大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞的分离及鉴定

背景:前期研究在大鼠阴茎海绵体组织中检测到了具有干细胞标志物及肌源性标志物的干细胞.目的:在前期研究基础上,对大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞进行分离及表型鉴定.方法:取2月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶消化分离组织,采用Preplate差速贴壁技术对细胞进行初步纯化,获得PP1~PP6贴壁细胞,并进行流式细胞仪检测、免疫荧光细胞化学鉴定及Western blotting检测.结果与结论:连续6步差速贴壁分离后,PP1~PP6细胞贴附能力逐渐减弱,PP6细胞两三天后开始贴壁形成圆形或梭形.流式细胞仪检测PP6细胞中干细胞抗原1(+)5.7%、胚胎抗原(+)2.6%、结蛋白(+) 41.2%.免疫荧光细胞化学显示仅有少量细胞分别表达干细胞抗原1和胚胎抗原,均散在分布,干细胞抗原1主要表达于胞浆,胚胎抗原主要表达于胞核,表达结蛋白的细胞聚集,数量较多,主要表达于胞浆;亦发现有极少量双阳性表达细胞,即干细胞抗原1/胚胎抗原、干细胞抗原1/结蛋白和胚胎抗原/结蛋白.PP1~PP5细胞中未检测到干细胞抗原1及胚胎抗原蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到干细胞抗原1及胚胎抗原蛋白的表达.结蛋白在PP1~PP6细胞中的表达逐渐增强.提示在大鼠阴茎海绵体中发现具有干细胞及肌源性干细胞表型的细胞.     

大鼠脂肪源性干细胞的分离培养及鉴定

背景：脂肪源性干细胞在体外易于培养,增殖快,具有多向分化潜能。目的：构建一种体外分离培养SD大鼠脂肪源性干细胞的方法,并对其部分生物学特性与表型进行分析。方法：切取SD大鼠腹股沟脂肪垫,应用胶原酶Ⅰ消化,分离大鼠脂肪源性干细胞,进行体外培养、传代,倒置显微镜观察细胞的生长增殖及形态变化,诱导成骨、成脂,分别行碱性磷酸酶、茜素红、von Kossa染色及油红O染色,绘制生长曲线及用流式细胞仪检测细胞表面标记。结果与结论：体外培养的脂肪源性干细胞呈梭形,增殖活跃,传代后形态均一,多次传代后细胞仍保持较强增殖能力,生长曲线呈＂S＂型。成骨诱导实验组碱性磷酸酶、茜素红、von Kossa染色阳性;成脂诱导实验组油红O染色阳性;对照组均为阴性。细胞CD29,CD44,CD105表达阳性,CD31,CD45表达阴性。提示SD大鼠腹股沟脂肪垫分离的脂肪源性干细胞在体外易于分离培养和传代扩增,特定条件下可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,并表达间充质干细胞相关的表型。     

大鼠脂肪源性干细胞的分离培养及鉴定

背景:脂肪源性干细胞在体外易于培养,增殖快,具有多向分化潜能。目的:构建一种体外分离培养SD大鼠脂肪源性干细胞的方法,并对其部分生物学特性与表型进行分析。方法:切取SD大鼠腹股沟脂肪垫,应用胶原酶Ⅰ消化,分离大鼠脂肪源性干细胞,进行体外培养、传代,倒置显微镜观察细胞的生长增殖及形态变化,诱导成骨、成脂,分别行碱性磷酸酶、茜素红、von Kossa染色及油红O染色,绘制生长曲线及用流式细胞仪检测细胞表面标记。结果与结论:体外培养的脂肪源性干细胞呈梭形,增殖活跃,传代后形态均一,多次传代后细胞仍保持较强增殖能力,生长曲线呈"S"型。成骨诱导实验组碱性磷酸酶、茜素红、von Kossa染色阳性;成脂诱导实验组油红O染色阳性;对照组均为阴性。细胞CD29,CD44,CD105表达阳性,CD31,CD45表达阴性。提示SD大鼠腹股沟脂肪垫分离的脂肪源性干细胞在体外易于分离培养和传代扩增,特定条件下可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,并表达间充质干细胞相关的表型。     

阴茎海绵体造影诊断静脉性阳痿

阳痿 (阴茎勃起功能障碍 )是男子常见的性功能障碍性疾病 ,是阴茎不能勃起进行性交或者是阴茎虽然能勃起 ,但不能维持足够的硬度和时间完成性交。阴茎海绵体造影术是诊断静脉性阳痿的可靠方法 ,对鉴别神经性、内分泌性阳痿具有重要的诊断价值 ,国内已有报道[1 4] ,现将我院自 1     

大鼠肌源性干细胞植入糖尿病鼠胰腺后的存活能力及血糖调节

背景:肌源性干细胞易于提取、分离及扩增,在特定条件下可分化为骨软骨、肌肉等中胚层组织细胞,还可以跨胚层分化为神经细胞等.目的:观察糖尿病鼠胰腺内植入的肌源性干细胞存活情况,及其调节血糖的效果.设计,时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/09在辽宁医学院科学实验中心完成.材料:SPFNAF级新生5d龄SD大鼠31只,由辽宁医学院实验动物中心提供.造模使用的链脲佐菌素为星隆达公司产品.方法:取5只大鼠的前肢肱三头肌与后肢腓肠肌,采用差速贴壁法纯化扩增大鼠肌源性干细胞,传至第3代用于移植,临用前以携带绿色荧光蛋白的腺病毒悬液进行转染.取20只大鼠,通过尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,15只成功造模,取12只随机均分为2组:细胞移植组胰腺被膜下移植肌源性干细胞约2×106个,模型对照组同法给予等量不含细胞的培养液.余6只大鼠作为正常对照组.主要观察指标:肌源性干细胞移植至胰腺后的存活情况.移植后大鼠血糖浓度的变化.结果:移植后1周,胰腺组织争网架样结构,表达较强的黄绿色荧光;4周后仍有荧光表达,但强度减弱.与模型对照组比较,移植前2d细胞移植组大鼠血糖浓度无明显差异(P>0.05);移植后4,8d,大鼠血糖浓度一直处于较高水平;至移植后第4,8周大鼠血糖浓度明最下降(t=-2.416-8.372,P<0.01).结论:肌源性干细胞移植后能在糖尿病模型鼠的胰腺部位存活,且一定程度上可下调大鼠血糖浓度.     

阴茎海绵体造影诊断静脉性阳痿75例分析

血管性阳痿是阴茎供血动脉或引流静脉病变所致的器质性阳痿,以前认为90%的阳痿是精神性的,近年经血管造影检查,有部分是血管性阳痿,在血管造影后,对其形态和功能作出了精确的诊断.遂使治疗阳痿的效果大大提高.血管性阳痿中,静脉性勃起功能障碍(ED)约占 ED患者25%～78%,多为继发性阴茎海绵体静脉闭塞功能不全(COVD)引起[1],发病率和年龄呈正相关[2].有学者研究发现血管性ED也是心血管疾病的早期表现 [3].本组收集本院2005～2009年的75例阴茎海绵体造影的相关资料,现总结如下.     

大鼠肌源性干细胞的分离、纯化和培养

背景:要获得满足临床需要的肌源性干细胞,体外筛选和扩增已成为关键环节.目的:拟建立稳定高效的成年大鼠肌源性干细胞的分离培养、纯化方法.方法:成年SD大鼠麻醉后,无菌条件下取骨骼肌,采用Ⅺ型胶原酶、Dispase和胰酶消化法获得肌源性干细胞,以密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化.记录细胞生长曲线,MTT比色法观察不同接种密度对细胞生长的影响,采用免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定.结果与结论:原代肌源性干细胞体积较小,贴壁缓慢,折光性较好,多呈球形、梭形或纺锤形,增殖缓慢.传代培养后,加入含体积分数为20%血清浓度的完全培养基,以1×109L-1密度接种时活细胞数量最多,为适宜接种密度,传1～4代细胞生长状态良好.免疫细胞化学染色结果为desmin(+),CD34(+),CD45(-),Sea-1(+),证实通过体外原代培养获得了高纯度的肌源性干细胞,并成功扩增.     

兔肌源性干细胞的分离及诱导分化为成骨细胞的观察

目的：探讨兔肌源性干细胞的分离、鉴定和诱导分化的方法。方法：取2月龄幼兔臀肌1g，采用胶原酶，dispase，胰蛋白酶分步消化，针头过滤，差速贴壁法分离肌源性细胞。用锥虫蓝染色细胞计数描记生长曲线，MTT法间接反映细胞增殖活性。作Bc1-2，Desmin免疫细胞化学染色鉴定肌源性细胞。用分化培养基(DMEM 5mL／L FBS 50mL／L HS 10mg／L BMP2 5g／L 维生素C 10mmol／L β-甘油磷酸钠＋10mg／L 地塞米松 10g／L 青霉素／链霉素)诱导细胞分化，用Osteocalcin，碱性磷酸酶，Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色鉴定成骨前体细胞。结果：用上述方法分离的肌源性细胞呈短梭形或多角形，体积明显小于肌细胞，24h贴壁，接种后36h开始增殖，生长有明显的方向性，原代肌源性干细胞对数生长期为7～9d，16d汇合。第3代肌源性干细胞接种后第3～5天为对数生长期，约8d汇合。细胞汇合后少部分细胞出现双核或三核，甚至出现核链，显示肌细胞分化倾向。约60％～70％的原代肌源性干细胞Bc1-2，Desmin免疫细胞化学染色呈阳性。用成骨细胞分化培养基中培养2周后，大部分细胞Osteocalcin碱性磷酸酶，Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色呈阳性，显示其成骨前体细胞分化。结论：用上述方法分离的肌源性细胞具有干细胞特征，并能在体外分化为成骨前体细胞和肌起源细胞，是一种组织特异性干细胞，即肌源性干细胞。     

阴茎及会阴浅层肌的解剖学特点及与勃起功能关系

目的:观察男性坐骨海绵体肌、球海绵体肌及阴茎血管的构筑特点,探讨其与勃起生理相关的解剖学因素。方法:实验于2004-07/2005-03在郑州铁路职业技术学院医学分院解剖学实验室完成。18例阴茎均取自死后3～5h内的尸体(年龄18～63岁),流浪死亡者(无名无亲属)及自愿捐献者(捐献者或捐献者家属知情并同意)。应用血管铸型法对18例成人阴茎制作血管铸型标本,再分别取下每具尸体两侧坐骨海绵体肌和球海绵体肌进行观察。用天平测量肌质量、用游标卡尺测量肌长(肌纤维起点最近端至止点最远端的距离)及用量角器测量羽状角(肌矢状切面上测量肌纤维与肌腱之间所形成的夹角)等指数。结果:阴茎海绵体内纵行的动脉发出无数树状分支,其中部分分支为毛细血管,此毛细血管汇合后注入白膜下静脉丛;部分形成螺旋动脉,与海绵窦相交通。引流海绵窦血液的窦后小静脉相互融合形成白膜下静脉丛,再汇合形成导静脉。坐骨海绵体肌肌质量(2.13±0.26)g,肌长(7.36±0.16)cm,羽状角(5.20±0.27)°;球海绵体肌肌质量(2.14±0.58)g,肌长(7.25±0.76)cm,羽状角(28.63±0.18)°。结论:副交感神经作用使阴茎动脉血管扩张,阴茎静脉和静脉分流支的管腔部分闭合,由于静脉回流受阻,引起阴茎海绵体和尿道海绵体充血膨胀,导致阴茎勃起。勃起的阴茎由于海绵体外坚韧的白膜的限制和会阴浅层肌尤其是坐骨海绵体肌的收缩,进一步压迫阴茎静脉,阻碍血液回流,勃起得以维持。球海面体肌收缩在协助勃起、缩窄和缩短尿道,帮助排尿和射精时,需要会阴浅横肌收缩加强会阴中心腱的稳定;坐骨海绵体肌收缩使硬勃起期的阴茎硬度增强,两肌协同作用,使勃起期的阴茎保持中立状态。     

失神经大鼠阴茎海绵体肌电图的检测

目的通过观察失神经大鼠阴茎海绵体肌电图（CC-EMG）的变化，探讨勃起功能的神经机制，为肌电图诊断神经性勃起功能障碍提供实验依据。方法将32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组、海绵体神经损伤组、腹下神经损伤组和盆神经损伤组，每组8只。大鼠神经损伤3周后，于清醒状态下行阴茎CC-EMG检测，比较各组皮下注射阿朴吗啡前、后阴茎CC-EMG的变化，并进行统计学分析。结果各组应用阿朴吗啡前及应用后5min和10min，CC-EMG组内各项观察指标两两比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。正常对照组使用阿朴吗啡后10min，均方根振幅（RMS）均明显高于海绵体神经损伤组、腹下神经损伤组和盆神经损伤组（P〈0．05），而在阿朴吗啡应用前和应用后5min，H／L均明显小于海绵体神经损伤组（P〈0．05）；海绵体神经损伤组阿朴吗啡应用前及应用后5min和10min，H／L均明显高于腹下神经损伤组（P〈0．05），而在应用阿朴吗啡前，MF明显高于腹下神经损伤组（P〈0，05），H／L明显高于盆神经损伤组（P〈0．05）；盆神经损伤组应用阿朴吗啡后10min，MF明届高于腹下神经损伤组（P〈0，05）。结论CC-EMG可以检测出海绵体神经、腹下神经和盆神经损伤大鼠阴茎海绵体的不同肌电变化，这种肌电变化的差异可能反映了这些神经在阴茎勃起功能中的不同作用。     

兔肌源性干细胞的分离及诱导分化为成骨细胞的观察

目的:探讨兔肌源性干细胞的分离、鉴定和诱导分化的方法。方法:取2月龄幼兔臀肌1g,采用胶原酶,dispase,胰蛋白酶分步消化,针头过滤,差速贴壁法分离肌源性细胞。用锥虫蓝染色细胞计数描记生长曲线,MTT法间接反映细胞增殖活性。作Bcl-2,Desmin免疫细胞化学染色鉴定肌源性细胞。用分化培养基(DMEM+5mL/LFBS+50mL/LHS+10mg/LBMP2+5g/L维生素C+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+10mg/L地塞米松+10g/L青霉素/链霉素)诱导细胞分化,用Osteocalcin,碱性磷酸酶,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色鉴定成骨前体细胞。结果:用上述方法分离的肌源性细胞呈短梭形或多角形,体积明显小于肌细胞,24h贴壁,接种后36h开始增殖,生长有明显的方向性,原代肌源性干细胞对数生长期为7～9d,16d汇合。第3代肌源性干细胞接种后第3～5天为对数生长期,约8d汇合。细胞汇合后少部分细胞出现双核或三核,甚至出现核链,显示肌细胞分化倾向。约60%～70%的原代肌源性干细胞Bcl-2,Desmin免疫细胞化学染色呈阳性。用成骨细胞分化培养基中培养2周后,大部分细胞Osteocalcin,碱性磷酸酶,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色呈阳性,显示其成骨前体细胞分化。结论:用上述方法分离的肌源性细胞具有干细胞特征,并能在体外分化为成骨前体细胞和肌起源细胞,是一种组织特异性干细胞,即肌     

剪切波弹性成像定量评价阴茎海绵体硬度

目的 探讨实时剪切波弹性成像（SWE）定量评价阴茎海绵体硬度的价值。方法 收集150名健康志愿者,根据年龄分为5~12岁组、13~18岁组、19~30岁组、31~50岁组、51~70岁组。采用SWE成像功能定量测量其阴茎海绵体的杨氏模量值。结果 随年龄增大,其阴茎海绵体硬度值增加,5~12岁组为（9.05±0.85）kPa、13~18岁组为（11.01±1.34）kPa、19~30岁组为（12.03±0.85）kPa、31~50岁组为（16.33±1.56）kPa、51~70岁组为（24.46±1.81）kPa。结论 SWE技术定量测量阴茎海绵体杨氏模量值无创、简便、安全,有重要临床应用价值。     

大鼠肌源性干细胞的培养与鉴定

背景：肌源性干细胞是一种成体多能干细胞，已成为基因治疗和细胞介导的组织工程领域内的研究热点，临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁具有广泛前景。目的：探讨大鼠肌源性干细胞体外原代培养的方法，为临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁提供实验依据。设计：重复观察测量。单位：武汉大学人民医院生殖中心与泌尿外科。材料：实验于2003-12／2004-05在武汉大学人民医院泌尿外科实验室完成。选取4～6周龄雌性SD大鼠20只，XI型胶原酶、胰酶、多聚赖氨酸（Sigma公司），dispase酶（Gibco公司），鸡胚提取液（自制）。方法：①将大鼠以质量浓度为10异／L的戊巴比妥钠30s／ks腹腔麻醉后，无菌条件下取腓肠肌，置人冷DMEM培养基中，D—Hank’s液洗涤组织块，除去筋膜、肌腱、神经和血管。剪成1．0-3．0mm^3小块，移入离心管。向组织中加入0．2％XI型胶原酶及0．1％的胰酶。采用胶原酶分离大鼠骨骼肌细胞。②应用差速贴壁法大鼠骨骼肌细胞进行纯化。细胞筛网过滤后接种至多聚赖氨酸包被的培养瓶中，37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中孵育1h，未贴壁细胞移人新的培养瓶中，加入新的培养基37℃培养1h后，未贴壁细胞再次转瓶换液，37℃培养过夜，如此反复，每次间隔24h转瓶换液，培养第5-6天贴壁的细胞即肌源性干细胞。③细胞生长到70％融合后，胰蛋白酶消化，以1：2的比例进行传代。传代细胞消化后接种于放有盖玻片的6孔培养板中，加入生长培养基，24h后制备细胞爬片，采用免疫组织化学方法鉴定所培养细胞上特异性结蛋白抗原和干细胞抗原-1的表达。主要观察指标：肌源性干细胞的形态及其鉴定结果。结果：①肌源性干细胞的形态观察：从骨骼肌组织中分离出来的肌源性干细胞呈球形，折光性强。培养12h后开始贴壁仍为圆形，48h后贴壁完全并开始增生，细胞逐渐延展成梭形或纺锤形，有两极，体积小。随培养时间的延长，细胞相互融合形成成熟的多核肌管。②肌源性干细胞的鉴定结果：细胞特异性结蛋白抗原和干细胞抗原-1染色呈阳性，荧光显微镜可见细胞浆发出红色荧光。阳性率达90％。结论：肌原性干细胞属于成体干细胞，具有取材方便、免疫原性低、移植后存活时间长等优点O高纯度的肌原性干细胞可通过体外原代培养获取．免疫组化技术可鉴定其肌源性和干细胞特性，在组织工程和基因治疗中具有广泛的应用前景。     

大鼠肌源性干细胞的培养与鉴定

背景:肌源性干细胞是一种成体多能干细胞,已成为基因治疗和细胞介导的组织工程领域内的研究热点,临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁具有广泛前景。目的:探讨大鼠肌源性干细胞体外原代培养的方法,为临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁提供实验依据。设计:重复观察测量。单位:武汉大学人民医院生殖中心与泌尿外科。材料:实验于2003-12/2004-05在武汉大学人民医院泌尿外科实验室完成。选取4～6周龄雌性SD大鼠20只,XI型胶原酶、胰酶、多聚赖氨酸(Sigma公司),dispase酶(Gibco公司),鸡胚提取液(自制)。方法:①将大鼠以质量浓度为10g/L的戊巴比妥钠30g/kg腹腔麻醉后,无菌条件下取腓肠肌,置入冷DMEM培养基中,D-Hank’s液洗涤组织块,除去筋膜、肌腱、神经和血管,剪成1.0～3.0mm3小块,移入离心管。向组织中加入0.2%XI型胶原酶及0.1%的胰酶,采用胶原酶分离大鼠骨骼肌细胞。②应用差速贴壁法大鼠骨骼肌细胞进行纯化。细胞筛网过滤后接种至多聚赖氨酸包被的培养瓶中,37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中孵育1h,未贴壁细胞移入新的培养瓶中,加入新的培养基37℃培养1h后,未贴壁细胞再次转瓶换液,37℃培养过夜,如此反复,每次间隔24h转瓶换液,培养第5～6天贴壁的细胞即肌源性干细胞。③细胞生长到70%融合后,胰蛋白酶消化,以1∶2的比例进行传代。传代细胞消化后接种于放有盖玻片的6孔培养板中,加入生长培养基,24h后制备细胞爬片,采用免疫组织化学方法鉴定所培养细胞上特异性结蛋白抗原和干细胞抗原-1的表达。主要观察指标:肌源性干细胞的形态及其鉴定结果。结果:①肌源性干细胞的形态观察:从骨骼肌组织中分离出来的肌源性干细胞呈球形,折光性强。培养12h后开始贴壁仍为圆形,48h后贴壁完全并开始增生,细胞逐渐延展成梭形或纺锤形,有两极,体积小。随培养时间的延长,细胞相互融合形成成熟的多核肌管。②肌源性干细胞的鉴定结果:细胞特异性结蛋白抗原和干细胞抗原-1染色呈阳性,荧光显微镜可见细胞浆发出红色荧光,阳性率达90%。结论:肌原性干细胞属于成体干细胞,具有取材方便、免疫原性低、移植后存活时间长等优点。高纯度的肌原性干细胞可通过体外原代培养获取,免疫组化技术可鉴定其肌源性和干细胞特性,在组织工程和基因治疗中具有广泛的应用前景。     

Multiple pathways of angiotensin I conversion and their functional role in the canine penile corpus cavernosum.

Multiple pathways of angiotensin (Ang) I conversion and their functional role in the canine penile corpus cavernosum were investigated. Biochemical analysis revealed high activities of angiotensin-converting enzyme (ACE) (6.9 +/- 1.7 mU/mg of protein, mean +/- S.E.M., n = 8) and chymase-like enzyme (4.0 +/- 1.4 mU/mg of protein). Functional recording of isometric tension showed that Ang I (3 x 10(-7) M) induced a tension of 0.17 +/- 0.05 g (n = 5), which was reduced to about 60% by pretreatment with an ACE inhibitor, lisinopril (10(-6) M), and almost completely blocked by lisinopril in combination with a chymase inhibitor, chymostatin (10(-4) M). Binding sites for ACE and Ang II receptors were studied by in vitro autoradiography using 125I-351A and 125I-[Sar1, Ile8]Ang II as ligands, respectively. Dense binding of ACE appeared in the endothelial layer of the corpus cavernosum penis, and Ang II receptors were localized in the trabecular smooth muscle layer. An AT1 receptor antagonist, CV-11974 (10(-6) M), markedly displaced 125I-[Sar1, Ile8]Ang II bindings, indicating that the corpus cavernosum penis contains AT1 receptors exclusively. Immunohistochemical studies demonstrated ACE in the endothelium of the corpus cavernosum penis. Mast cells that produce chymase were present mainly in the cavernosal area. These results demonstrate that chymase, in addition to ACE, is involved in the contraction of canine penile corpus cavernosum through local Ang II formation.     

应用改良差速贴壁法和有限稀释技术分离培养小鼠来源肌源干细胞

背景:研究者们通过多种方法从肌组织中分离得到肌源干细胞,并应用于各类组织工程和再生医学研究.目的:结合改良的差速贴壁法和有限稀释技术分离小鼠来源肌源干细胞,并培养其单细胞克隆和亚克隆集落.方法:以新生C57BL/6小鼠四肢作为肌组织取材对象,经三重酶消化和细胞筛过滤,运用改良的差速贴壁法分离出肌源干细胞,予细胞特异标记物以免疫组织化学染色;以有限稀释技术克隆培养的方法,获得稳定的肌源干细胞单克隆和亚克隆集落.结果与结论:差速贴壁培养过程中,肌性细胞占比逐渐增高,首次贴壁1 h可以获得足够数量的细胞进行第6次贴壁培养;肌源干细胞需72 h左右贴壁生长,经10 d左右可以增殖为300~500细胞数量的集落,细胞形态以小圆形细胞为主,并有少量梭形细胞,肌源干细胞能够维持形态并持续增殖;应用有限稀释技术可获得肌源干细胞单克隆和亚克隆集落,肌源干细胞克隆细胞均呈现Desmin染色阳性,Sca-1染色阳性,阳性率为(92.3±4.1)%.提示应用preplate法和有限稀释技术可以分离得到小鼠来源肌源干细胞及其克隆集落.     

应用改良差速贴壁法和有限稀释技术分离培养小鼠来源肌源干细胞

背景：研究者们通过多种方法从肌组织中分离得到肌源干细胞,并应用于各类组织工程和再生医学研究。目的：结合改良的差速贴壁法和有限稀释技术分离小鼠来源肌源干细胞,并培养其单细胞克隆和亚克隆集落。方法：以新生C57BL/6小鼠四肢作为肌组织取材对象,经三重酶消化和细胞筛过滤,运用改良的差速贴壁法分离出肌源干细胞,予细胞特异标记物以免疫组织化学染色;以有限稀释技术克隆培养的方法,获得稳定的肌源干细胞单克隆和亚克隆集落。结果与结论：差速贴壁培养过程中,肌性细胞占比逐渐增高,首次贴壁1h可以获得足够数量的细胞进行第6次贴壁培养;肌源干细胞需72h左右贴壁生长,经10d左右可以增殖为300～500细胞数量的集落,细胞形态以小圆形细胞为主,并有少量梭形细胞,肌源干细胞能够维持形态并持续增殖;应用有限稀释技术可获得肌源干细胞单克隆和亚克隆集落,肌源干细胞克隆细胞均呈现Desmin染色阳性,Sca-1染色阳性,阳性率为（92.3±4.1）%。提示应用preplate法和有限稀释技术可以分离得到小鼠来源肌源干细胞及其克隆集落。     

A nitric oxide-like factor mediates nonadrenergic-noncholinergic neurogenic relaxation of penile corpus cavernosum smooth muscle.

This study was initiated to characterize nonadrenergic-noncholinergic (NANC) inhibitory neurotransmission in penile corpus cavernosum. Using organ baths, isometric tension measurements were made in strips of human and rabbit corpus cavernosum. In examining endothelium-mediated responses, cumulative additions of exogenous acetylcholine elicited dose-dependent relaxations which were significantly reduced or completely inhibited in tissues treated with NG-monomethyl L-arginine (L-NMMA; an inhibitor of nitric oxide synthesis), oxyhemoglobin (a nitric oxide scavenger), or methylene blue (a guanylate cyclase blocker). Tissues exposed to hypoxic conditions (PO2 = 5-10 mmHg) also did not respond to exogenous acetylcholine. Mechanical removal of the endothelium in human corporal strips or in situ treatment of rabbit corpora with detergent blocked the relaxation to acetylcholine. Transmural electrical stimulation of corporal tissue strips denuded of functional endothelium, in the presence of adrenergic blockade with bretylium and muscarinic receptor blockade with atropine, caused frequency-dependent relaxation. This neurogenic relaxation was reduced or prevented by L-NMMA, oxyhemoglobin, methylene blue, and hypoxia. The effects of L-NMMA were reversed by L-arginine and the effects of hypoxia were readily reversed by normoxic conditions. Authentic, exogenous nitric oxide relaxed corporal strips which were contracted with adrenergic agonists and this effect was significantly inhibited by oxyhemoglobin. It is concluded that (a) endothelium-mediated responses of corpus cavernosum smooth muscle are mediated by a diffusible nitric oxide-like substance; (b) NANC neurogenic inhibitory responses do not require functional endothelium, and (c) nitric oxide, or a closely related substance, may act as an inhibitory neurotransmitter in penile corpus cavernosum smooth muscle.