云南红豆杉生长过程中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量变化

目的 研究云南红豆杉生长过程中不同部位10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetyl baccatinⅢ)的含量变化.方法 采用色谱柱Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-水(42∶13∶45),流速1.0 ml·min-1,柱温32℃,检测波长234 nm,测定云南红豆杉生长过程中不同部位10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.结果 回归方程 Y = 15.290 29X -4.059 76 (r = 0.999 0),线性范围5.50～550 μg·ml-1;加样回收率(n=6)98.6%,RSD为2.4%.在云南红豆杉生长期树皮中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量高于枝叶,是枝叶中最高含量的1.498倍;休眠芽分化期和休眠期是10-去乙酰巴卡亭Ⅲ积累的关键时期,在枝叶中的含量显著高于树皮,最高含量达0.115 0%是树皮中最高含量的1.769倍,二年生枝叶中含量略高于一年生枝叶.结论 该方法简便、准确度高,可用于云南红豆杉枝叶的质量控制.     

云南红豆杉中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量的固相萃取-高效液相色谱法测定

目的 建立以固相萃取-高效液相色谱(HPLC)法测定云南红豆杉枝叶中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.方法 固相萃取柱:Agilent ODS C18 500 mg/3 ml;色谱柱:Agilent zorbax SB-C18( 250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-水-乙腈(35∶55∶10),流速1.0 ml·min-1,检测波长227 nm,柱温30℃.结果 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ在 1.6～8.0 μg·ml-1范围内,进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9,平均回收率为96.8%,RSD为 4.8 %(n= 6).结论 该方法可用于云南红豆杉枝叶中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量测定,方法稳定,结果准确、可靠.     

云南红豆杉心木的化学成分研究

目的进一步了解云南红豆杉心木部位的化学成分。方法云南红豆杉心木的乙醇提取物,经用萃取、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等方法分离,从其氯仿萃取部位分离鉴定得18个化合物,采用波谱解析(UV、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR)等方法确定其结构。结果这18个化合物分别为12个紫杉烷:2α,5α,7β,9α,10β,13α-六乙酰氧基-4(20),11-紫杉二烯(Ⅰ)、紫杉素(Ⅱ)、紫杉-4(20),11-二烯-2A,5A,10β-三乙酰氧基-14β,2-甲基丁基(Ⅲ)、10B-羟基-2A,5A,14β-三乙酰氧基-4(20),11-紫杉二烯(Ⅳ)、1-去羟基巴卡亭Ⅳ(Ⅴ)、巴卡亭Ⅳ(Ⅵ)、巴卡亭Ⅵ(Ⅶ)、7,9-去乙酰基巴卡亭Ⅵ(Ⅷ)、10-去乙酰基云南红豆杉素(Ⅸ)、1B-乙酰氧-5-去乙酰基巴卡亭Ⅰ(Ⅹ)、巴卡亭Ⅰ(Ⅺ)、taxuchinA(ⅩⅡ);4个木脂素:开环异落叶松树脂素(ⅩⅢ)、A-conidendrin(ⅩⅣ)、异紫杉脂素(ⅩⅤ)、落叶松脂醇(ⅩⅥ);2个其它化合物:肌醇甲醚(ⅩⅦ)、β-谷甾醇(ⅩⅧ)。其中化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅺ、ⅩⅡ、ⅩⅥ为心木部位首次分得的成分。结论云南红豆杉心木部位的化学成分同云南红豆杉其他部位有一定的差异,但就红豆杉属而言没有什么差异。     

植物生长调节剂对东北矮紫杉愈伤组织中次生代谢物质的影响

目的 使用植物生长调节剂提高东北矮紫杉愈伤组织中紫杉醇和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的量.方法 以东北矮紫杉幼茎为外植体,运用正交试验优选NAA、2,4-D和6-BA 3种植物生长调节剂组合培养植物愈伤组织,HPLC法测定愈伤组织中紫杉醇和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的量.结果 植物生长调节剂对东北矮紫杉愈伤组织中紫杉醇和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ合成的影响顺序是:NAA>6-BA>2,4-D.结论 利用东北矮紫杉愈伤组织培养生产紫杉醇和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的最佳培养基为:B5+NAA 2.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L.     

HPLC法测定云南红豆杉细胞悬浮培养中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ

目的 测定经寡聚半乳糖醛酸(oligogalacturonic acid,OGA)诱导的云南红豆杉Taxus yunnanensis细胞悬浮培养物中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-deacetyl baccatin Ⅲ,10-DAB Ⅲ)的量.方法 采用不同质量浓度的OGA处理云南红豆杉悬浮培养细胞,通过RP-HPLC法测定细胞和培养液中的10-DAB Ⅲ的量,甲醇-乙腈-水(2∶3∶8)为流动相,检测波长为232 nm.结果 10-DAB Ⅲ在0.05～2.06 μg与峰面积线性关系良好,回归方程为y=89.146X 27.067(R2=0.999 6),细胞内、外样品平均回收率分别为94.96%、100.72%,RSD分别为0.44%、0.81%.OGA(40 μg/mL)可显著提高云南红豆杉细胞中10-DAB Ⅲ的量.结论 10-DAB Ⅲ的RP-HPLC方法 可靠简便、重现性好、灵敏度高,具有较高的实用价值,可用于对红豆杉细胞诱导培养研究中的分析,OGA是10-DAB Ⅲ细胞生产的有效诱导子.     

云南红豆杉化学成分研究

从云南红豆杉的树皮中分离得到4个紫杉烷类二萜化合物及1个黄烷醇类化合物。根据理化常数及光谱分析确定为紫杉醇C-7-木糖甙,紫杉醇B,10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ,紫杉素及2R,3R-儿茶精。     

组培条件对云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的影响

目的 :寻找适合于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的培养条件。方法 :对在不同光照条件下和不同培养基上的愈伤组织进行生长分析和紫杉醇含量测定。结果与结论 :黑暗、0.1mg·L^-1BAP和 1.0mg·L^-1 2,4 D的激素组合 ,B5,DCR或 6,7V基本培养基有利于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇 ;培养基中NO₃ -浓度高有利于愈伤组织的生长 ,NH4⁺ 浓度高抑制愈伤组织的生长 ,但显著提高紫杉醇含量。     

基于中药整体性的红豆杉抗乳腺癌活性成分筛选方法研究

目的 基于中药整体性建立2种红豆杉抗乳腺癌活性成分筛选方法：中空纤维细胞捕获结合高效液相色谱法（HFCF-HPLC）、细胞捕获-分散液相微萃取结合高效液相色谱法（CF-DLLME-HPLC）。方法 HFCF-HPLC是在模拟人体内环境状态下，将人乳腺癌MCF-7细胞种植到聚丙烯中空纤维管腔内部，再将该中空纤维放入红豆杉提取液中，筛选和捕获可以与细胞结合的抗乳腺癌活性成分群；CF-DLLME-HPLC是将MCF-7细胞与红豆杉提取液在细胞正常代谢的基础上共孵育，取不同孵育时间上清液进行分散液相微萃取处理，然后进行不同时间段下色谱分析比对，根据色谱峰变化发现潜在抗乳腺癌活性成分群。结果 HFCF-HPLC筛选出的活性成分是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱M、去乙酰紫杉醇、三尖杉宁碱、紫杉醇、云南紫杉烷；CF-DLLME-HPLC筛选出的活性成分是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱M、去乙酰紫杉醇、金松双黄酮。结论 2种方法均可以筛选出有效的抗肿瘤活性成分群，为活性成分的筛选、中药质量的综合评价提供一种方便、普适和高效的新方法。     

紫杉醇前体化合物10-去乙酰baccatin Ⅲ和baccatin Ⅲ在东北红豆杉中的含量

报道了不同生长年限、不同生长形态和不同生长部位的东北红豆杉样品中紫杉醇的前体化合物baccatinⅢ和10-去乙酰baccatinⅢ的含量测定结果。通过相同样品中紫杉醇含量及云南红豆杉中两个化合物含量的比较，对利用价值进行了讨论。     

红豆杉属植物中紫杉烷化合物含量比较与分析

目的 分析和比较5种红豆杉中6种紫杉烷类化合物含量的差异.方法 利用乙醇超声浸提后得到样品溶液;通过高效液相色谱法测定和相关性分析、回归分析和聚类分析比较紫杉醇、巴卡亭Ⅲ、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatinⅢ,10-DAB)、10-去乙酰基紫杉醇(10-deacetyltaxol,10-DA...     

不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长及皂苷含量积累的影响

目的 研究不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累规律的影响.方法 改变培养基中碳源、氮源、磷酸盐、钙盐的浓度,比色法测定愈伤组织中皂苷的含量.结果 金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累的最适培养基成分为蔗糖40 g·L-1,KNO3∶NH4NO3为(1.9:1.65)g·L-1,1 mmol·L-1KH2PO4,4.5 mmol·L-1CaCl2.结论 蔗糖作为碳源最有利于金铁锁愈伤组织生物量的积累和金铁锁皂苷的生物合成.混合氮源有利于金铁锁愈伤组织生长和皂苷含量的积累.     

南方红豆杉愈伤组织培养及其紫杉烷二萜类成分的分析

目的研究南方红豆杉愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长率、生长状态、褐变程度,比较愈伤组织中紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的量。方法采用单因素比较、正交试验设计,研究影响南方红豆杉愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用HPLC法测定不同来源愈伤组织中10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ(10-DAB)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇和东北红豆杉素5种紫杉烷二萜类成分的量;采用加权评分综合考虑以上各因素优选组织培养条件。结果外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以完整叶片及茎段最好;暗培养有利于紫杉醇等5种萜类成分的富集;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。结论南方红豆杉愈伤组织诱导、培养与外植体种类、培养基种类、光照有较大关联,紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的富集受植物生长调节剂种类及浓度影响显著。     

HPLC法测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭的含量

目的测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatin Ⅲ,10-DABⅢ)的含量.方法采用RP-HPLC法.C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-乙腈-水(203050)作为流动相,检测波长为233.9nm.结果 10-DABⅢ在0.004 75～0.038 μg与峰面积线性关系良好(r=0.999 0),平均回收率为100.5%,RSD为2.0%.结论方法操作简便、灵敏度高、专属性强,可用于红豆枝叶中10-DABⅢ的质量控制.     

采收季节与年龄对曼地亚红豆杉主要活性成分的影响

目的:揭示采收季节与年龄对曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇(taxol)和10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetyl baccatin Ⅲ,10-DABⅢ)含量的影响,为曼地亚红豆杉适时采收提供依据。方法:2009年3月26日至2010年1月26日每隔2个月采集经标记的25株三年生植株和25株五年生植株枝叶,采用HPLC测定不同年龄与生长季节曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇和10-DABⅢ的含量。结果:不同采收年龄的曼地亚红豆杉紫杉醇和10-DABⅢ含量存在显著差异,五年生植株显著高于三年生植株;不同采收季节的曼地亚红豆杉紫杉醇和10-DABⅢ含量也存在显著差异,全年中5月份的含量最高,紫杉醇最高含量为0.56mg.g-1,10-DABⅢ最高含量为0.32mg.g-1。结论:曼地亚红豆杉枝叶在5月份采收最佳,而采收年龄尚需根据主要活性成分及生物量积累规律作进一步研究。     

南方红豆杉愈伤组织培养条件的优化及紫杉醇积累的基因表达效应分析

目的 优化南方红豆杉愈伤组织诱导与继代培养条件,获得含紫杉醇量高的红豆杉愈伤组织,明确紫杉醇合成相关基因的表达模式与紫杉醇量的关系.方法 探讨了适合南方红豆杉的愈伤组织诱导及继代培养的激索组成及浓度.比较了南方红豆杉(种胚、幼茎、幼芽)、曼地亚红豆杉(种胚)和太平洋红豆杉(种胚)不同外植体来源的愈伤组织的生长特点和紫杉醇的量,分析了不同愈伤组织紫杉醇合成相关基因的表达差异.结果 添加3.0 mg/L 2,4-D的Murashige & Skoog(MS)培养基有利于南方红豆杉的诱导,诱导率高于92%.添加2.0 mg/L 2,4-D与1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)的继代培养基有利于南方红豆杉的紫杉醇积累.同一培养条件下,南方红豆杉种胚来源的愈伤组织紫杉醇量最高,达到干质量的0.027%.含紫杉醇量高的愈伤组织,其紫杉醇合成途径中的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPPS)、紫杉二烯合成酶(TASY)、紫杉烷-10β-羟化酶(T10βH)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-β-O-乙酰转移酶(DBAT)、苯丙氨酸氨基变位酶基因(PAM)、去苯甲酰紫杉-N-苯甲酰转移酶(DBTNBT)等酶基因的表达水平高.结论 从南方红豆杉的种胚为外植体源获得了含紫杉醇量高的愈伤组织,提高GGPPS、TASY、T10βH、DBAT、PAM、DBTNBT的表达水平将促进紫杉醇的合成.     

响应面法优选红豆杉枝叶中有效成分的提取工艺

目的采用响应面法优选红豆杉枝叶中4种紫杉烷类有效成分的提取工艺。方法选择乙醇体积分数、提取时间以及溶剂倍量为考察因素,以紫杉醇、7-表-紫杉醇、7-表-10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的量为评价指标,计算总评"归一值",并进行二项式拟合,用效应面法优选提取工艺,对结果进行预测分析。结果确定最优提取工艺为乙醇体积分数71.32%,18.6倍量回流提取2次、每次提取0.82 h。结论采用响应面法得到的提取红豆杉枝叶中有效成分的工艺条件可靠,简单易行,对红豆杉枝叶中有效成分的提取具有一定的参考意义。     

矮紫杉中紫杉烷类成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究矮紫杉Taxus cuspidata cv. Nana中紫杉烷类化合物成分及其抗肿瘤活性,以期发现红豆杉资源的替代品种。方法采用高通量测序技术进行转录组测序,并采用分子对接的方式初步预测矮紫杉具有产生紫杉烷类化合物的能力。采用硅胶、SephadexLH-20和HPLC等色谱方法进行分离纯化,并根据理化性质及波谱学数据鉴定结构。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Westernblotting等方式,以肺癌NCI-H1299细胞、乳腺癌耐药株MCF-7/ADR、胃癌AGS细胞以及肝癌HepG2细胞为模型,对所分离鉴定的部分化合物进行体外抗肿瘤活性评价。结果从分子层面上验证矮紫杉具有代谢产生紫杉烷类化合物的能力,在此基础上从矮紫杉中分离得到6个紫杉烷类化合物,分别鉴定为紫杉醇(taxol,1)、三尖杉宁碱(cephalomannine,2)、巴卡亭Ⅲ(baccatin Ⅲ,3)、2-去乙酰氧基紫杉宁J(2-deacetoxytaxinine J,4)、2-去乙酰氧基-13-去乙酰去桂皮酰-紫杉宁J(2-deacetyloxy-13-deacetyldecinnamyltaxinine J,5)、2-去乙酰氧-5α-羟基紫杉宁J(2-deacetoxy-5α-hydroxytaxinine J,6)。化合物1～3对目标细胞株均具有良好的抗肿瘤活性。结论栽培品种矮紫杉具有代谢产生紫杉烷类化合物的能力,可以在一定程度上作为红豆杉替代资源使用。     

HPLC法测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭的含量

目的　测定东北红豆杉枝叶中 10 -脱乙酰巴卡亭 (10 - deacetylbaccatin ,10 - DAB )的含量。方法　采用 RP- HPL C法。 C1 8色谱柱 (2 5 0 mm× 4 .6 mm ,5μm) ,甲醇 -乙腈 -水 (2 0∶ 30∶ 5 0 )作为流动相 ,检测波长为 2 33.9nm。结果　 10 - DAB 在 0 .0 0 4 75～ 0 .0 38μg与峰面积线性关系良好 (r=0 .9990 ) ,平均回收率为 10 0 .5 % ,RSD为 2 .0 %。结论　方法操作简便、灵敏度高、专属性强 ,可用于红豆枝叶中 10 - DAB 的质量控制。     

HPLC、UPLC测定南方红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的:对高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱法(UPLC)测定的南方红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)含量进行比较。方法:分别建立HPLC和UPLC测定南方红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的方法。HPLC法为Inertsil ODS-SP(4.6×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇:水(53∶47)为流动相,流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长227 nm,柱温30℃;UPLC法为ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1×100 mm,1.7μm)色谱柱,以甲醇∶水(53∶47)为流动相,流速分别为0.3 mL·min~(-1),检测波长227 nm,柱温15℃。结果:超高效液相色谱仅6.8 min即可完成测试,测定时间远低于高效液相色谱法,2种方法所得结果一致结论:UPLC法较HPLC法具有速度更快、灵敏度更高,且节省溶剂的优势。UPLC法可以成功代替HPLC法,应用于南方红豆杉药材的质量控制。     

从欧洲红豆杉茎皮中分离出2种新的类紫杉醇化合物

欧洲红豆杉 Taxus baccata 因含紫杉碱成为一种毒性很强的植物。1968年,Lythgoe曾报道分离了此类生物碱中的紫杉碱 A 、B和 C,10年后 Graf 等鉴定了紫杉碱 A、B 的结构。作者也曾报道从欧洲红豆杉茎皮中分离出新的类紫杉醇化合物,即与紫杉醇、三尖杉宁碱、巴可亭-Ⅲ共存的13-去乙酰-10-去苯甲酰 taxchinin C。随后,又进一步分离出另外5种类紫杉醇化合物,其中2个为新化