丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 在大鼠心肌细胞系H9c2中,观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激及其特异的凋亡分子表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ(AgⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的内质网应激机制.方法 H9c2在CO2孵箱37 ℃常规培养,同步化后进行实验.细胞分为4组.正常对照组.AgⅡ组:10-6 mol/L的AgⅡ孵育48 h.AgⅡ+0.5 μg/mL TSA组同时加入10-6 mol/L的AgⅡ和0.5 μg/mL TSA培养48 h.AgⅡ+1 μg/mL TSA组同时加入10-6 mol/L的AgⅡ和1 μg/mL TSA培养48 h.培养结束,收集细胞进行Hoechst染色检测细胞凋亡的发生,实时荧光定量PCR测定GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA的表达.结果浓度为1 μg/mL TSA可以显著抑制AgⅡ诱导的细胞凋亡(P<0.01).内质网应激通路分子GRP78、CHOP mRNA在给以AgⅡ培养48 h表达较正常培养细胞显著增加,而同时给以0.5 μg/mL TSA可以抑制表达增加(P<0.05),当TSA为1 μg/mL时,抑制作用更明显(P<0.01).结论 TSA可以抑制AgⅡ诱导的心肌细胞系H9c2的凋亡,以及AgⅡ诱导的GRP78,CHOP mRNA表达的增加.     

PCSK9-siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响

目的 研究PCSK9siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响.方法 用不同浓度ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化.应用Lipofectamine2000分别转染30、50 nmol/L和80 nmol/L PCSK9 siRNAs 进THP-1 源性巨噬细胞中,作用24 h后加入ox-LDL 处理48 h,免疫印迹法分析细胞Bax、Bcl-2表达,Hoechst33258染色观察形态评价细胞凋亡.结果 随着ox-LDL浓度的增加,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性,80 μg/mL ox-LDL处理组作用最为明显;80 μg/mL ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间后,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈时间依赖性,48 h处理组作用最为明显;PCSK9 siRNA能明显下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,且均呈浓度依赖性;Hoechst33258染色显示,PCSK9 siRNA转染组细胞凋亡明显减少.结论 PCSK9 siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1 源性巨噬细胞凋亡中下调促凋亡蛋白Bax表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达.     

不对称二甲基精氨酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 观察不对称二甲基精氨酸（ADMA）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 THP-1单核细胞给予160nmol/L佛波酯（PMA）孵育48h,诱导分化成巨噬细胞,与80mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育24h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度ADMA（1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L）作用泡沫细胞24h,以20μmol/L ADMA作用泡沫细胞不同时间（0h,6h,12h,24h,48h）,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果 ①单核细胞加人PMA诱导48h后,分化为巨噬细胞,再经ox-LDL诱导24h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L,30μmol/L的ADMA作用于,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,细胞内胆固醇含量均明显增加（P＜0.01）,③与对照组相比,20μmol/L的ADMA作用于THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞12h,24h,48h,细胞内胆固醇含量均明显增加（P＜0.01）.结论 ①单核细胞株THP-1经PMA诱导后,可分化为巨噬细胞,再经ox-LDL诱导后,可转化为泡沫细胞.②ADMA可以增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的含量.     

胆固醇过负荷对脂肪细胞分泌内脂素的影响及其机制

3T3-L1细胞促分化成熟后,分别以酯酰辅酶A胆固醇酯酰转移酶(ACAT)抑制剂(2μg/ml)和不同浓度(0、25、50、75和100 μg/ml)的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干预48 h,ACAT抑制剂(2μg/ml)和ox-LDL( 50 μg/ml)干预0、6、18、36和48 h,ACAT抑制剂(2μg/ml)、ox-LDL( 50 μg/ml)和不同浓度(0、100、200和400 μmol/L)的牛磺酸熊去氧胆酸(TUDCA)干预48 h.用ELISA法检测细胞上清内脂素的水平,Western印迹法检测脂肪细胞总蛋白GRP78和CHOP表达.ACAT抑制剂和不同浓度的ox-LDL干预脂肪细胞48 h后,随着ox-LDL浓度的增加,脂肪细胞内胆固醇浓度、GRP78和CHOP蛋白表达及内脂素水平显著升高,实验组与空白对照组比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);ACAT抑制剂和ox-LDL干预后,随干预时间的延长,脂肪细胞GRP78、CHOP蛋白表达及内脂素水平均显著升高,实验组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);ACAT抑制剂、ox-LDL和不同浓度TUDCA干预48 h后,脂肪细胞GRP78及CHOP蛋白表达水平及内脂素水平逐渐降低,实验组(200和400 μmol/L)与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).脂肪细胞胆固醇负荷增加可促进脂肪细胞分泌内脂素,其机制可能与脂肪细胞的内质网应激增强有关.     

swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中的表达及对巨噬细胞凋亡和炎症因子表达影响

目的探讨swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中的表达及对巨噬细胞凋亡和炎症因子表达的影响。方法构建动脉粥样硬化小鼠模型,RT-PCR和Western blot检测动脉粥样硬化组织中swiprosin-1的表达水平。用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理巨噬细胞THP-1、平滑肌细胞VSMC、内皮细胞EC-304,RT-PCR和Western blot检测swiprosin-1的表达水平。巨噬细胞THP-1转染swiprosin-1 siRNA和siRNA control,经ox-LDL处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达,ELISA检测培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量。结果 swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中的表达水平明显高于正常组织。swiprosin-1在ox-LDL处理后的巨噬细胞THP-1中表达水平最高,而在平滑肌细胞VSMC、内皮细胞EC-304中表达水平极低。ox-LDL处理后巨噬细胞THP-1凋亡率高达21.64%±1.88%,细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达水平升高,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6含量也明显升高。干扰swiprosin-1表达后的巨噬细胞THP-1经ox-LDL处理后凋亡率下降为15.25%±1.10%,细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达水平降低,细胞培养液上清中TNF-α、IL-6含量也明显下降。结论 swiprosin-1在动脉粥样硬化组织中表达升高,降低swiprosin-1表达能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡和巨噬细胞炎症因子分泌。     

N-乙酰半胱氨酸对毒胡萝卜素诱导的HepG2细胞内质网氧化应激凋亡的影响

目的 了解N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用.探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制.方法 用毒胡萝卜素(TC)诱导HepG2细胞,建立内质网应激凋亡模型,用NAC进行干预.噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪、DNA梯形电泳检测凋亡率及活性氧(ROS),Western印迹检测葡萄糖调节蛋白(GRP)78、Caspase-12酶原及ADP聚合酶(PARP)表达.多样本间均数采用方差分析.结果 用2μmol/L TG诱导HepG2细胞0、24、36和48 h,随诱导时间延长,细胞活力逐渐下降;GRP 78、Caspase-12酶原及PARP表达增高;凋亡率逐渐增加.分别是0.7%±0.5%、27.6%±6.3%、29.7%±3.03%和47.9%±3.5%(P<0.05);ROS产生逐渐增加,分别是14.0%±0.5%、36.1%±300%、38.2%±6.0%和48.3%±12.4%(P<0.05);诱导36、48 h后细胞出现典型DNA梯形条带.10 mmol/L、20 mmol/L NAC分别与2/μmol/L TG共同温育HepG2细胞后发现,NAC可明显提高细胞活力;抑制GRP 78、Caspase-12酶原及PARP表达,细胞凋亡率分别降至14.0%±1.3%和11.0%±0.3%;细胞内ROS的产生减至34.7%±0.8%与31.5%±2.9%.结论 TG作为一种内质网特异的钙离子ATP酶抑制剂,能触发HepG2细胞内质网氧化应激凋亡;而NAC作为巯基合成的前体.直接抑制氧自由基反应,阻断内质网氧化应激介导的细胞凋亡,减轻肝细胞损伤,达到临床治疗肝功能衰竭的作用.     

咖啡酸苯乙酯对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的抑制作用

目的研究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法用不同浓度CAPE预处理THP-1源性巨噬细胞2 h,再用40 mg/L ox-LDL处理24 h,ELISA检测炎症因子TNF-α,IL-6以及MCP-1的分泌情况;用40 mg/L ox-LDL分别处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Westernblot检测细胞COX-2蛋白表达的情况;最后,采用Western blot分析CAPE对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达、IκB-α降解及其NF-κB核转位的影响。结果 40 mg/L ox-LDL可诱导THP-1源性巨噬细胞TNF-α,IL-6以及MCP-1分泌增多,而CAPE明显抑制了ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌,呈浓度依赖性(P<0.05);随着ox-LDL处理时间的延长,THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达逐渐增高,以24 h最为明显(P<0.05),而CAPE能抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达上调,并可抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞IκB-α降解及其NF-κB核转位。结论 CAPE对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症因子分泌应具有抑制作用,作用机制可能与其抑制NF-κB激活,下调COX-2蛋白表达有关。     

氧化型低密度脂蛋白诱导分子伴侣GRP78在3T3-L1脂肪细胞中的表达

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导3T3-L1脂肪细胞内质网应激相关分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,探讨ox-LDL对脂肪细胞内质网应激的诱导作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,分别给予不同浓度ox-LDL(50,100,200μg/ml)及内质网应激阳性对照诱导剂衣霉素(Tun)处理。用RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达,筛选出最佳干预浓度,用最佳浓度的ox-LDL分别干预脂肪细胞6、12、24 h,分别用RT-PCR、Western印迹法检测GRP78 mRNA、蛋白表达情况。结果 ox-LDL呈浓度依赖方式诱导脂肪细胞GRP78表达,其表达强度随时间延长而增强,24 h达高峰(P<0.05)。结论 ox-LDL可诱导3T3-L1脂肪细胞发生内质网应激,促使未折叠蛋白反应信号通路的分子伴侣表达增加。     

芹黄素对布雷菲德菌素诱导的神经元样PC12细胞内质网应激途径的影响

目的探讨芹黄素对布雷菲德菌素(BF)A诱导的PC12分化细胞内质网应激(ERS)标志分子葡萄糖调节蛋白(GRP)48及ERS相关促凋亡因子C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)表达水平的影响。方法以神经生长因子(NGF)诱导PC12分化细胞作为模型,流式细胞仪检测不同浓度BFA诱导的PC12分化细胞凋亡情况,MTT法检测芹黄素及BFA作用后细胞存活率,PT-PCR及Western印迹检测芹黄素及BFA作用后GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平。结果 BFA(0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00μmol/L)可诱导PC12分化细胞凋亡,激活ERS凋亡途径。芹黄素(10.00、20.00、40.00μmol/L)预处理可使BFA(1μg/ml)诱导的细胞损伤减轻,使细胞存活率明显提高(P<0.05)。芹黄素(10.00、20.00μmol/L)可抑制BFA(1μg/ml)诱导的GRP78及CHOP表达上调(P<0.05)。结论芹黄素对BFA诱导的ERS损伤有保护作用,抑制GRP78/CHOP信号通路可能是其机制之一。     

脂联素依赖p38-MAPK途径抑制衣霉素诱导的内质网应激致心肌细胞凋亡

目的通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立衣霉素心肌细胞内质网应激损伤模型,观察脂联素对心肌细胞内质网应激致细胞凋亡的作用及其机制。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定。选用原代培养3～4天的心肌细胞,随机分为五组:对照组、1 mg/L衣霉素组、1 mg/L衣霉素+100 mg/L脂联素组、1 mg/L衣霉素+3μmol/LSB203580组及1 mg/L衣霉素+3μmol/L SB203580+100 mg/L脂联素组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,通过流式细胞术检测心肌细胞凋亡,用qRT-PCR及免疫荧光法检测内质网应激指标GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,给予衣霉素后,细胞凋亡率显著增加,GRP78和CHOP的mR-NA及蛋白表达增加。脂联素预处理后给予衣霉素,可较大程度地逆转上述指标变化,细胞凋亡率显著下降,GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达减少;而加用p38-MAPK抑制剂SB203580后脂联素的保护作用明显减弱,凋亡率显著增加,GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达增高,但较单纯衣霉素处理组凋亡率低,GRP78和CHOP的mRNA及蛋白表达也减少。结论衣霉素可使GRP78和CHOP表达增强,启动内质网应激,导致心肌细胞凋亡,脂联素可以通过减轻内质网应激逆转衣霉素所致的心肌细胞凋亡作用,对心肌细胞有保护作用,且这种保护作用部分是通过p38-MAPK途径实现的。     

内质网应激在PM2.5诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡中的作用

目的 本研究通过用PM2.5干预传代培养的大鼠肺泡巨噬细胞,检测细胞存活率、凋亡率,及内质网应激信号分子C/EBP同源蛋白(C/EBP honologus protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78 (glucoser regulated ptotein 78,GRP78)的mRNA相对表达量,探讨内质网应激在PM2.5诱导肺泡巨噬细胞凋亡过程中的作用.方法 用不同浓度的PM2.5干预传代培养的肺泡巨噬细胞(NR8383细胞),分6个浓度组(分别为H0:0 mg/L,空白对照组,加等体积的PBS液;H1:40 mg/L;H2:80 mg/L;H3:160 mg/L;H4:320 mg/L;H5:640 mg/L),经12h、24 h、48h3个时间后,用MTT法检测NR8383细胞的存活率,选择最佳的干预时间.将传代的NR8383细胞接种于6孔板,浓度组设置同MTT,每组设3个复孔(n=3),经最佳干预时间后,采用流式细胞术检测各浓度组细胞的早期凋亡率及总凋亡率,用RT-PCR法检测各浓度组CHOP mRNA、GRP78 mRNA的相对表达量.结果 PM2.5干预12 h后,H1组与H0组、H2组与H1组细胞存活率间的差异无统计学意义(P＞0.05),余组间差异有统计学意义(P＜0.05),且随干预浓度的增加,细胞存活率下降.干预24 h后,除H5组与H4组差异无统计学意义(P＞0.05),余各组细胞存活率的组间差异有统计学意义(P ＜0.05).干预48 h后,H4组与H3组及H5组与H4组差异无统计学意义(P＞0.05),余各组细胞存活率的组间差异有统计学意义(P ＜0.05).各浓度组在PM2.5环境中分别暴露12 h、24 h、48 h后,以暴露24 h后各浓度组间差异较12h、48 h明显,确定24h为最佳的干预时间.经不同浓度的PM2.5干预24 h后,H1组较H0组、H5组较H4组的细胞早期凋亡率无明显增加,差异无统计学意义(P＞0.05),余各组与H0组比较,细胞早期凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).干预24 h后,各浓度组的细胞总凋亡率较H0组均增加明显,且随干预浓度的增加,细胞凋亡率相应增加,组间差异有统计学意义(P ＜0.05).不同浓度PM2.5干预24 h后,H1组较H0组、H4组较H3组的GRP78 mRNA的相对表达量无明显增加,差异无统计学意义(P＞0.05),余各组与H0组比较,GRP78 mRNA的相对表达量均增加,组间差异有统计学意义(P＜0.05).干预24 h后,各浓度组的细胞CHOP mRNA的相对表达量较H0组增加明显,随干预浓度的增加,其相对表达量相应增加,组间差异有统计学意义(P ＜0.05).结论 PM2.5诱导NR8383细胞凋亡,内质网应激参与PM2.5诱导NR8383细胞凋亡的过程.     

黄芪多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞功能的影响

目的以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察不同浓度黄芪多糖对细胞活力和凋亡以及对胆固醇流出的影响。方法将THP-1细胞诱导分化成泡沫细胞，用不同浓度黄芪多糖对其干预24h，XTT法检测细胞活力，Annexin V／PI染色、caspase3活性检测观察细胞凋亡情况。γ计数仪检测胆固醇流出。结果黄芪多糖呈剂量依赖性（10—100μg／m1）诱导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡，抑制细胞活力；促进胆固醇流出。结论黄芪多糖可影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞活力，诱导凋亡，促进胆固醇流出。     

丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响

目的　观察丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响,并探讨其机制。方法　160　nmol/L　PMA孵育THP-1巨噬细胞24　h后,细胞分为三组：对照组、ox-LDL组（100　mg/L）和丹红组（100　mg/L　ox-LDL+30　mL/L丹红注射液）。高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,Western　blot检测细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）和肝X受体α（LXRα）的蛋白表达,定量　PCR　检测细胞ABCA1和LXRα的mRNA　表达。结果　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,显著降低细胞总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量,增加载脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ）介导的胆固醇流出,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和LXRα的表达。结论　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,可能与其促进LXRα-ABCA1途径介导的胆固醇流出有关。     

LYVE1+巨噬细胞在RA患者关节滑膜组织中表达变化及对RA-FLS细胞迁移、侵袭、FMT的抑制作用

目的 观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)⁺巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法 采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA)患者滑膜组织LYVE1、CD68进行定性、定量检测。取对数生长期人单核白血病细胞THP-1,在培养液中加入LYVE1过表达慢病毒,培养48 h获得表达LYVE1的THP-1细胞,在表达LYVE1的THP-1细胞中加入100 ng/mL的佛波酯(PMA)诱导培养48 h,获得LYVE1⁺巨噬细胞;另取部分THP-1细胞,仅加入100 ng/mL的PMA诱导培养48 h获得LYVE1^-巨噬细胞。取对数生长期人类风湿性关节炎成纤维细胞MH7A分为LYVE1⁺巨噬细胞组、LYVE1^-巨噬细胞组,分别加入LYVE1⁺巨噬细胞、LYVE1^-巨噬细胞,另将仅含培养基的小室设为空白对照组,采用划...     

结缔组织生长因子通过增强Caspase-3活性调节ox-LDL诱导THP-1细胞凋亡的机制

目的:研究动脉粥样硬化过程中结缔组织生长因子(CTGF)在巨噬细胞凋亡过程中发挥的作用及机制。方法:对人巨噬细胞(THP-1)分组进行干预,采用SiRNA基因沉默方法,对CTGF基因进行靶向沉默,用细胞流式、实时定量、蛋白印迹及酶活性检测等技术,阐明CTGF在氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1凋亡过程中起的作用及机制。结果:CTGF在ox-LDL刺激THP-1细胞组高表达,而CTGF靶向性SiRNA可以降低其表达;沉默CTGF后,THP-1凋亡率明显降低,并且与Caspase-3酶活性呈正相关。结论:内源性的CTGF可以通过增强Capsase-3酶活性来促进THP-1的凋亡。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用观察

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG-2细胞共同培养,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;采用Hoechst33258/PI染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果在25~100μg/ml的药物浓度作用下,细胞增殖被抑制。药物浓度在50μg/ml下作用48h,细胞抑制率达50.63%,药物浓度在75μg/ml下作用48h细胞,抑制率达77.62%。抑制率呈浓度和时间依赖性;药物浓度在50μg/ml时作用48h,可见HepG-2细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型的凋亡改变;随着黄芩苷作用浓度的增加,细胞凋亡率增高(P<0.05);随药物浓度的增加,Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量呈增加趋势,而Bcl-2表达减少。结论黄芩苷能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肝癌细胞增殖,其诱导凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

养心氏对巨噬细胞极化及活化的调节

目的以人单核细胞株THP-1细胞为基础,观察养心氏对THP-1源性巨噬细胞极化和活化的影响,为养心氏抗动脉粥样硬化机制提供理论依据。方法分别以不同浓度(10mg/L,25mg/L和50mg/L)的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激THP-1源性巨噬细胞24h,以空白为对照组,用ELISA法测定上清液中的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的浓度,用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD16及CD68的表达。用不同浓度的养心氏(10mg/L,50mg/L和100mg/L)预处理THP-1源性巨噬细胞12h,再用50mg/L的ox-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞24h,检测上清液中MIF、MCP-1的浓度以及CD16及CD68的表达情况。结果 ox-LDL能以剂量依赖的方式诱导THP-1源性巨噬细胞分泌MCP-1和MIF,其中50mg/L组表达最高,MCP-1(29.30±1.48)pg/mL,对照组为(5.71±1.94)pg/mL;MIF(18.67±0.15)ng/mL,对照组为(4.61±0.40)ng/mL(P0.01)。ox-LDL能改变巨噬细胞表面抗原CD16、CD68的表达,50mg/L组能显著下调CD16、CD68的表达(CD16:26.9vs对照组29.8;CD68:22.3vs对照组25.2)。养心氏能够以剂量依赖的方式抑制ox-LDL所致的THP-1源性巨噬细胞分泌MCP-1和MIF,随着养心氏刺激浓度的增加,MCP-1和MIF的分泌减少。结论养心氏可能通过抑制巨噬细胞炎性活化,抑制巨噬细胞向促炎表型转化进而抑制动脉粥样硬化的形成和发展。     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.     

血脂康对氧化型低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞凋亡的拮抗作用

目的研究血脂康对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养HUVEC,实验分为空白对照组、ox-LDL组、ox-LDL+不同浓度(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)血脂康组。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染细胞检测细胞凋亡,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧(ROS),蛋白免疫印迹分析细胞色素C(CytC)、Caspase-3和PARP-1蛋白的表达情况。结果血脂康(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)可拮抗ox-LDL诱导的HUVEC凋亡、ROS水平增加,100 mg/L血脂康可下调细胞CytC、Caspase-3和PARP-1蛋白的表达。结论血脂康可通过减少ROS形成而抑制CytC释放、减少Caspase-3和PARP-1活化抑制线粒体凋亡途径启动,拮抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡。     

葡萄糖调节蛋白78对单核巨噬细胞分化的影响

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对单核巨噬细胞分化的影响。方法:利用佛波酯(PMA)诱导形成THP-1单核细胞来源巨噬细胞模型。实验分为4组,分别为对照组(PMA浓度为50 ng/ml)、GRP78 10 ng/ml组(GRP78浓度10 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 20 ng/ml组(GRP78浓度20 ng/ml+PMA 50 ng/ml)、GRP78 40 ng/ml组(GRP78浓度40 ng/ml+PMA 50 ng/ml),培养72 h。应用流式细胞术检测巨噬细胞M1型特异表面标志物CD86、M2型特异表面标志物CD163的表达;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞M1型相关因子iNOS、M2型相关因子FIZZ-1、TGF-β、ARG-1及IL-10的mRNA表达。结果:与对照组比较,其他3组的CD163阳性巨噬细胞百分比显著增加(P0.01);而各实验组CD86阳性巨噬细胞百分比没有明显改变。与对照组相比,GRP78实验组中各组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平均有增加,其中GRP78 40 ng/ml组FIZZ-1、TGF-β的mRNA水平明显增高(P0.01);各组其他因子iNOS、IL-10和ARG-1的mRNA水平则没有明显变化。结论:GRP78可诱导THP-1单核巨噬细胞极化成M2型巨噬细胞。