当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下系膜细胞(GMC)增殖及细胞上清液中层粘连蛋白(LN)、Ⅳ胶原纤维(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的大鼠肾小球系膜细胞在各种处理因素的作用下上清液中LN、Ⅳ型胶原及FN的表达情况;②利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时促进GMC分泌FN、LN和ColⅣ(P<0.05或P<0.01)。而当归补血汤能抑制GMC增殖及GMC分泌FN、LN和ColⅣ,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖、GMC分泌FN、LN和ColⅣ的能力也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖、细胞外基质(ECM)蛋白分泌,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖、及其分泌FN、LN和ColⅣ,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖及分泌ECM,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及乙酰肝素酶表达的影响

目的:研究当归补血汤对高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及其乙酰肝素酶(HPA)表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义.方法:①利用透射电镜观察各组中GMC的增殖情况;②采用免疫组织化学方法检测各组肾小球中HPA的表达.结果:高糖能明显促进肾小球GMC增殖,也相应的增加系膜细胞中HPA表达(P＜0.05...     

糖肾颗粒对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]研究糖肾颗粒对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells,GMC)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)防治中的意义.[方法]将常规体外培养的GMC分为正常对照组、高糖组、糖肾颗粒高、中、低剂量组及贝那普利组,分别进行相应处理后收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同作用时间(24h、48h、72h)下细胞增殖程度.[结果]高糖(30.0mmol· L-1)能明显刺激体外培养的GMC增殖.糖肾颗粒及贝那普利两种药物含药血清对高糖刺激下的GMC增殖有抑制作用,其中糖肾颗粒血清对GMC的抑制作用优于贝那普利血清,且呈一定的时间、剂量依赖性关系.[结论]高糖可促进GMC增殖,糖肾颗粒能明显抑制高糖条件下GMC增殖,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展.     

单宁酸对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨单宁酸（GLTN）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖的抑制作用及对细胞周期的影响,阐明GLTN对糖尿病肾病（DN）发生发展的延缓作用。方法：实验细胞分成正常糖对照组（D-葡萄糖5.5 mmol·L^-1,NC组）、高糖组（D-葡萄糖30 mmol·L^-1,HC组）、高糖+5 mmol·L^-1 3-氨甲苯甲酰胺（3-AB,AB组）、高糖+20 μmol·L^-1GLTN（G20组）和高糖+40 μmol·L^-1 GLTN（G40组）。MTT法观察不同时间点（4、8、24、48和72 h ）各组GMC的增殖情况,流式细胞术观察细胞周期,Western blotting法检测转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达情况。结果：与NC组比较,高糖组GMC增殖水平升高（P<0.01）,于48 h时达高峰;S期细胞百分比明显升高（P<0.01）。与HC组比较,各给药组GMC增殖水平均明显下降（P<0.01）,S期细胞百分比降低（P<0.01）。与NC组比较,各给药组S期细胞百分比明显升高（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,但与HC组比较明显下降（P<0.01）。结论：单宁酸可通过阻滞细胞周期,下调TGF-β1和CTGF的表达,抑制高糖诱导的大鼠GMC的增殖,从而对DN的发生发展起到一定的延缓作用。     

当归补血汤对不同状态下血管内皮细胞增殖及超微结构影响的实验研究

目的:观察当归补血汤对正常、与肿瘤共培养、缺氧等不同状态下血管内皮细胞增殖及超微结构的影响.方法:应用Transwell建立与肿瘤共培养血管内皮细胞模型,连二亚硫酸钠建立缺氧血管内皮细胞模型,通过CCK-8法观察血管内皮细胞的增殖作用,电子显微镜观察细胞的超微结构变化.结果:当归补血汤(浓度3.75～15 g/L)能够促进正常血管内皮细胞及缺氧血管内皮细胞的增殖,其中高剂量和中剂量组促进缺氧血管内皮细胞增殖作用较促进正常血管内皮细胞增殖作用明显.当归补血汤(浓度3.75～15 g/L)能抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞增殖,且与剂量呈正相关,抑制缺氧或与肿瘤共培养对血管内皮细胞超微结构的影响.结论:当归补血汤能够双向调节不同状态下血管内皮细胞的增殖作用,保护缺氧或与肿瘤共培养对血管内皮细胞超微结构改变的影响.     

过表达羧肽酶E对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的：探究羧肽酶E（carboxypeptidase E,CPE）对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）增殖、周期及凋亡的影响。方法：PCR法扩增CPE基因片段,将其插入表达载体 pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1?CPE。将质粒转染GMC细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测CPE标签蛋白、增殖标志物细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）以及凋亡标记物Cleaved?caspase?3的表达;采用平板克隆、Cell Counting Kit?8（CCK?8）法以及流式分析法检测过表达CPE对高糖培养的GMC细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果：成功构建CPE过表达的GMC细胞。平板克隆以及CCK?8实验表明,过表达CPE可以抑制GMC细胞的增殖能力。流式细胞学检测表明,与对照组相比,CPE过表达明显促进了细胞凋亡;细胞周期中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：过表达CPE可以抑制高糖培养的小鼠GMC细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

黄芩苷下调NF-κB表达抑制高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的作用

目的研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞（GMC）增殖的抑制作用及对NF-κB表达的影响。方法将体外培养的大鼠GMC分为六组：低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组、氯沙坦组,培养24、48、72 h。实验结束后根据MTT法检测结果,收集细胞并提取核蛋白,用Western blot方法检测各组NF-κB表达情况。结果高糖组在24、48、72 h时间段的吸光值均较低糖组增高,且随培养时间延长而增高明显（P〈0.05）;黄芩苷低、中、高剂量组,氯沙坦组在24 h时间段吸光值均较高糖组高,48、72 h时间段较高糖组低（P〈0.05）。Western blot结果显示,高糖组NF-κB表达量较低糖组增加。而用黄芩苷干预后,GMC中NF-κB表达量较高糖组减少,且随着浓度增加,表达量逐渐减少。结论高糖环境下体外培养的GMC存在异常增殖现象,黄芩苷能抑制高糖诱导的GMC异常增殖,且呈时间、剂量依赖关系,其机制可能与黄芩苷下调NF-κB表达有关。     

肝素对人类系膜细胞金属基质蛋白酶1、3表达的影响及其肾保护作用

目的通过体外高糖（HG）刺激下培养正常人类系膜细胞（NHMC），观察NHMC的增殖同时金属基质蛋白酶（MMP1和MMP3）表达状况及肝素对MMP1和MMP3表达的影响。探讨MMPl和MMP3在DN发病中的作用及肝素对DN的肾保护作用机制。方法将正常人类系膜细胞在高糖或低糖的培养基中进行体外细胞培养并用含有不同肝素浓度的培养液进行干预实验，观察高糖和不同肝素浓度对NHMC增殖的影响；用Western blotting方法测定高糖对MMPl和MMP3表达的影响及其肝素的干预作用。结果HG刺激NHMC增殖为1．93倍而LG则为1．60倍。当肝素浓度仅为50ug／mL时NHMC增殖开始受到抑制且随着剂量的递增NHMC增殖抑制更明显。HG可刺激NHMC增殖同时使MMP和MMP3表达；在HG中加入肝素后NHMC中MMP1和MMP3出现高表达。结论高糖能刺激正常人类系膜细胞增殖；肝素具有抑制系膜细胞增殖的作用。高糖在刺激NHMC增殖同时使MMP1和MMP3表达，而肝素在高糖状态下使NHMC中MMP1和MMP3出现高表达。这可能是肝素抗凝作用外的肾脏保护作用机制。     

阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响

目的:探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导下原代肾小球系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制.方法:原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24 h、48 h收集细胞.用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;免疫细胞化学检测p53和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达.结果:48 h内,高糖促进GMC增殖并上调p38MAPK蛋白的表达,抑制p53的表达,SF能明显对抗高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强.结论:SF可能是通过抑制p38MAPK通路,促进p53的合成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖.     

高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响

目的：探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响。方法：大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6mmol/L葡萄糖（正常对照组）、10、20、30mmol/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝（MTT）法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-κBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-κBp65核转位。结果：48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异（P〉0.05）;各高糖组NF-κBp65总蛋白的表达无统计学差异（P〉0.05）;高糖组NF-κBp65核转位增加（P〈0.01）,呈时间浓度依赖性。结论：在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-κBp65核转位导致NF-κB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-κBp65总蛋白的表达增加。     

复方血尿停经肝微粒体代谢后对肾小球系膜细胞的影响

目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)水平,速率法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果经肝微粒体代谢后,复方血尿停2、4、8mg/mL均抑制GMC的增殖及IL-6、ET-1的产生,且呈剂量依赖方式。结论复方血尿停能抑制IL-6、ET-1的分泌和GMC的增殖,此作用可能是其治疗系膜增生性肾小球疾病的作用机制之一。     

黄芪注射液对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na+-K+-ATP酶活性的影响

[目的]观察黄芪注射液对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na⁺-K⁺-ATP酶活性的影响。[方法]用含高糖或AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后,四甲基氮唑盐(MTT)法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na⁺-K⁺-ATP酶测定。[结果]葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低,与正常培养液比较具有显著性差异。而加入黄芪注射液后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na⁺-K⁺-ATP酶活性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na⁺-K⁺-ATP酶活性降低,起到保护细胞的作用。     

中药复方益肾蠲湿合剂抑制肾小球系膜细胞增殖及机理的研究

目的:观察自拟中药复方"益肾蠲湿合剂"对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖的影响,并进一步探讨其作用机理。方法:将1×10-3、1×10-2和1×10-1mg/mL的"益肾蠲湿合剂"提取液作用于体积分数10%血清的DMEM培养的GMC,分别用MTT和Western Blot方法检测细胞的增殖和磷酸化ERK1/2的表达。结果:1×10-2和1×10-1mg/mL"益肾蠲湿合剂"可显著抑制GMC的增殖,抑制率在12、24和36 h分别为13.4%、为9.6%。细胞总ERK的表达在各组间无明显差别。但不同浓度的"益肾蠲湿合剂"能显著地抑制血清所诱导的ERK1/2的磷酸化,最高抑制率达68%。结论:"益肾蠲湿合剂"可通过抑制ERK1/2的磷酸化来抑制GMC的增殖。     

黄芪和雷公藤多甙对大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌IL-6影响的比较

[目的]观察比较黄芪和雷公藤多甙对’肾小球系膜细胞增殖及其分泌白细胞介素6(IL-6)水平的影响【方法】应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞培养,采用血清药理学方法,制备黄芪舍药血清、雷公藤多甙含药血清．并分为低、中、高3个剂量梯度(5％、10％、20％),观察含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖和分泌IL-6的影响．应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定系膜细胞增殖,酶标记免疫吸附分析法(ELISA)测定细胞IL-6含量。【结果】黄芪、雷公藤多甙含药血清各剂量组均可抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖,并能抑制肾小球系膜细胞产生IL-6,其抑制作用呈剂量效应关系,其中尤以雷公藤多甙高、中剂量组及黄芪高剂量组作用显著。【结论】在体外培养的肾小球系膜细胞处于过度增殖的状态下．黄芪能抑制肾小球系膜细胞增殖及分泌IL-6,其作用与雷公藤相仿,两药合用可减少雷公藤用量,可能具有增效减毒的作用。     

大鼠Thy-1肾炎增殖病变及sublytic C5b-9致其肾小球系膜细胞增生的实验研究

目的:检查大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)的增生病变及亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物在GMC增殖中的作用?方法:复制大鼠Thy-1N模型,分别于注射Thy-1抗体后18 h?3 d和7 d时,取肾组织,用real-time PCR和Western blot方法检查其肾组织中细胞增殖指标,即细胞周期蛋白D2(cyclin D2)和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA丰度及蛋白表达水平?用免疫荧光观察肾小球中C5b-9复合物的沉积?同时,使用BrdU掺入法?光镜及电镜观察大鼠肾小球细胞的增殖情况?此外,体外培养大鼠GMC,进行不同分组处理后再给予sublytic C5b-9刺激,用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymidine incorporation,3H-TdR)检查GMC的增殖情况?结果:大鼠Thy-1N病变18 h,肾组织中cyclin D2?PCNA表达和肾内BrdU阳性细胞数均开始升高,实验3 d和7 d,其表达进一步提高?同时肾小球内可见C5b-9复合物沉积,部分C5b-9包绕的肾细胞形态完好?另形态学观察还发现,实验18 h,部分GMC溶解坏死,而实验3 d,GMC数量明显增多,7 d增加更为显著?体外实验中,大鼠GMC在sublytic C5b-9刺激后18 h,其细胞增殖水平显著增高,而用sublytic C5b-9刺激GMC产生的培养上清处理正常的GMC后,亦能轻度刺激GMC增殖?结论:大鼠Thy-1N肾小球病变存在早期增殖和继发增生的病理改变,而GMC的早期增殖可能与sublytic C5b-9作用有关?     

海昆肾喜对肾小球系膜细胞增殖及表达PDGF-BB mRNA的影响

目的:探讨海昆肾喜对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及表达血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)mRNA的影响。方法:制备大鼠含药血清,MTT比色法检测海昆肾喜对脂多糖诱导下肾小球系膜细胞(GMCS)增殖的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海昆肾喜对GMCS表达PDGF-BB mRNA的影响,设苯那普利为对照组。结果:MTT实验各时间点海昆肾喜组OD值均显著低于LPS组(P<0.05),RT-PCR实验海昆肾喜组PCR产物电泳条带较脂多糖组明显减弱(P<0.05),且均呈量效依赖关系,海昆肾喜大剂量组作用优于小剂量组。结论:海昆肾喜抑制脂多糖诱导的肾小球系膜细胞增殖并显著下调肾小球系膜细胞表达血小板源性生长因子-BB mRNA,可能是其防治肾小球硬化的作用机理之一。     

肾康注射液对肾小球系膜细胞增殖及自分泌FN的效应

目的：探讨肾康注射液（SKI）阻抑肾小球硬化（GS），防治慢性肾功能衰竭（CR）的部分作用机制，为SKI临床应用提供依据。方法：采用血清药理学实验法，观察SKI对体外培养人肾小球系膜细胞（GMC）增殖及其自分泌纤维连接蛋白（FN）水平的影响，结果：SKI及其含药血清对GMC增殖，自分泌FN有明显抑制作用（P＜0．01，P＜0．05），呈剂量或SKI血药浓度与效应依赖性；但随刺激时间延长，其作用存在差异，即对增殖的抑制效应：SKI呈递增趋势，而SKI含药血清则呈递减趋势，对FN水平的抑制效应则相反。结论：SKI经机体代谢，药理效应的不一致性，提示SKI含药血清可能出现提高FN降低解酶活性的新物质，或存在降解FN的某种活性成分。