改良血小板添加液低温液态保存血小板的形态及功能研究

本研究探讨使用改良的血小板添加液替代70％自体血浆在低温（10℃）液态条件下对血小板的保存效果。采集6名供者单采血小板,每一名供者单采血小板平均分为3组,A组（常规保存组）加入100％血浆、22℃保存：B组（添加液10℃保存组）加入70％PAS—ⅢM／30％血浆、10℃保存;C组（冰冻保存组）加入100％血浆和海藻糖、-85℃保存;另设D组（血浆4℃保存组）加入100％血浆、4℃保存,作为扫描电子显微镜对照组。A、B组在第1、5、7、9天取样,C组在20天后复苏取样,分别检测CD62p、HSR、PAgT、LDH的变化。血浆常温组、添加液低温组于保存后第3、9天取样扫描电镜观察,血浆低温组于保存后第3天取样观察．冰冻组在20天后复苏取样观察,同时使用新鲜血小板作为对照。结果表明,保存期内随保存时间延长,A组和B组CD62p表达增加,HSR和最大聚集率降低;A组的LDH释放、CD62p表达、HSR、血小板最大聚集率与B组比较有显著统计学差异（P〈0．05）。C组LDH释放明显较其他两组增多,但CD62p表达较少（P〈0．05）。A、B组血小板形态保持较好,C组血小板形态保持差。结论：改良的PAS—ⅢM保存液能够替代血浆用于血小板的保存,在低温条件下能够很好地保护血小板的功能,保存效果优于血浆常温保存。     

血小板添加液保存单采血小板的研究

目的研发一种新型血小板添加液(H-sol),并评价其对血小板的保存效果。方法新型血小板添加液(H-sol)的组成成分:氯化钠80.0mmol/L、醋酸钠25.0mmol/L、氯化钾5.0mmol/L、氯化镁2.0mmol/L、枸橼酸钠15.0mmol/L、葡萄糖15.0mmol/L、碳酸氢钠13.0mmol/L、磷酸二氢钠4.0mmol/L、L-精氨酸180.0μmol/L。将超浓缩单采血小板(PLT≥10×109/ml)悬浮在H-sol和100%血浆(对照组)介质中,置22℃±2℃振荡条件下保存,分别于1、5、7d取样检测血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、pH、葡萄糖、乳酸、血小板低渗休克反应(HSR)、血小板形变能力(ESC)、CD62P表达率。结果血小板保存至7d时,H-sol组(含<10%的血浆)与对照组比较,PLT、MPV、PDW、CD62P表达率、HSR、ESC的差异无统计学意义(P>0.05),其pH高于对照组(P<0.01),1～7d葡萄糖平均消耗量和乳酸平均产生量明显低于对照组(P<0.01)。结论单采血小板在H-sol中的保存效果与100%血浆相同,血小板在H-sol中保存能更好地维持pH的稳定。     

冰冻保存血小板的研究

目前国内外通用的血小板保存方法及供应数量、供给及时性远不能满足临床输用血小板需求量的增加 ,常规保存方法 (2 2℃ ,5d)极大地限制了血小板的临床应用。 2 0多年来 ,人们一直在探索长期、稳定保存血小板的方法[1] 。冰冻保存可能是维持生物细胞、组织活性的最理想的方法之一 ,也是许多研究人员目前致力研究的重要方向[2 ] 。然而血小板以其寿命短、易激活、不稳定等特殊生物学特性 ,使这一方法的具体实施困难重重。至今冰冻保存血小板领域仍有许多问题未得到共识 ,关于它的应用和操作等仍在探讨与优化之中。本文仅就这一方面的研究进展…     

冷冻干燥保存血小板的实验研究

本研究探讨冷冻干燥保存血小板的方法,以获得可长期冻干保存的血小板制品,使之能在常温条件下保存、占用空间小、重量轻、便于长距离运输,能够满足突发事件和战伤救治的需要。在冷冻干燥保存过程中添加血小板可逆性激活抑制剂、DMSO和海藻糖等低温保护剂,进行预处理、冷冻、一级干燥、二级干燥,再水化,并同时测定血小板回收率,凝血酶聚集反应,促凝血功能,CD62p表达率和PAC-1表达率等。结果表明:血小板回收率为56.29%,其对凝血酶的聚集反应与对照组无明显差异,对ADP和丙基没食子酸诱导的聚集反应较对照组分别降低49.34%和26.25%,促凝血功能与对照组比较也无统计学差异;冻干血小板CD62p表达率为42.36%,PAC-1表达率为2.12%,凝血酶激活后CD62p再表达率为50.88%,PAC-1再表达率为54.55%。结论:添加血小板可逆性激活抑制剂,海藻糖和DMSO后的冻干血小板,其聚集活性和促凝血功能与新鲜血小板无明显差异,血小板可逆性激活抑制剂降低了冻干血小板的CD62p表达,增强了冻干血小板的生存能力,因而延长了其生存时间,因此可以该冻干方法为基础进一步提高冻干保存血小板的效率。     

-80℃长期保存血小板的可行性研究

目的探索-80℃条件长期保存血小板的关键技术。方法将12人份加终浓度为5%二甲基亚砜(DMSO)的富含血小板血浆,分为若干等份后置于实验专用-80℃低温冰箱中保存1—16个月,1—6个月每月每人份各取1份样本、8—16个月每2个月每人份各取1份样本37℃水浴复温后检测:血小板计数(P lt)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、pH、血小板CD62p表达、凝血酶激活CD62p表达、凝血酶激活CD62p再表达、磷脂酰丝氨酸(PS)表达和激活血小板诱导血浆凝固时间。结果在16个月的保存过程中P l、tMPV、PDW、pH、血小板CD62p表达、凝血酶激活CD62p表达、凝血酶激活CD62p再表达、PS表达和激活血小板诱导血浆凝固时间等,变化均无统计学意义(P>0.05)。结论血小板加终浓度为5%DMSO,在-80℃条件下长期保存质量较好且较稳定,此技术条件可用于长期储备血小板资源。     

以海藻糖为添加剂冷藏保存血小板悬液的研究

本研究探讨以海藻糖(trehalose)为添加剂的血小板悬液冷藏保存方法。采用核素标记法检测血小板生存时间,用比浊法测定血小板聚集率,诱导剂为终浓度11.2μmol/L的ADP。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PCs),在悬液中加入50mg/ml的海藻糖,37℃水浴4小时后,放于4-8℃冰箱保存,冷藏12天后,测定血小板聚集功能和输入自身体内后的生存时间。结果表明:常温和冷藏储存24小时后的PC血小板聚集率分别为(75.3±9.8)%和(80.5±12.5)%;输入兔体内24、48和72小时时的血小板存活率分别为(78.1±7.9)%、(65.4±6.7)%、(57.5±7.2)%和(5.1±2.5)%、(2.8±2.0)%、(0.9±0.8)%。加入海藻糖的PC冷藏保存12天后,血小板聚集率为(77.8±9.5)%;输入体内24、48和72小时时的血小板存活率分别为(75.7±11.0)%、(67.0±8.5)%、(56.8±8.0)%,与常温保存24小时对照相比,两者相近,P值均>0.05。结论:海藻糖能保护冷藏储存的兔血小板,延长冷藏血小板在体内的生存时间,经海藻糖冷藏储存的兔血小板功能完好。     

冷冻干燥血小板保存技术研究

为了探索新的血小板保存方法,对血小板进行了冷冻干燥的研究.采用乙醛对血小板做预处理,在冷冻干燥过程中为了稳定血小板的结构,加入了人白蛋白或海藻糖作为保护剂,并对再水化液进行了筛选.对冷冻干燥后的血小板进行了形态学观察和表面膜糖蛋白表达的检测.结果表明,乙醛处理后血小板的回收率基本稳定在60%以上,血小板的聚集活性与处理前相比有轻微的降低;5%人血白蛋白冷冻干燥保护液的保存效果明显优于40mmol/L海藻糖冷冻干燥保护液,在血小板聚集活性保持方面,用贫血小板血浆（PPP）再水化结果明显优于磷酸缓冲盐溶液（PBS）.透射电子显微观察显示,冷冻干燥后血小板胞内细胞器和颗粒物质清晰可见,其中包括线粒体和各种分泌颗粒.乙醛处理后血小板膜糖蛋白的表达与新鲜血小板相比明显降低.结论：乙醛作为一种新的保护剂,对血小板冷冻干燥有良好的效果,值得进一步研究.     

冷冻干燥保存兔血小板的实验研究

目的研究冷冻干燥长期冻干保存的血小板制品的方法。方法将24只大白兔随机分为3个实验组:在所抽取的兔血小板中添加血小板可逆性激活抑制剂、DMSO和海藻糖等低温保护剂,经过预处理、冷冻、一级干燥、二级干燥等过程冷冻干燥兔血小板,分别室温保存1 d(实验1组)、7 d(实验2组)和15 d(实验3组)后经再水化;分别与各自冷冻干燥前的新鲜血小板为对照。并检测血小板回收率和聚集反应功能,并用851Cr示踪法评价血小板体内生存活性。结果3个实验组血小板冷冻干燥后回收率分别为71.68%,68.76%和70.64%,组间无明显差异。实验1、2、3组对凝血酶的最大聚集率(73.20%,77.53%和71.31%)与对照组(86.20%)差异无明显统计学意义(P>0.05),对ADP和没食子酸诱导的聚集反应率(35.6%和58.0%、36.61%和62.56%,32.65%和60.12%)比对照组低(72.4%和91.0%);冻干后保存兔血小板的1、24和48 h体内生存率分别为70%—79%、52%—56%和32%—40%,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论添加血小板可逆性激活抑制剂、海藻糖和DMSO后冷冻干燥获得的冻干兔血小板,具有较好的聚集活性和体内存活率,保存活性较为稳定。     

海藻糖对4℃体外保存血小板的影响

目的 探讨在M-Sol中添加海藻糖对体外4℃保存血小板的影响.方法 随机选取7袋ABO同型浓缩血小板汇集后,根据保存温度、保存介质和海藻糖浓度的不同均分成7组,分别为22℃+PRP组、PRP组、M-Sol+PRP组、M-Sol+PRP+1 g/L 海藻糖组、M-Sol+PRP+5 g/L 海藻糖组、M-Sol+PRP+...     

-80℃保存机采浓缩血小板的实验研究

血小板在成分输血中的地位已越来越重要 ,输注比例正逐年显著提高 ,血小板的体外保存也因此成为国内外输血医学的研究热点 [1 ,2 ]。笔者用两年多的时间对 -80℃保存机采浓缩血小板 (以下简称冰冻血小板 )进行了较深入的实验研究 ,比较了不同保存时期冰冻血小板的功能及回收率 ,现将实验结果报告如下。材料与方法1　主要仪器设备　 CS-3 0 0 0 Plus血细胞分离机 ;TYXN-91 A智能血液凝集仪 ;F-82 0血细胞计数仪 ;局部 1 0 0级净化间 ;-80℃深低温冰箱。2　冰冻血小板的制备、保存与解冻　选择符合国家规定体检标准的献血者 ,依照 CS-3 0…     

冻干保存血小板可逆性抑制激活的实验研究

目的探索最优的血小板激活抑制剂组成方案,以建立一套完善的血小板冻干前处理程序。方法选择已基本确定有效作用浓度的6种血小板激活抑制剂如前列腺素E1、腺苷、左旋精氨酸、植酸钠、百维利肽和西洛他唑,结合血小板冷冻干燥保护剂的负载过程,以CD62p、PAC-1、MPV和P lt作为血小板活化指标,CD62p和PAC-1的再表达率作为血小板反应性指标,诱导剂诱导的血小板最大聚集率和SPAT作为血小板聚集和促凝血功能的指标;采用正交实验设计,分8个实验组,研究分析各因素在负载中对血小板状态和功能的影响,选择最优的负载液组成。结果A因素(负载环境)水平Ⅰ在抑制血小板MPV增大、D62p和PAC-1的表达以及再表达率保留、血小板最大聚集率和SPAT影响均优于水平Ⅱ(P均<0.05);B因素(PGE1)C因素(左旋精氨酸)F因素(植酸钠)G因素(百维利肽)的水平Ⅱ则均由于各自的水平Ⅰ。因此,在8个实验条件中,以第3实验组(A1B2C2D1E1F2G2)对血小板功能保护的最好。结论在血小板冻干前保护剂负载过程程序,在血浆负载环境中添加1μmol/L前列腺素E1,5 mmol/L左旋精氨酸,0.5 mmol/L植酸钠和0.5μmol/L百维利肽,可有效抑制血小板激活,使保存的血小板具有表达CD62p和PAC-1活性、聚集反应和促凝血活性。     

血小板添加液保存血小板的体外功能的研究

血小板添加液（PAS）是用合成的晶体液部分代替血小板制品中的血浆来保存血小板。目前,临床广泛应用的浓缩血小板都是悬浮在200-250mL自体血浆中来贮存的。与保存在血浆中的血小板相比,用血小板添加液保存血小板具有诸多优点。由于血小板添加液中血浆比例减少,使过敏反应和输血反应减少,避免大量血浆输入带来的不良反应和循环超负荷。     

血小板添加液保存血小板的体外功能的研究

血小板添加液(PAS)是用合成的晶体液部分代替血小板制品中的血浆来保存血小板.目前,临床广泛应用的浓缩血小板都是悬浮在200～250 mL自体血浆中来贮存的.与保存在血浆中的血小板相比,用血小板添加液保存血小板具有诸多优点.由于血小板添加液中血浆比例减少,使过敏反应和输血反应减少,避免大量血浆输入带来的不良反应和循环超负荷.     

冰冻保存血小板的制备与临床应用现状

血小板在成分输血中越来越显得重要,主要是血小板在止血和凝血过程中起到及其重要的作用。机采新鲜血小板于(22±2)℃条件下保存,容易发生细菌污染而引起输血反应,5 d保存期短很容易过期。不能满足临床输血紧急需求,供应矛盾突显。冰冻保存是延长血小板效期的最佳选择。冰冻保护剂有聚乙烯砒咯烷酮(PVP)、聚乙烯二醇(PEG)、乙烯乙二醇(EG),也有甘油、羟乙基淀粉等。目前常用的大多使用5%～     

血小板4℃冷藏保存方法的实验研究

目的探讨以尿嘧啶二磷酸半乳糖为添加剂的血小板冷藏保存方法。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PCs),在悬液中添加5g/L的尿嘧啶二磷酸半乳糖(UDP-Gal),于37℃孵育2h后,放4℃冰箱储存10d。而后观察血小板(PLT)数量、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板聚集功能(PagF)、血小板促凝活性(APCT)和血小板膜AnnexinV结合率的变化;将添加UDP-Gal冷藏保存的兔血小板输入兔血小板减少症模型体内,检测输注后1h和24h兔耳出血时间和血小板回收率(PPR)。结果添加UDP-Gal冷藏保存10d的PCs中PLT数量、MPV、PDW、APCT与新鲜PCs相比,差异均无显著性(P>0.05);其血小板凋亡率与新鲜PCs相比有所增高,但显著低于冷藏对照组(P<0.01),血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上;而冷藏对照PCs的PLT数量显著减少,MPV、PDW显著增大,且血小板促凝血活性减低,血小板PagF丧失。UDP-Gal冷藏保存的兔血小板可明显缩短兔耳出血时间(P<0.01),而冷藏对照PCs输注前后兔耳出血时间的变化无显著性(P>0.05);新鲜血小板组、UDP-Gal+冷藏血小板组、冷藏血小板对照组输入兔血小板减少症模型体内1h和24h的PPR分别是66.1%±0.5%、47.8%±0.6%,60.9%±0.3%、41.6%±0.4%、47.7%±0.5%、9.4%±0.5%,UDP-Gal+冷藏兔血小板组与新鲜兔血小板相比,其PPR的差异无显著性(P>0.05),UDP-Gal+冷藏兔血小板组和新鲜兔血小板组的PPR均显著高于冷藏血小板组(P<0.01)。结论添加尿嘧啶二磷酸半乳糖的兔血小板冷藏保存后的体内外功能良好。     

海藻糖在血小板保存中的应用

血小板制品因其常规保存时间短,不仅难以满足临床紧急输注需求,而且常大量过期报废。开发简便实用而安全高效的血小板保存技术,是当前输血医学的研究热点。海藻糖因其无毒副作用,负载技术简便易行,已经显露出在血小板冷藏保存、超低温冷冻保存以及冻于保存中的应用前景。本文就海藻糖的保护机制及其用于保存血小板的实验研究进展作一综述。     

血小板添加液维持血小板12天保存有很好体外质量

背景如果血小板的体内外变量允许更长的保存，并做细菌筛查，浓缩血小板(PCs)的保存可以延长到超过5天。本研究的目的是检测PCs在不同的保存溶液中的保存特性，如仅血浆，或血浆混合PAS-Ⅱ，PAS-Ⅲ，PAS-ⅢM，及Composol。研究设计及方法5份白膜制备的过滤去白细胞的PCs保存在1．3L丁酰-3-己基-枸橼酸塑料PVC血袋中。首先，比较含     

血小板保存的研究进展

血小板体外保存的质量,是血液服务机构亟待解决的问题之一.目前供应临床的主要是常温[(22±2)℃]连续振荡液态保存的血小板,然而这种血小板保存时间<5 d,并且22℃常温振荡储存易使血小板受细菌污染,输入人体后可能会造成机体败血症的发生~([1]).     

M-sol血小板保存液中添加花生四烯乙醇胺对体外保存血小板的影响

本研究探讨在M-sol（mixture of solutions）血小板保存液中添加花生四烯乙醇胺（N-arachidonoylethanolamine,ANA）对体外保存血小板的影响.利用Amicus血细胞分离机采集无偿献血志愿者的血小板,血小板保养液为M-sol,实验组加入终浓度为0.1-50 μmol/L的ANA,未加入ANA的另一组作为对照,置于22 ±2℃振荡仪中保存.于第7d取样,用MTT比色法分析血小板的存活率.选定最佳浓度的ANA加入血小板保存液中,分别于第1、5、7、9和11d取样,检测血小板计数（BPC）、平均血小板体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、血小板磷脂酰丝氨酸（PS）膜外表达以及可溶性P-选择素（sP-selectin）含量.结果发现,加入终浓度为0.5μmol/L ANA的血小板存活率（91.23 ±5.44％）最高,与对照组（62.54±4.79％）相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;保存第1、5、7、9和11d实验组与对照组BPC均有下降趋势,但两组相比差较异均无统计学意义（P均＞0.05）;保存期间血小板MPV和PDW有增加趋势,实验组与对照组相比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）.保存到第9和11d血小板膜外PS的表达,在实验组PS表达阳性率显著低于对照组（7.69±1.82％ vs 11.21±2.03％;10.74±1.78％ vs15.37±1.95％）,两组相比较差异具有统计学意义（P均＜0.05）;保存期间可溶性P-选择素含量在两组中均有增加趋势,实验组可溶性P-选择素含量显著低于对照组（30.19±2.03 ng/mL vs 39.18±2.66 ng/mL; 34.52±2.64ng/mL vs 43.23 ±2.58 ng/mL）,两组相比差较异具有统计学意义（P均＜0.05）.结论：将低浓度ANA加入血小板M-sol保存液中,在一定程度上可以减轻血小板贮存损伤.     

不同比例血浆对GMA添加液4℃保存血小板体外质量的影响

目的分析低温液态条件下血浆对保存于葡萄糖甘露醇腺嘌呤（GMA）血细胞添加液中血小板体外质量的影响。方法取白膜法制备的浓缩血小板（PCs）7单位。每单位等分成3份,分离部分血浆后,按比例加入GMA血细胞添加液,制成10％血浆-PCs、35％血浆-PCs和100％血浆-PCs,置4℃冷藏5d。检测0d和5d的血小板计数、pH、平均血小板体积（MPV）、血小板低渗休克反应（HSR）、血小板形变能力（ESC）、P-选择素（P—selectin）、磷脂酰丝氨酸（PS）、血小板表面糖蛋白GPIbα以及乳酸和RANTES（Regulated On Activation,Normal,T—cell Expressed,and Secreted）的生成。结果4℃冷藏5d后,35％血浆-PCs与100％血浆-PCs比较,血小板计数、pH、MPV、HSR、P—selectin、GPIbα和PS以及乳酸和RANTES的差异无显著性（P〉0．05）;而10％血浆-PCs与35％血浆-PCs和100％血浆-PCs比较,P—selectin和PS表达的增加,差异有显著性（P〈0．05）,而HSR下降,但差异无显著性（P=0．09）;10％血浆-PCs与100％血浆-PCs比较,血小板计数下降,乳酸的生成增加,差异有显著性（P〈0．05）。结论用GMA保存液4℃保存血小板时,35％ACD血浆可维持冷藏血小板的膜的完整性、正常代谢和功能。