肝星状细胞增殖与p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系

背景:肝星状细胞的激活、增殖导致肝纤维化,p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路可参与调控细胞增殖。目的:探讨SB203580作用于乙醛刺激的大鼠肝星状细胞后p38丝裂原活化蛋白激酶活性变化和细胞增殖变化。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株,在乙醛干预的基础上加入不同浓度的p38特异性抑制剂SB203580进行培养,并设置对照。以Westernblot检测磷酸化p38蛋白表达水平变化,MTT比色法检测细胞增殖。结果与结论:乙醛刺激后大鼠肝星状细胞内磷酸化p38水平增强,细胞增殖明显。使用5,10,20μmol/L SB203580能明显抑制乙醛刺激的肝星状细胞增殖(P<0.05),加大浓度至30μmol/L时,抑制作用更明显(P<0.01),抑制率为43.9%,而磷酸化p38水平也降低(P<0.05)。结果证实,抑制p38丝裂原活化蛋白激酶活性可能影响肝星状细胞的增殖。     

川芎嗪干预转化生长因子β1诱导肝星状细胞结缔组织生长因子表达中p38丝裂酶原激活蛋白激酶的途径

背景:前期研究发现川芎嚷可通过抑制肝星状细胞的增殖和阻断Ⅰ,Ⅲ胶原的合成,下调结缔组织生长因子的表达等,发挥抗肝纤维化的作用,但具体机制尚小清楚.目的:观察川芎嗪对体外培养肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响,以及p38丝裂酶原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在其中的作用.方法:用5 μg/L转化牛长因子β1诱导活化体外培养的肝星状细胞,用川芎嗪和p38MAPK特异阻断剂SB203580进行干预,以RT-PCR法检测结缔组织生长因子mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达,Western blot法检测磷酸化p38MAPK蛋白的表达.结果与结论:经转化生长因子β1诱导后.肝星状细胞中结缔组织生长因子和Ⅰ型胶原mRNA表达显著增强(P<0.01),用川芎嗪和SB203580干预后,结缔组织生长因子和Ⅰ型胶原mRNA的表达均出现不同程度的下降.但川芎嗪和川芎嗪+SB203580混合干预对这两者的基因表达抑制作用比单独的SB203580干预更强.川芎嗪和SB203580对磷酸化p38MAPK蛋白表达也都有明显的抑制作用(P<0.01),但SB203580和川芎嗪+SB203580对其磷酸化蛋白表达抑制作用更明显,而SB203580与川芎嗪+SB203580无明显差异(P>0.05).因此,推测川芎嗪可能通过抑制转化生长因子β 1诱导的结缔组织生长因子基因表达,阻断Ⅰ型胶原合成,其作用途径可能与抑制p38mapk信号通路有关,同时认为川芎嗪抗纤维化可能是多重作用靶点.     

甘草酸对肝星状细胞增殖、活化和细胞外基质合成的影响

目的：探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、活化与细胞外基质合成的影响。方法：体外分离、培养大鼠肝星状细胞，甘草酸与HSC共同孵育。用m法、LDH测定法检测甘草酸对HSC增殖及活性的作用。Western印迹法检测1-1000 μmol／L甘草酸对HSC中α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的蛋白表达水平。结果：MTT实验显示1-1000μmol／L甘草酸能明显抑制肝星状细胞增殖但，不同浓度甘草酸并不影响肝星状细胞的活力。1～1000μmol／L甘草酸逐渐抑制α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的蛋白表达。结论：甘草酸可能通过干预大鼠HSC增殖、活化、减少胶原合成，发挥抗纤维化作用。     

β-arrestin1通过活化p38信号转导通路激活肝星状细胞促进肝纤维化

目的 探讨β-arrestin1(ARRB1)在肝纤维化中的作用，阐明ARRB1和p38信号转导通路诱导肝星状细胞活化从而促进肝纤维化的机制。方法 选取C57BJ/6L背景的雄性小鼠12只，随机分为对照组和模型组，每组6只小鼠，采用浓度为20%的四氯化碳诱导肝纤维化小鼠模型，并于临床收集肝硬化患者的肝组织及健康对照志愿者的肝组织样本。采用HE和天狼星红染色来评估肝纤维化情况。通过免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测ARRB1、p38、磷酸化p38(pp38)及纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白的表达水平。在人肝星状细胞LX2中使用转化生长因子-β(TGF-β)细胞因子诱导其活化，并分析ARRB1的表达水平；进而利用小干扰RNA和质粒沉默或者过表达ARRB1，同时配合p38特异性抑制剂（SB203580），揭示两者的调控关系。结果 在肝纤维化组织中ARRB1表达升高，p38信号活化增强（P均<0.05）。在肝星状细胞LX2中，TGF-β可以激活肝星状细胞并表达ARRB1和增强p38信号。ARRB1表达的升高或抑制可以相应地影响p38信号从...     

MAPK信号通路调控子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1-B,采用MTT法检测增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell试验检测细胞侵袭能力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测细胞中磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达水平的影响。结果:p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖具有抑制作用,且随着作用浓度的升高抑制作用增强(P0.05)。与对照组比,施加抑制剂SB203580能够导致G0/G1期HEC-1-B细胞比例增多,S期和G2/M期细胞比例减少,细胞侵袭抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞中p-p38MAPK, PCNA,MMP-2蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)。且抑制剂SB203580组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:抑制MAPK信号通路能够抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与下调细胞中PCNA,MMP-2蛋白表达有关。     

二烯丙基二硫诱导HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制研究

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)诱导HL 6 0细胞G2 /M期细胞生长阻滞的分子机制。方法　用不同浓度的DADS处理HL 6 0细胞 ,分别作用 0 ,6 ,1 2 ,2 4 ,4 8h后用MTT法测定细胞增殖活性 ;用流式细胞术和有丝分裂指数测定细胞增殖周期 ;用Westernblot检测 p38丝裂原活化蛋白 (p38MAPK)及Cdc2 5B和Cdc2激酶的表达和磷酸化水平 ;用RT PCR检测p38MAPKmRNA的表达。结果　DADS抑制HL 6 0细胞增殖呈浓度依赖性 ,且DADS(2 0 μmol/L)与ATRA(1 0nmol/L)对HL 6 0细胞增殖活性影响相近 (P >0 .0 5 ) ;DADS 2 0 μmol/L作用HL 6 0细胞 1 2h后能引起G2 /M期细胞百分数增高并达到最大值 ,而此时有丝分裂指数明显下降 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,磷酸化p38MAPK蛋白及p38MAPKmRNA的表达达到高峰 (P <0 .0 5 ) ,并引起Cdc2 5B和Cdc2磷酸化水平的相应变化。而p38特异性抑制剂SB2 0 2 1 90 (1 0 μmol/L)能阻断DADS对HL 6 0细胞增殖的抑制作用 (P <0 .0 5 )。结论　DADS能启动HL 6 0细胞G2 /M控制点 ,它的激活可能与磷酸化 p38MAPK的活化有关     

周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中p38MAPK信号通路的作用

背景：当牙齿受异常咬合力时会导致牙体吸收、牙周组织的大量破坏。目的：研究牙周膜成纤维细胞在受到周期性张应力刺激后是否发生凋亡及p38MAPK信号通路是否参与该凋亡过程。方法：取4～7代成纤维细胞,同步化后随机分为对照组、加力组和SB203580组。加力组和SB203580组细胞加载力值为12%表面应变率,加力频率为6个循环/min,即5s拉伸,5s松弛。SB203580组细胞在加力前1h加入终浓度为20mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。分别在加力6,12,24h,取各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡基因baxmRNA的表达。结果与结论：与对照组比较,加力后成纤维细胞凋亡率及baxmRNA表达增加（P〈0.05）,且随着加力时间的延长而增强,12h达高峰,之后逐渐下降。与加力组比较,SB203580组对应时间点细胞凋亡减少（P〈0.05）,baxmRNA表达降低。说明细胞受到力学刺激会发生凋亡,而丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK信号通路参与了该凋亡过程。     

“清肝活血方”对肝星状细胞增殖及胶原生成的影响

目的　研究“清肝活血方”药物血清对体外培养肝星状细胞增殖及胶原生成的影响。方法　原位分离大鼠肝细胞、肝星状细胞 ,3H TdR掺入法测定细胞增殖能力 ,ELISA法测定I型胶原含量。结果　乙醛可以直接促进肝星状细胞增殖和I型胶原的分泌 ,乙醛损伤肝细胞条件培养液培养下的肝星状细胞出现相同的改变 ,不同剂量的清肝活血方药物血清能产生正向调节作用 ,有效地抑制肝星状细胞增殖和I型胶原分泌。结论　清肝活血方既可以通过拮抗乙醛引起的肝脏脂质过氧化损伤 ,还可以直接阻止乙醛引起的肝星状细胞的活化增殖Ⅰ型胶原分泌 ,从而有效预防肝纤维化的发生和发展     

SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠肠缺血再灌注（IR）时p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响。方法：Wistar大鼠30只随机分为对照组（C组）、缺血再灌注组（Ⅰ组）和SB203580组（S组）（n=10）,采用肠IR模型检测p38 MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平。结果：Ⅰ组中p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组（P〈0.05）,而S组中p38 MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高（P〈0.05）。结论：SB203580抑制了小肠组织中p38 MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放,在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用。     

丝裂原激活蛋白激酶信号转导系统对维甲酸诱导NB4细胞分化的影响

本研究观察丝裂原活化蛋白激酶对全反式维甲酸（ATRA）诱导NB4细胞分化的影响并探讨其机制。采用MTT法测定细胞增殖活性，用流式细胞术分析细胞周期，NBT还原实验检测粒系分化，底物磷酸化法测定细胞外调节激酶（ERK）活性。结果显示：0．01—0．1μmol／L的ATRA呈时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖，并诱导NB4细胞向粒系分化；在这过程中ATRA激活ERK活性，ERK抑制剂PD98059能部分阻断ATRA的作用。p38MAPK的特异抑制剂SB203580与ATRA联合应用部分阻断了ATRA对细胞的生长抑制和诱导分化作用。结论：ATRA在诱导NB4细胞分化过程中激活ERK和P38MAPK途径，并且对该途径有依赖作用。     

阻断p38MAPK信号通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

【目的】探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路对大鼠急性肾缺血再灌注损伤（IRI）的影响。【方法】sD大鼠24只,随机分为3组,每组8只。对照组（S组）：仅结扎右侧肾蒂,左肾蒂游离;缺血再灌注组（IR组）：结扎右侧肾蒂,夹闭左侧肾蒂60min后,开放灌注24h;p38MAPK抑制剂组（SB组）：静脉注射p38MAPK特异抑制剂SB203580（10mg／kg）,余同IR组。检测三组血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-I水平和p38MAPK蛋白表达、组织病理评分并比较。【结果】与S组比较,IR组血BUN、Cr、TNF—α、IL-1水平、p38MAPK蛋白表达量及组织病理评分均显著增加（P〈0．05）;上述指标SB组较IR组显著下降（P〈0．05）。【结论】SB203580能阻断p38MAPK信号通路,减少p38MAPK表达,抑制炎症细胞因子的释放,减轻肾缺血再灌注损伤。     

离体肝脏早期缺血再灌注期间p38信号转导途径对TNFα mRNA表达的影响

目的：研究离体肝脏缺血再灌注期间丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,p38MAPK）信号转导途径对肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）mRNA表达的影响。方法：建立兔离体肝脏缺血再灌注模型,对照组（n=12）灌注液中不加特异性p38MAPK抑制剂SB202190,抑制组（n=12）灌注液中加入SB202190（浓度为3μmol/L）。分别于肝脏离体前,冷保存末,再灌注10 min、30 min、60 min及120 min时获取离体肝组织标本。应用Western-blot法及免疫沉淀法检测离体肝组织中p38MAPK表达的水平及活性,RT-PCR法检测TNF-αmRNA表达水平。结果：对照组p38MAPK活性在冷保存末及再灌注10 min、30 min、60 min均较离体前和再灌注120 min显著升高（P〈0.01）,也显著高于同时相点的抑制组（P〈0.01）;抑制组p38MAPK活性在组内各时相点的变化无显著性差异（P〉0.05）。两组肝脏于离体前、冷保存末及再灌注10 min及30 min,肝组织中仅有少量TNF-α mRNA表达,组间及组内比较无显著性差异（P〉O．05）;至再灌注60min及120min,对照组TNF-α mRNA的表达水平显著性高于组内其它时相点（P〈0．01）,而抑制组虽然也显著高于组内其它时相点（P〈O．05）,但却显著性低于同时相点对照组的表达水平（P〈O．01）。离体再灌注期间供肝组织中p38MAPK活性与供肝组织内TNF-α mRNA的表达水平呈显著性正相关（r=0．996,P〈0．01）。结论：p38MAPK对TNF-α生成的调节作用层次可能在转录水平,提示p38MAPK信号转导途径对TNF-α mRNA的调节可能是导致离体肝脏缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

p38丝裂素活化蛋白激酶与细胞外调节蛋白激酶在重症胰腺炎炎症反应和免疫抑制中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（p38 mitogen—activated protein kinase,p38MAPK）与细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）炎症反应和免疫抑制中的作用。方法75只Wistar大鼠随机分为对照组、SAP组、ERK抑制组（PD组）、p38MAPK抑制组（SB组）、ERK＋P38MAPK联合抑制组（PD＋SB组）各15只。对照组仅作开腹缝合处理,其余4组大鼠建立大鼠SAP模型,其中PD组大鼠术前30min尾静脉注射PD98059,SB组大鼠尾静脉注射SB203580,PD＋SB组大鼠尾静脉注射PD98059与SB203580。术后6、12h观察5组腹腔积液量变化情况。检测5组血清肿瘤坏死因子-α水平,并计算大鼠肺组织湿／干比值。结果对照组腹腔积液量、肺组织湿／干比值及血清肿瘤坏死因子-α水平明显低于其他4组（P〈i0．05）,PD＋SB组低于SAP组、PD组和SB组（P〈0．05）,PD组和SB组低于SAP组（P〈0．05）。结论ERK、p38MAPK在SAP炎症反应和免疫抑制中发挥重要作用,抑制其活性可抑制SAP过度活化的炎症反应,改善细胞免疫功能低下状态。     

p38MAPK信号转导途径对早期缺血再灌注期间离体肝脏ICAM1 mRNA表达的影响

目的：研究离体肝脏缺血再灌注期间丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,p38MAPK）信号转导途径对细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecular 1,ICAM1）mRNA表达的影响。方法：建立兔离体肝脏缺血再灌注模型,对照组（n=12）：灌注液中不加特异性p38MAPK抑制剂SB202190,抑制组（n=12）：灌注液中加入SB202190（浓度为3μmol/L）。于肝脏离体前,冷保存末,再灌注10 min、30 min、60 min及120 min时获取离体肝组织标本。分别应用Western-blot法及免疫沉淀法检测离体肝组织中p38MAPK表达的水平及活性,原位杂交法检测ICAM1 mRNA表达水平。结果：与离体前相较,对照组p38MAPK活性在冷保存末及再灌注10 min、30 min、60 min显著性增高（P〈0.01）,而再灌注120 min时活性与离体前相较无明显差异（P〉0.05）;抑制组p38MAPK活性在各时相点的变化无显著性差异（P〉0.05）,除离体前及再灌注120 min两组肝脏的p38MAPK活性无显著性差异外,其余各时相点p38MAPK活性均显著性低于对照组（P〈0.01）。离体前、冷保存末及再灌注10 min及30 min时,两组肝组织中仅有少量ICAM1 mRNA表达,组间及组内比较无显著性差异（P〉0.05）;至再灌注60 min及120 min,对照组ICAM1 mRNA的表达水平显著性高于组内其它时相点（P〈0.01）,而抑制组虽然也显著高于组内其它时相点（P〈0.05）,但却显著性低于同时相点对照组的表达水平（P〈0.01）。离体再灌注期间供肝组织中p38MAPK活性与供肝组织内ICAM1 mRNA的表达水平呈显著性正相关（r=0.985,P〈0.01）。结论：p38MAPK对ICAM1生成的调节作用层次可能在转录水平,提示p38MAPK信号转导途径对ICAM1 mRNA的调节可能是导致离体肝脏缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

促红细胞生成素抑制急性梗死心肌炎症因子的表达

背景：研究表明,炎症细胞因子可影响心肌梗死后的预后,在心脏重构的进程中起重要作用。同时促红细胞生成素的促红细胞生成之外的非造血效应也被广泛证实：促红细胞生成素可通过与靶细胞膜表面的促红细胞生成素受体结合而减少炎症反应,从而减少心肌缺血后的再灌注损伤。目的：观察重组人促红细胞生成素对大鼠急性心肌梗死后心脏重构中炎症因子表达的影响。方法：通过结扎左冠状动脉前降支建立 SD 大鼠急性心肌梗死模型,分为 5 组,假手术组注射生理盐水,手术对照组造模后注射生理盐水,SB203580 组造模后注射 p38 MAPK 的高选择性阻断剂 SB203580,促红细胞生成素组造模后注射促红细胞生成素注射液,促红细胞生成素＋SB203580 组造模后注射促红细胞生成素＋SB203580 混合液,分别在造模前、造模后 1 d、1 周、2 周及 4 周进行尾静脉采血,酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α水平变化。结果与结论：造模前各组大鼠血清白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α检测值差异均无显著性意义（P 〉 0.05）。假手术组各时段白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α检测值差异无显著性意义（P 〉0.05）,其余 4 组不同时段各因子检测值呈现造模后 1 d 最高,造模后 4 周回降的趋势（P 〈 0.05）。造模后手术对照组血清各因子检测值较其他组升高明显,而假手术组血清各因子检测值均低于其他 4 组（P 〈 0.05）;使用药物进行干预的 3 组中,促红细胞生成素＋SB203580 组各因子检测值较低（P 〈 0.05）,而促红细胞生成素组与 SB203580 组各因子检测值差异无显著性意义（P 〉 0.05）。提示重组人促红细胞生成素抑制了大鼠急性心肌梗死后心脏重构中炎症因子白细胞介素 1β、白细胞介素 6、肿瘤坏死因子α的表达,重组人促红细胞生成素抑制炎症因子表达的机制可能与转化生长因子β1-TAK1-p38 MAPK 信号路径相关。     

VEGF通过细胞外信号调节激酶途径促进骨髓源间充质干细胞的增殖

本研究旨在探索血管内皮生长因子(VEGF)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响及其可能的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞术分析其表面标记(CD45、CD34、CD90、CD29)等鉴定MSC特征;以培养的第3代MSC(P3MSC)为实验材料,采用MTT法分析20ng/ml的VEGF作用12、36、72小时对MSC增殖的影响;随后以细胞外信号调节激酶(ERK1/2)阻断剂50μmol/L PD98059或丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂30μmol/L SB203580等分别处理P3MSC,观察VEGF是否通过p38MAPK或ERK1/2途径影响MSC的增殖。结果表明:培养的P3MSC表达PDGFR-α、PDGFR-β和NRP1,不表达VEGF-R(Flk1和Flt1)。P3MSC呈现CD90(96.7%)和CD29(94.6%)强阳性以及CD34(0.79%)和CD45(0.84%)阴性特征,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;20ng/ml VEGF作用于MSC后,随着时间的延长,MSC增殖也逐渐增强,在72小时达峰值。在50μmol/L PD98059或30μmol/L SB203580处理后,VEGF所介导的MSC增殖效应被阻断,且在对照水平以下。PD98059阻断效应明显强于SB203580的阻断效应。结论:VEGF可能主要通过细胞外信号调节激酶途径调节MSC的增殖。