CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和合成细胞外基质的影响.方法体外培养兔角膜成纤维细胞,经0.5、5、50和500 ng/mL CTGF处理24 h后,分别进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色、银染核仁组成区染色(AgNOR)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色以及Ⅲ型胶原(CA-Ⅲ)、纤维连接蛋白(FN)和层黏蛋白(LM)免疫组化染色,检测CTGF对角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和细胞外基质合成的影响.结果与对照组相比,0.5、5、50和500 ng/mL的CTGF能剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞PCNA表达,增加核仁银染颗粒数,促进α-SMA的表达,同时能促进角膜成纤维细胞CA-Ⅲ、FN和LM的合成(P＜0.01).结论一定质量浓度的CTGF可能在角膜损伤修复过程中发挥重要作用.     

兔角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

角膜发生炎性损伤或机械损伤时，角膜基质细胞增生活化为角膜成纤维细胞，在角膜损伤修复过程中起着极其重要的作用，该过程涉及一系列复杂的细胞因子的参与，其中的机制尚未完全阐明。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一类新近发现的多肽生长因子，是创伤处组织修复再生过程的主要调节因子。我们通过测定体     

结缔组织生长因子对角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响

目的 :观察结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响。方法 :体外培养兔角膜成纤维细胞 ,经 0 .5、5、5 0和 5 0 0ng/mlCTGF处理 2 4h后 ,用免疫组化染色检测角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达情况。结果 :与对照组相比 ,0 .5、5、5 0和 5 0 0ng/ml的CTGF能呈剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达 (P <0 .0 1)。结论 :一定浓度的CTGF能促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达 ,它可能参与角膜基质损伤修复过程中角膜成纤维细胞与细胞外基质以及角膜成纤维细胞之间的黏附和角膜成纤维细胞的移行过程。     

TGF-β1诱导体外培养角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对体外培养的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的诱导表达作用。方法体外培养的角膜成纤维细胞分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的TGFβ1(0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1)处理24h,用RTPCR方法检测角膜成纤维细胞CTGFmRNA的表达情况。结果1μg·L-1和10μg·L-1TGFβ1处理组CTGF/GAPDH像素比值分别为0.35±0.05和1.25±0.10,均较对照组高(0.13±0.02),差异具有统计学意义,同时CTGF/GAPDH比值随TGFβ1浓度增加而增加。结论TGFβ1可以诱导角膜成纤维细胞CTGF的表达,在角膜成纤维细胞中CTGF也可能是TGFβ1对细胞起作用的下游信号分子。     

氯化锂对人眼Tenon囊成纤维细胞TGF-β及CTGF的影响

目的:研究氯化锂(lithium chloride,LiCl)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响并探讨其作用机制.方法:体外培养HTFs并通过vimentin免疫荧光染色技术及细胞形态特征观察鉴定细胞;将HTFs分为实验组(80mmol/L LiCl处理48h)和对照组(未用药).用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, Real time-qPCR)检测两组细胞内TGF-β及CTGF基因的表达,Western blot检测两组细胞内TGF-β及CTGF蛋白的表达.结果:体外培养的HTFs能够表达TGF-β及CTGF.与对照组比较,实验组中TGF-β、CTGF基因表达下降,差异均具有统计学意义(t=20.042、14.995,P<0.05);与对照组比较,实验组中TGF-β、CTGF蛋白表达下降,差异均具有统计学意义(t=46.058、12.452, P<0.05).结论:体外培养的HTFs在基因和蛋白水平表达TGF-β及CTGF,LiCl能够抑制该过程,其可能通过该机制抑制HTFs增殖,此研究为LiCl用于青光眼滤过术后瘢痕化调控提供了实验依据.     

人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞中bFGF表达的影响

目的:观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对体外培养的兔角膜上皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)表达的影响,探讨人羊膜匀浆上清液在促进角膜上皮损伤修复中的作用。方法:将兔角膜上皮细胞离体培养并传代,然后分组。实验组分别在含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液中分别加入终浓度为40,80,160μg/mL 的人羊膜匀浆上清液,对照组仅用100mL/L胎牛血清的DMEM培养液。分别在培养24,48和96h后,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞增殖的影响。同时,采用RT-PCR技术检测三个不同等级浓度对兔角膜上皮细胞bFGF-mRNA表达的影响。结果:培养24h后,与对照组（0.087±0.013）比较,加入终浓度为40,80,160μg/mL人羊膜匀浆上清液的实验组角膜上皮细胞增殖数量（分别为0.185±0.010,0.318±0015,0.501±0.014）明显增加,差异具有显著性(P<0.05);同时,随着作用时间的延长,差异愈加明显;加入40μg/mL和80μg/mL浓度羊膜匀浆上清液组兔角膜的bFGF-mRNA（分别为0.750±0.007,0.785±0.006）和空白对照组（0.708±0.013）比较,差异无显著性意义（P>0.05）,但160μg/mL浓度羊膜匀浆上清液组（1.013±0.120）与其它两组及对照组（0.708±0.013）比较,差异均具有显著性（P<0.05）。结论:人羊膜匀浆上清液具有促进兔角膜上皮细胞增殖的作用,并随着人羊膜匀浆上清液所含蛋白浓度的增加,其促进作用增强;人羊膜匀浆上清液具有促进体外培养的兔角膜上皮细胞bFGF-mRNA表达的作用,但与羊膜匀浆上清液的浓度有关。     

羊膜抑制兔角膜成纤维细胞凋亡及其TGF-β1 mRNA表达的实验研究

目的 探讨羊膜移植抑制眼表纤维组织增生的机制。方法 将传代的免角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面，分别培养1和7d，采用吖啶橙法观察羊膜对成纤维细胞凋亡的影响。同时采用RT-PCR技术，观察成纤维细胞中TGF-β1 mRNA表达的变化。结果羊膜对培养1和7d的兔角膜成纤维细胞均有明显地抑制凋亡作用。同时发现在羊膜基质面培养1d的兔角膜成纤维细胞，其TGF-β1 mRNA的表达与对照组相比无明显改变，而培养7d后，TGF-β1 mRNA的表达明显下降。结论 羊膜有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞凋亡的作用。同时还有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达的作用，可部分解释羊膜抑制纤维增生的机制，为临床应用提供理论依据。     

大鼠角膜碱烧伤后碱性成纤维细胞生长因子在角膜中的表达及意义

目的 探讨大鼠角膜碱烧伤后成纤维细胞生长因子（bFGF）在角膜中的表达和意义。方法 采用碱烧伤大鼠角膜建立角膜炎症性新生血管动物模型；免疫印迹法检测大鼠角膜碱烧伤后不同时间段bFGF在角膜中的表达；免疫组织化学方法检测大鼠角膜碱烧伤后bFGF在角膜不同组织层次的表达。结果 免疫印迹法检测显示：去除上皮后的正常大鼠角膜无bFGF表达；碱烧伤后96h，大鼠角膜可检测出bFGF表达，随着时间进展，bFGF蛋白表达量逐渐增加。免疫组化结果：正常大鼠角膜上皮层表达bFGF；碱烧伤后角膜上皮层bFGF着染程度逐渐增强，在碱烧伤后48h以前，基质层浸润的炎症细胞无bFGF着染，96h以后，浸润的炎症细胞和新生血管内皮细胞均呈bFGF阳性。结论 bFGF未参与碱烧伤后角膜新生血管增殖的早期诱导，对角膜炎症性新生血管的增殖仅起到后续支持作用。     

羊膜培养液抑制角膜新生血管的实验研究

目的　研究羊膜培养液对小鼠角膜新生血管的抑制作用及机制。方法　应用cornealmicropocket方法 ,将含 10 0ng碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和 12 %hydronpolymer的缓释颗粒植入角膜层间 ,制备小鼠角膜新生血管模型。实验分对照组、羊膜组和去上皮羊膜组 ,每组 10只眼 ,收集各组培养液于模型制作当日起 ,每日滴眼 4次至术后 7d摄片观测角膜新生血管长入情况并处死动物。对脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)进行体外培养 ,并应用Boyden小房技术和荧光结合(CyQUANT)实验分别检测羊膜培养液对HUVEC细胞迁移和细胞增殖的影响。利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组培养液中金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP1)和 2 (TIMP2 )的含量。结果　羊膜培养液明显抑制由bFGF诱发的小鼠角膜新生血管的形成 ,对照组、羊膜组和去上皮羊膜组角膜新生血管面积分别是 (2 4 8± 0 76 )mm2 、(0 6 4± 0 5 2 )mm2 和 (1 96± 0 6 5 )mm2 。羊膜培养液明显抑制血管内皮细胞的迁移和增殖 ,而对照组和去上皮羊膜组对HUVEC细胞迁移无作用。羊膜培养液中TIMP2水平明显增高 ,而TIMP1的含量无变化。结论　羊膜培养液中TIMP1的含量未增加。而羊膜上皮产生或释放大量的TIMP2 ,抑制血管内皮细胞的迁移和增殖 ,其可能是羊膜培养液抑制角膜新生血管的     

羊膜上皮细胞培养液抑制角膜基质细胞凋亡的实验研究

目的 对羊膜上皮细胞培养液抑制由肿瘤坏死因子(TNF-α)诱发的角膜基质细胞凋亡进行研究。方法 体外培养兔角膜基质细胞(RCK),30ng/ml TNF-α诱发角膜基质细胞凋亡。实验分为对照组、羊膜上皮细胞培养液组(羊膜组)和阴性对照组。应用FITC-dUTP-TUNEL和DAPI染色检测RCK细胞凋亡发生率,分别测定经24h培养后各组细胞凋亡特异性DNA梯形降解。Western blot检测细胞凋亡保护性因子Bcl-2、促进因子Bax在经羊膜上皮细胞培养液处理后于细胞中表达强度及Bcl-2/Bax比值变化。结果 羊膜上皮细胞培养液明显抑制由TNF-α诱发的兔角膜基质细胞凋亡,DAPI染色显示24h对照组,羊膜培养液组和阴性对照组细胞凋亡发生率分别为:42.4％±4.3％,2.2％±0.3％和2.7％±0.4％。DNA降解实验显示羊膜上皮细胞培养液明显抑制TNF-α诱导的DNA片段降解。Western blot显示羊膜上皮细胞培养液明显刺激RCK细胞Bcl-2蛋白的表达和分泌。结论 羊膜培养液中可能释放的多种细胞因子对TNF-α诱发的角膜基质细胞调亡具有明显的抑制作用,其作用机制之一是刺激Bcl-2在RCK细胞的表达,并使Bcl-2/Bax比值上调。     

结缔组织生长因子对POAG患者Tenon囊成纤维细胞的影响

目的：研究结缔组织生长因子(CTGF)对原发性开角型青光眼(POAG)患者Tenon囊成纤维细胞(Tfb)增殖、移行和转化的影响。

方法：POAG患者的Tenon囊组织行组织块法培养出来的Tfb细胞分为2组：(1)对照组;(2)CTGF处理组：DMEM-F12培养液中分别加入终浓度为1.0、10.0、100.0ng/mL的CTGF。细胞处理24h后,分别用MTT法和细胞划痕法分别检测Tfb的增殖和移行,半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测Tfb中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA水平的变化和蛋白的表达。

结果：MTT法测得1.0、10.0、100.0ng/mL CTGF处理组的A值分别是0.436±0.009、0.643±0.009、0.679±0.006,对照组为0.423±0.156。细胞划痕法显示,细胞移行数分别为34.600±3.507、70.400±2.074、80.000±2.915个,对照组为31.000±3.536个。RT-PCR法得出不同浓度CTGF处理组α-SMA/β-actin条带吸光度比值分别为0.873±0.161、1.213±0.312、1.352±0.376,对照组是0.851±0.158。免疫组织化学法得出1.0、10.0、100.0ng/mL CTGF处理组阳性细胞的平均光密度值分别是0.110±0.026、0.141±0.017、0.175±0.027,对照组是0.108±0.020。上述所有观察指标10.0、100.0ng/mL CTGF组与对照组相比较均有差异(P<0.05),而1.0ng/mL CTGF与对照组相比较均无差异(P>0.05)。

结论：CTGF能促进POAG患者Tfb的增殖、移行和表型转化,CTGF可能在滤过泡瘢痕化中扮演了重要作用。     

羊膜培养液体外抑制兔角膜上皮细胞血管内皮生长因子的表达

目的:探讨羊膜培养液对角膜上皮细胞中血管内皮细胞生长因子(vascula rendothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:刮除并收集新鲜兔角膜上皮细胞,传代培养接种于35mm培养皿及自制的羊膜培养皿上。实验分为4组,Ⅰ组(对照组):无血清的DMEM培养液,Ⅱ组:去上皮的羊膜培养液,Ⅲ组:未去上皮的羊膜培养液,Ⅳ组:将细胞直接接种于无上皮羊膜。作用48h后用Trizol法提取各组样本的总RNA,进行RT-PCR一步法反应检测各组VEGF mRNA表达并与β-actin比较。结果:正常角膜上皮细胞中有VEGF基因表达,在Ⅲ,Ⅳ组中表达受到明显抑制(P<0.01,n=5)。结论:羊膜培养液明显抑制VEGF mRNA在角膜上皮细胞中的表达。     

结缔组织生长因子在兔视网膜增生膜中的表达

目的观察结缔组织生长因子（CTGF）在实验性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）增生膜中的表达,探讨CTGF在PVR视网膜增生膜形成过程中的作用。方法采用Nobuyo的方法从兔视网膜中分离视网膜色素上皮（RPE）细胞并进行体外培养和传代。第3代RPE细胞制备密度为1.1×10^5/mL的细胞悬液。32只日本大耳白兔,取8只作为正常对照组,其余24只采用玻璃体腔内注入RPE细胞悬液的方法建立PVR动物模型。动物分别于造模后7、30、60d处死并摘除眼球,每次处死8只动物。光学显微镜下观察视网膜增生膜的组织学改变,免疫组织化学法检测PVR视网膜增生膜中CTGF的表达。结果造模后5d检眼镜下可见视网膜增生组织开始形成,增生膜随时间的推移逐渐增厚。组织学检查显示,造模后7d兔视网膜表面可见红染的条索状和网状胶原纤维,并可见大量的增生细胞分布其中。光学显微镜下可见视网膜内界膜变厚、粗糙、断裂或结构不清,视网膜各层结构欠清。免疫组织化学法检测表明,正常对照组在玻璃体及视网膜内未见CTGF的特异性染色。造模后7d,CTGF主要表达于视网膜表面增生细胞;造模后30d,CTGF主要表达于增生的细胞及增生的胶原纤维组织中;造模后60d,CTGF主要表达于增生的胶原纤维组织中。结论 CTGF在实验性PVR动物模型中呈高表达,提示CTGF参与了PVR增生膜的形成。     

结缔组织生长因子在眼科的研究进展

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)是相对分子量为38kDa的分泌性生长因子，属于即刻早期基因家族——CCN家族成员之一。多种组织的成纤维细胞、部分血管内皮细胞和平滑肌细胞、某些上皮细胞和肿瘤细胞以及软骨细胞等都可表达CTGF。CTGF的主要生物学作用包括促进细胞有丝分裂和增生、细胞移行、诱导细胞粘附和胞外基质合成等。CTGF作为组织过度纤维化、瘢痕愈合和创伤修复可能的关键因子，以及在血管形成、肿瘤生长、发育分化等方面的作用，近来受到较多的关注。我们着重概述了CTGF的蛋白结构、生物学作用，回顾了近几年CTGF在眼科的研究进展。     

神经生长因子对准分子激光治疗性角膜切削术后角膜修复的作用

目的探讨神经生长因子（nervegrowth factor，NGF）对准分子激光治疗性角膜切削术（phototherapeutic keratectomy，PTK）后伤口愈合及透明度恢复的影响。方法建立30只新西兰白兔PTK模型，术后右眼滴用自制NGF滴眼液，左眼滴用人工泪液作为对照眼。于术后不同时间分别进行裂隙灯、光学显微镜、722光栅分光光度计及扫描电镜检查。结果2组均于术后3～7d角膜上皮全部愈合，差异无统计学意义（P〉0．05）实验组术后不同波长的角膜透明度高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。HE染色光镜观察发现对照组上皮细胞过度增生较重。扫描电镜显示，术后4周NGF组角膜上皮细胞层基本恢复正常，对照组角膜上皮表面的微绒毛及微皱褶仍然相对较少。结论NGF通过改善伤口愈合的微环境，抑制角膜上皮细胞的过度增生，调节伤口愈合，从而促进PTK后角膜透明度的恢复。[眼科新进展2007；27（2）：110-112]     

结缔组织生长因子在糖尿病视网膜病变中的调控机制及研究进展

糖尿病视网膜病变是一种微血管循环异常的致盲性眼病。在疾病进展后期,血管内皮生长因子抗体类药物因可显著抑制新生血管形成和改善黄斑水肿而被广泛应用于临床。然而,药物应用后纤维化趋势的加重也引起了广泛的关注。结缔组织生长因子作为眼内纤维化的重要细胞因子,在药物应用后过量表达,被认为是引起上述副反应的重要因素之一,也是一种潜在的辅助治疗靶点。整理目前研究进展后发现,结缔组织生长因子的调控机制包括调控下游细胞因子基因表达和直接结合于其他细胞因子或受体两种方式。因其特殊的四模块结构上具有多种细胞因子特异结合位点,其调控方式多依赖于后者,进而促进或抑制了多种重要细胞因子通路的表达。在糖尿病视网膜病变中,其表达贯穿整个疾病进程。在临床前期和新生血管形成末期,结缔组织生长因子的累积分别起到促进基底膜增厚和新生血管纤维化形成的重要作用。本文将对结缔组织生长因子多样化的调控机制及该因子在DR中的研究进展进行系统阐述。