长链非编码RNA SNHG14可能通过促进胃癌细胞增殖和转移影响胃癌的进展

目的：研究长链非编码RNA（long non?coding RNA,lncRNA）SNHG14在胃癌（gastric cancer,GC）进展中的作用。方法：应用RT?qPCR检测SNHG14在68对胃癌组织和癌旁组织、3个胃癌细胞系（MGC?803、BGC?823、SGC?7901）和人类正常胃上皮细胞株GES?1中的表达量。分析胃癌组织及胃癌细胞株内的SNHG14表达水平与临床病理特征的相关性。使用siRNA沉默SNHG14后观察胃癌细胞株的功能。CCK?8增殖实验评估SNHG14对胃癌细胞增殖的影响,Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力。结果：胃癌细胞株和胃癌组织中SNHG14的表达量与正常对照相比显著上调。相关分析显示SNHG14的表达量与胃癌组织的TNM分期（P < 0.05）、分化程度（P < 0.001）、肿瘤大小（P < 0.01）及浸润深度（P < 0.05）等有显著相关性。通过siRNA沉默SNHG14的表达后,能够显著抑制胃癌细胞的增殖（P < 0.01）、迁移（P < 0.01）和侵袭（P < 0.05）能力。结论：SNHG14可能起到促癌作用,通过促进胃癌细胞的增殖和转移来影响胃癌的进展。SNHG14在治疗和诊断胃癌中具有潜在价值,有可能成为诊断胃癌的新型生物标志物或胃癌生物治疗的候选靶点。     

Id-1和VEGF在胃癌中的表达及其意义

目的探讨Id-1和VEGF在胃癌组织中的表达和临床病理特征之间的关系。方法通过组织芯片技术用免疫组化SP法检测55例胃癌组织、15例正常胃组织中Id-1和VEGF表达情况,以及Id-1和VEGF表达与胃癌临床病理特征的关系。结果病例组中Id-1和VEGF的表达阳性率分别为61.8%和74.5%,正常胃组织则分别为20.0%、26.7%,病例组Id-1和VEGF阳性表达率与正常胃组织比较差异有统计学意义（P均〈0.05）。Id-1表达强度和肿瘤浸润深度、分化程度、临床分期、淋巴结转移有明显的相关性（P均〈0.05）。VEGF表达强度和肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结转移有明显相关性（P均〈0.05）,而与肿瘤分化程度无关（P〉0.05）。Id-1和VEGF在胃癌组织中的表达呈正相关（rs=0.525,P〈0.01）。结论 Id-1、VEGF的过度表达可能与肿瘤的发生和恶性行为有关,检测该指标对预测胃癌预后和指导治疗有一定的参考价值。     

IGF-Ⅱ和VEGF在胃癌中的表达及其意义

目的研究IGF-Ⅱ和VEGF在胃癌组织中的表达和临床病理特征之间的联系以及2者之间的相互关系。方法使用免疫组化SP法检测100例胃癌组织、40例正常胃组织中IGF-Ⅱ和VEGF的表达情况以及IGF-Ⅱ、VEGF表达与胃癌临床病理特征的关系。结果病例组中IGF-Ⅱ、VEGF的表达阳性率分别为80%、73%,明显高于正常对照组（P〈0.01）。IGF-Ⅱ、VEGF的表达强度与肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结转移有明显的相关性（P〈0.01）,但与肿瘤大小、分化程度无相关性（P〉0.05）。2者在胃癌组织中的表达存在着正相关（P〈0.05）。结论 IGF-Ⅱ、VEGF的表达可能与肿瘤的发生和恶性行为有关,通过检测该指标对预测胃癌的预后和指导治疗有一定的参考价值。     

Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞SGC-7901中的表达

目的：研究Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞中的表达，探讨其与胃癌发生的关系。方法：培养胃癌细胞（SGC-7901）和正常肠上皮细胞（IEC-6），用免疫细胞化学法检测两种细胞中Shh蛋白的表达，用RT—PCR法检测Shh mRNA在两种细胞中的表达。结果：Shh蛋白在正常肠上皮细胞中表达阳性率为15％，在胃癌细胞中表达阳性率为70％，Shh蛋白在正常肠上皮细胞中的表达明显低于胃癌细胞（P〈0．05）。Shh mRNA在正常肠上皮细胞中不表达或低表达，在胃癌细胞中明显表达（P〈0.05）。结论：Shh信号通路可能与胃癌发生有关。     

免疫球蛋白样转录子2在胃癌细胞中的表达及临床意义

目的检测免疫球蛋白样转录子2(ILT2)在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达,分析其表达与胃癌生物学行为和临床特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测50例胃癌病理组织中ILT2蛋白的表达,并结合临床病理指标进行分析。采用实时荧光定量PCR和FACS流式细胞术检测6株高(MKN1)、中(SGC-7901,AGS)、低(MGC-803)及未分化(HGC-27,BCG-823)人胃癌细胞株ILT2的mRNA和蛋白表达。MTT法检测自然杀伤细胞(NK-92)和外周血淋巴细胞(PBMCs)对HGC-27、MKN1两种胃癌细胞的杀伤活性。结果 50例胃癌病理组织中ILT2表达阳性率为62.0%(31/50),正常胃组织不表达ILT2。在低分化型胃癌组织中ILT2表达阳性率为73.3%(22/30),在分化型组织中表达阳性率为45%(9/20),差异有统计学意义(χ2=4.089,P<0.05);肿瘤直径>5 cm时胃癌组织中ILT2表达阳性率为84.2%(16/19),明显高于肿瘤<5 cm时患者阳性率48.4%(15/31),差异有统计学意义(χ2=6.417,P<0.01)。6株人胃癌细胞均表达ILT2,ILT2在低分化和未分化胃癌细胞中表达阳性率高于中分化和高分化细胞(P<0.05)。在不同效靶比下人PBMC及NK-92细胞对MKN1细胞(ILT2低表达)的杀伤能力高于对HGC-27细胞(ILT2高表达)的杀伤(P<0.05)。结论胃癌组织细胞ILT2的表达与细胞分化程度和胃癌临床病理特征显著相关,PBMC和NK-92细胞对高表达ILT2的胃癌细胞的杀伤能力降低。提示ILT2可能参与肿瘤的免疫逃逸并可作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

VEGF和抑癌基因maspin在胃癌组织中的表达及意义

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）和抑癌基因maspin在胃癌组织中的表达情况,研究它们与胃癌临床特征的关系。方法应用免疫组化法检测102例胃癌患者手术切除的癌组织和癌周正常组织中VEGF和maspin表达水平。结果VEGF在正常胃组织中未见表达,在胃癌组织中的表达率为50.0%,两者比较差异有显著性意义（P〈0.01）。maspin在正常胃组织中表达率为87.3%,在胃癌组织中的表达率为52.0%,两者比较差异有显著性意义（P〈0.01）。VEGF蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移、5年生存率有关（P〈0.05）,maspin蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、淋巴结转移、5年生存率有关（P〈0.05）。结论同时检测胃癌组织中VEGF与maspin表达水平,对判断胃癌浸润转移潜能及评估患者预后有一定参考价值。     

Kruppel样因子15——多功能转录因子的功能研究

Kruppel样因子15(KLF15)是Kruppel样转录因子家族中的一员。Kruppel样转录因子家族特征性结构是含有3个Kruppel样锌指结构,与DNA的CACCC元件和富含GC区连接,从而调控转录激活或抑制。KLF15在许多生物过程中起重要作用,包括细胞的增殖、分化、发展和凋亡。研究证实,KLF15参与调节三大物质代谢:糖代谢、脂肪酸代谢、氨基酸代谢。在循环系统方面,KLF15过表达能够抑制心肌肥厚,而KLF15的缺乏会引起心力衰竭、主动脉瘤的产生。此外,KLF15在肾病、肾纤维化、骨骼肌脂质利用、昼夜节律等诸多方面起重要作用。随着对KLF15功能的认识越来越深入,KLF15有望成为有效治疗致死性疾病的新靶点。     

Survivin和VEGF在胃癌和癌前病变中的表达及临床意义

目的：探讨胃癌和胃癌前病变中Survivin和VEGF的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P法检测62例胃癌,25例不典型增生,25例正常胃黏膜中的Survivin、VEGF的表达情况。结果：胃癌组织中Survivin、VEGF的表达远高于轻、中、重度不典型增生和正常黏膜组织（P〈0.05）,胃癌中Survivin阳性表达与TNM分期有关（P〈0.05）,VEGF阳性表达与胃癌细胞分化、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关（P〈0.05）,Survivin和VEGF表达显著相关（P〈0.05）。结论：Survivin、VEGF在胃癌的发生、发展中起着重要作用,可作为反映胃癌生物学行为的指标。     

胃癌组织中PTEN、VEGF表达与肿瘤新生血管形成

目的探讨胃癌组织中PTEN、vascular endothelial growthfactor（VEGF）基因表达及其与肿瘤侵袭转移的关系。方法用RT-PCR和免疫组化方法检测胃癌、淋巴结转移组织中PTEN、VEGF mRNA和蛋白表达;用CD34检测肿瘤细胞微血管数。结果PTEN和VEGF mRNA表达阳性率在正常胃黏膜为76.5%与0.0%、胃癌组织为30.9%与69.1%、淋巴结转移组织23.6%与74.5%;PTEN和VEGF蛋白阳性率在正常胃黏膜为76.5%与0.0%、胃癌组织27.9%与82.4%、淋巴结转移组织16.3%与91.0%;胃癌组织中新生血管呈浸润生长,以淋巴结转移组织中明显。胃癌组织PTEN mRNA和蛋白低于正常胃黏膜（P〈0.01）,VEGF高于正常胃黏膜（P〈0.01）,PTEN与VEGF表达负相关（P〈0.05）,VEGF表达与新生血管形成正相关（P〈0.05）。结论PTEN基因失活和VEGF的过表达与新生血管形成相关,可能是通过调节包括VEGF在内的血管生成因子而在血管形成中起作用。     

p53和Rb与胃癌组织学分型的关系

目的：探讨p53和Rb蛋白在不同组织学分型胃癌中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP二步法检测216例胃癌术后原发灶标本和80例癌旁正常的胃黏膜组织标本中p53及Rb蛋白的表达情况。胃癌标本按组织学特点分为：高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌、未分化癌五型。结果：①正常胃黏膜和胃癌标本中p53的阳性表达率分别为0、67.10%（P〈0.01）;Rb的阳性表达率分别为100%、51.85%（P〈0.01）。②不同组织学分型的胃癌中,癌细胞分化程度越好,p53的阳性表达率越低（P〈0.05）,Rb的阳性表达率也越高（P〈0.05）。③在胃癌中p53和Rb的蛋白表达无相关性（P〉0.05）。结论：p53蛋白及Rb蛋白阳性表达在不同组织学分型的胃癌中差异呈显著性;胃癌细胞分化程度越差,p53的阳性表达率越高,Rb的阳性表达率越低,但两者并无关联性。     

Hedgehog通路中PTCH1蛋白在人胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Hedgehog通路中PTCH1蛋白在人胃癌组织中的表达及其与胃癌发生的关系。方法应用免疫组化法检测PTCH1蛋白在40例胃癌及癌旁组织中的表达情况以及分布规律,分析PTCH1蛋白的表达与胃癌的临床生物学特征的关系。结果 PTCH1蛋白在胃癌组织中的表达比癌旁组织低（50.0%vs87.5%）,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。PTCH1蛋白表达与胃癌肿瘤大小和转移无相关性,与肿瘤分化程度有关,低分化癌组织中PTCH1蛋白表达率明显低于中高分化癌组织中表达率（41.4%vs72.7%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 PTCH1蛋白在胃癌组织中的低表达与胃癌的发生、发展密切相关,提示PTCH1蛋白检测有可能成为临床新的胃癌的早期诊断标志物并可预测患者的预后及转归。     

ARNT2在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨人胃癌中芳香烃受体核易位蛋白2(ARNT2)的表达及临床意义。 方法 运用qRT-PCR和Western blotting检测ARNT2在正常胃细胞株及多种胃癌细胞株中的表达。通过免疫组织化学检测61例胃癌组织及相应癌旁胃黏膜组织中ARNT2的表达。 结果 ARNT2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃细胞株。胃癌组织中ARNT2的阳性表达率显著低于癌旁胃黏膜组织(32.79% vs 80.33%,P<0.05),与细胞株的检测结果一致。并且,胃癌中ARNT2的表达水平与肿瘤的分化程度显著相关(P<0.05)。 结论 ARNT2在胃癌细胞及组织中低表达,并且其表达水平与胃癌的分化程度相关,提示其可能参与胃癌的发生与发展。     

KLF6基因在原发性肝癌中的表达

目的 通过研究潜在抑癌基因KLF6在肝细胞癌的表达,探讨KLF6基因作为肝癌抑制基因的可能性.方法 分别用荧光定量PCR、半定量RT-PCR和Western blot方法检测肝细胞癌及癌旁组织中KLF6基因在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 实时荧光定量PCR显示经过看家基因GAPDH标化的KLF6 cDNA 起始浓度,在配对癌旁组织约为肝癌组织的3倍.26例肝癌组织的KLF6 mRNA表达水平与配对癌旁组织相比,差异具有显著性意义(P<0.01).在肝癌细胞株HepG2及Hep3B,KLF6 mRNA的表达亦显著低于正常对照细胞L02(P<0.01).实验还发现,在肝细胞癌中KLF6蛋白表达变化与mRNA表达变化一致,即KLF6蛋白在癌组织及肝癌细胞的表达明显低于癌旁组织及L02(P<0.01).结论 KLF6表达下调可能是肝细胞癌的遗传学改变之一, KLF6基因可能为新的肝癌相关抑癌基因.     

低密度脂蛋白受体LDLR基因在胃癌中的表达及意义

目的 检测低密度脂蛋白受体LDLR在胃癌肿瘤细胞系和组织中基因水平的表达,并探讨其与胃癌的相关性.方法 利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测7株胃癌细胞系及其56对胃癌组织和癌旁配对组织中LDLR基因的mRNA水平表达状况.并对所得数据做相关性研究分析.结果 LDLR在7株胃癌细胞系的mRNA水平均有表达且有差异,其中N87、MKN45表达较高.LDLR在56对胃癌和癌旁配对组织中的mRNA水平表达有差异,肿瘤组织表达水平71.4％ （40/56）,高于癌旁配对组织39.3％ （22/56）,差异有显著性（P＜0.01）.结论 LDLR基因在不同胃癌细胞系和胃癌组织中高表达,且胃癌肿瘤组织表达高于癌旁组织,提示低密度脂蛋白受体LDLR基因表达与胃癌相关.     

GCF2选择性剪接区在肝癌组织及细胞株中的表达及意义

目的：研究肿瘤相关抗原GCF2选择性剪接区在人肝癌细胞株、肝癌组织、癌旁组织及正常成人肝细胞及组织中的表达及意义.方法：采用RT PCR检测GCF2 5个选择性剪接区（D1～D5）在人肝癌细胞株、43例肝癌组织、相对应的癌旁组织,以及正常成人肝细胞株及9例肝组织中的表达.结果：GCF2 4个选择性剪接区（D1～D4）在所检测的细胞株、肝癌组织、癌旁组织和正常成人肝组织中均未检测到表达;GCF2选择性剪接区D5仅在人肝癌细胞株检测到阳性表达;在43例肝癌组织及相应的癌旁组织中,有41例肝癌组织GCF2选择性剪接区D5呈阳性表达,阳性表达率为95.35％ （41/43）,而9例正常肝组织均未检测到GCF2选择性剪接区D5表达.结论：GCF2 D5选择性剪接区在肝癌组织中有较高阳性表达,GCF2选择性剪接区D5可能与肝癌的发生发展有关.     

酪氨酸激酶受体RON在胃癌中的表达及意义

目的探讨酪氨酸激酶受体RON在胃癌组织中的表达及与预后的关系。方法采用免疫组化Envision法检测98例胃癌组织、29例癌旁组织和10例正常胃黏膜的RON表达及用Western-blot方法检测19例新鲜胃癌组织、癌旁组织、转移的淋巴结和10例正常胃黏膜中RON的表达情况,检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞株HGC．27、SGC-7901、BGC．803和BGC。823的RON蛋白表达。对所有胃癌术后患者进行随访,随访期为3—89（中位时间22）个月,生存率的比较用Kaplan—Meier法估计生存曲线。结果（1）98例胃癌组织RON阳性表达率为56．1％（55／98）,29例癌旁组织RON阳性表达率为27．6％（8／29）,两者比较差异有统计学意义（P=0．007）;正常胃黏膜不表达RON;（2）RON表达与胃癌细胞浸润深度、有否伴淋巴结转移和临床病理分期有关（P〈0．05或P〈0．01）,而与Borrmann分型、组织学类型及是否伴远处转移无关（P〉0．05）;（3）RON阳性表达组与阴性组术后生存率差异无统计学意义（P=0．195）;（4）胃癌新鲜组织,相应癌旁组织和伴有胃癌转移的淋巴结中RON变异体（RONA165）均呈强表达,而正常胃黏膜和正常淋巴结未见RON变异体表达;（5）正常人胎儿胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞株SGC-7901、BGC-803、BGC-823均有不同程度的RON蛋白表达,而未分化胃癌细胞株HGC-27未发现有RON蛋白表达。结论RON主要表达于胃癌组织而不表达于正常胃黏膜,并且与胃癌的浸润深度、是否伴有淋巴结转移和胃癌临床病理分期有关,提示RON在人胃癌发生、发展和浸润转移方面发挥重要作用。     

表皮生长因子受体Ⅲ型突变体在胃癌的表达及其临床意义

目的检测表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvⅢ）在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学染色法（Maxvion 二步法）检测胃癌组织及正常胃组织中EGFRvⅢ蛋白的表达水平,并将检测结果进行统计学分析、比较。结果胃癌组织EGFRvⅢ的阳性表达率为60．34％,正常胃黏膜EGFRvⅢ表达率为0,胃癌组织表达明显高于正常胃组织（P〈0．01）;EGFRvⅢ的表达与性别、年龄和肿瘤生长部位均无相关性（P〉0．05）。结论EGFRvⅢ过度表达可能与胃癌发生发展密切相关,EGFRvⅢ在胃癌组织的特异性表达,可能使其成为胃癌治疗的理想的靶点。     

胃癌组织中KiSS-1 mRNA及蛋白的表达

目的探讨胃癌组织中KiSS-1 mRNA及蛋白的表达情况。方法分别采用原位杂交方法和免疫组织化学SP法对40例胃癌组织、22例癌旁不典型增生组织及40例正常胃黏膜组织进行KiSS-1 mRNA和蛋白的检测。结果胃癌组织、癌旁不典型增生组织及正常胃黏膜组织中KiSS-1 mRNA的阳性表达率分别为57.5%（23/40）、77.3%（17/22）、97.5%（39/40）,依次升高（X2=18.323,P〈0.01）;KiSS-1蛋白的阳性表达率分别为52.5%（21/40）、81.8%（18/22）、95.0%（38/40）,依次增高（X2=20.131,P〈0.01）;胃癌组织中KiSS-1 mRNA及蛋白表达与胃癌分化程度无关（P〉0.05）,与浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0.05）;胃癌组织中KiSS-1 mRNA与蛋白的表达呈正相关（rs=0.702,P〈0.05）。结论 KiSS-1表达缺失与胃癌的发生、转移有关;KiSS-1有望成为胃癌早期诊断和判断预后的辅助指标。     

胃癌Smad4、CyclinD1和p21^waf1表达意义及其与生存的关系

目的研究Smad4、CyclinD1及p21^waf1在胃癌组织中的表达状况,分析其与l临床病理特征及生存之间的关系。方法应用免疫组化S-P法,采用组织芯片技术,分析200例胃癌、56例癌旁组织中Smad4、CyclinD1和p21^waf1蛋白的表达。结果胃癌中Smad4、CyclinD1和p21^waf1蛋白的阳性表达率分别为67．0％、56．5％和59．5％。Smad4蛋白阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌降低（P〈0．01）;CyclinD1的表达水平在有淋巴结转移、低分化程度及弥漫型胃癌中高于无淋巴结转移、高分化及肠型胃癌者（P〈0．05）;p21^waf1n蛋白的阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌者下降（P〈O．05）。胃癌中Smad4与p21^waf1蛋白表达之间呈正相关性（r=0．179,P〈0．05）。用Kaplan—Meier生存曲线经Log-rank检验发现,Smad4阳性表达者预后优于阴性表达者。结论胃癌中存在TGF—Smad4信号通路的异常,Smad4蛋白的异常表达可能导致p21^waf1蛋白的低表达,进而使p21wan对细胞G1／S期的负性调控作用减弱,最终导致肿瘤的发生发展。Smad4蛋白高表达对胃癌患者是一个有利的预后因素,但尚不能作为一个独立的预后指标。     

KISS1在胃癌的表达及临床意义

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KISS1mRNA在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测52例胃癌、52例癌旁组织及12例正常胃组织中KISS1mRNA的表达,半定量分析RT-PCR产物电泳条带密度。结果 在52例胃癌及其相应癌旁组织中KISS1mRNA表达水平分别为（0.425±0.046）和（0.825±0.028）;12例正常胃组织表达水平分别为（0.856±0.044）;胃癌组织KISS1mRNA的表达水平明显低于癌旁组织、和正常胃组织（P〈0.01）。KISS1mRNA的表达水平与患者肿瘤病理类型及临床分期无关（P〉0.05）,而淋巴结有转移者其表达水平低于无淋巴结转移（P〈0.05）。结论 KISS1mRNA在胃癌组织中表达水平下降;其表达与胃癌淋巴结转移有关,可能成为胃癌转移和预后的指标之一。