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相似文献
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1.
背景:不同种类细胞的最佳化标记方案需要大量实验证明,而每种细胞对应标记策略的安全性检测至关重要.目的:应用超顺磁性氧化铁联合多聚左旋赖氨酸标记猪脂肪干细胞,探讨磁标记对细胞生物学特性和多向分化潜能的影响以及标记细胞体外3.0T MR成像特性.方法:五指山小型猪皮下脂肪分离培养脂肪干细胞;超顺磁性氧化铁-多聚左旋赖氨酸复合物标记液标记脂肪干细胞;应用3.0T MR对不同浓度标记细胞进行T1WI、T2WI及T2*WI序列体外成像.结果与结论:普鲁士蓝染色显示标记细胞胞质内含有多少不等的蓝染铁颗粒,细胞标记率近100%;标记细胞向心肌、骨、脂肪方向诱导分化成功;不同浓度标记细胞MR扫描显示,随细胞浓度升高,3种序列信号变化率均增加;相同浓度细胞T2*WI信号变化率最大,T1WI最小,同一浓度3种MR序列间信号变化率差异均有显著性意义(P < 0.01);3.0T MR成像能检测到至少1×106 L-1标记细胞.结果显示应用超顺磁性氧化铁联合多聚左旋赖氨酸标记方案可有效标记脂肪干细胞,不影响细胞活力、增殖及多向分化能力;T2*WI序列检测标记细胞最敏感.  相似文献   

2.
超顺性氧化铁在细胞内外对磁共振信号的影响   总被引:2,自引:1,他引:2  
背景:目前关于超顺磁性氧化铁在进行细胞标记和作为网状内皮细胞系统特异性对比剂时对周围质子驰豫时间影响的报道差异较大。目的:验证超顺磁性氧化铁在细胞内外对磁共振信号的影响有否差异,以选择最佳的磁共振扫描方法。设计、时间及地点:对比观察,细胞成像实验,于2006-06/2007-01在川北医学院附属医院医学影像研究所和风湿免疫研究所完成。材料:超顺磁性氧化铁采用Resovist(SHU555A),由德国先灵公司惠赠。将大鼠骨髓基质干细胞用铁质量浓度分别为0,4.2,8.4,21,42,84mg/L的氧化铁-多聚赖氨酸复合物标记。方法:应用GE Signa EXCITE 1.5TMR扫描仪对19只含不同质量浓度超顺磁性氧化铁的EP管及不同质量浓度铁标记后的磁标记细胞悬液进行体外MR成像。主要观察指标:超顺磁性氧化铁在不同磁共振序列上随质量浓度改变其信号改变的规律;低质量浓度时细胞内外超顺磁性氧化铁对磁共振信号影响的差异。结果:①在细胞外:T1WI信号强度随超顺磁性氧化铁质量浓度的增加先升高后降低,在T2WI上随质量浓度的增加信号降低,在低质量浓度时,T1WI及T2*WI较T2WI更敏感,以T2*WI最敏感(P〈0.05)。②在细胞内:MR信号强度随培养液中铁质量浓度的增加而增加,在FSET1WI,铁质量浓度≤21mg/L时,各组间信号强度没有显著性差异,当质量浓度为42mg/L和84mg/L时信号强度较对照组明显升高(P〈0.05)。在FSPGR T1WI,当铁质量浓度≥8.4mg/L时,各管信号强度明显高于对照管(P〈0.05)。在FSE T2WI及GRE T2*WI上,当质量浓度为4.2mg/L时,信号强度较对照管信号强度明显降低(P〈0.05),且T2*WI信号降低较T2WI明显(P〈0.05)。结论:低质量浓度的超顺磁性氧化铁在细胞内外对MR信号的影响是不同的,T2*WI为检测超顺磁性氧化铁较敏感而特异的序列。  相似文献   

3.
背景:干细胞磁性标记是新近开展的一项干细胞体外标记技术,结合MR成像设备可以活体监控移植入体内的干细胞.目的:明确超顺磁性氧化铁粒子体外标记猪骨髓间充质干细胞的方法、不同种类超顺磁性氧化铁标记细胞经MR成像的特征及可成像的最低标记细胞量.设计、时间及地点:对比观察,于2006-09/2007-03在苏州大学医学部心血管外科实验室及苏州大学附属第一医院影像中心完成.材料:猪髂骨骨髓由太湖梅山猪新鲜采集:超顺磁性氧化铁纳米颗粒为德国Schering公司产品;超微型超顺磁性氧化铁纳米颗粒由苏州大学化学与化工学院提供:铁颗粒晶核表面包被葡聚糖,3种超微型超顺磁性氧化铁包被葡聚糖后根据颗粒大小(12,15,20 nm)分别依次简称为1#,2#,3#.方法:分离、纯化、培养猪骨髓间充质干细胞,体外进行不同种类超顺磁性氧化铁标记,染色及荧光显微镜观察;测量并绘制未标记细胞和标记细胞的MTT生长曲线;选取不同的细胞量组(Feridex标记细胞分别选取1×106、5×105及1×105L-1量组,未标记细胞选取5×105L-1量组,1#、2#及3#超微型超顺磁性氧化铁标记细胞均选取5×105L-1量组)进行标记后MR成像,测量不同扫描序列标记细胞管的信号强度改变,并进行统计学分析.主要观察指标:超顺磁性氧化铁标记干细胞的普鲁士蓝染色检测标记率:标记干细胞的MTT生长曲线;双染色法检测细胞凋亡;不同Ependoff管内细胞团T1WI、T2WI和FFE图像的信号强度.结果:应用多聚赖氨酸介导干细胞磁标记方法标记骨髓间充质干细胞有效率为100%,普鲁士蓝染色见细胞浆内有多少不等的蓝染铁颗粒;超顺磁性氧化铁标记的间充质干细胞在T2WI尤其是FFE(T2WI)序列信号明显降低;在25 mg/L Fe培养液标记浓度下,MR成像的最低细胞量为1×105;在不同种类超顺磁性氧化铁标记下,2#、3#USPIO与Feridex在T2WI及T2*WI上有显著性差异(P<0.01);而1#USPIO与Feridex在T2WI及T2WI上差异无显著性意义(P>0.05):Feridex标记间充质干细胞在T2WI及T2WI上与T1WI相比,差异均有显著性意义(P<0.01).结论:超顺磁性氧化铁可以简便标记间充质干细胞并且在适当浓度下对间充质干细胞的生物学活性没有影响,MR T2WI和T2*WI序列可敏感显像磁性标记的干细胞.  相似文献   

4.
背景:传统的干细胞标记方法常需要病理组织学等侵袭性手段检测,无法动态观察整个实验过程,也不适合临床研究。目的:观察超顺磁性氧化铁纳米颗粒体外标记对兔骨髓间充质干细胞生物学特性的影响以及标记兔骨髓间充质干细胞的体外MRI成像特征。方法:采用红细胞裂解贴壁法培养扩增兔骨髓间充质干细胞。采用不同浓度超顺磁性氧化铁纳米颗粒(100,50,25,12.5mg/L)联合多聚赖氨酸(0.75mg/L)标记兔骨髓间充质干细胞。对标记兔骨髓间充质干细胞进行MRI检测,观察其成像特征。结果与结论:25mg/L的超顺磁性氧化铁纳米颗粒联合0.75mg/L多聚赖氨酸标记兔骨髓间充质干细胞具有较好的安全性和有效性。此浓度对细胞的生长活性没有影响,不影响骨髓间充质干细胞的成骨成脂分化能力。MRI扫描在T2^*WI序列上能明显有效地显像超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记的兔骨髓间充质干细胞。  相似文献   

5.
背景:骨髓间充质干细胞移植是治疗股骨头坏死的发展方向之一。近年来,利用超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记靶细胞再经MRI显像的方法已成为研究的焦点。目的:观察超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在MRI信号上的变化情况及对兔股骨头坏死的修复效果。方法:将超顺磁性氧化铁标记的兔骨髓间充质干细胞、未标记的骨髓间充质干细胞、生理盐水采用原位移植方式移植入兔股骨头坏死区,行MRI检测,观察移植入坏死区的超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在SE T2WI、FSE T2WI、GRE T2WI 三种扫描序列中信号变化情况;同时行组织学观察及高倍镜下缺损标本边缘新生骨小梁面积百分比行统计学分析。结果与结论:超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞原位移植侧,在SE T2WI、FSE T2WI、GRE T2*WI 三种扫描序列中信号减低区即为实验中的靶点,MRI图像示靶点在3种扫描序列中信号强度均有不同程度的降低,而对照侧则无明显信号改变;移植后6周,超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞移植侧高倍镜下缺损标本边缘新生骨小梁面积百分比与未标记的骨髓间充质干细胞移植侧间差异无显著性意义(P〉0.05),均高于生理盐水移植侧,差异有显著性意义(P〈0.01)。结果可见超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞与未标记的骨髓间充质干细胞原位移植治疗兔股骨头坏死有着同样的效果,MRI 可对超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞进行活体示踪检测。  相似文献   

6.
背景:优化人源细胞安全、有效的标记参数及细胞移植后的定位是评价其治疗效果至关重要的环节。目的:比较核磁影像对比剂超顺磁性氧化铁纳米粒子体外标记入骨髓和脐带间充质干细胞的细胞活率、标记效率及核磁共振T2*WI成像的效果,优化标记细胞处理细节。方法:培养第3代人骨髓和脐带间充质干细胞,以5-30mg/L菲立磁(FeridexIV)结合硫酸鱼精蛋白标记细胞。结果与结论:人骨髓和脐带间充质干细胞标记前后细胞的存活率接近(P〉0.05)。以530mg/L菲立磁标记骨髓间充质干细胞的阳性标记率差异无显著性意义(P〉0.05):而5mg/L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率与20和30mg/L菲立磁标记的差异有显著性意义(P〈0.05):10mg/L菲立磁标记脐带间充质干细胞的阳性标记率低于骨髓间充质干细胞(P〈O.05)。当≥20mg/L菲立磁标记细胞时,2种来源的细胞悬液中均出现不易洗脱和过滤去除的氧化铁颗粒。标记后细胞在3.0T MR GRE T2*WI扫描均见随菲立磁的浓度升高,信号强度减弱。提示这2种组织来源的间充质干细胞,以10mg/L的菲立磁硫酸鱼精蛋白复合物标记是安全有效的,可用临床T2*WI的MR成像观察。  相似文献   

7.
超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的磁共振成像研究   总被引:16,自引:2,他引:16  
目的明确顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)体外标记兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的适当浓度和不同标记浓度对细胞的生物学活性影响,以及经MR成像的特征和可成像的最低标记细胞量等。方法分离、纯化、培养兔MSCs,体外不同浓度SPIO标记,荧光显微镜观察铁颗粒在细胞内的位置、不同标记浓度下的最佳孵育时间、不同标记浓度细胞形态的改变、细胞内铁颗粒的分布及标记率;测量并绘制未标记细胞和标记细胞的MTT生长曲线;选取适当浓度标记量,对不同细胞量组进行标记后MR成像,测量不同扫描序列标记细胞管的信号强度改变,并进行统计学分析。结果标记后的铁颗粒均位于细胞质内;20~50μgFe/ml培养液是SPIO标记干细胞的适当浓度阈值,超过50μgFe/ml培养液浓度可使细胞的变形增殖能力受到不同程度的抑制;在此浓度阈值标记后孵育18~24h即可有效标记细胞97%~100%;细胞对铁颗粒的吸收与细胞的数量、标记浓度和孵育时间呈正相关;SPIO标记的MSCs在T2WI尤其是FFE(T2WI)序列信号明显降低;在35μgFe/ml培养液标记浓度下,MR可成像的最低细胞量为5×104;35μgFe/ml培养液浓度时,标记细胞1×105和5×104MR成像可使T2WI、FFE图像信号均降低,而且没有使靶灶扩大的磁敏感伪影。结论SPIO可以简便标记MSCs并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,MRT2WI和T2WI序列可敏感显像磁性标记的干细胞。  相似文献   

8.
目的 以超小超顺磁性氧化铁(USPIO)标记SD大鼠脂肪来源干细胞(ADSCs),探讨临床型1.5 T MR扫描仪活体示踪SD大鼠急性心梗后心肌注射USPIO标记的干细胞并同时评估心功能的可行性.方法 USPIO 40 μg Fe/ml、多聚赖氨酸(poly-l-lysine,PLL) 1.5 μg/ml与ADSCs共...  相似文献   

9.
背景:干细胞移植的疗效和安全性评估均需要对体内干细胞的存活、分布、迁徙、增殖及分化进行连续监测。目的:观察MRI示踪超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在缺血心肌组织的分布、迁徙情况。方法:直接贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,获得的细胞进行免疫鉴定。以新型超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞,体外MRI成像确定其体内示踪的可行性。标记后锥虫蓝拒染试验、MTT比色试验分别检测标记细胞的活力、增殖情况。60只SD大鼠随机分为3组,制备大鼠心肌梗死模型2周后再次开胸移植含标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液、含未标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液和等量PBS。于移植后第1天、第3周行MRI检查,动态观察移植细胞的分布、迁徙,并根据MRI图像定位选择性行CD90免疫组化检查。结果与结论:骨髓间充质于细胞标记后,普鲁士蓝染色见胞浆内蓝色铁颗粒,标记效率为99%,标记细胞与未标记细胞间锥虫蓝拒染率、MTT吸光度差异无显著性意义。体外MRI可检测到标记细胞,并在T2WI及T2W/FFE序列上呈低信号。细胞移植1d后,在T2WI及T2W/FFE序列上可见标记细胞在梗死心肌边缘呈类圆形低信号;移植3周后,移植区域信号边界模糊,范围扩大,对比度降低。CD90免疫组化检测证实移植细胞可由梗死边缘向梗死区域迁徙。结果可见新型超顺磁性氧化铁可成功对大鼠骨髓间充质干细胞进行标记,细胞标记后可被MRI检测。  相似文献   

10.
背景:超顺磁性氧化铁作为磁共振对比剂已进行了大量临床实验,但其随标记细胞传代分化后的分布及代谢却报道甚少.目的:实验首次观察和描述了体外超顺磁性氧化铁标记的大鼠骨髓基质干细胞及其传代细胞的情况,并以磁共振信号检测铁粒子随细胞传代的演变情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-06/2007-01在川北医学院附属医院医学影像研究所和风湿免疫研究所完成.材料:清洁级雌性大白鼠2只,由川北医学院动物中心提供.超顺磁性氧化铁由德国先灵公司惠赠.方法:抽取大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓,采用贴壁法分离纯化骨髓基质干细胞,用铁浓度为42 mg/L的氧化铁-多聚赖氨酸复合物600 μL进行体外标记.主要观察指标:倒置显微镜下观察各代细胞标记阳性率,磁共振扫描测定磁共振信号强度变化百分率.结果:普鲁士蓝染色后,镜下第1代细胞超顺磁性氧化铁标记阳性率为100%,随着传代次数的增加,第1~5代细胞标记阳性率逐级降低.与未接受超顺磁性氧化铁标记的PBS对照比较,除第1,2代细胞信号强度变化率无明显变化外,随着细胞的传代磁共振信号强度变化百分率逐渐降低,细胞标记率与T2~*WI信号强度呈负性相关(r=-0.986 6,P<0.005).结论:标记入骨髓基质干细胞内的铁能随细胞的传代而传向子代,并可以在一定时期内用磁共振进行追踪检测,实验结果亦首次提出了磁标记的细胞铁粒子可随细胞传代而递减的规律.  相似文献   

11.
背景:国内外动物实验多是荧光标记骨髓间充质干细胞的移植,以SPIO标记脂肪干细胞移植后活体示踪对退变椎间盘修复作用的研究较少.目的:活体监测SPIO标记的脂肪干细胞在退变椎间盘内的存活、迁移和转归,以及脂肪干细胞对退变椎间盘的修复及延缓退变作用.方法:新西兰大白兔20只,兔椎间盘被分为4组,即正常对照组(L1/2),脂肪干细胞组(L2/3),PBS组(L3/4),SPIO-脂肪干细胞组(L4/5).透视引导下用18G穿刺制作退变模型后2周行SPIO标记的脂肪干细胞移植.结果与结论:SPIO-脂肪干细胞移植后即刻T2WI/FFE序列上可见椎间盘内明显低信号,8周后仍可检测到低信号.脂肪干细胞移植组与同时间点PBS组比较,椎间盘退变程度轻.提示SPIO-脂肪干细胞移植至椎间盘后,可通过MRI进行监测;脂肪干细胞椎间盘内移植有助于修复退变椎间盘和延缓椎间盘退变.  相似文献   

12.
目的通过采用多聚左旋赖氨酸(PLL)与超顺磁氧化铁纳米微粒(SPIO)的复合物对脂肪干细胞(ADSCs)体外进行标记,观察SPIO标记ADSCs脑内移植治疗大鼠脑梗死的分布和迁徙情况。方法显微镜下直接结扎大脑中动脉方法制备大鼠脑梗死模型36只,随机分成缺血未干预对照组(12只)、磁性标记ADSCs移植组(12只)和未磁性标记ADSCs移植组(12只),采用立体定向方法脑内移植。对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,病理组织化学染色观察ADSCs在体内的分布情况,并用磁共振成像的方法在体观察ADSCs的分布,并与病理结果进行对比。结果移植后3周神经系统行为学评分显示移植组动物明显改善,ADSCs脑内移植后3周MRT2WI显示移植区低信号改变并通过胼胝体向病灶迁移。病理组织检查显示磁共振低信号改变区可见普鲁士蓝染色阳性细胞。结论移植ADSCs可以有效地促进大鼠脑梗死后神经行为功能的恢复,MRI可用于在体评价经SPIO和PLL复合物标记的ADSCs细胞移植后在体内的分布、迁移过程。  相似文献   

13.
目的:观察不同浓度超顺磁性氧化铁(SPIO)标记对干细胞生物学特性的影响及SPIO标记后BMSCs体外的MRI特征。材料与方法分离、培养SD大鼠的BMSCs,取第四代的BMSCs,通过流式细胞仪检测表面抗原。不同浓度的SPIO标记液标记BMSCs,通过普鲁士兰染色检测标记效率,台盼兰活细胞计数检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖活性。通过MRI检查,观察体外不同浓度SPIO标记细胞的信号变化情况。结果 SPIO在25~50μg/ml的浓度范围可以安全、高效地标记BMSCs,不会影响BMSCs的表型、活力和增殖等生物学特性;当SPIO浓度在75μg/ml以上时,BMSCs活性及增殖能力逐渐降低。随着SPIO标记浓度的增加,细胞内摄入的铁逐渐增多,而T2信号强度则逐渐降低;当SPIO浓度≥50μg/ml,标记细胞的T2信号强度与普通BMSCs相比较均有明显差异(P〈0.05)。结论适当浓度的SPIO标记BMSCs对其生物学活性没有明显影响,且MRI扫描能够有效检测其信号变化。  相似文献   

14.
目的探讨标记细胞不同细胞数量所引起的MR信号强度变化规律,以及MR示踪最敏感的成像序列,为标记细胞活体内MR示踪奠定基础。方法用1%的琼脂糖混悬经Brdu和SPIO双标记的BMSCs(分别为2×106、1×106、5×105个)和未标记的BMSCs(2×106个),分别置于不同EP管中,行冠状位和轴位TSE序列T1WI、T2WI和FFE—T2WI扫描,测量相同细胞数量不同成像序列以及相同成像序列不同细胞数量的MR信号强度,并比较信号强度变化百分率。结果标记组5×105、1×106、2×106个细胞不同扫描序列MR信号强度变化百分率分别为,TSE—T1WI:(-4.19±0.788)%、(-16.35±1.228)%、(-22.80±1.053)%;TSE—T2WI:(-14.15±1.366)%、(-35.09±1.391)%、(-53.02±1.299)%;FFE—T2WI:(-44.98±0.456)%、(-69.38±0.820)%、(-87.24±0.818)%。同一扫描序列中各标记细胞组之间以及相同标记细胞数量各成像序列之间两两比较,差异均有统计学意义(P〈0.001)。结论磁粒子标记BMSCs,细胞浓度相同条件下,以FFE-T2WI序列信号下降最为明显,标记的细胞数量越多,信号改变越明显,呈细胞数量依赖性。FFE—T2WI序列为磁粒子标记细胞MR示踪的理想序列。  相似文献   

15.
目的 在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型中,比较常规T2加权成像(T2 weighted imaging,T2WI)、钆 二乙三胺五醋酸(gadolinium diethylenetriamine pentaacetic acid,Gd DTPA)和超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)增强图像之间的差异,探讨巨噬细胞在多发性硬化(multiple sclerosis,MS)炎性活动病灶中的细胞学标志。方法 在EAE模型临床症状的亚临床期、初发期、高峰期,13只复发缓解(relapsing remitting,R R)EAE大鼠模型组和13只正常对照组大鼠在注入对比剂之前均行常规T2WI扫描,接着分别在其尾静脉注入Gd DTPA后5 min行T1加权成像(T1 weighted imaging,T1WI),再注入SPIO,24 h后行T2*WI扫描。扫描完毕后立即处死大鼠取脑,行脑组织切片的ED1免疫组织化学染色和Prussian blue染色。结果 EAE模型组大鼠在第11天出现临床症状(初发期),第14天达到高峰期;MRI检查:SPIO增强图像对EAE病灶的显示较常规T2WI和Gd DTPA增强图像好。病理学检查:ED1染色,在SPIO显示为低信号的区域内出现了炎症细胞(以巨噬细胞为主)浸润;Prussian blue染色示病灶内巨噬细胞胞质内出现了蓝染颗粒,沉积部位与T2*WI上低信号区对应。对照组大鼠均无异常。结论 SPIO较Gd DTPA更好地显示EAE模型中炎性活动性病灶内血管周围以巨噬细胞为主的浸润。  相似文献   

16.
目的研究C6细胞内高表达的铁蛋白与标记的超顺磁性纳米铁颗粒(SPIO)的相互作用,利用磁共振进行此类标记细胞的活体示踪。方法构建鼠铁蛋白重链基因质粒并转染鼠胶质瘤C6细胞。转染铁蛋白基因的细胞和对照细胞标记SPIO后,分别皮下接种于一组裸鼠后腿部左、右侧。在肿瘤细胞接种后不同时间点,进行T2WI扫描。接种2周后处死裸鼠,测定两组接种细胞生成的肿瘤组织中的铁浓度。结果进行铁蛋白基因转染并标记SPIO的C6细胞来源肿瘤,铁浓度明显高于没有铁蛋白基因转染但标记SPIO的C6细胞来源肿瘤(P=0.034,n=5)。在接种后第2天(P=0.012,n=5)、第6天(P=0.003,n=5)和第13天(P=0.021,n=5),进行铁蛋白基因转染并标记SPIO的C6细胞来源肿瘤与对照组相比,T2信号强度明显改善。结论铁蛋白与SPIO相互作用,并可以延长磁共振活体细胞示踪时间。  相似文献   

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