带气囊导管构建脊髓缺血模拟再灌注与缺血分离模型

背景:采用带有气囊的导管急性压迫脊髓缺血模拟人类损伤可以造成再灌注与缺血分离的动物模型。目的:应用免疫组化和生物化学分析方法观察不同缺血时间窗处理对损伤脊髓的影响。方法:SD大鼠36只,随机分为假手术组,带气囊导管造成大鼠脊髓缺血10,30,45,60,90min组。结果与结论:再灌注48h后,随着缺血时间的延长,脊髓前角神经元坏死和凋亡逐渐加重,丙二醛水平逐渐增加,超氧化物歧化酶活性逐渐下降,大鼠的神经行为学病症加重。提示用带气囊的导管建立缺血再灌注大鼠模型成功,再灌注后大鼠脊髓的损伤随缺血时间的延长而加重。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后转化生长因子β1的表达

目的:观察具有多种生物学功能的多肽生长因子转化生长因子β1及其mRNA在脊髓缺血再灌注损伤后的表达变化。方法:实验于2003-11/2004-04在兰州大学第二医院骨科研究所进行。健康Wistar大鼠42只,随机分成6组,正常组,伤后3,6,12,24和48h组,每组7只。正常组不做模型。其他5组大鼠建立脊髓缺血再灌注损伤模型,夹闭腹主动脉40min后放开。应用改良Tarlov评分对模型进行评估(共5分,0分为完全瘫痪;5分为正常)。观察正常大鼠脊髓及缺血再灌注损伤后各时间点大鼠脊髓转化生长因子β1及其mRNA的分布和含量变化(灰度值变化与正常组比较,其灰度值越低表示阳性细胞越多),检测方法采用免疫组织化学技术和原位杂交技术。结果:42只大鼠均进入结果分析。①正常大鼠脊髓不表达转化生长因子β1。②大鼠脊髓神经功能评分:于伤后3h显著下降,以后逐渐恢复。③大鼠脊髓转化生长因子β1蛋白表达结果:免疫组织化学染色显示,损伤后3h蛋白的表达开始增加(149.26±12.97),损伤后24h表达强度达高峰(104.95±9.40)。④大鼠脊髓转化生长因子β1mRNA表达结果:原位杂交图像分析显示,损伤24h表达阳性细胞达高峰,其灰度值明显低于正常组(79.08±10.42,140.40±10.85,P<0.01)。⑤大鼠脊髓转化生长因子β1结果:光镜观察脊髓缺血再灌注损伤后出现大量的转化生长因子β1阳性细胞;主要是小胶质细胞、星形胶质细胞、巨噬细胞和神经元。结论:大鼠脊髓缺血再灌注损伤后转化生长因子β1表达显著增加,脊髓的神经功能随时间延长逐渐恢复,说明大鼠脊髓损伤的同时,也启动了其内源性保护机制,转化生长因子β1的高表达可能与其保护作用有关。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后转化生长因子β1的表达

目的：观察具有多种生物学功能的多肽生长因子转化生长因子βl及其mRNA在脊髓缺血再灌注损伤后的表达变化。方法：实验于2003-11／2004-04在兰州大学第二医院骨科研究所进行。健康Wistar大鼠42只，随机分成6组，正常组，伤后3，6，12，24和48h组，每组7只。正常组不做模型。其他5组大鼠建立脊髓缺血再灌注损伤模型，夹闭腹主动脉40 min后放开。应用改良Tarlov评分对模型进行评估（共5分，0分为完全瘫痪；5分为正常）。观察正常大鼠脊髓及缺血再灌注损伤后各时间点大鼠脊髓转化生长因子β1及其mRNA的分布和含量变化（灰度值变化与正常组比较，其灰度值越低表示阳性细胞越多），检测方法采用免疫组织化学技术和原位杂交技术。结果：42只大鼠均进入结果分析。①正常大鼠脊髓不表达转化生长因子β1。②大鼠脊髓神经功能评分：于伤后3h显著下降，以后逐渐恢复。③大鼠脊髓转化生长因子β1蛋白表达结果：免疫组织化学染色显示，损伤后3h蛋白的表达开始增加（149．26&;#177;12．97），损伤后24h表达强度达高峰（104．95&;#177;9．40）。④大鼠脊髓转化生长因子β1mRNA表达结果：原位杂交图像分析显示，损伤24h表达阳性细胞达高峰，其灰度值明显低于正常组（79．08&;#177;10．42，140．40&;#177;10．85，P〈0．01）。⑤大鼠脊髓转化生长因子β1结果：光镜观察脊髓缺血再灌注损伤后出现大量的转化生长因子β1阳性细胞；主要是小胶质细胞、星形胶质细胞、巨噬细胞和神经元。结论：大鼠脊髓缺血再灌注损伤后转化生长因子β1表达显著增加，脊髓的神经功能随时间延长逐渐恢复，说明大鼠脊髓损伤的同时，也启动了其内源性保护机制，转化生长因子β1的高表达可能与其保护作用有关。     

脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白表达的研究

目的：研究脊髓缺血再灌注损伤（SCⅡ）后热休克蛋白（HSP70）表达的变化。方法：制作SCⅡ动物模型，采用光镜，激光多普勒超声，免疫组化等技术，研究SCⅡ后HSP70表达的变化。结果：（1）缺血30min，血灌流量平均下降85．37％，再灌流即刻血灌流量迅速升高，再灌流10min左右达到最高点，再灌流30min，血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平，以后逐渐降低。（2）缺血后部分大鼠再灌注后出现“二次瘫痪”现象。（3）脊髓缺血30min再灌注60min后即有HSP70的表达增强，随着再灌注时间的延长，HSP70表达逐渐增多，在再灌注240min达到高峰，此后，HSP70表达逐渐减少，在再灌注24h基本消失，结论：（1）脊髓缺血一定时间后恢复血液供应，可以发生再灌注损伤。（2）脊髓缺血灌注后HSP70的表达增加。     

肝脏缺血—再灌注损伤时中性粒细胞的聚积及海风藤酮的…

探讨肝脏缺血－再灌注损伤时中性粒细胞的聚积及海风藤酮的保肝作用。应用大鼠肝脏局部抽血－再灌注损伤模型，观察肝脏缺血－再灌注损伤过程中ＰＭＮ的浸润及海风藤酮的保护作用。结果：随着肝脏缺血－再灌注时间的延长，肝组织中ＰＭＮ浸润程度逐渐加重；海风藤酮可以减轻肝脏脂质过氧化及炎症损伤程度，显著改善肝脏损伤后的胆汁流量。     

兔缺血再灌注脊髓组织中中性粒细胞的浸润变化

目的：脊髓缺血再灌注可使组织自身产生炎症反应，中性粒细胞(PMNL)的浸润加重组织损伤。观察缺血再灌注脊髓组织中24h内不同阶段PMNL的黏附、聚集及浸润情况。方法：采用腰动脉阻断法建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型，分别缺血40，60min后再灌注，对不同时间段损伤脊髓节段行光镜观察。结果：在缺血期均未观察到PMNL的黏附、浸润，随着再灌注的进程，病理改变的加重，组织中PMNL数量逐渐增多；6h时：PMNL主要黏附、聚集在血管中，甚至堵塞血管腔部；同时可见其穿透血管壁向外游出，实质中可见少量的PMNL,浸润；12，24h时大量PMNL浸润在实质中，并形成“噬神经元”现象。此外，不同的缺血时间，其各自再灌注后PMNL聚集、浸润程度不同；在同一时间点上，缺血时间长、损伤重的，PMNL出现数量多。结论：脊髓缺血再灌注早期(24h内)，PMNL最初聚集并阻塞血管,然后浸润到组织实质中，从而加重损伤；进一步阐明中性粒细胞参与脊髓缺血再灌注损伤的作用过程。     

脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白表达的研究

目的研究脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后热休克蛋白(HSP70)表达的变化。方法制作SCII动物模型,采用光镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术,研究SCII后HSP70表达的变化。结果(1)缺血30min,血灌流量平均下降85.37%,再灌流即刻血灌流量迅速升高,再灌流10min左右达到最高点。再灌流30min,血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平,以后逐渐降低。(2)缺血后部分大鼠再灌注后出现“二次瘫痪”现象。(3)脊髓缺血30min再灌注60min后即有HSP70的表达增强,随着再灌注时间的延长,HSP70表达逐渐增多,在再灌注240min达到高峰。此后,HSP70表达逐渐减少,在再灌注24h基本消失。结论(1)脊髓缺血一定时间后恢复血液供应,可以发生再灌注损伤。(2)脊髓缺血再灌注后HSP70的表达增加。     

黏附分子在大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨大鼠骨骼肌缺血再灌注（I/R）时黏附分子的动态变化及其在骨骼肌I/R损伤中的作用。方法42只Wistar大鼠随机分为正常对照组（n=6）、缺血组（n=6）、缺血再灌注组（n=30）。分别于缺血期,再灌注1、2、4、8、12h测定白细胞上黏附分子β2整合素（CD11b/CD18）和骨骼肌血管中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达情况,测定血浆中的丙二醛、骨骼肌组织中的髓过氧化物酶,及各组的组织学改变。结果随着骨骼肌再灌注的时间的延长,黏附分子的表达逐渐增多,再灌注8～12h表达最多,骨骼肌组织损伤也随再灌注时间的延长而逐渐加重,时程上与黏附分子表达同步。结论黏附分子的表达与骨骼肌I/R损伤密切相关。     

兔缺血再灌注脊髓组织中中性粒细胞的浸润变化

目的:脊髓缺血再灌注可使组织自身产生炎症反应,中性粒细胞(PMNL)的浸润加重组织损伤。观察缺血再灌注脊髓组织中24h内不同阶段PMNL的黏附、聚集及浸润情况。方法:采用腰动脉阻断法建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型,分别缺血40,60min后再灌注,对不同时间段损伤脊髓节段行光镜观察。结果:在缺血期均未观察到PMNL的黏附、浸润,随着再灌注的进程,病理改变的加重,组织中PMNL数量逐渐增多;6h时PMNL主要黏附、聚集在血管中,甚至堵塞血管腔部;同时可见其穿透血管壁向外游出,实质中可见少量的PMNL浸润;12,24h时大量PMNL浸润在实质中,并形成“噬神经元”现象。此外,不同的缺血时间,其各自再灌注后PMNL聚集、浸润程度不同;在同一时间点上,缺血时间长、损伤重的,PMNL出现数量多。结论:脊髓缺血再灌注早期(24h内),PMNL最初聚集并阻塞血管,然后浸润到组织实质中,从而加重损伤;进一步阐明中性粒细胞参与脊髓缺血再灌注损伤的作用过程。     

肝脏缺血－再灌注损伤时中性粒细胞的聚积及海风藤酮的保护作用

探讨肝脏缺血再灌注损伤时中性粒细胞（ＰＭＮ）的聚积及海风藤酮的保肝作用。应用大鼠肝脏局部缺血再灌注损伤模型，观察肝脏缺血再灌注损伤过程中ＰＭＮ的浸润及海风藤酮的保护作用。结果：随着肝脏缺血再灌注时间的延长，肝组织中ＰＭＮ浸润程度逐渐加重；海风藤酮可以减轻肝脏脂质过氧化及炎症损伤程度，显著改善肝脏损伤后的胆汁流量。因此，寻找有抑制炎性细胞激活及其释放炎症介质作用的新药，有望为治疗肝脏缺血再灌注损伤提供一条新的途径。     

远程预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用(英文)

目的:探讨远程预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用。方法:20只成年雄性新西兰大白兔随机分成2组(各组n=10),即对照组和远程预处理(RPC)组。所有动物脊髓缺血前1h戊巴比妥钠麻醉动物(30mg/kg,iv)。RPC组动物麻醉后进行双后肢短暂缺血2次(充气式压力止血带环扎双后肢,压力26.6kPa,阻断10min,松开10min,再阻断10min),最后一次缺血后再灌注30min,阻闭肾下腹主动脉20min,制作兔脊髓缺血模型。对照组动物不进行双后肢短暂缺血,其余同RPC组。再灌注后4,8,12,24和48h分别对动物后肢运动功能评分。再灌注48h后,处死动物取脊髓(L5～7),石蜡包埋切片行组织病理学观察。结果:RPC组神经功能评分在各时间点均明显高于对照组(P=0.000);与对照组相比,RPC组脊髓前角正常神经细胞数明显增多(P=0.000),且神经功能评分与脊髓前角正常神经细胞计数之间有显著相关性(r=0.868,P<0.01)。结论:远程预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用。     

重组人促红细胞生成素对兔脊髓缺血/再灌注损伤后白细胞介素8表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对兔脊髓神经细胞缺血/再灌注损伤后白细胞介素8(IL-8)表达的影响。方法 44只健康成年新西兰大白兔随机分为3组:假手术组(4只),对照组(20只),rHuEPO处理组(20只),对照组与rHuEPO处理组分别于再灌注6 h,12 h,24 h、48 h、7 d后时间点随机处死4只动物,取L3～L5节段脊髓组织用霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色法(S-P法)及兔抗人IL-8 ELISA试剂盒检测脊髓组织内IL-8的表达。结果 IL-8在无损伤脊髓中即见有表达。随着缺血及再灌注进程的加重,组织中IL-8阳性表达强度逐渐增加。脊髓损伤后24 h表达明显上调并达高峰;高表达持续至损伤后7 d;两组间IL-8水平的变化趋势相同,但在各时间点rHuEPO处理组兔脊髓组织IL-8的含量均低于对照组(P<0.05)。结论 rHuEPO具有抑制脊髓组织炎症反应的作用,能明显抑制兔脊髓缺血/再灌注损伤后的IL-8表达。     

Pretreament with repeated electroacupuncture induced neuroprotection against spinal cord ischemiareperfusion injury in rabbits

AIM:To investigate whether pretreatment with repeated electroacupuncture (EA) could induce ischemic tolerance against transient spinal cord ischemia in rabbits.METHODS:24male New Zealand white rabbits were randomly assigned to 3 groups(n=8 each),animals in the control group received no treatment;animals in the SP and EA group received sodium pentobarbitone 30mg/kg each day for 5 days;animals in EA group were also received electroacupuncture at the Zusanli acupoint 30min a day for 5days.24hours after the last treatment,spinal cord ischemia was induced by an infrarenal aortic occlusion for 20min.Hind-limb motor function was determined with the Tarlov criteria at 4,8,12,24 and 48h after reperfusion.All animals were sacrificed at 48h after reperfusion and the spinal cords(I5) were remoed immediately for histopathologic study.RESULTS:The neurologic outcome and histopathology(48h) in the EA group were significantly better than the control group(P=0.006).CONCLUSION:Pre-ischemic treatment with electroacupuncture significantly reduces spinal cord ischemia-reperfusion injury in rabbits.     

构建脊髓慢性压迫损伤模型大鼠巢蛋白的表达规律

背景：既往应用的脊髓损伤动物模型难以达到一种慢性渐进性的压迫效果,与人体慢性脊髓压迫损伤机制有很大的不同。目的：构建一种新的脊髓慢性压迫性损伤模型大鼠,探究慢性压迫损伤后脊髓损伤区域巢蛋白的表达规律及其意义。方法：Wistar大鼠40只随机分为实验组30只和对照组10只。实验组大鼠取下胸7、8椎板,植入压迫材料,形成慢性压迫脊髓损伤模型。植入后第1,3,7,14,28天,取压迫处脊髓组织,行病理学检查及巢蛋白免疫组织化学染色,半定量反转录PCR反应测定巢蛋白mRNA的表达,同时测量压迫段椎管直径及缓膨胀材料侵占厚度。结果与结论：随压迫时间的延长,实验组大鼠椎管侵占率逐渐增加,脊髓组织出现坏死等情况,大鼠BBB评分降低,压迫处脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白表达至伤后7d时达到高峰,而后表达逐渐下降,说明实验成功建立慢性脊髓压迫损伤动物模型,且慢性脊髓压迫损伤大鼠脊髓组织Nestin mRNA及蛋白呈动态变化。     

重复电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

AIM: To investigate whether pretnatment with repeated electroacupuncture (EA) could induce ischemic tolerance against transient spinal cord ischemia in rabbits. METHODS: 24 male New Zealand white rabbits were randomly assigned to 3 groups(n = 8 each), animals in the control group received no treatment; animals in the SP and EA group received sodium pentobarbitone 30 mg/kg each day for 5 days; animals in EA group were also received electroacupuncture at the Zusanli acupoint 30 min a day for 5 days. 24 hours after the last treatment, spinal cord ischemia was induced by an infrarenal aortic occlusion for 20 min. Hind-limb motor function was determined with the Tarlov criteria at 4,8,12,24 and 48 h after reperfusion. All animals were sacrificed at 48h after reperfusion and the spinal cords(L5) were removed immediately for histopathologic study. RESULTS: The neurologic outcome and histopathology (48 h) in the EA group were significantly better than the control group( P = 0. 006) . CONCLUSION: Pre-ischemic tr     

急性脊髓损伤模型大鼠白细胞介素1β和核因子κB的表达

背景：在脊髓损伤后的继发性损伤过程中,白细胞介素1β参与刺激其他细胞因子和损伤介质的合成。目的：观察白细胞介素1受体拮抗剂对急性脊髓损伤模型大鼠损伤脊髓白细胞介素1β与核因子κB表达的影响。方法：采用改良Allen法建立SD大鼠急性脊髓损伤模型,造模后分别在损伤处敷含白细胞介素1受体拮抗剂或仅有生理盐水的明胶海绵,于脊髓损伤1,48,72h取损伤段脊髓标本,免疫组织化学染色检测白细胞介素1β与核因子κB的表达。结果与结论：经白细胞介素1受体拮抗剂治疗后,损伤脊髓组织白细胞介素1β和核因子κB的表达均显著降低。说明白细胞介素1受体拮抗剂可通过抑制白细胞介素1β和核因子κB的表达,减轻局部炎症反应,对急性脊髓损伤大鼠损伤段脊髓发挥保护作用。     

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1在大鼠脊髓横断损伤后的表达研究

目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(PDKl)及磷酸化3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(p-PDK1)在横断性脊髓损伤(tSCI)后的表达变化及意义。方法将30只成年SD大鼠随机分为假手术对照组和T9横断伤6 h、12 h、1 d和3 d组,每组6只。采用Western blot方法检测损伤后各时间段PDK1和p-PDK1蛋白水平在脊髓中的表达变化;采用免疫组织化学方法检测p-PDK1在假手术对照组以及损伤组脊髓中的分布和定位;最后通过免疫荧光标记法检测p-PDK1在细胞中的定位。结果 Western blot和免疫组化显示PDKl蛋白表达在SCI后无明显变化,p-PDK1蛋白在SCI后表达增加,12 h达到高峰,之后逐渐下降,并于3 d恢复到假手术水平。免疫荧光双标显示p-PDK1神经元及少突胶质细胞存在大量共定位。结论脊髓损伤后PDKl蛋白水平无变化而p-PDK1呈现明显的时空变化,提示在脊髓损伤后PDK1可能通过磷酸化参与了神经元及少突胶质细胞的病理生理过程,发挥抗凋亡的作用。     

不同穴位重复电针预处理诱导兔脊髓缺血耐受效果的对比

目的:比较不同穴位电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用的效果,为临床提供最佳的预处理方案。方法:32只雄性新西兰大白兔随机数字表法分成4组(各组n=8),即对照组、戊巴比妥钠组、委中穴组及足三里穴组。对照组静脉给予生理盐水1mL/kg,连续5d;戊巴比妥钠组静脉给予戊巴比妥钠30mg/kg,连续5d;委中穴和足三里穴组每天在戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉下,电针分别刺激委中穴和足三里穴60min/d,连续5d。最后一次预处理后24h,夹闭肾下腹主动脉20min,制作兔脊髓缺血模型;再灌注后4,8,12,24和48h分别对动物后肢运动功能评分;再灌注48h后,深麻醉下处死动物取脊髓(L5～7),制作标本行组织病理学观察。结果:所有动物均存活,再灌注后48h电针预处理委中穴和足三里穴组后肢运动功能评分及脊髓前角运动神经元计数均明显高于对照组(P=0.001);足三里组后肢运动功能评分和脊髓前角运动神经元计数明显低于委中穴组(P=0.001);对照组与戊巴比妥钠组相比,后肢运动功能评分及脊髓前角神经元计数无显著性差别(P=1.0和P=0.873)。结论:电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用,且刺激委中穴优于刺激足三里穴的效果。     

银杏叶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨预先给予银杏叶提取物能否预防大鼠脊髓缺血再灌注损伤。方法将30只大鼠随机分为3组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、银杏叶提取物保护组(G组)。其中G组每日腹腔注射给予0.83 ml.kg-1GBE,连续给药5天。采用腹主动脉缺血法制备大鼠的脊髓缺血再灌注损伤模型。缺血45 min,再灌注24 h后进行Tarlov神经功能评价和病理组织学改变的观察。结果 G组与IR组相比较,神经功能评分结果显示IR组后肢神经功能改善明显,神经功能评分结果差异具有显著的统计学意义(P0.05)。病理组织学结果表明,IR组出现明显的病理改变,神经细胞固缩、组织内血管充血等病理改变,G组的病理改变较轻,明显好于IR组。结论银杏叶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。