降压宝蓝片含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:探讨降压宝蓝片含药血清对过氧化氢(H₂O₂)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,分为空白组、模型组、降压宝蓝片含药血清低、中、高浓度组(含量血清体积分数为5%,10%,15%),显微镜下观察细胞形态,用噻唑蓝(MTT)法检测HUVECs活力,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测内皮素-1(ET-1),组织型纤溶酶原激活物(tPA),组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低,上清液中LDH活性明显增高,ET-1和PAI-1含量显著增加,NO和tPA含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,降压宝蓝片中、高浓度组细胞活力显著升高,LDH活性显著减低,ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:降压宝蓝片含药血清对H₂O₂诱导的HUVECs损伤具有显著地保护作用。     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。     

三棱含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 研究三棱含药血清对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）损伤的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组和三棱组,制备空白血清及含药血清。建立LPS诱导的HUVEC损伤模型,设置对照组、模型组、5%空白血清组和三棱含药血清（1%、3%、5%）组,采用MTT法检测三棱含药血清对细胞活力的影响;采用荧光显微镜分析各组细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用ELISA法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-17、组织因子...     

白藜芦醇对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的调控作用

目的探索白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法用200μmol.L-1H2O2作用2 h复制HUVECs损伤模型,白藜芦醇分为3个浓度干预组(13.75,27.5,55μmol.L-1)于损伤前2 h加入;MTT法测定细胞活力,比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的含量,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光染料JC-1标记法检测线粒体膜电位。结果 13.75μmol.L-1白藜芦醇能显著增强H2O2损伤HUVECs后的细胞活力(P<0.05,与H2O2组比较),提高SOD活性(P<0.05,与H2O2组比较)及GSH含量(P<0.05,与H2O2组比较),降低细胞凋亡率(P<0.01,与H2O2组比较),恢复线粒体膜电位;而55μmol.L-1白藜芦醇对H2O2诱导的HUVECs细胞活力降低、细胞内SOD的活性和GSH的含量以及线粒体膜电位的下降无明显影响,但却能进一步促进H2O2诱导的HUVECs凋亡率(P<0.05,与H2O2组比较)。结论白藜芦醇在低浓度时对H2O2诱导的HUVECs凋亡具有抑制作用,而在高浓度时却对凋亡有促进作用。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

三草降压汤含药血清对人脐静脉内皮细胞活性及NO分泌的影响

目的：观察三草降压汤（SCD）含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性及NO分泌水平的影响,探讨其降压作用的有效组分和作用机制。方法：采用大孔树脂富集纯化技术制备SCD的4种组分（SCD-DW、SCD-10ET、SCD-50ET、SCD-95ET）,分别用血清药理学方法制备SHR大鼠含药血清,以5%、10%、15%的血清浓度作用于HUVEC,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,Griess比色法检测培养液中NO含量。同时观察eNOS抑制剂L-NAME对其作用的影响。结果：SHR空白血清可显著抑制HUVEC活性（P〈0.05）,降低NO含量（P〈0.01）。SCD-DW、SCD-10ET含药血清可增强被SHR空白血清抑制的HUVEC的活性（P〈0.05,P〈0.01）,SCD-10ET可以提高HUVEC的NO分泌水平（P〈0.05）,此效应在15%血清浓度下可被L-NAME明显抑制（P〈0.01）。结论：SCD-10ET可以通过调节内皮细胞NO分泌,减少血管内皮细胞损伤,eNOS-NO途径可能是该组分降低血压的机制之一。     

红芪总黄酮对过氧化氢致脐静脉内皮细胞损伤的抗氧化作用

目的:研究红芪总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:化学发光法检测红芪总黄酮对氧自由基的清除能力。建立H2O2致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测对细胞DNA损伤的影响。结果:红芪总黄酮可清除氧自由基。100μmol/L H2O2诱导脐静脉内皮细胞4 h,细胞液LDH、细胞内MDA含量升高SOD活性降低,DNA损伤明显。红芪总黄酮可明显抑制MDA损伤,显著降低LDH释放及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:红芪总黄酮对H2O2诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。     

参麦饮含药血清对H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用

目的:通过观察参麦饮含药血清对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响,探讨参麦饮含药血清对损伤的HUVEC的保护作用及其机制。方法:15只SD大鼠随机分为3组:正常对照组及参麦饮1.1、5.4 g/kg组,每日3次灌胃给药,连续3 d。末次给药1 h后,腹主动脉取血,制备含药血清。使用不同浓度的H_2O_2诱导HUVEC细胞0.5 h,进行氧化应激损伤模型的建立,通过CCK-8法检测,明确H_2O_2的浓度为800μmo1/L时为最适的造模浓度;利用CCK-8试剂探讨含药血清作用不同时间对HUVEC细胞存活率的影响;利用CCK-8试剂进行含药血清对HUVEC细胞及H_2O_2损伤的HUVEC细胞存活率的影响;采用荧光染色法观察活性氧(ROS);利用试剂盒检测丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力;采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中PI3K、AKT、BAX、BCL-2、Caspase3的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞存活率显著降低(P<0.01),ROS生成量、MDA含量、LDH活力显著升高(P<0.01),SOD活力、NO含量显著降低(P<0.01),细胞凋亡率升高,PI3K、AKT、BCL-2蛋白表达及BCL-2/BAX的比值显著降低(P<0.01),BAX、Caspase3蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,参麦饮1.1 g/kg 15%含药血清使细胞活力显著升高(P<0.01),ROS生成量、MDA含量、LDH活力明显降低(P<0.05或P<0.01),SOD活力、NO含量明显降低(P<0.05或P<0.01);细胞凋亡率明显降低;PI3K、AKT、BCL-2蛋白表达及BCL-2/BAX的比值明显升高(P<0.05或P<0.01),BAX、Caspase3蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:参麦饮含药血清对H_2O_2诱导损伤的血管内皮具有明显保护作用。     

宁夏枸杞总黄酮对H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的: 研究宁夏枸杞总黄酮对过氧化氢(H₂O₂)损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的保护作用及可能的机制. 方法: 采用H₂O₂诱导HUVEC氧化应激损伤模型.实验分为正常组、1 mmol·L^-1H₂O₂损伤模型组、枸杞总黄酮保护(100,200,400 mg·L^-1) 预孵育24 h组,以及阳性对照(维生素C 20 mg·L^-1)组,预孵育24 h.采用噻唑蓝(MTT)法检测枸杞总黄酮对1 mmol·L^-1 H₂O₂损伤 4 h细胞活性,测定细胞上清液中丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO). 结果: 与正常组比较,H₂O₂损伤模型组MDA含量、LDH活性均增高,NO生成量、SOD活性明显下降,其差异均具有显著性(P<0.01).枸杞黄酮保护组MDA含量、LDH活性均下降,NO生成量、SOD活性较H₂O₂损伤模型组明显增高(P<0.01),MDA含量、LDH活性的下降程度,NO生成量、SOD活性的增高程度,与枸杞总黄酮呈剂量依赖性. 结论: 宁夏枸杞总黄酮对H₂O₂所致人血管内皮损伤有保护作用,其机制可能与宁夏枸杞总黄酮抑制损伤细胞的脂质过氧化,以及有效提高机体抗氧化酶的活性、清除自由基,促进一氧化氮(NO)的合成有关.     

天麻钩藤饮含药血清对人脐静脉内皮细胞保护作用的研究

目的：观察天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）致人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法：制备大鼠天麻钩藤饮含药血清。采用酶消化法体外培养HUVECs，利用Human von Willebrand factor免疫细胞化学法鉴定，随机分为3组：对照组，AngⅡ组，AngⅡ＋天麻钩藤饮组。倒置显微镜下观察细胞形态、密度，酶联免疫法测定细胞上清TNF-d含量，RT-PCR法测定细胞PPAR-γmRNA的表达。结果：与对照组比较，AngⅡ（10^-6mol／L）可引起内皮细胞密度降低，细胞分泌TNF-α增加，PPAR-γmRNA表达水平降低。天麻钩藤饮含药血清可抑制AngⅡ导致的细胞损伤，减少TNF-α的分泌，升高PPAR-γmRNA的表达。结论：天麻钩藤饮可对抗AngⅡ所致的HUVECs损伤，保护血管内皮细胞功能。     

桃红四物汤用于原发性痛经的整合效应评价研究

目的:评价桃红四物汤及各分离部位对热板致小鼠疼痛,醋酸致小鼠扭体反应,小鼠痛经模型及离体子宫收缩的影响,探讨效应部位群的物质基础。方法:采用大孔树脂分离制备各部位样品(TH-1～TH-15);整体动物实验,采用热板致小鼠疼痛的模型,观察样品对小鼠痛阈值的影响;采用醋酸致小鼠扭体反应的模型,观察样品对小鼠扭体反应的影响;采用小鼠痛经模型,观察样品对小鼠扭体反应,子宫匀浆中钙离子和NO的影响。离体器官实验,采用缩宫素诱导的小鼠离体子宫收缩模型,观察样品对离体子宫收缩指标的影响。用HPLC-DAD法对效应部位群进行含量测定。结果:整合生物效应评价表明,桃红四物汤效应部位除整方水煎液(TH-2)和醇沉上清部位(TH-4)外,TH-9,TH-10和TH-11是主要的效应部位群,对其主要效应成分进行分析,化合物类型包括单萜苷类、苯酞类、有机酸类等。结论:桃红四物汤用于痛经的主要效应部位群为TH-9,TH-10和TH-11,是水溶性小分子部位经大孔树脂吸附醇梯度洗脱得到的30%～50%活性部分,与TH-10,TH-11比较,TH-9的效应较强,这可能与其所含的化合物类型和含量密切相关。     

桃红四物汤对骨折临床证候疗效的分析研究

目的:观察桃红四物汤对骨折初期临床症状、体征的疗效。方法:将60例新鲜四肢骨折患者随机分为2组。治疗组33例用桃红四物汤(处方:桃仁、红花、当归、生地黄、赤芍、川芎)治疗;对照组27例用伤科跌打片治疗。2组均以15天为1疗程。并在治疗第2、5、10、15天4个时相点进行临床症状、体征的计分对比研究。结果:治疗组显效18例,有效14例,无效1例,总有效率为96.97％;对照组显效1例,有效20例,无效6例,总有效率为77.78％。2组总有效率比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);总体症状、体征改善程度各时相点明显优于对照组(P<0.01);单项症状、体征比较,2组疼痛、肿胀缓解明显,改善程度治疗组明显优于对照组(P<0.01),2组瘀斑、局部压痛、功能障碍等体征均有不同程度缓解,治疗组改善稍优于对照组。结论:桃红四物汤对骨折初期主要临床症状、体征有明显缓解作用,是活血祛瘀法治疗骨折的有效方剂之一。     

天香丹对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨天香丹对tBHP诱导损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用。方法:将HUVECs分为对照组、模型组、阳性对照药(维生素C)组和天香丹剂量组(30、60、90μg/mL)。MTT法筛选tBHP最佳造模浓度,并评价天香丹对内皮细胞氧化损伤的保护作用;微板法和WST法检测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)表达情况;显微镜下观察各组细胞形态学变化,Hoechst 33258荧光染色法检测各组细胞凋亡情况。结果:经tBHP诱导24 h后,模型组细胞存活率、SOD活性和GSH含量较对照组显著降低(P<0.01),LDH释放量和细胞凋亡率明显增加(P<0.01);经维生素C和不同浓度天香丹预处理后,与模型组相比较,各组细胞存活率、SOD活性和GSH含量显著增加,LDH的释放和细胞凋亡率得到减轻(P<0.01)。结论:天香丹具有保护HUVECs免于氧化损伤的作用,其机制可能与抗氧化通路的激活,抗氧化能力的增强及逆转细胞凋亡有关。     

冠心病不同阶段患者血清对人脐静脉血管内皮细胞促增殖作用的实验研究

目的观察冠心病不同阶段患者血清对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响。方法采集正常健康人群（正常组）、冠心病中高危人群（中高危组）、冠心病急性期患者（急性期组）、冠心病稳定期患者（稳定期组）的血清,分别作用于HUVEC,培养至24、48、72、96h检测吸光度值（OD值）。结果4组血清中加或不加5％胎牛血清,其对HUVEC增殖均有促进作用,正常组、中高危组、急性期组、稳定期组对HUVEC的促增殖作用呈逐渐增强趋势,稳定期组血清促增殖作用最强。结论心血管疾病在急性期后,随着病程和生存期的延长,其血清对HUVEC的促增殖作用逐渐增强。     

淫羊藿苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导人脐静脉内皮细胞的损伤及其机制。方法人脐静脉内皮细胞株分别培养在含5.5mmol/L葡萄糖(正常对照组)、5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇(高渗对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖损伤组)、30mmol/L葡萄糖+10μmol/L淫羊藿苷(低剂量淫羊藿苷组)和30mmol/L葡萄糖+100μmol/L淫羊藿苷(高剂量淫羊藿苷组)的培养基中培养48h,分别进行细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶及一氧化氮含量、细胞丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力的测定。结果:高糖损伤组及低、高剂量淫羊藿苷组的细胞活力、乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力与正常对照组比差异均有统计学意义(P<0.01);低、高剂量淫羊藿苷组的细胞活力、乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛含量及谷胱甘肽-过氧化物酶活力与高糖损伤组比差异均有统计学意义(P<0.01)。高渗对照组各项指标与正常对照组相比无显著性差异。结论淫羊藿苷对体外高糖损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高内皮细胞抗氧化酶活力,维持NO正常水平;减少细胞膜脂质过氧化损伤,维持膜完整性而实现的。     

桃红四物汤对早期闭合性骨折祛瘀生新作用的初步探讨

目的:研究桃红四物汤对闭合性骨折早期的治疗作用。方法:SD大鼠60只,分为6组,分别为正常组、模型组、桃红四物汤高、中、低剂量组(18,9,4.5 g·kg-1)、麝香接骨胶囊组(0.6 g·kg-1),借由专用的骨折器造成胫骨闭合性骨折,建立大鼠胫骨闭合性骨折模型,给药后观察对骨折大鼠血液黏度的影响,采用放射免疫法测定血浆中血栓素B2(TXB2),6-酮前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的含量以及TXB2/6-Keto-PGF1α,采用酶联免疫法(ELISA)测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量,取骨组织病理切片观察骨痂微血管生成及骨折愈合情况。结果:与正常组比较,模型组明显骨折面缺损,大鼠血液黏度明显升高,血浆中TXB2水平,TXB2/6-Keto-PGF1α明显升高,均具有统计学差异(P0.01),VEGF浓度略微升高;与模型组比较,麝香接骨胶囊组、桃红四物汤高、中、低剂量组可明显的促进骨折区血管新生和骨折愈合,可明显降低骨折大鼠血液黏度,显著降低血浆中TXB2水平,TXB2/6-Keto-PGF1α,VEGF浓度明显增高,均具有统计学差异(P0.05,P0.01),尤其是桃红四物汤高剂量组与麝香接骨胶囊组效果一致(P0.01)。结论:桃红四物汤对胫骨闭合性骨折具有很好的祛瘀生新作用,其作用机制可能与桃红四物汤改善血液黏度、减低TXB2/6-Keto-PGE1α,促进VEGF的表达有关。     

加味桃红四物汤含药血清对动脉粥样硬化血瘀证模型大鼠血管内皮细胞功能的影响

目的：观察加味桃红四物汤含药血清对体外培养的动脉粥样硬化血瘀证大鼠血管内皮细胞（VECs）的保护作用及其机制。方法：制备加味桃红四物汤含药血清及动脉粥样硬化血瘀证模型大鼠,从模型大鼠胸主动脉分离培养VECs,将VECs分为对照组、血瘀血清组、中药血清组分别进行处理,采用改良的Boyden chamber法观察VECs迁移的活性,硝酸还原酶法测定培养液中NO含量,ELASA法测定培养液中ET、t-PA/PAI-1、ICAM-1含量,RT-PCR检测eNOSmRNA、ICAMmRNA的表达。结果：血瘀血清组培养液中NO、t-PA含量低于对照组与中药血清组（P〈0.05）,ET、PAI-1、ICAM-1含量高于对照组与中药血清组（P〈0.05）;VECs经血瘀血清处理后,迁移活性降低,而经中药血清干预后,VECs迁移活性增加,与血瘀血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。血瘀血清组eNOSmRNA表达低于中药血清组,而ICAMmRNA表达高于中药血清组。结论：加味桃红四物汤药物成分可促进动脉粥样硬化血瘀证大鼠VECs迁移,并促进VECs保护性因子表达。     

马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的作用

目的观察两色金鸡菊黄酮类化合物马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的作用。方法取对数生长期的细胞,分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及马里苷不同浓度(50、100、200、400μmol/L)给药组。采用CCK-8法检测细胞活力;ELASA法检测MDA含量及SOD、CAT、GSH-PX活力; Western blot法检测炎性因子VEGF、ICAM-1、MCP-1在HUVEC细胞中的蛋白表达。结果与NG组比较,及HG组细胞活力明显降低(P0.05); MDA含量显著升高(P0.05),SOD、CAT、GSH-PX活性降低(P0.05);与HG组(50 mmol/L)比较,马里苷药物干预组(50、100、200、400μmol/L)细胞活性明显增加,差异有统计学意义(P0.05),且随浓度增加细胞活性明显增加。Western blot蛋白印迹结果显示,与NG组比较,HG组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,马里苷干预组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论马里苷对高糖损伤的HUVEC细胞具有一定保护作用。