干扰STAT3的siRNA真核表达载体对人卵巢癌的侵袭转移性的相关研究

目的：通过构建针对STAT3的siRNA真核表达载体,研究STAT3对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响。方法：使用软件Primer Premier 5设计siRNA靶序列,在合成修饰靶序列之后,构建siRNA-STAT3-脂质体复合物,并转染卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot检测细胞STAT3的表达,通过Transwell小室及对卵巢癌SKOV3细胞侵袭相关蛋白MMP-2的检测,探讨siRNA-STAT3对卵巢癌细胞侵袭力的影响。结果：构建干扰STAT3的siRNA真核表达载体转染SKOV3细胞可显著抑制细胞中STAT3的蛋白表达;与SKOV3细胞对照组和SKOV3细胞阴性对照组相比,SKOV3细胞siRNA-STAT3组中细胞侵袭转移能力明显下降。结论：构建干扰STAT3的siRNA真核表达载体可有效抑制STAT3的表达及卵巢癌SKOV3细胞的侵袭转移能力。     

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者.采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力.     

RNA干扰沉默Fascin基因对人胆管癌细胞QBC939侵袭力影响

目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,探讨RNA干扰沉默fascin基因的表达对人胆管癌细胞QBC939体外侵袭力的影响.方法 采用常规方法培养QBC939细胞,将其分为三组,实验组和对照组分别转染fascin shRNA慢病毒载体和shRNA阴性对照慢病毒载体,空白组不做处理.Western blot检测各组fascin mRNA和蛋白的表达情况;通过Transwell侵袭试验检测各组细胞在体外的侵袭能力.结果 Western blot检测发现,实验组fascin基因的表达明显低于空白组及对照组,差异有显著性(P ＜0.05);Transwell侵袭试验检测发现实验组侵袭能力明显低于其余两组,差异有显著性(P＜0.05)).结论 慢病毒介导的shRNA能有效地沉默Fascin基因在胆管癌QBC939中的表达,能有效抑制胆管癌细胞的侵袭能力.     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人胰腺癌细胞SW1990侵袭能力的影响

目的：观察信号转导与转录因子3（STAT3）siRNA表达载体对胰腺癌细胞侵袭能
力的影响,并探讨其机制。方法：实验分为空白对照组、阴性对照组及STAT3 siRNA组。以人
胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,将合成的STAT3 siRNA转染SW1990细胞后,采用RT-PCR及
Western blotting检测转染前后STAT3 mRNA及蛋白的表达变化,Transwell法检测其对胰腺癌
细胞侵袭能力的影响,RT-PCR及Western blotting检测其对胰腺癌细胞MMP-2和MMP-9表达
的影响。结果：STAT3 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后,STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,
与空白对照组及阴性对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后胰腺癌细
胞的侵袭细胞数及MMP-2和MMP-9的表达显著减小,与阴性对照组及空白对照组比较,差异有统
计学意义（P<0.05）。结论：STAT3 siRNA能特异地阻断胰腺癌细胞中STAT3信号的活
化,并进一步通过下调MMP-2和MMP-9的表达从而抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。     

RNA干扰沉默STAT3对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎的治疗作用

目的: 研究小干扰RNA(siRNA)干扰沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)对大鼠类风湿关节炎(RA)的治疗作用,评价其有效性,为RA的基因治疗提供实验依据。方法: 采用鸡Ⅱ型胶原诱导方法建立大鼠 RA(CIA)模型,实验分为正常组(非关节炎大鼠)、模型组(不给予治疗的关节炎大鼠)、阴性对照组(给予乱码RNA的关节炎大鼠)和治疗组(给予STAT3特异干扰siRNA的关节炎大鼠),实验中siRNA均由慢病毒颗粒包载。实验期间观察大鼠一般情况,每7 d检测大鼠关节病变程度并记录,实验第35天处死大鼠后观察其关节病理切片并进行评分;Western blotting法检测大鼠滑膜组织中STAT3蛋白表达水平;RT-PCR法检测大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA表达水平。结果: 与模型组和阴性对照组比较,治疗组大鼠临床及形态学表现均明显减轻。与正常组比较,模型组和阴性对照组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05或P<0.01),治疗组差异无统计学意义(P>0.05);模型组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠滑膜组织中STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论: 局部注射siRNA阻断STAT3的表达可明显改善RA大鼠关节的组织病理学表现,其机制可能与STAT3 mRNA和蛋白表达水平降低有关。     

小鼠STAT4，STAT6基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒.方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒.同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列.结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符.结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体.为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础.     

RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响

 目的研究RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法采用RNA干扰技术,在E-cadherin和S100A2表达阳性的MNK45细胞同时沉默E-cadherin和S100A2基因表达,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测干涉效果,MTT 和Transwell检测细胞生长和侵袭力的变化。结果小干扰RNA明显抑制MKN45 细胞E-cadherin和S100A2 的表达;干涉第11天,E-cadherin和S100A2蛋白表达下降,细胞生长速度和细胞侵袭力明显增加。结论E-cadherin和S100A2蛋白具有抑制细胞增殖和侵袭的功能,可作为抑癌因子参与胃癌的发生与转移。     

RNA干扰-dsRNA介导的基因沉默

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来首先在线虫体内发现的一种生物现象,即双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)能抑制序列特异性基因的表达[1].目前,RNAi现象在包括植物、真菌、果蝇以及某些哺乳动物等多种生物体内也已得到证实[2～4],被认为是进化过程中普遍存在的一种保守机制,是生物体防御病毒感染和转座子,保护自身基因组的重要手段[5、6],并因此引起生命科学界极大的关注.     

小干扰RNA沉默EGFR基因对卵巢癌细胞侵袭力的影响

目的 通过小干扰RNA(siRNA)沉默表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,旨在探讨其对卵巢癌SKOV3细胞体外侵袭力影响.方法 体外构建靶向EGFR基因siRNA质粒和阴性对照质粒, Lipofectamin 2000介导转染到SKOV3细胞中.实验分空白对照组、非特异性转染组、特异性转染组.采用RT-PCR和免疫细胞化学法检测EGFR基因mRNA和蛋白表达水平;采用平板克隆形成法检测细胞生长增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力.结果 特异性转染组细胞EGFR mRNA 的表达与其他两组相比明显减弱(F=50.45,q=12.87、11.72,P<0.01),EGFR 蛋白表达明显下调(F=61.54,q=14.58、11.46,P<0.01);细胞生长增殖能力减弱(F=130.12,q=21.12、18.15,P<0.01);体外侵袭力明显降低(F=34.09,q=11.26、8.34,P<0.01).结论 siRNA可以有效抑制SKOV3细胞EGFR基因的表达,从而抑制SKOV3细胞增殖和侵袭能力.     

RNA干扰-转录后水平的基因沉默

随着人类基因组计划的初步完成,生命科学也随之进入后基因组计划的时代.在各种研究基因功能的方法中,RNA水平使目的基因沉默无疑是目前研究的新点和热点,特别是双链RNA(dsRNA)介导的转录后水平的基因沉默(PTGS),更是快速关闭基因的途径,目前在植物、线虫、果蝇和小鼠早期胚胎中均有发现和证实.这一现象的发现和应用将有助于基因功能及其在信号传导、病毒抵御机制等方面的研究,并有可能开创基因治疗的新模式.     

靶向转录信号传导子与激活子-3基因的RNAi对人结肠癌细胞HCT116侵袭能力的影响

目的探讨抑制靶向转录信号传导子与激活子-3（STAT-3）基因表达对结肠癌细胞增殖以及侵袭转移行为的影响。方法实验分三组：空白对照组、转染NC-siRNA（阴性对照组）及转染特异性STAT-3-siRNA组（RNAi组）。人结肠癌细胞HCT116瞬时转染特异性siRNA,24、48、72 h后MTT法检测三组细胞的增殖活性,48 h后RQPCR检测STAT-3基因mRNA表达。RQ-PCR及细胞免疫化学法检测MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果 RNAi组与其他两组相比细胞增殖受抑明显（均P〈0.01）;细胞生长减慢,RNAi组较阴性对照组STAT-3mRNA下降了71.91%（P〈0.01）。RNAi组与其他两组相比MMP-9在mRNA和蛋白水平表达均明显下降（均P〈0.01）;侵袭实验RNAi组较空白对照组侵袭力下降了49.75%（P〈0.01）,而两对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论下调STAT-3基因表达可有效抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭转移,抑制MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达。沉默STAT-3基因抑制结肠癌细胞侵袭能力的机制之一可能是通过下调MMP-9途径。     

siRNA敲除STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的抑制

目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用.方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力.结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关.结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的侵袭.     

E-钙粘蛋白在胃癌浸润、转移中的作用

目的：研究E-钙粘蛋白（E-cad）在胃癌中的表达,并探讨它在胃癌浸润、转移中的作用。方法：应用免疫组化检测36例胃癌标本中肿瘤组织及癌旁组织中E-cad的表达,并进行回顾性随访。结果：E-cad在胃癌组织中的阳性表达率（72．2％）显著低于癌旁组织（91．7％）（P〈0．05）。E-cad的阳性表达与胃癌分化程度相关（P〈0．05）。结论：E-cad的异常表达在胃癌的发生中起着重要作用,参与了胃癌的浸润、转移过程;E-cad可能是预测胃癌患者临床预后的有用标志物。     

STAT3、p-STAT3与Survivin在胃癌及其癌前病变组织中的表达及意义

目的 检测信号传导和转录激活因子-3(STAT3)、酪氨酸磷酸化STAT3(p-STAT3)及Survivin在胃癌及其癌前病变组织中的表达,探讨三者在胃癌组织中表达的关系及其临床病理意义.方法 采用免疫组化二步法检测91例胃癌及其配对正常胃黏膜、肠化生及异型增生组织中STAT3和Survivin蛋白的表达,其中50例胃癌组织检测了p-STAT3的表达.结果 STAT3、p-STAT3、Survivin蛋白在肠上皮化生(95.2%,71.4%,91.4%)、异型增生(85.7%,100%,100%)和胃癌组织(67.0%,60.0%,81.32%)中表达的阳性率均显著高于正常胃黏膜(6.6%,32%,3.9%),P<0.05;伴淋巴结转移胃癌组中STAT3、p-STAT3、Survivin蛋白表达的阳性率(67.7%,69.4%,86.8%)显著高于无淋巴结转移组(65.2%,35.7%,65.2%),P<0.05.在胃癌组织中STAT3与p-STAT3表达呈正相关(rk=0.288,P=0.013).结论 STAT3、p-STAT3及Survivin蛋白的过表达可能在胃癌的发生发展过程中起重要作用,是胃癌诊治中较有价值的标记物,但其具体分子病理学机制尚需进一步深入研究.     

用组织芯片技术研究STAT3在胃癌中的表达及意义

目的检测STAT3在胃癌组织中的表达,探讨其与临床病理参数间的关系。方法应用组织芯片及免疫组织化学技术检测89例胃癌组织中STAT3表达情况。结果 STAT3在胃癌和正常胃粘膜组织中的表达阳性率分别为68.5%和15.0%,差异有统计学意义（P〈0.05）。STAT3表达阳性率与组织学分级、TNM分期及淋巴结转移相关（P〈0.05）。结论 STAT3在胃癌中过度表达,并且与胃癌的组织学分级、TNM分期及淋巴结转移相关,STAT3可能在胃癌发生发展中起重要作用。     

STAT3信号传导通路与胃癌关系研究进展

[目的]综述STAT3信号传导通路与胃癌发生发展关系的研究进展.[方法]查阅近10年来的相关文献并进行归纳总结,从 STAT3信号传导通路对胃癌形成、发展及转移等方面对其进行整理分析.[结果]STAT3信号传导通路与胃癌的关系是近期国内外学者的研究热点,研究发现STAT3信号传导通路与胃癌有着密切的联系,参与了胃癌增殖分化、凋亡等的调控且与胃癌的侵袭转移等密切相关.[结论]STAT3信号传导通路与胃癌关系的不断揭示对胃癌的防治工作有着重要的意义,该通路可能成为今后胃癌诊治的重要突破口,同时对以STAT3为靶点的抗肿瘤药物研发进展具有积极的促进作用.但该通路的复杂性及胃癌发生发展的多因素调控性,我们仍需进行更深入的研究.     

STAT3-siRNA表达框架的设计与构建

【目的】设计和构建针对STAT3基因的siRNA表达框架，并在结直肠癌细胞中观察其干扰效果。【方法】GeneBank中查询STAT3基因序列，Oligo 6．0软件设计siRNA靶序列，合成并修饰靶序列后PCR扩增siRNA表达框架，通过脂质体介导，直接将扩增产物转染至结直肠癌细胞SW480中，48h后提取细胞总RNA进行RT—PCR检测干扰效果。【结果】RT-PCR结果显示SW480细胞内靶基因STAT3 mRNA水平下降（62．16±12．50）％。【结论】本实验成功设计并构建的siRNA表达框架能干扰人结直肠癌SW480细胞内STAT3基因的表达。     

竹节香附素A对人胃癌细胞株BGC-823细胞周期及STAT3信号通路的影响

目的?研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)在体外对胃癌细胞BGC-823的周期阻滞作用及对STAT3信号通路的影响。方法?应用MTT法检测RA对人低分化细胞BGC-823细胞的增殖影响,应用流式细胞仪检测RA对BGC-823细胞周期的阻滞作用,细胞划痕实验检测RA对BGC-823迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测其对STAT3信号通路的影响。结果?RA在给药12、24、48h后,与对照组相比,对BGC-823细胞的增殖抑制有显著效果,呈现时间-浓度依赖关系。流式细胞周期结果显示,RA作用于人胃癌细胞BGC-823 12h后,S期比例与对照组相较显著上升,而G₂/M期比例下降,表明细胞被阻滞于S期。在浓度为8、16μmol/L时,镜下显示迁移过去的胃癌细胞数目均明显低于对照组,Western blot结果显示RA能下调p-STAT3蛋白的表达。结论?RA能有效抑制人胃癌细胞的增殖并阻滞其细胞周期于S期,并且抑制STAT3信号通路中p-STAT3的表达。      

丹参素对胃腺癌NGCC细胞株的作用

丹参素在无血清培养液中能明显抑制细胞癌细胞株并在实验范围内有较好的剂量依赖关系、血清成分对丹参素的抗肿瘤活性有抑制作用，文中进一步对丹参素抗肿瘤的应用价值进行了讨论。     

张镜人经验方对胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：对张镜人治疗胃癌的经验方进行药效学研究，探讨其作用机制。方法：采用Wistar大鼠血清药理学方法，观察细胞凋亡、死亡及细胞形态学改变。结果：三组药方对胃癌细胞凋亡、细胞死亡均有明显效果。结论：扶正方药与祛邪方药或两者结合组方对胃癌细胞的凋亡与死亡有一定作用。