3周大运动量训练对大鼠骨骼肌mTOR信号通路的影响

目的:探讨3周大运动量训练过程中,大鼠骨骼肌蛋白合成代谢的变化规律和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的变化特点。方法:以7周龄雄性SD大鼠(36只)为研究对象,按体重随机分对照组3组(C1、C2、C3)和运动组(E1、E2、E3)3组。运动组进行3周大强度和中等强度相结合大运动量跑台训练,对照组不运动。每周训练结束后,随机选取对照组和运动组各1组,测试腓肠肌湿重、肌球蛋白重链(MHC)表达、mTOR及其下游信号70KD核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、真核起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的蛋白表达和磷酸化水平。结果:(1)第1周训练结束,与同期对照组(C1)相比,E1组p70S6K(Thr389)磷酸化水平和4EBP1蛋白表达显著升高(P<0.01);4EBP1(Thr37/46)磷酸化水平显著升高(P<0.05)。(2)第2周训练结束,与同期对照组(C2)相比,E2组mTOR(Ser2448)磷酸化水平显著降低(P<0.01);p70S6K(Thr389)磷酸化水平显著降低(P<0.05)。(3)第3周训练结束,与同期对照组(C3)相比,腓肠肌MHC蛋白表达显著降低,mTOR(Ser2448)和p70S6K(Thr389)磷酸化水平显著降低(P<0.01);腓肠肌湿重和mTOR、p70S6K、4EBP1蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:3周大运动量训练过程中,骨骼肌蛋白合成能力呈现出先升高后降低的变化特点。大运动量训练疲劳后对骨骼肌蛋白合成的抑制作用主要由m TOR信号通路蛋白表达降低所致。     

PERK参与调控砷化物诱导细胞自噬反应的信号转导机制研究

目的 探索PERK是否参与调控砷化物诱导的细胞自噬反应.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,以砷化物为刺激源,采用Western印迹方法检测自噬反应标志性蛋白的表达水平、PERK诱导活化状态以及敲低PERK表达水平后砷化物诱导细胞自噬反应和p53诱导活化水平变化情况;采用双荧光素酶报告基因技术检测敲低PERK表达水平后p53的转录激活活性变化.结果 砷化物刺激HepG2细胞后自噬反应相关蛋白Beclin-1诱导表达、LC3发生剪切、p62发生降解反应,同时PERK活化水平显著增强;敲低PERK表达水平后,砷化物刺激作用下Beclin-1的诱导表达、LC3的剪切以及p62的降解均被显著抑制;同样条件下p53在Ser15和Ser392位的磷酸化修饰反应水平和转录激活活性显著下降、p53下游靶基因DAPK1的诱导表达水平被显著抑制.结论 PERK能通过调节p53活化及其下游靶基因DAPK1表达从而介导砷化物诱导的细胞自噬反应.     

七氟醚上调PI3K/Akt/mTOR活性对小鼠心肌缺血再灌注损伤中自噬水平的影响

 目的 从PI3K/Akt/mTOR通路角度,探讨七氟醚对小鼠心肌缺血再灌注损伤中自噬水平的影响。方法 小鼠24只随机分4组(n=6):假手术组,只开胸不结扎;缺血再灌注组,戊巴比妥钠麻醉下结扎冠状动脉左前降支行缺血/再灌注手术;七氟醚组,七氟醚麻醉下手术;七氟醚+LY294002组,术前一周每日注射PI3K阻断剂LY294002,余同七氟醚组。收集血浆检测心肌损伤标志物肌酸激酶-MB(CK-MB)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)水平。心肌组织用免疫印迹法检测自噬标志物 LC3、Beclin1,及信号通路磷脂酰肌醇3-磷酸激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素(mTOR) 总蛋白及磷酸化蛋白水平。结果 与假手术组相比,其余3组的血浆CK-MB、cTnI、心肌自噬标志蛋白LC3和Beclin1水平均增高(P<0.05),磷酸化PI3K、Akt、mTOR与总蛋白比值降低(P<0.05)。与假手术组相比,七氟醚组的PI3K、Akt、mTOR总蛋白水平差异无统计学意义;而缺血再灌注组PI3K、Akt水平增高(P<0.05),且mTOR蛋白水平降低(P<0.05);七氟醚+LY294002组PI3K水平增高(P<0.05),且Akt、mTOR蛋白水平降低(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,七氟醚组和七氟醚+LY294002组血浆CK-MB和cTnI、LC3和Beclin1水平均降低(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,七氟醚组的磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白与总蛋白比值升高(P<0.05)。与七氟醚组相比,七氟醚+LY294002组血浆CK-MB、cTnI降低,LC3和Beclin1水平均增高(P<0.05);七氟醚+LY294002组的磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白与总蛋白比值均降低(P<0.05)。结论 七氟醚抑制了缺血再灌注引发的过度自噬,可能的机制是上调了PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平。     

IKKα通过激活p38 K介导紫外线诱导的p53活化反应

目的：探讨IκB激酶（IκB kinase,IKK）催化亚基α（IKKα）在紫外线（ultraviolet radiation, UV）诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。 Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。     

乙肝病毒X蛋白连接蛋白抑制辐射诱导的乳腺癌细胞自噬调节的研究

目的 探讨乙肝病毒X蛋白连接蛋白（HBXIP）对电离辐射诱导的乳腺癌细胞自噬的影响。方法 将实验细胞分为对照组、HBXIP转染组、si-HBXIP转染组、HBXIP和si-STAT3共转染组。各处理组给予4 Gy γ射线照射后,0、24、48和72 h采用流式细胞技术检测含嗜酸性自噬体的乳腺癌细胞数;Western blot方法检测LC3-I/II、HBXIP、STAT3蛋白和STAT3（Y705）磷酸化蛋白表达水平的改变。结果 与对照组相比,外源性过表达HBXIP明显减少含有辐射诱导的嗜酸性自噬体的乳腺癌MDA-MB-231细胞数（t_{24 h}=3.67,P<0.05;t_{48 h}=9.74,P<0.01;t_{72 h}=10.15,P<0.01）和自噬相关蛋白LC3-II蛋白的表达;相反,采用siRNA降低HBXIP表达则明显增加含有嗜酸性自噬体的细胞数（t_{24 h}=3.5,P<0.05;t_{48 h}=4.15,P<0.05;t_{72 h}=12.12,P<0.01）和LC3-II的表达。提高HBXIP表达导致剂量依赖性的辐射诱导的STAT3（Y705）磷酸化水平提高;反之,降低HBXIP表达可降低受照细胞中STAT3（Y705）磷酸化水平的表达。采用siRNA-STAT3降低STAT3表达水平,明显降低了HBXIP对辐射诱导的自噬（t_{24 h}=5.57,P<0.05;t_{48 h}=13.65,P<0.01;t_{72 h}=12.47,P<0.01）和LC3-I/II表达调节能力。结论 HBXIP可通过调节p-STAT3（Y705）磷酸化的表达从而调节辐射诱导的乳腺癌细胞自噬。     

DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在电离辐射诱发HeLa细胞自噬中的作用

目的：了解DNA依赖性蛋白激酶催化亚基（ DNA-PKcs）在电离辐射诱发细胞自噬中的作用。方法通过慢病毒载体（ pSicoR ）构建DNA-PKcs短发夹RNA （ shRNA ）表达载体,并转染HeLa细胞敲低DNA-PKcs表达。CCK-8实验检测细胞增殖活性及细胞放射敏感性,免疫印迹检测自噬相关蛋白表达,免疫荧光实验检测自噬标志物GFP-LC3的表达。结果成功构建shRNA敲低DNA-PKcs表达的HeLa细胞模型,通过该细胞模型观察到抑制DNA-PKcs蛋白表达导致细胞增殖能力降低、放射敏感性增高。 P62和LC3蛋白表达变化,以及细胞内绿色荧光蛋白（ GFP）-LC3免疫荧光斑检测结果显示,DNA-PKcs基因敲低后,明显增加X射线诱发细胞自噬。抑制DNA-PKcs导致哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白（ mTOR）第2481位丝氨酸磷酸化水平降低。结论抑制DNA-PKcs增强受照射宫颈癌HeLa细胞的自噬及放射敏感性,mTOR信号通路可能参与DNA-PKcs对自噬的调节作用。     

模拟失重条件下大鼠心室肌Beclin-1和LC3的表达变化

目的探讨模拟失重大鼠心室肌自噬相关基因Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达变化。方法雄性SD大鼠12只,随机分为对照组和模拟失重组。模拟失重4周后取心室肌组织,采用RT-PCR和Western Blot方法测定Beclin-1和LC3 mRNA及蛋白表达的变化。结果与对照组相比,模拟失重4周后大鼠心室肌Beclin-1和LC3 mRNA及蛋白表达均显著增强(P0.05)。结论模拟失重可诱导大鼠心室肌自噬相关基因Beclin-1和LC3的高表达,提示模拟失重可能引起了心室肌自噬的激活。     

miR-34a调控HEK293细胞自噬作用的初步研究

目的探讨miR-34a对HEK293细胞自噬作用的影响。方法采用miR-34a模拟物(模拟物组)和miR-34a抑制剂(抑制剂组)分别转染HEK293细胞,并设空白对照(对照组)。采用定量PCR检测miR-34a、p53基因表达的变化,Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ及p53表达的变化,并采用生物信息学方法分析miR-34a对自噬相关基因(Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等)的可能作用。结果定量PCR结果显示,模拟物组miR-34a表达显著上调(P<0.05),抑制剂组miR-34a表达显著下调(P<0.05)。与对照组相比,miR-34a模拟物可显著抑制HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05),而miR-34a抑制剂则显著上调HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05)。定量PCR和Western blotting结果显示,各组p53mRNA及蛋白表达无统计学差异。生物信息学分析显示,Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等自噬相关基因是miR-34a潜在的靶基因。结论miR-34a能抑制HEK293的自噬作用,可能是通过直接抑制...     

鸢尾素促进高糖环境中兔BMSCs骨向分化的机制

目的 探讨鸢尾素促进高糖环境中兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制。方法 兔BMSCs随机分为对照组、高糖组、鸢尾素组(高糖+鸢尾素)和氯奎组(高糖+鸢尾素+氯奎)。成骨诱导培养5 d后,Western blot检测自噬相关蛋白P62和LC3B的表达,实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)检测成骨相关基因Runx2、ALP、COL-I和OCN的转录表达,试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性。结果 与对照组相比,高糖组P62蛋白表达升高同时LC3B-II表达降低,下调Runx2、ALP和COL-I的转录表达并降低ALP活性(P<0.05);鸢尾素干预降低P62蛋白水平同时升高LC3B-II的表达,上调Runx2、ALP和COL-I的转录表达并升高ALP活性(P<0.05);当使用氯喹抑制自噬后,鸢尾素上调Runx2和ALP的转录表达并升高ALP活性的作用明显减弱(P<0.05)。结论 鸢尾素通过激活自噬促进高糖环境中BMSCs成骨分化。     

回转器模拟微重力对神经细胞自噬的影响(英文)

目的探讨回转模拟微重力对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬的影响。方法利用回转模拟微重力的细胞学效应,回转条件下培养细胞12 h、24 h,相同条件下静置培养细胞作为对照。WesternBlot方法检测LC3蛋白表达变化水平。荧光显微镜观察GFP-LC3点状聚集物,计数含有大于5个GFP-LC3点状聚集物的细胞数量。结果回转组SH-SY5Y细胞LC3-II蛋白表达高于对照组,荧光显微镜检测到GFP-LC3点状聚集物也随之增多。结论回转可以引起SH-SY5Y细胞自噬增多。     

Systematics of (p,alpha) (p,nalpha), and (p,np) reaction cross-sections.

Semi-empirical systematics of (p,alpha) (p,nalpha), and (p,np) reaction cross-sections were obtained at various incident proton energies from 17.9 to 28.5 MeV. Systematics are based on analytical formulas derived using the pre-equilibrium exciton model, evaporation model and semi-empirical mass formula. Parameters of systematics were fitted to the data obtained from the analysis of available measured cross-sections for (p,alpha) (p,nalpha), and (p,np) reactions.     

ras、p16、p53和幽门螺杆菌感染与胃癌发生关系的研究

采用聚合酶链反应－单链构象多肽性分析法（PCR－SSCP）及HP尿素酶快速检测法，随机对46例慢性浅表性胃炎、39例慢性萎缩性胃炎、39例胃溃疡、36例胃癌的胃粘膜活检标本进行了ras、p16、p53及HP检测，并对其在胃癌致癌机制中的相互关系进行研究。结果表明，①ras及p53在胃癌标本中的检出率明显高于萎缩性胃炎、胃溃疡及浅表性胃炎（P＜0．05）；②p16在胃癌标本中的检出率远远低于基本正常胃粘膜及其他胃良性病变（P＜0．05）；③HP在胃癌标本中的检出率明显高于萎缩性胃炎、胃溃疡及浅表性胃炎（P＜0．05）；④ras和p53阳性表达的各种胃良、恶性疾病中的HP阳性检出率均高于p16阳性表达的各种胃良、恶性疾病中的HP阳性检出率（P＜0．05）。提示ras、p53、p16和HP感染在胃癌致病机制中可能具有重要作用，并可能有相互协同作用。     

Excitation function measurements of 40Ar(p,3n)38K, 40Ar(p,2pn)38Cl and 40Ar(p,2p)39Cl reactions

For the production of ³⁸K, excitation functions of the ⁴⁰Ar(p,3n)³⁸K reaction and its accompanying reactions ⁴⁰Ar(p,2pn)³⁸Cl, and ⁴⁰Ar(p,2p)³⁹Cl were measured at the proton energy of 20.5–39.5 MeV to determine the optimum conditions of irradiation. Target cells containing argon gas were prepared using specially developed tools in an argon-replaced glove box. In the ⁴⁰Ar(p,3n)³⁸K, ⁴⁰Ar(p,2pn)³⁸Cl, and ⁴⁰Ar(p,2p)³⁹Cl reactions, the maximum cross sections were 6.7±0.7, 34±3.3 and 11±1.2mbarn at 37.6, 39.5 and 32.0 MeV, respectively, and the saturation thick target yields were calculated to be 560, 2200, and 1300¹ MBq/μA, respectively, at an incident energy of 39.5 MeV (¹ integral yield above 21 MeV).     

Alterations of tumor suppressor genes (Rb,p16, p27 and p53) and an increased FDG uptake in lung cancer

OBJECTIVE: The FDG uptake in lung cancer is considered to reflect the degree of malignancy, while alterations of some tumor suppressor genes are considered to be related to the malignant biological behavior of tumors. The aim of this study is to examine the relationship between FDG-PET and alterations in the tumor suppression genes of lung cancer. METHODS: We examined 28 patients with primary lung cancer who underwent FDG-PET before surgery consisting of 17 patients with adenocarcinoma, 10 with squamous cell carcinoma and 1 with large cell carcinoma. The FDG-PET findings were evaluated based on the standardized uptake value (SUV). Alterations in the tumor suppressor genes, Rb, p16, p27 and p53, were evaluated immunohistochemically. RESULTS: The FDG uptake in lung cancer with alteration in each tumor suppressor gene tended to be higher than in those genes without alterations, although the differences were not significant. In 15 tumors with alterations in either tumor suppressor genes, the FDG uptake was 6.83 +/- 3.21. On the other hand, the mean FDG uptake was 1.95 in 2 tumors without alterations in any genes. The difference in the FDG uptake between the 2 groups was statistically significant (p < 0.001). CONCLUSIONS: In conclusion, the presence of abnormalities in the tumor suppressor genes, which results in an accelerated cell proliferation, is thus considered to increase the FDG uptake in lung cancer.     

细支气管肺泡癌中PCNA、p16和p27的表达及其临床意义

目的分析细支气管肺泡癌(BAC)标本中增殖细胞核抗原(PCNA)和肿瘤抑制因子p16和p27的表达及与临床病理特征、预后的关系,进而评价其作为判断BAC预后指标的可行性。方法检测68例手术切除的BAC患者石蜡包埋组织,并取同期24例相应癌旁正常肺组织作正常对照,采用免疫组织化学染色法检测以上标本中PCNA、p16及p27的表达情况。结果 BAC组织中PCNA表达水平显著高于正常肺组织(P<0.05)。BAC组织中p16、p27表达水平显著低于正常肺组织(P<0.05);PCNA高表达同BAC的组织学类型、淋巴结转移有相关性(P<0.05),而p16、p27的失表达同淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论联合检测BAC组织中PCNA、p16和p27的表达水平有助于预测患者预后。     

犬胆管金属支架诱导p16、p53基因扩增的实验研究

目的 探讨胆道金属支架在诱导抑癌基因扩增方面的价值.方法 健康成年实验犬24只,采用经皮经肝穿刺胆囊的方法于犬胆总管下段植入支架1枚,术后正常喂养平均半年,再次麻醉后活体开腹取支架覆盖段胆管壁与支架上段胆管壁组织,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测所取组织p16、p53、p15、Bcl-2及K-ras基因的表达情况,计算两个部位胆管壁目的 基因表达阳性率,采用X~2检验进行统计学分析.结果 共20只实验犬建模成功.支架覆盖段胆管壁p16、p53基因表达阳性率分别为80%(16/20)、45%(9/20),支架上段胆管壁p16、p53基因表达阳性率分别为15%(3/20)、0,以上差异具有统计学意义(X~2值分别为16.94、9.17,P值均＜0.05).支架覆盖段胆管壁p15、Bcl-2、K-ras基因表达阳性率分别为60%(12/20)、100%(20/20)、0,支架上段胆管壁p15、Bcl-2、K-ras基因表达阳性率分别为70%(14/20)、100%(20/20)、0,两个部位间差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 胆管壁p16、p53的扩增加强与胆道金属支架的植入有一定的相关性,对于不存在胆道支架植入禁忌证的恶性梗阻性黄疸患者建议行胆道支架植入术治疗.     

p53,p16,PCNA蛋白在食管癌中的表达及其临床意义

目的探讨p53,p16,PCNA蛋白在食管癌中的表达及临床意义。方法用免疫组织化学染色SP法对62例食管癌标本进行p53,p16,PCNA蛋白测定。结果62例食管癌中,p53,PCNA蛋白阳性表达均为71.0%(44/62),p16缺失率48.4%(30/62)。p16缺失与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05、P<0.01)。而p53,PCNA蛋白同时表达56.5%(35/62),亦与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05、P<0.01)。结论食管癌p53,PCNA蛋白同时表达及p16缺失可视为危险预后因素。     

Ki-67、p16和p53在结肠癌中的表达和相关性研究

目的：探讨Ki-67、p16和p53在结肠癌组织中表达的意义和它们之间的相关性。方法：应用链霉素-生物素（SP）免疫组织化学法，对127例结肠癌进行Ki-67、p16和p53的检测。结果：结肠癌Ki-67、p16和p53蛋白阳性表达率分别为74．8％、47．2％和54．3％。Ki-67蛋白阳性表达均与肿瘤分化程度、浸润深度和淋巴结转移显著相关（P〈0．05），而与患者年龄、肿瘤大体类型无关（P〉0．05）；p16蛋白阳性表达与肿瘤分化程度和淋巴结转移显著相关（P〈0．05），与患者年龄，肿瘤大体类型、浸润深度无关（P〉0．05）；p53与肿瘤分化程度显著相关（P〈0．05），与患者年龄，肿瘤大体类型、浸润深度和淋巴结转移无关（P〉0．05）。结肠癌中Ki-67蛋白和p16、p53蛋白的表达无显著关系（P〉0．05）。结论：结肠癌中Ki-67表达的上调与其浸润转移密切相关，p16和p53在结肠癌发生发展过程中具有重要作用；术前联合检测Ki-67、p16和p53在结肠癌活检组织中的表达，对指导手术决策，以及估计预后有重要的临床应用价值。     

食管反流促进肿瘤发生与抑癌基因mRNA表达的相关性

为研究胃二十指肠食管反流的大鼠诱癌过程中食管组织内p53,p16,p21等抑癌基因的mRNA表达，制作3种食管反流动物模型及对照组，术后均注射致癌剂，用原位杂交法检测术后20，26周时食管组织中p53,p16,p21基因的mRNA表达。结果显示，各反流组食管上皮中p53的mRNA表达均较对照组显著增强，其中十二指肠食管反流组（D组），十二指肠胃食管反流组（DG组）的表达较胃食管反流组（G组）更强，D组与DG组结果相似；D，DG组的p16,p21基因mRNA表达较C组减弱，而G组与C组相比差异无显著性意义。提示胃液及十二指肠内容物反流可改变抑癌基因在转录水平的表达，促进大鼠食管肿瘤的发生，其中十二指肠内容物的作用较强。     

Calculations for the excitation functions of the 63Cu(p,n)63Zn, 63Cu(p, 2n)62Zn and 65Cu(p,n)65Zn reactions.

Calculations for the excitation functions of 63Cu(p, n)63Zn, 63Cu(p, 2n)65Zn and 65Cu(p, n)65Zn reactions have been carried out in 3-30 MeV energy range using statistical and pre-equilibrium nuclear reaction models. The calculations have been compared with reported measurements and discussed.