豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察

目的 分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性.方法 Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流.结果 酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上.全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms.全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流.结论 该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究.     

腺病毒介导超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型4过度表达对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响

目的观察过度表达超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因亚型(HCN)4对乳鼠心肌细胞电生理特性的影响。方法酶解法分离20只乳鼠的原代心肌细胞并进行培养,用含HCN4基因的重组腺病毒AdHCN4感染心肌细胞,以未感染细胞作为对照组,通过RT-PCR及细胞免疫荧光方法检测心肌细胞中HCN4基因在mRNA和蛋白质水平的表达,用全细胞膜片钳方法测定转染HCN4基因的心肌细胞的动作电位和起搏电流If。结果AdHCN4感染组心肌细胞中HCN4mRNA和蛋白质的表达水平明显高于对照组细胞;感染组心肌细胞自发搏动的频率为(92·5±7·4)次/分,明显高于对照组心肌细胞的(68·9±6·2)次/分(P<0·05);动作电位出现明显的4相自动除极化,其最大舒张电位(-52·8±4·2)mV明显高于对照组细胞(-62·1±2·6)mV(P<0·05);动作电位复极50%和90%的时间两者比较差异无统计学意义;在感染组细胞中,起搏电流If的电流密度为(115·7±7·8)pA/pF,也明显高于对照组细胞的(7·2±0·6)pA/pF(P<0·05)。结论过度表达起搏通道基因HCN4能够明显增强乳鼠心肌细胞的自律性,从而增加心肌细胞自发搏动的频率,这提示HCN4基因有可能成为治疗缓慢性心律失常疾病的目的基因。     

豚鼠心房肌细胞的分离及其电生理特性

目的 建立单个心房肌细胞的急性分离方法并记录其电生理特性。方法 采用改进的酶解分离法分离单个细胞并经膜片钳全细胞记录法进行鉴定。结果 采用本方法分离出典型的豚鼠单个心房肌细胞并记录到豚鼠心房细胞毒蕈碱型钾电流及L－型钙电流。结论 此方法简单、快捷，分离出的心房肌细胞具有正常的电生理特性。     

温度对豚鼠心室肌细胞动作电位时程影响的研究

用微电极技术记录离体豚鼠心室肌细胞动作电位,观察营养液温度雯化对动作电位时程的影响。结果表明:随营养液温度的升高,动作电位复极50％(APD_(50))和复极90％(APD_(90))的时程均缩短。这一结果为体温升高引起心率加快提供了电生理学依据。     

射频消融对豚鼠心室肌细胞钙离子流的影响

采用全细胞膜片钳技术研究了射频消融（ＲＦＣＡ）对豚鼠心室肌细胞钙离子流（ＩＣａ）的影响。结果发现，在２０Ｗ×１０ｓ能量下，ＲＦＣＡ明显减小ＩＣａ，其影响范围达消融点外１．２ｃｍ以上。而在该能量下，ＲＦＣＡ所造成的组织学损伤范围仅为０．４１±０．１１ｃｍ。提示ＲＦＣＡ除了热效应引起组织坏死外，并在更大的范围内影响了细胞膜离子流。这一发现为阐明ＲＦＣＡ组织损伤范围小而疗效高的机理提供了初步的实验依据。     

自发性高血压大鼠左心室肌细胞电生理研究

目的　研究自发性高血压大鼠 (SHR)左心室肌细胞的电生理特性。方法　以正常血压Wistar大鼠左心室肌细胞作为对照 ,采用玻璃微电极技术记录动作电位 ,应用膜片钳全细胞技术记录膜离子流 ,观察SHR左心室肌细胞动作电位及膜离子流的改变。结果　①SHR和Wisar大鼠的心脏 /体重比分别为 5 .6 6± 0 .46mg/g(n =2 0 )和 3.7± 0 .2 9mg/g(n =2 8) (P <0 .0 0 1) ,平均细胞膜电容分别为 2 80 .6 8± 6 7.98pF(n =91)和 189.94± 5 6 .5 9pF(n =137) (P <0 .0 5 )。②SHR左心室肌细胞动作电位时程较Wistar大鼠明显延长 [APD50 :2 1.33± 1.5 6ms(n =6 ) ,vs 14.91± 2 .95ms(n =11) ,P <0 .0 0 1;APD90 :16 4.6 7± 4ms ,vs 93.2 7± 10 .5 9ms ,P <0 .0 0 1]。③内向电流 :SHR左心室肌细胞的ICa -L密度与Wistar大鼠间无差异 [6 .93± 1.71pA/pF(n =2 0 ) ,vs 6 .19± 2 .85pA/pF(n =37) ],但前者的慢失活时间常数显著延长 (5 6 .0 1± 13.36ms,vs 43.6 3± 17.89ms,P <0 .0 0 1)。SHR左心室肌细胞的INa密度与Wistar大鼠间无差异 [2 4.6 1± 6 .72 pA/pF(n =16 ) ,vs 2 4.95± 6 .99pA/pF(n =18) ]。④外向电流 :SHR左心室肌细胞IK1内向电流密度显著小于Wistar大鼠 [- 12 0mV时 ,11.3± 2 .2 6 pA/pF(n =17) ,v     

黄芪皂甙对豚鼠心室肌细胞动作电位的作用

目的研究黄芪皂甙（saponins of astrag—alus,SA）对豚鼠心室肌细胞动作电位（AP）的作用。方法实验采用标准玻璃微电极细胞内记录心室肌细胞动作电位（AD）。结果应用9A20mg／L后心室肌细胞动作电位的幅度从给药前的（69.31±6．07）mV降低到（57．37±368）mV（n=6,p〈0．05）;动作电位时程（APD40）从给药前的（263.38±16.56）ms延长到（284.55±21．21）ms（n=6,P〈0.05）。应用SA40mg／L后心室肌动作电位的幅度从给药前的（71.37±56.54）mV降低到（47．23±8.67）mV（n=6,p〈0.05）;动作电位时程（APD90）的从给药前的（238．31±13.28）ms延长到（314.64±27．36）ms（n=6,p〈0.05）。结论SA可以降低心室肌动作电位幅值延长动作电位时程,并且有一定的剂量依赖性。     

窦房结细胞电生理的研究进展

人们对窦房结的研究经历了从用微电极在多细胞标本上记录电流到用膜片钳在单个细胞上记录电流的过程。通过对窦房结单个细胞的研究 ,阐明了许多电流的离子机制。最近人们又把目光聚集在多细胞标本的研究 ,发现在窦房结不同的部位存在着不同的动作电位 ,现综述如下。1　窦房结的     

缬沙坦对豚鼠心室肌细胞动作电位的作用

目的:观察缬沙坦对豚鼠心室肌细胞动作电位的直接作用,以探讨其可能的抗心律失常作用。方法:采用Langendorff主动脉逆行灌流酶解分离法分离单个心室肌细胞。采用全细胞膜片钳记录,电流钳模式记录单个心室肌细胞的动作电位。实验分3组:对照组(n=5),普通细胞外液灌流,不含缬沙坦;缬沙坦5μM组(n=5);缬沙坦100μM组(n=5)。结果:缬沙坦5μM对豚鼠心室肌细胞静息膜电位、动作电位幅度、动作电位时程均无明显影响。缬沙坦100μM可延长心室肌细胞动作屯位时程,尤其是APD50从(334.2±14.4)ms延长至(375.2士12.0)ms(P<0.01)及APD30从(395.4士13.3)ms延长至(451.4±9.5)ms(P<0.01),对细胞静息膜电位、动作电位幅度无显著影响。结论:高浓度缬沙坦延长心室肌细胞动作电位时程APD50及APD90,而不影响动作电位的静息膜电位及动作电位幅度。适度延长动作电位时程,从而延长心室有效不应期,有助于折返引起的快速室性心律失常的防治,类似Ⅲ类抗心律失常药物的作用。提示缬沙坦可能通过此机制起抗心律失常的作用。     

缝隙连接对心室肌细胞电不均一性的影响

近年来 ,大量实验研究已证实了正常心肌存在电生理不均一性 ,但在体和离体的实验结果不一致 ,目前认为细胞间缝隙连接 (ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎ ,ＧＪ)是导致这种结果不一致的重要因素之一 ,它可以影响动作电位时程的不均一性和复极化的离散性。1　 心肌细胞的缝隙连接心肌纤维的超微结构包括闰盘 ,它们于Ｚ线水平 ,由相邻两个肌纤维的分支处伸出许多短突相互嵌合而成 ,常呈阶梯状 ,在连接的横向部分 ,有中间连接和桥粒 ,起牢固的连接作用 ;在连接的纵向部分 ,为缝隙连接 ,便于细胞间化学信息的交流和电冲动的传导 ,这对心肌纤维整体活动的…     

莲心碱对豚鼠心室肌细胞动作电位及钠与钙电流的影响

为探讨莲心碱 (liensinine,L ien)对心肌离子流的影响及抗心律失常作用机制。采用全细胞膜片钳技术 ,记录了 L ien对单个豚鼠心肌细胞动作电位 (AP)及纳电流 (INa)与 L -型钙电流 (ICa- L)的影响。 L ien 3～ 30μmol/ L 可剂量依赖性地降低 AP幅度 (APA)、静息电位 (RP) ,延长 AP时程。 L ien10 ,30 μm ol/ L 分别使 INa及 ICa- L从给药前的 (8.6± 2 .3) n A和 (75 8± 177) p A降至 (5 .4± 1.7)、(2 .2± 1.6 ) n A和 (335± 12 2 )、(137±10 0 ) p A。L ine10 μmol/ L 抑制 INa和 ICa- L的 I- V曲线并使后者的峰值电流电位略右移。结果表明 L ien有钠、L -型钙通道阻滞作用 ,这些可部分解释其抗心律失常作用机制     

急性缺血对豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的　观察急性缺血对豚鼠心室肌细胞 L型钙通道电流 (ICa- L)的影响。　方法　采用膜片钳全细胞记录方法 ,分别于模拟急性缺血后 0 ,5 ,10 ,15和 2 0 m in记录 ICa- L。　结果　模拟急性缺血状态后豚鼠心室肌细胞ICa- L明显受抑 ,L钙电流峰值最大值较对照组下降 2 5 .6 5 %± 4 .13% (P<0 .0 5 ) ;但其最大活性电压和 ICa- L的 I- V曲线形态无明显改变。　结论　模拟急性缺血状态可明显抑制豚鼠心室肌细胞 L 型钙通道电流 ,但不影响最大活性电压和 ICa- L的 I- V曲线形态     

丹皮酚对豚鼠心肌细胞动作电位及钙通道电流的影响

目的 :研究丹皮酚对分离的单个豚鼠心肌细胞动作电位及钙通道电流 (ICa)的影响。方法 :单个细胞膜片钳技术。结果 :①丹皮酚 40 0 μg/ml可使动作电位时程 (APD)明显缩短。APD50 和APD90 分别由给药前的 (35 2±2 7)ms和 (416± 33)ms缩短至 (16 8± 2 0 )ms和 (2 6 5± 2 3)ms(P <0 .0 5 ,n =5 ) ,分别缩短了 5 2 .2 %和 35 .6 % ,而静息电位和动作电位幅值无明显改变 ;② 5 0～ 40 0 μg/ml丹皮酚浓度依赖性阻滞ICa,使其最大峰值由 (916 .7± 197.3)pA分别降至 (5 83 .3± 10 8.8)pA和 (2 5 0 .0± 12 0 .0 )pA(P <0 .0 1) ,抑制率分别为 36 .4%和 72 .7% ,并使ICa的I V曲线上移 ,但不使I V曲线发生偏移。结论 :丹皮酚对ICa的阻滞作用为其抗心律失常作用的主要机制之一     

内皮素1对豚鼠心室肌细胞正常和急性缺血状态L型钙通道电流的影响

目的 探讨内皮素1（ET－1）对正常和急性缺血状态下豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流（Ica-L）的影响。方法 应用全细胞膜片钳技术记录豚鼠心室肌细胞单一Ica-L。结果 5，10，50nmol/L的ET－1分别使正常状态心室肌细胞Ica-L的峰值明显增加（均P＜0．05）；但在模拟缺血低氧条件下ET－1对Ica-L的峰值和最大激活电位无明显影响。结论 ET－1对正常豚鼠心室肌细胞Ica-L有明显的浓度依赖性增强作用；在急性缺血条件下该增强作用消失。     

洛土辛对豚鼠心室肌细胞动作电位及L型钙电流的作用

采用膜片钳技术全细胞记录方式,研究洛土辛（Ｌｏｔ）对单个豚鼠心室肌细胞动作电位（ＡＰ）和Ｌ型钙通道电流（Ｉ_（Ｃａ－Ｌ））的影响。结果表明,Ｌｏｔ ３０ μｍｏｌ／Ｌ明显延长 ＡＰ时程,但不影响静息电位和 ＡＰ幅度,另增加全细胞Ｉ_（Ｃｃ－Ｌ）。贴附式单通道记录表明,Ｌｏｔ １００ μｍｏｌ／Ｌ不改变斜率电导,对Ｌ型钙通道的门控过程也无明显影响,但显著提高单通道的平均电流,使非空白记录从 ２５％增至 ４１％。提示,Ｌｏｔ增加 Ｌ型钙通道的可利用度可能是其促钙内流的主要作用机制。     

桂枝甘草汤含药血清对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的:观察桂枝甘草汤及不同组分含药血清对单个豚鼠心室肌细胞钠离子通道电流及其动力学参数的影响。方法:制备桂枝甘草汤及各组分含药血清,急性分离豚鼠心室肌细胞,细胞复钙后随机分为空白组、甘草组、桂枝组、甘草加桂枝组和桂枝甘草汤组,各组分别加入各含药血清(10%、15%体积分数),加药完成后细胞放于37℃,5%CO2的孵育箱中孵育24 h后进行膜片钳实验。结果:与空白组比较,各组不同体积分数均可显著抑制Na+电流平均电流密度(P<0.05)。结论:桂枝甘草汤及各组分含药血清对Na+通道有不同程度的抑制作用,与I类抗心律失常药物作用机制相同,这可能是桂枝甘草汤抗心律失常的作用机制。     

心律平对心肌细胞钠钙通道的抑制效应

目的 研究抗心律失常药物心律平对通道电流的作用。 方法 运用细胞内微电极、电压箝和膜片箝技术从细胞动作电位、跨膜离子流和单通道三个水平研究心律平的作用。 结果 心律平对钠流、钙流有明确的抑制作用，减少晚钠通道电流爆发型模式的出现，并能抑制早期后除极的平台期振荡。 结论 心律平对心肌细胞钠通道和钙通道有明确抑制效应，为心律平应用于室上性和室性心律失常的治疗提供理论依据。     

降纤酶对大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心室肌细胞动作电位和L型钙电流的影响

目的　探讨降纤酶对大鼠急性心肌梗死后梗死周边区心室肌细胞动作电位和 L型钙电流的影响。方法　制成大鼠急性心肌梗死模型, 分两组, 一组对照, 另一组腹腔注射降纤酶0. 2 U/ (100g·d), 共 7 d, 酶解分离梗死周边区心室肌细胞, 采用全细胞膜片钳技术记录其动作电位和 ICa,L。结果　降纤酶组梗死周边区心室肌细胞 ERP/APD90增大, 受抑制的 ICa,L有所恢复, 峰电流密度显著增大, I V曲线下移, 失活曲线右移, 失活后再恢复速度加快。结论　降纤酶使急性心肌梗死后梗死周边区心室肌细胞ERP/APD90增大, ICa,L有所恢复, 因此具有减少急性心肌梗死后室性心律失常和改善心功能的作用。     

左—甲状腺素所致豚鼠肥厚心室肌细胞L—型钙电流的变化

观察左 -甲状腺素造成的豚鼠肥厚心室肌细胞 L-型钙电流变化及与血浆 T3、T4水平增高的关系。豚鼠 ip左 -甲状腺素 ( Levothyroxine,L-thy,0 .5mg/kg× 1 0 d) ,造成心肌肥厚模型之后 ,部分豚鼠 ip普萘洛尔( propranolol,pro,5mg/kg× 3d)。用全细胞膜片钳技术测定单个心室肌细胞 L-型钙电流的变化。结果 ,电流强度、电流密度在肥厚组增幅分别达 32 .95%和 35.2 4 % ( P<0 .0 1 ) ,用 pro治疗后接近正常值 ( P>0 .0 5)。血浆T3、T4含量 ,pro治疗后仍明显高于正常组 ,但肥厚有所消退 ,消退率为 66.1 2 %。结论 ,左 -甲状腺素造成的豚鼠肥厚心室肌细胞 L-型钙电流增强 ,此变化与血浆 T3、T4水平增高状态无关