乙酰半胱氨酸对小鼠肺成纤维细胞系3T3增殖及胶原合成的影响

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠肺成纤维细胞3T3增殖、凋亡和胶原合成的影响.方法 培养小鼠肺成纤维细胞3T3,不同浓度NAC处理后,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,RT-PCR检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化.结果 ①5、10、20、40 mmol/L NAC对3T3细胞生长均有明显抑制作用,且呈剂量依赖性;②5、10、20、40 mmol/L NAC作用24 h后,细胞凋亡率分别为(27.64±17.22)%、(33.73±14.82)%、(42.30±9.81)%和(69.27±11.50)%,均高于对照组(3.48±1.13)%(P<0.05或P<0.01);③5、10、20、40 mmol/L NAC能够引起G0/G1期细胞比例明显升高,S期比例明显降低(P值均<0.01);④5、10、20、40mmol/L NAC处理组3T3细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达均低于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 NAC可直接抑制小鼠肺成纤维细胞增殖,诱导其发生凋亡,并降低其胶原合成.     

毫米波辐照对心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察毫米波辐照对心肌成纤维细胞增殖及胶原合成功能的影响。方法取原代培养的心肌成纤维细胞,随机分为A、B、C、D组。A组为对照组。B、C、D组分别给予波长8.4 mm（频率35.75 GHz）、功率10 mW/cm^2的毫米波辐照15、30、60 min,1次/d,共5 d。辐照2、5 d用MTT法检测各组细胞增殖活性,辐照1、2、3、4、5 d分别用羟脯氨酸碱水解法和放射免疫分析法分别检测各组细胞培养液上清中的羟脯氨酸（HYP）和Ⅲ型前胶原N端肽（PⅢNP）。结果与A组相比B、C、D组CFbs增殖活性升高,细胞培养液上清中HYP和PⅢNP水平升高（P均〈0.05）,且升高程度均随毫米波每次照射时间及照射天数增加而增加（P均〈0.05）。结论毫米波辐照可以促进成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成。用毫米波辐照治疗心血管疾病时,每次辐照时间及疗程较长有导致心肌纤维化的可能性。     

槲皮素对人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨槲皮素对人成纤维细胞(HSF)生长及胶原分泌能力的影响。方法原代培养HSF,并以不同浓度的槲皮素干预24 h,以MTT法检测细胞增殖能力,以流式细胞术测定其细胞周期,对培养上清用碱水解法测定其中羟脯氨酸(Hyp)含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定Ⅰ型胶原(ColⅠ)及透明质酸(HA)含量。结果槲皮素作用HSF 24 h后,与对照组比较,槲皮素各剂量组细胞处于增殖期的细胞数目、增殖能力逐渐增加(P<0.05),并呈现一定的剂量效应关系;不同浓度槲皮素作用于HSF 24 h后,培养上清中Hyp、ColⅠ及HA含量均明显高于对照组(P<0.05),并具有剂量-效应关系。结论槲皮素可促进HSF增殖、刺激其分泌胶原及HA,对维持皮肤弹性、减少皮肤皱纹形成、延缓衰老有重要意义。     

辛伐他汀对大鼠血管外膜成纤维细胞增殖迁移和胶原合成的影响

为观察辛伐他汀对血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的影响 ,用组织贴块法培养SD大鼠的血管外膜成纤维细胞 ,以四氮唑蓝比色法测定细胞增殖 ,以Sarkar方法测定血管外膜成纤维细胞迁移距离 ,以3 H 脯氨酸掺入法测定胶原合成。结果发现 ,随着辛伐他汀浓度增高血管外膜成纤维细胞的A4 90值呈递减趋势 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4mol/L组的A4 90值分别为 0 .2 91± 0 .0 11、0 .2 6 5± 0 .0 0 6、0 .2 34± 0 .0 0 8和 0 .2 14± 0 .0 0 6 ,与对照组(0 .335± 0 .0 18)差异显著 (P均 <0 .0 1) ;随着辛伐他汀浓度增高血管外膜成纤维细胞的迁移距离呈递减趋势 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4mol/L组的迁移距离分别为 6 .5± 1.1mm、5 .3± 1.2mm、4 .1± 1.0mm和 2 .9± 0 .9mm ,与对照组 (8.1± 1.8mm)差异显著 (P均 <0 .0 1)。随着辛伐他汀浓度的增高的3 H 脯氨酸掺入率呈递减趋势。 10 -7、10 -6 、10 -5及 10 -4mol/L组血管外膜成纤维细胞的3 H 脯氨酸掺入率分别为 (cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 385± 5 1、2 72± 4 8、16 1± 38和 14 1± 36 ,与对照组 (6 5 5± 5 8)差异显著 (P均 <0 .0 1)。此结果提示 ,辛伐他汀可以剂量依赖地抑制血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成 ,这可能对改善血管重塑有一     

辛伐他汀对自发性高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨辛伐他汀(simvastatin)对培养的自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)和正常血压Wistar大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原合成的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,流式细胞分析仪(FCM)技术检测细胞周期,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成.结果(1)10-9mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L辛伐他汀作用后MTT比色法OD值SHR组分别为0.38±0.01、0.34±0.01、0.26±0.01和0.24±0.01,与对照组(0.41±0.01)比较差异非常显著(P＜0.05);Wistar大鼠组分别为0.35±0.01、0.31±0.01、0.26±0.01和0.23±0.01,与对照组(0.37±0.01)相比差异非常显著(P均＜0.05).(2)10-6mol/L辛伐他汀作用48h,SHR和Wistar大鼠CFs的G0G1期细胞百分率均较对照组显著提高(P均＜0.01),S期细胞百分率、G2/M期细胞百分率和增殖指数(proliferation index,PI)则较对照组显著降低(P均＜0.01).(3)随着辛伐他汀浓度的增高,CFs的Ⅰ型胶原分泌呈明显的递减趋势.10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L辛伐他汀作用后Ⅰ型胶原,SHR分别为O.80±0.01、0.74±0.01、0.68±0.01、0.68±0.01和0.62±0.02,均显著低于对照组0.97±0.02(P均＜0.01);Wistar大鼠分别为0.73±0.01、0.65±0.01、0.60±0.02和0.56±0.02,与对照组(0.81±0.01)相比差异非常显著(P均＜0.01).SHR组与Wistar大鼠相比较,CFs受抑制的效应更强.结论辛伐他汀呈浓度依赖性抑制SHR的CFs增殖和胶原合成,这对逆转高血压心室重塑有一定的价值.     

IL-1β对大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨IL- 1β对心肌间质增殖的调控作用,为高血压左室肥厚的防治提供治疗依据。方法:在无菌条件下取生后1～3d的SD大鼠心脏,用胰酶分散细胞,采用差速贴壁法分离出心脏成纤维细胞(CFs) ,进行培养,实验采用3～4代细胞。实验分组:1IL- 1β对CFs胶原合成的影响,分为对照组和10     

C 型钠尿肽对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：观察C型钠尿肽（CNP）对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响,探讨其抑制心肌细胞外基质（ECM）重构的作用机制。方法原代培养新生大鼠CFs,应用MTS法分析细胞增殖,以Western blot法检测CFs中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的蛋白表达。结果10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/LCNP能显著抑制CFs的增殖（P＜0．05）,同时抑制CFs中Ⅰ型胶原（P＜0．05）、Ⅲ型胶原（P＜0．05）的蛋白表达,并具有浓度依赖性。结论CNP能有效抑制CFs的增殖及胶原合成,这可能是其抑制心肌ECM重构的重要机制。     

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL-Ⅰ细胞胶原合成的影响及机制

目的进一步探讨青蒿琥酯对肺纤维化的治疗作用及机制。方法取对数生长期的人胚肺成纤维细胞（HELF）系HFL-Ⅰ细胞,随机分为观察1～3组及对照组,观察1～3组分别加入质量浓度为1、10、100 mg/L的青蒿琥酯,对照组加入等体积培养液继续培养。用天狼猩红染色法检测胶原蛋白的分泌水平,RT-PCR法测定Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达。结果观察1～3组胶原表达量、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原蛋白mRNA表达均显著低于对照组,且各观察组间两两比较有显著差异（P均〈0.05）。结论青蒿琥酯具有抗纤维化的作用,可在一定程度上降低胶原分泌,其机制可能为下调Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA表达。     

雌激素抑制血管平滑肌细胞增殖和胶原合成的实验研究

目的　探讨雌激素对于胎儿血管平滑肌细胞 (HVSMC)增殖和胶原合成的影响。方法　分别以不同浓度 (0 .1nmol/ L～ 10 0 nm ol/ L)的雌二醇作用于体外培养的 HVSMC,利用 3H-脯氨酸掺入法测定培养平滑肌细胞胶原合成及 3H- Td R掺入法测定细胞增殖率。结果　 1.0 nm ol/ L～ 10 0 nmol/ L 雌激素以剂量依赖性方式抑制 10 %胎牛血清诱导 HVSMC增殖和胶原合成。结论　小剂量雌二醇具有抗动脉粥样硬化作用 ,而超生理剂量雌二醇可能诱发血管损伤     

高盐对乳鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原分泌的影响及相关机制

目的观察高盐对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及胶原分泌的影响,并分析其可能的相关机制。方法胰酶、Ⅱ型胶原酶两步消化法消化分离乳鼠心肌组织,通过差速贴壁法收集、培养乳鼠CFs。CFs传至第4代去血清同步化24 h,分为对照组(培养基Na+终浓度139 mmol/L)、高盐组(培养基Na^+终浓度146、149、152、155、158、161、164、167、170、173和176 mmol/L),培养24、48、72和96 h后,CCK-8检测CFs增殖情况。选择增殖作用最为明显的Na+浓度和作用时间,以Na^+139 mmol/L为对照进行后续实验,高盐组(培养基Na^+终浓度161 mmol/L),甘露醇组(甘露醇浓度为29.334 mg/ml),其中甘露醇组与高盐组渗透压相同。CCK-8检测渗透压对CFs增殖的影响。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CFs培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。Western印迹检测CFs中转化生长因子(TGF)-β1、p-smad3及smad7蛋白的表达情况。结果CCK-8结果显示,Na+146~176 mmol/L作用48、72 h可促进乳鼠CFs增殖(Na+161 mmol/L作用48 h最明显);检测渗透压对CFs增殖显示,高盐组(Na+161 mmol/L)细胞发生增殖明显,而甘露醇组细胞较对照组(Na+139 mmol/L)并无增殖差异;ELISA结果显示,高盐组中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达均增加(P<0.05),甘露醇组胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达较对照组比无差异(P>0.05)。Western印迹结果显示,高盐组TGF-β1和p-smad3蛋白表达较对照组和甘露醇组明显增多(P<0.05),smad7蛋白表达明显减少(P<0.05);甘露醇组TGF-β1、p-smad3、smad7蛋白表达与对照组比较无差异(P>0.05)。结论高盐可诱导乳鼠CFs发生增殖,且能够促使Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原分泌增加,且与渗透压改变无关,其机制可能与TGF-β1/smads表达异常相关。     

Urocortin对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成作用的影响

目的 :探讨 urocortin对大鼠心肌成纤维细胞 （CFs）增殖和胶原合成作用的影响。方法 :消化法培养新生Sprague-Dawley （SD）大鼠的 CFs,采用四氮唑盐 （MTT）比色法测定细胞数目 ,流式细胞分析仪 （FCM）检测细胞周期 ,EL ISA法检测 型胶原合成 ,分别观察不同浓度 urocortin对 CFs增殖和胶原合成的影响。结果 :1随着 uro-cortin浓度的增高 ,CFs MTT比色法 A490 值呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10 、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 mol/L组的 A490值分别为 0 .183± 0 .0 0 4、0 .2 2 2± 0 .0 0 4、0 .2 51± 0 .0 0 7、0 .2 80± 0 .0 0 6和 0 .3 17± 0 .0 0 2 ,均较对照组 （A490 值 0 .167± 0 .0 0 4）显著升高 （P均 <0 .0 1）。 2 FCM细胞周期分析结果表明 ,10 - 7mol/L urocortin作用 48h,CFs的 G0 /G1期细胞百分率均较对照组显著降低 （P<0 .0 1） ,S期细胞百分率、G2 /M期细胞百分率和增殖指数则较对照组显著增高 （均 P<0 .0 1）。 3 CFs的 型胶原分泌随着 urocortin作用浓度的增高呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 m ol/L urocortin组的 型胶原 A值分别为 0 .576± 0 .0 10、0 .614± 0 .0 0 8、0 .771± 0 .0 47、0 .83 9±0 .0 54和 0 .90 8± 0 .0 0 6,均较对照组     

纤维溶解酶原激活物抑制剂-1对大鼠胚肺成纤维细胞的影响

目的 研究纤维溶解酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对大鼠胚肺成纤维细胞增殖、转化及胶原合成的影响,探讨PAI-1在肺纤维化发生中的作用.方法 体外分离培养Wister 待产孕大鼠胚肺成纤维细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验观察不同浓度(5、10、20、40、80 μg/L)的PAI-1刺激12、24和48 h后成纤维细胞的增殖率;选用PAI-1最适浓度20 μg/L刺激48和72 h后,细胞免疫化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;实时PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原24和48 h时mRNA表达的变化.结果各浓度PAI-1刺激成纤维细胞后,以20 μg/L 12 h增殖率及吸光度值最高,分别为62.6%和0.573±0.039.在12 h中,不同浓度组较对照组差异有统计学意义(F=111.112,P=0.000),选择20 μg/L为最适浓度.免疫细胞化学法检测20 μg/L PAI-1刺激48、72 h后,PCNA表达的积分吸光度值分别为3685±686和2530±477,较对照组差异有统计学意义(F=7.85,P=0.020).PAI-1刺激成纤维细胞24和48 h后,α-SMA表达上调(230±11)%和(159±9)%,较对照组差异有统计学意义(F=39.92,P=0.000).Ⅰ型胶原表达上调(92±8)%和(65±12)%,差异有统计学意义(F=32.61,P=0.001).结论 PAI-1可以促进成纤维细胞增殖、转化及胶原合成,可能促进肺间质纤维化的发生和发展.

Abstract：

Objective To explore the effect of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) on the proliferation and conversion of rat embryonic lung fibroblasts and the synthesis of collagen, and therefore to explore the function of PAI-1 in pulmonary fibrosis.Methods The embryonic lung fibroblasts from pregnant Wistar rats were isolated and cultured in vitro. The reproduction rate of fibroblasts at 12 h, 24 h, and 48 h after being stimulated by PAI-1 with different concentrations (5, 10, 20, 40, 80, and 100 μg/L) was measured by MTT assay. After being stimulated by PAI-1 with the most suitable concentration (20 μg/L) for 48 h and 72 h, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was measured by immunocytochemical technique, and the mRNA expression of α-SMA and type-1 collagen at 24 h and 48 h was measured by real-time PCR. Results PAI-1 with different concentrations stimulated the proliferation of fibroblasts. The highest proliferation rate and absorbance in concentration of 20 μg/L and at 12 h were 62.6% and 0.573±0.039. The comparison of different concentrations showed that the difference was significant(F=111.112,P=0.000). Therefore, 20 μg/L was selected as the most suitable concentration. Using immunocytochemical method, the optical density of PCNA at 48 h and 72 h were 3685±686 and 2530±477 after being stimulated with 20 μg/L PAI-1.The comparison showed significant difference(F=7.85,P=0.02). The expression of α-SMA increased (230±11)% and(159±9)% at 24 h and 48 h after being stimulated with 20 μg/L PAI-1, and the difference was significant(F=39.92, P=0.0003). The expression of type-1 collagen increased(92±8)% and (65±12)%, the difference being significant(F=32.61,P=0.0006). Conclusion PAI-1 can promote the proliferation and conversion of fibroblasts and the synthesis of collagen, which may be involved in the pathogenesis of pulmonary interstitial fibrosis.     

细胞外信号调节激酶1/2在抗纤维化短肽AcSDKP调节大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原表达中的作用

目的 探讨AcSDKP是否通过阻断细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径调节血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达. 方法 CCK-8法检测心脏成纤维细胞代谢活性.流式细胞仪法检测细胞周期.免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达.Western blot法检测ERK1/2及磷酸化-ERK1/2蛋白表达. 结果 10-9mol/L AcSDKP能够抑制PDGF诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,减少了细胞由G1期向S期的转化,细胞增殖指数下降.抑制了Ⅰ、Ⅲ型胶原及磷酸化-ERK1/2蛋白的表达,而ERK1/2蛋白表达无明显改变. 结论 AcSDKP能够通过阻断PDGF介导的ERK1/2通路的激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达.     

比索洛尔对高血压大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨比索洛尔对培养的高血压大鼠（SHR）和W istar大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖及胶原合成的影响。方法:采用胰酶消化法培养CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成功能,四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖,3H-脯氨酸（3H-Proline）掺入法测定胶原合成。结果:①基础状态下,SHR组CFs的3H-Proline掺入量3、H-TdR掺入量及MTT比色法A值均明显高于W istar组。②不同浓度比索洛尔对两组大鼠CFs3H-TdR掺入量及MTT比色法A值均无明显作用。③不同浓度比索洛尔以浓度依赖的方式抑制CFs3H-Proline掺入量,与W istar大鼠组相比,SHR组CFs受抑制的效应更强。结论:SHR的CFs细胞数目、DNA合成及胶原含量均存在异常,比索洛尔呈浓度依赖性抑制CFs的胶原合成,但对CFs增殖及DNA合成无明显作用。     

氨基胍延缓人胚肺二倍体成纤维细胞复制性衰老的实验研究

目的探讨人工合成单体抗氧化剂氨基胍（2-AG）对人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）复制性衰老的影响及其分子机制。方法观察2-AG对2BS细胞衰老表型、细胞代龄、传代速度、细胞周期、细胞增殖能力、晚期糖基化终末产物（AGEs）水平及衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）阳性率的影响。结果2-AG可维持细胞的非衰老表型，增加2BS细胞代龄19～20代，MTT法分析发现用2-AG孵育细胞84h，细胞增殖能力较对照组升高36％～40％。2-AG显著加快了细胞的增殖速度，其培养细胞S期的比例较对照细胞升高约1倍。另外，2-AG连续培养的细胞在老龄阶段AGEs、SA-β-Gal阳性率均显著低于老年对照细胞，而与年轻2BS细胞相似。结论2-AG可有效延缓2BS细胞的复制性衰老。     

紫杉醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响

目的 观察紫杉醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,探讨其抑制气道支架植入后肉芽组织增生的作用机制.方法 采用噻唑蓝法测定4.5、13.5及45 μg/ml的紫杉醇作用24、48及72 h后对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制率.结果 紫杉醇4.5、13.5及45 μg/ml作用24 h对人胚肺成纤维细胞增殖抑制率分别为43.7%、58.8%及68.1%;作用48 h的抑制率分别为75.5%、77.7%及91.9%;作用72 h的抑制率分别为95.1%、97.1%及97.0%.结论 紫杉醇对人呼吸系统来源的成纤维细胞,即人胚肺成纤维细胞有明显的抑制作用,在一定程度上呈现剂量.时间依赖性,其在抑制气道支架植入后肉芽组织增生方面可能具有潜在价值.     

硝苯啶和尼卡地平对人成纤维细胞增殖,胶原与透明质酸合成的作用

目的：研究硝苯啶（Ｎｉｆ）和尼卡地平（Ｎｉｃ）对人胚肺成纤维细胞（ＨＬＦ）增殖、胶原与透明质酸合成的影响，为应用钙通道阻滞剂防治器官纤维化提供实验依据。材料和方法：采用ＭＴＴ比色法、３Ｈ－脯氨酸掺入和放射免疫法分别测定细胞增殖、胶原与透明质酸合成。结果：Ｎｉｆ和Ｎｉｃ在１０～４０μｍｏｌ／Ｌ浓度范围内以剂量依赖方式抑制ＨＬＦ增殖及胶原和透明质酸合成，而对细胞无明显毒性作用。结论：Ｎｉｆ和Ｎｉｃ具有抗纤维化作用。