA表达高于B组(P<0.001),D组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白、mRNA表达均低于B组(P<0.001).结论 在缺氧心肌细胞中通过外源性增加miRNA-21表达能够提高心肌细胞活性,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号及磷酸化有关.     

新藤黄酸通过PTEN-PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的研究

目的 探究PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）抑制人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial, HUVECs）迁移中的作用。方法 倒置显微镜下观察HUVECs形态变化;Boyden chamber实验以及细胞划痕实验观察GNA对HUVECs迁移能力的影响;硝酸还原酶法检测NO水平;Western blot法检测GNA及LY29400预处理对HUVECs内磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT表达水平的影响;HUVECs转染PTEN-siRNA后,RT-PCR实验检测VEGF mRNA的表达水平。结果 GNA能有效抑制HUVECs迁移,其抑制效果与剂量相关（P＜0.05）。GNA和抑制剂LY294002以及L-NAME均能有效抑制NO的产生,且GNA+LY294002组、GNA+L-NAME组抑制效果更好（P＜0.05）;Western blot检测结果显示,GNA上调PTEN蛋白表达水平,下调eNOS、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平（P＜0.05）。RT-PCR检测结果表明,PTEN-siRNA转染后,GNA能上调VEGF mRNA基因的表达水平（P＜0.05）。结论 GNA通过PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号传导通路,抑制HUVECs迁移,阻止HUVECs血管生成。     

创伤性脑损伤后大鼠脑组织miRNA-9表达变化及意义

目的 观察创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后大鼠损伤皮质区miRNA-9的表达变化规律,探讨其对脑微血管内皮细胞的保护作用.方法 选取成年雄性SD大鼠60只制作控制性皮质撞击损伤模型(controlled cortical impact,CCI),分别应用荧光定量PCR和Western blot检测伤后6h及1、3、7、14、28 d各时间点伤灶周围组织中miRNA-9及CD31的表达情况.培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,将内皮细胞分为正常组、损伤模型组[用依托泊苷(etoposide,ETO)损伤]、miRNA-9过表达损伤模型组、空转染损伤模型组,应用CCK-8检测各组细胞活力;应用Western blot检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、活化半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,cl-caspase-3)表达水平.结果 (1)脑创伤后伤灶周围区域miRNA-9表达明显增加,于伤后第14天达高峰(P＜0.01);内皮细胞标志物CD31蛋白表达水平从伤后第3～28天持续高于正常组(P＜0.05);(2)内皮细胞建模转染后,qPCR结果提示损伤模型组较正常组miRNA-9表达显著降低(P＜0.01),但miRNA-9过表达损伤模型组miRNA-9表达显著高于损伤模型组(P＜0.01);CCK-8结果同样显示miRNA-9过表达损伤模型组细胞活力明显高于损伤模型组(P＜0.01);(3)相比于损伤模型组,miRNA-9过表达损伤模型组内皮细胞Bcl-2蛋白表达增加(P＜0.01),Bcl-2/Bax值增加(P＜0.05),但Bax蛋白、cl-caspase-3蛋白表达降低(P＜0.05).结论 创伤性脑损伤后伤灶周围区域miRNAO表达增多且过表达miRNA-9可提高依托泊苷诱导损伤的内皮细胞活力,提示脑创伤后miRNA-9表达增加有助于脑血管重塑的发生.     

miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移：通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

目的 探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法 qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC(miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照)、miR-inhibitor(miR-372-5p抑制剂)、miR-mimics(miR-372-5p类似物)以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12(CXCL12干扰)以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM4...     

miRNA-142-3p对肺泡巨噬细胞炎症过程的负向调控及其机制

目的 探索miRNA-142-3p (miR-142-3p)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的负向调控作用及其可能机制.方法 用100 ng/mL LPS诱导肺泡巨噬细胞NR8383,实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法分别检测诱导后0、6、24、48 h时细胞中miRq42-3p和高迁移率族蛋白(HMGB1)的表达.细胞体外转染miR-142-3p拟似物(miR-142-3p mimic),qFCR检测转染后细胞中miR-142-3p及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、l-1β和巨噬细胞炎症蛋白2β(MIp2β)]的表达,蛋白质印迹法检测细胞中HMGB1的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液中HMGB1的含量.结果 LPS诱导NR8383细胞后,细胞中miR-142-3p在48 h时表达最高,HMGB1在24h时最高,与0h时相比差异均有统计学意义(P＜0.05).过表达miR-142-3p后,NR8383细胞中miR-142-3p的表达升高(P＜0.05),HMGB1 mRNA和蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-2β mRNA的表达均降低(P＜0.05).结论 miR-142-3p能介导LPS诱导的NR8383细胞的炎症反应过程,该效应可能是通过负向调控HMGB1的表达来实现的.     

微小核糖核酸101异常表达与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的关系

目的探讨微小核糖核酸101（miRNA-101）在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达及其对MDAMB-231 细胞增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞MCF-10A 中miRNA-101 的表达。采用Lipofectamine TM 2000 将miRNA-101-mimic/inhibitor/NC 分别转染至MDA-MB-231 细胞中,通过qRT-PCR检测miRNA-101 的转染效率,CCK-8 实验检测MDA-MB-231 细胞的增殖。结果miRNA-101 在MDA-MB-231 细胞中的表达水平低于正常乳腺细胞MCF-10a（ p<0.01）。转染miRNA-101 mimic 后MDA-MB-231 细胞的增殖能力减弱（p <0.05）,而转染miRNA-101 inhibitor后细胞的增殖能力增强（p <0.05）。结论miRNA-101 在乳腺癌细胞MDA-MB-231中低表达,转染miRNA-101 mimic后乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖减弱。     

镉处理对小鼠睾丸间质细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞3-磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响.方法 TM3细胞经20μmol/L CdCl2处理,分别在加入CdCl24 h和8h后收集细胞;对照组给予相应体积的PBS,8h后收集细胞.利用实时定量RT-PCR法测定炎症相关细胞因子白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2、MIP-1和环氧合酶(COX)-2 mRNA的表达水平以及用Western blot法检测细胞COX-2、AKT和p-AKT蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,镉能够显著诱导TNF-α和IL-6 mRNA的表达(P＜0.01);镉处理4h组MCP-1 mRNA表达水平明显高于对照组(P＜0.01),而镉处理8h组MCP-1 mRNA表达水平与对照组相比差异无统计学意义;镉对TM3细胞MIP-1和MIP-2mRNA表达差异无统计学意义;镉能够明显诱导TM3细胞COX-2蛋白和mRNA的表达(P＜0.01).此外,镉处理组p-AKT蛋白表达水平也明显高于对照组(P＜0.01).结论 镉可能通过激活TM3细胞中PI3 K/AKT信号通路进而选择性调节部分炎症相关细胞因子的表达.     

miR-143-5p对镉致肾细胞凋亡的调控作用及其机制

目的:探讨miR-143-5p对镉诱导LLC-PK1细胞凋亡的调控作用及其机制?方法:通过基因芯片技术筛选出由镉引起的差异表达miRNAs,并用实时定量PCR方法验证基因芯片结果的可靠性;应用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-143-5p的模拟物和抑制剂建立miR-143-5p高表达和低表达的模型,并结合qRT-PCR技术验证转染效果;Hoechst 33258染色和Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡;生物信息学分析结合实时定量PCR和Western blot验证miR-143-5p靶基因的表达;Western blot分析miR-143-5p对细胞凋亡相关通路的调控作用?结果:镉可增强LLC-PK1细胞的miR-143-5p表达水平(P < 0.01);转染miR-143-5p模拟物或抑制剂后,与对照组(miR-NC)比较,miR-143-5p表达明显上调或下调(P < 0.01);miR-143-5p的过表达可促进 LLC-PK1细胞凋亡 (P < 0.01);miR-143-5p在AKT3的mRNA和蛋白水平上发挥靶向调控作用;miR-143-5p过表达能抑制p-Akt和p-Bad蛋白表达,促进caspase-9和caspase-3蛋白上调?结论:miR-143-5p可能通过作用于靶基因AKT3,并抑制Akt/Bad信号通路,促进镉诱导LLC-PK1细胞的凋亡?     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

基于PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨非小细胞肺癌Treg细胞上调的分子机制

目的:通过观察肺癌患者Treg细胞PTEN-PI3K-AKT信号通路分子的表达变化,探讨肺癌患者Treg细胞上调的作用机制。方法:选择30例非小细胞肺癌为研究组,30例健康人作为对照组,采用流式细胞术检测各组人群外周血Treg细胞表达变化;运用免疫磁珠法分选外周血单个核细胞中Treg细胞,Western-blot、Real-time PCR技术检测Treg细胞PI3K、AKT、PTEN蛋白及PTEN mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA的表达情况。结果:研究组外周血Treg细胞占CD+4T细胞的比例(Treg/CD4=4.53%±1.85%)明显高于对照组(Treg/CD4=1.87%±0.93%),差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组PI3K、AKT蛋白表达明显升高,PTEN表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组PI3K mRNA、AKT mRNA表达明显升高,PTEN mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:肺癌患者外周血Treg细胞水平明显升高,其机制可能与PTEN表达下调进而激活PI3K-AKT信号通路相关。     

miRNA-21-5p通过pdcd4靶向调控胃癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:探究微小RNA-21-5p（miRNA-21-5p）通过下调pdcd4基因表达调控胃癌耐药细胞系SGC-7901/DDP对顺铂敏感性机制的研究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）对胃癌细胞系SGC7901及胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP增殖抑制的影响。通过实时荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞中瞬时转染miRNA-21-5p inhibitors后miRNA-21-5p相对表达量的变化。采用Western blot及实时荧光定量PCR检测转染组、无关序列转染组（NC组）及空白转染组（CON组）分别转染miRNA-21-5p inhibitors及无关序列后对靶基因pdcd4蛋白及mRNA表达量的影响。结果:MTT实验结果显示耐药细胞SGC7901/DDP相对于亲本细胞SGC7901对顺铂不敏感（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果表明,转染组miRNA-21-5p表达量均明显低于NC组和CON组（P<0.01）,转染组pdcd4 mRNA表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。Western blot检测结果示,转染组pdcd4蛋白表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。结论:miRNA-21-5p表达水平的升高在一定程度上有利于胃癌细胞增殖,并通过下调pdcd4的表达,降低胃癌细胞对顺铂的敏感性。