直肠癌局部浸润及肝转移中MT和FasL表达异常的意义

目的 探讨直肠癌局部浸润及肝转移中金属硫蛋白(metallothionein,MT)和人凋亡相关因子配体(Fas Ligand,FasL)蛋白表达异常的意义.方法 采用免疫组化和定量RT-PCR方法检测85例直肠癌原发灶、正常直肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶MT、FasL表达,比较各组间数据差异并作统计学分析.结果 直肠癌原发灶、正常直肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中MT表达阳性率分别为:57.3%、29.6%、79.5%、61.8%.FasL表达阳性率分别为:45.8%、17.8%、63.5%、90.3%.癌原发灶、肝转移灶和转移淋巴结中MT、FasL表达阳性率高于正常直肠黏膜组织(X~2=33.1322、56.7142,P<0.01).C、D期MT、FasL表达阳性率高于A、B期(X~2=18.8372、21.5823,P<0.01).低分化腺癌和黏液腺癌MT、FasL表达阳性率高于高分化和中分化腺癌(X~2=11.2146、9.3136,P<0.05).转移淋巴结中MT mRNA表达高于FasL mRNA表达.肝转移灶中FasL mRNA表达水平高于MT mRNA表达.结论MT、FasL表达对分别预测直肠癌组织局部淋巴结转移和早期肝转移具备临床诊断价值,两者对判断直肠癌患者预后亦有重要意义.     

组织蛋白酶 B在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨组织蛋白酶 B( CatB)的表达与结直肠癌浸润和转移的关系及临床意义.方法采用免疫组织化学(免疫组化)法检测 83例患者的结直肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中 CatB表达,用酶联免疫吸附法检测患者外周静脉血 CatB水平.结果结直肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中 CatB表达阳性率分别为 56.6%、 31.3%、 88.4%和 85.0%,癌原发灶、肝转移灶和转移淋巴结中 CatB表达阳性率高于正常肠黏膜组织(χ 2=45.6124, P< 0.01);转移淋巴结和肝转移灶中 CatB表达阳性率高于癌原发灶(χ 2=11.5982、 4.3747, P< 0.05). Dukes C、 D期 CatB表达阳性率高于 Dukes A、 B期(χ 2=16.9385, P< 0.01),低分化腺癌和黏液腺癌 CatB表达阳性率高于高、中分化腺癌(χ 2=14.2338, P< 0.01). 83例结直肠癌患者外周静脉血 CatB平均水平为( 5.9± 2.9) ng/ml, 30例健康志愿者 CatB平均水平为( 2.3± 1.1) ng/ml,两者差异有统计学意义( t=6.6975,P< 0.01). Dukes C、 D期结直肠癌患者外周血 CatB水平高于 Dukes A、 B期患者.结论 CatB增强表达与结直肠癌浸润转移有关,检测外周静脉血 CatB水平对临床预测和判断淋巴结和肝转移有重要意义,有助于评价和观察临床治疗效果.     

FasL基因表达对结直肠癌细胞肝转移影响的研究

目的　探讨FasL基因表达对结直肠癌细胞生物学行为的影响及在肝转移中的作用。方法　采用RT PCR方法检测大肠癌原发灶、癌旁肠黏膜、肝转移灶中FasL基因表达。用细胞转染方法 ,将FasLcDNA转染人直肠癌细胞HR 8348,采用四唑蓝法观测FasL表达对癌细胞生长抑制率及对5 FU、卡铂杀伤作用的影响。　结果　结直肠癌原发灶 (5 8例 )、癌旁肠黏膜 (5 8例 )、肝转移灶 (2 8例 )中FasL基因表达阳性率分别为 2 4 % (14 /5 8)、14 % (8/5 8)、10 0 % (2 8/2 8)。肝转移灶中FasL表达阳性率高于癌原发灶 (χ2 =4 3 4 9,P <0 0 1)和癌旁肠黏膜组织 (χ2 =5 7 6 6 ,P <0 0 1)。肝转移组原发灶FasL表达阳性率高于无肝转移组 (χ2 =3 96 ,P <0 0 5 )。转染HR 8348细胞FasL表达为阳性。用 5 FU、卡铂杀伤FasL转染细胞和未转染细胞 ,2组癌细胞生长抑制率有显著性差异 (t=9 0 2、t=11 93,P <0 0 1)。在相同化疗药物浓度下 ,FasL阳性HR 8348细胞存活率高于对照组癌细胞。　结论　FasL阳性癌细胞对化疗药物有较强的耐受性。FasL基因表达能使癌细胞逃避免疫监视和杀伤并对化疗药物产生抗性 ,促进结直肠癌发生肝转移。     

Anchor Attachment蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨Anchor Attachment蛋白(AAP)的表达与结直肠癌浸润和转移的关系及临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测83例结直肠癌患者的正常肠黏膜、癌原发灶、转移淋巴结及肝转移灶中AAP的表达,并分析AAP表达水平与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 结直肠正常肠黏膜、癌原发灶、淋巴结和肝转移灶中AAP的表达阳性率分别为20.5%、53.0%、69.8%和80.0%;癌原发灶、转移淋巴结和肝转移灶中AAP表达阳性率均显著高于正常肠黏膜组织(x2=42.349,P<0.01),转移淋巴结和肝转移灶中AAP阳性率又高于癌原发灶(x2=6.666,P<0.05);淋巴结转移患者和肝转移患者的原发灶AAP阳性率显著高于无转移者(x2=10.056,7.705,P<0.01);Dukes分期A、B、c、D期患者AAP阳性率逐渐增高,各分期之间差异有统计学意义(x2=12.313,P<0.01).83例结直肠癌患者血清AAP水平为(6.3±2.8)ng/ml,30例志愿者AAP水平为(2.2±0.9)ng/m1,两者差异有统计学意义(t=6.97,P<0.01);Dukes分期A、B期患者血清AAP水平为(5 2±2.6)ng/ml,C、D期患者AAP水平为(7.1±2.9)ng/ml,两者差异有统计学意义(t=2.028,P<0.05).结论 AAP增强表达与结直肠癌浸润和转移密切相关,检测外周静脉血AAP水平对预测和判断结直肠癌局部复发和肝转移有重要意义.     

消化道肿瘤淋巴结转移灶多药耐药性的变化及其意义

目的探讨消化道肿瘤淋巴结转移灶多药耐药性（MDR）的变化。方法对55例胃癌、大肠癌原发灶及相应淋巴结转移灶分别进行MDR相关蛋白（MRP）、P-糖蛋白（gp）、DNA拓扑异物酶（Topo）Ⅱα、谷胱甘肽S转移酶（GST）-n免疫组织化学染色，比较二病灶间诸指标表达程度的差异。结果原发灶与淋巴结转移灶比较：（1）两者的MRP、P-gp、TopⅡα、GST-n表达一致率分别为32．7％、40．0％、45．5％、50．9％；（2）P—gp、GST-n阳性表达差异均有统计学意义（P〈0．01）；（3）中高分化腺癌的MRP、TopⅡα阳性表达差异均有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05），低分化腺癌仅GST-n阳性表达差异有统计学意义（P〈0．01）。中高分化腺癌与低分化腺癌比较：原发灶中TopⅡα阳性表达、转移灶中MRP及TopⅡα阳性表达差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论消化道肿瘤淋巴结转移灶存在MDR的异质性变化，肿瘤原发灶的耐药基因相关蛋白表达水平不能预测淋巴结转移灶的MDR。     

精氨酸酶在结直肠癌原发灶及转移灶组织中的表达及意义

目的研究精氨酸酶在结直肠癌原发灶及转移灶组织中的表达及其意义,探究其在结直肠癌转移中的作用及临床应用价值。方法应用免疫组化方法检测正常肠粘膜、结直肠癌原发灶、淋巴结转移灶及肝转移灶中人精氨酸酶的表达,并进行数据统计分析。结果在不同分期的结直肠癌不同组织中,人精氨酸酶的表达有规律性的变化。癌组织中人精氨酸酶的表达显著高于正常肠粘膜组织（P〈0．01）,转移癌组织中人精氨酸酶阳性表达率比Ⅱ期癌原发灶组织明显增高（P〈0．05）;肝转移灶组织与淋巴结转移灶组织中人精氨酸酶的表达率无明显差异（P〉0．05）。结论人精氨酸酶在Ⅲ期、Ⅳ期结直肠癌原发灶组织及各种转移组织中高表达,可能与结直肠癌的转移相关。     

Twist 蛋白在结直肠癌和肝转移组织中的表达及临床意义

目的：探讨Twist蛋白在结直肠癌及肝转移组织中的表达及其临床意义。方法选取2001年1月至2012年12月伴有肝转移的结直肠癌患者成套组织标本（原发灶、肝转移灶、距肿瘤边缘10 cm以上的正常结直肠黏膜组织）54例患者。采用免疫组织化学SP法检测54例患者标本的原发灶、肝转移灶及正常结直肠黏膜组织中Twist蛋白的表达,数据分析处理采用SPSS 19．0统计软件包,计数资料采用R ＆#215;C表资料的χ2检验,生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线法,Log-rank检验分析肿瘤浸润程度、淋巴结转移、组织学分型及Twist蛋白在原发灶及肝转移灶中表达的情况,采用Cox回归模型进行独立预后因素分析。结果 Twist蛋白在结直肠癌原发灶中的阳性表达率明显高于肝转移灶、正常结直肠黏膜组织（P＜0．001）;原发灶中Twist蛋白在不同浸润深度T2、T3、T4的阳性表达率分别为30．0％、64．9％、85．7％,其差异有统计学意义（P＝0．049）;单因素分析显示,原发灶及肝转移灶中Twist蛋白阳性表达组患者的总体生存率均显著低于阴性表达组（P＝0．034,P＝0．031）;多因素生存分析证实肿瘤浸润深度、淋巴结转移和肿瘤组织学分型为影响患者总体生存率的独立因素（P＜0．001,P＝0．002,P＝0．005）,而Twist蛋白在原发灶及肝转移灶中的表达不是总体生存率的独立因素（ P＝0．548,P＝0．742）。结论 Twist蛋白在结直肠癌肝转移患者的原发灶高表达,其可能参与结直肠癌肝转移的发生,对评价结直肠癌肝转移患者预后具有一定临床意义。     

GPAA1在结直肠癌中表达增强及其意义

目的 通过检测GPAA1在结直肠癌组织中的表达以探讨其与结直肠癌增殖、侵袭、转移的关系.方法 取新鲜结直肠癌原发灶组织(52例)、正常结直肠黏膜(52例)和肝转移灶组织标本(11例)分别行免疫组织化学检测;实时定量PCR检测每个组织样本中GPAA1基因表达水平;高表达GPAA1 mRNA结直肠癌组织和低表达GPAA1 mRNA结直肠癌组织行原代细胞培养,将培养获得的原代细胞进行Boyden小室体外增殖、侵袭实验.结果 52例结直肠癌患者标本经免疫组织化学检测,GPAA1在结直肠正常肠黏膜、癌原发灶、肝转移灶中的表达阳性率分别为21.15% ( 11/52)、55.76% (29 /52)、和72.73% ( 8/11).GPAA1在结直肠癌原发灶、肝转移灶中表达阳性率均高于正常肠黏膜组织(P＜0.01).通过实时定量PCR检测发现GPAA1 mRNA表达水平在结直肠癌原发灶、肝转移灶中均高于结直肠正常肠黏膜(P＜0.01);在肝转移灶中的GPAA1 mRNA水平高于癌原发灶(P＜0.05);高表达GPAA1 mRNA的原代细胞穿透Matrigel微孔滤膜细胞数明显高于低表达GPAA1 mRNA组.结直肠癌组织中GPAA1 mRNA的表达水平与组织分化程度相关,而与年龄、性别及Dukes分期无明显相关,(P<0.05).结论 GPAA1表达增强与结直肠癌的发生、侵袭、转移有密切关系.     

大肠癌细胞膜磷脂变化与蛋白激酶C同工酶表达对肝转移影响的研究

目的　探讨结直肠癌细胞膜磷脂变化与蛋白激酶C(PKC)同工酶表达的关系及对肝转移的影响。　方法　采用高效液相色谱法 ,检测 5 8例大肠癌标本 (大肠癌原发灶、癌旁肠黏膜、肝转移灶 )的细胞膜磷脂酰肌醇 (PI)、磷脂酰丝氨酸 (PS)、磷脂酰乙醇胺 (PE)和磷脂酰胆碱 (PC)。用QRT PCR方法检测PKC α、 βⅡ、 δ、 ε、 λ、 ζ同工酶mRNA表达。　 结果　检测在癌原发灶、肝转移灶中 ,PI、PE、PC含量高于癌旁肠黏膜组织。肝转移灶与原发灶中PI、PC含量无显著性差异 (t =1 73,t=1 36 ,P >0 0 5 ) ,PE含量显著高于癌原发灶 (t=98 88,P <0 0 1)。癌原发灶和肝转移灶中PKC α表达水平降低。PKC βⅡ、 δ、 ε、 λ、 ζ表达高于癌旁肠黏膜组织 ,肝转移灶中PKC δ、 ε、 λ、 ζ表达高于癌原发灶 (t=4 31,P <0 0 5 )。PI、PC与PKC βⅡ呈正相关。PE与PKC δ、 ε、 λ、 ζ呈正相关 ,与PKC α呈负相关。　结论　细胞膜磷脂PI、PC增高 ,PKC α/PKC βⅡ比例改变与大肠癌发生有关。PE升高 ,PKC δ、 ε、 λ、 ζ增强表达促进结直肠癌肝转移。     

环氧合酶-2在预测结直肠癌肝转移中的价值

目的研究环氧合酶-2（COX-2）在结直肠癌组织中的表达,探讨其与结直肠癌肝转移的关系。方法免疫组化法检测无肝转移、术时合并肝转移和术后发生肝转移的各30例结直肠癌组织以及30例癌旁正常黏膜组织（对照组）中的COX-2表达水平,分析其与性别、年龄、Dukes分期等临床特征之间的联系,比较无肝转移、术时肝转移、术后肝转移的结直肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中的COX-2表达水平。结果COX-2表达情况：在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜组织（P〈0．05）;在术时肝转移组和术后肝转移组中的表达均显著高于无肝转移组（P〈0．05）;在结直肠癌组织中的表达与性别、年龄、分化等级、病理类型、术前癌胚抗原（CEA）和糖链抗原19-9（CA19-9）无关,与Dukes分期、淋巴结转移有关。结论COX-2过度表达与结直肠癌发生、发展、肝转移相关,对结直肠癌肝转移早期诊断有一定的应用价值。     

结直肠癌淋巴结转移的规律及其影响因素

目的探讨结直肠癌淋巴结转移的规律及其影响因素。方法总结1166例接受手术治疗的结直肠癌患者的临床病理资料，分析各临床病理因素对结直肠癌淋巴结转移的影响。结果全组病例淋巴结转移率为49．7％；单因素分析显示，患者的性别（x^2=1．46，r=0．035，P〉0．05）和肿瘤部位（x^2=3．86，r=0．012，P〉0．05）与淋巴结转移无关；而年龄（x^2=13．1，r=0．064，P〈0．05）、肿瘤大小（x^2=77．161，r=0．245，P〈0．01）、大体类型（x^2=144．831，r=0．341，P〈0．01）、组织学类型（x^2=128．310，r=0．318，P〈0．01）、分化程度（x^2=120．418，r=0．319，P〈0．01）及浸润深度（x^2=227．287，r=0．434，P〈0．01）与淋巴结转移密切相关。Logistic多因素回归分析得出的与淋巴结转移的相关因素按密切程度依次递减为：浸润深度、大体类型、分化程度、肿瘤大小。术前血清癌胚抗原水平与淋巴结转移高度相关（x^2=509．599，r=0．661，P〈0．01）。结论结直肠癌的浸润深度是淋巴结转移发生的最主要因素；术前血清CEA水平的上升提示淋巴结转移的发生。     

肠道干细胞标记基因Lgr5在结直肠癌中的表达及其意义

目的 探讨结直肠癌组织中Lgr5的表达及其意义.方法 采用SP免疫组织化学方法 检测139例结直肠癌组织中Lgr5的表达.结果 139例结直肠癌中管状腺癌、黏液腺癌和乳头状腺癌的Lgr5蛋白高表达率分别为87.1%、100.0%和75.0%;黏膜及黏膜下层、肌层、浆膜及浆膜外层的lgr5高表达率分别为50.0%、82.6%、93.9%;淋巴结转移阳性组和阴性组的Lgr5高表达率分别为94.6%和81.9%.结直肠癌组织中Lgr5蛋白表达水平与其浸润程度、淋巴结转移、Dukes分期均明显相关(P<0.05),而与其年龄、性别、组织学类型、病理分期无明显相关(P>0.05).结论 Lgr5的表达与结直肠癌浸润程度及淋巴结转移状况密切相关,可能参与结直肠癌的发生、发展.

Abstract：

Objective To investigate the expression of leucine-rich-repeat-containing G-protein-coupled receptor 5 (Lgr5) and its significance in colorectal carcinoma. Methods The expression of Lgr5 was examined by immunohistochemistry in 139 cases of colorectal cancer, and its relationship with clinical characteristics was analyzed. Results In 139 colorectal carcinoma samples, the Lgr5 expression rate in tubular adenocarcinoma, mucinous adenocarcinoma, papillary adenocarcinoma was 87.1%, 100.0% and 75.0% respectively. The Lgr5 expression rate in mucous layer, muscular layer, and membrane serosa was 50.0%, 82.6%, 93.9% respectively. High expression levels of Lgr5 were detected in 53 of 56 (94.6%) patients with lymph node metastasis and in 68 of 83 (81.9%) patients without lymph node metastasis. The expression of Lgr5 protein was higher in the tissues with deeper infiltration, advanced Dukes stage, or lymph node or remote metastasis. Conclusion The expression of Lgr5 is significantly correlated with invasion and lymph node metastasis, and may play an important role in the occurrence and development of epithelial colorectal carcinoma. Overexpression of Lgr5 provides an important implication of malignancy and prognosis for colorectal carcinoma.     

大肠癌组织中基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1的表达及对微血管生成和肿瘤转移的影响

目的　探讨基质金属蛋白酶 -9(MMP -9)与基质金属蛋白酶抑制剂 -1(TIMP -1)在大肠癌中的表达及其与血管生成 ,侵袭转移之间的关系。方法　采用免疫组化S -P法 ,检测 46例大肠癌组织中MMP -9,TIMP -1的表达和微血管密度之间的关系。结果　MMP -9的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移明显相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;TIMP -1的表达与Dukes分期、淋巴结转移明显相关 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ;MMP -9表达阳性的大肠癌组织微血管密度 (MVD)值明显高于表达阴性者 (P <0 .0 1)。结论　MMP -9、TIMP -1的表达和微血管生成与大肠癌侵袭转移密切相关     

CD4+、CD8+和NK在结直肠癌中的表达及其与淋巴结微转移的关系

目的 检测不同Dukes分期结直肠癌患者淋巴结细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与NK细胞活性表达,探讨两者间关系.方法 采用常规苏木素.伊红(HE)染色病理切片检测21例结直肠癌患者281枚淋巴结转移癌灶及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者淋巴结CK20 mRNA表达;采用流式细胞仪检测患者外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞活性表达.结果 HE染色法检出有淋巴结转移者为16枚(6%,16/281),RT-PCR法检出有淋巴结转移者140枚(50%,140/281);按有淋巴结微转移重新Dukes分期后,手术前,A、B期患者血CD4+、CD4+/CD8+高于c期(P<0.05);A期患者血CD8+低于C期(P<0.05);B期患者血NK细胞活性高于C期(P<0.05).新Dukes分期与血CD4+呈负相关(r=-0.497,P<0.01);与CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.714,P<0.01);与CD8+呈正相关(r=0.945,P<0.01).结论 RT-PCR方法对淋巴结微转移的检出率明显优于HE染色切片法,结直肠癌淋巴结微转移的发生与患者免疫功能明显低下密切相关.     

血管内皮生长因子受体KDR在大肠癌发展中的作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)受体KDR和血管生成与大肠癌发展的关系。方法应用免疫组织化学技术 ,检测 10 2例大肠癌组织KDR及VEGF蛋白表达和微血管密度 (microvesseldensity ,MVD) ,分析KDR、VEGF和MVD及其与大肠癌组织学分级、浸润深度、Dukes分期、淋巴结转移、肝转移和预后的关系。结果KDR及VEGF阳性者MVD值显著高于阴性者 (F =7 6 3及F =6 38,P <0 0 1)。KDR、VEGF表达和MVD与大肠癌Dukes分期 (χ2 =4 0 373,χ2 =39 6 3,F =10 89)、淋巴结转移 (χ2 =2 7 83,χ2 =2 1 70 ,F =5 94 )和肝转移 (χ2 =13 5 3,χ2 =8 6 8,F =6 82 )密切相关 (P <0 0 1) ,KDR及VEGF表达阳性或高MVD的大肠癌患者 5年生存率较低 (χ2 =5 7 94 ,χ2 =39 84 ,F =8 86 ,P <0 0 1)。结论KDR及VEGF与大肠癌的血管生成密切相关 ,对大肠癌的生长和浸润转移有促进作用 ,KDR、VEGF和MVD可作为反映大肠癌生物学行为的客观指标。     

生长抑素对大肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨生长抑素对大肠癌细胞凋亡的影响.方法 采用巢式RT-PCR方法检测2004年1月至2006年10月皖南医学院附属弋矶山医院收治的79例大肠癌患者癌组织中生长抑素mRNA的表达情况,采用免疫组织化学法检测大肠癌组织中生长抑素、Fas、FasL、半胱天冬蛋白酶(caspase)3和8蛋白的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI).采用χ~2检验、q检验、Spearman等级相关检验对结果进行分析.结果 大肠癌组织中生长抑素mRNA与其蛋白表达呈正相关(r=0.98,P<0.05).低分化和中分化大肠癌组织中生长抑素mRNA及其蛋白的表达明显低于高分化组织(χ~2=10.78,11.24,5.27,5.24,P<0.05);生长抑素mRNA及其蛋白在乳头状腺癌的阳性表达率明显高于黏液腺癌+印戒细胞癌及未分化癌(χ~2=6.56,6.99,5.44,7.39,P<0.05);Dukes A、B期的生长抑素mRNA及其蛋白阳性表达率明显高于C、D期(χ~2=5.17,4.06,P<0.05).生长抑素高表达组、中表达组的AI明显高于低表达组(q=5.66,4.21,P<0.05);Fas、caspase-8、caspase-3在生长抑素高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组(χ~2=5.48,5.62,6.89,4.32,4.19,3.91,P<0.05).结论 生长抑素对大肠癌细胞凋亡的调控可能与Fas/FasL基因的表达失衡、功能和信号系统的紊乱有关.