TNF-α影响肝癌HepG2细胞表达B7-H1分子的研究

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人肝癌细胞B7-H1分子表达的影响。方法人肝癌HepG2细胞体外培养,经过不同浓度的TNF-α干预后,采用FCM检测细胞凋亡,RT-PCR检测B7-H1 mRNA的表达。结果不同浓度的TNF-α能促进HepG2细胞凋亡;干预后HepG2细胞的B7-H1基因表达明显增加。结论TNF-α能促进HepG2细胞凋亡,并且上调HepG2细胞B7-H1基因的表达。     

γ-干扰素诱导Jurkat细胞表达B7.1/CD80、B7.2/CD86分子

目的研究观察γ 干扰素 (γ IFN)诱导Jurkat细胞株表达B7.1、B7.2分子的作用。方法不同浓度的γ IFN体外孵育Jurkat细胞 48h后 ,流式细胞仪检测细胞表达B7.1、B7.2的百分率。结果与对照组相比 ,γ IFN在312 .5～ 10 0 0 0u/ml浓度下有轻微提高Jurkat淋巴白血病细胞表达B7.1、B7.2分子的作用。在 2 5 0 0u/ml浓度时达到高峰 ,B7.1的表达比对照组提高 3.47% ,B7.2表达提高 2 .39% ,B7.1与B7.2双表达提高 1.85 %。结论γ IFN可轻度诱导Jurkat细胞表达B7.1、B7.2分子     

麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制研究

目的:研究麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制.为临床抗肿瘤治疗提供理论依据.方法:MTT比色法检测人肝癌HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡及细胞周期变化;吖啶橙、Lyso-Tracker Red(溶酶体红色荧光探针)染色、HepG2-GFP-LC3转染细胞等检测细胞自噬;Western blotting(蛋白质印迹法)检测人肝癌HepG2细胞自噬信号通路中关键蛋白的变化.结果:人肝癌HepG2细胞的增殖被麦冬皂苷B抑制,而且麦冬皂苷B可诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬,但不诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可导致LC3I转变为LC3II和Beclin-1(自噬标志性蛋白)表达增加,自噬抑制剂3-MA几乎完全逆转其抗增殖作用.Western blotting检测结果表明,AKT、mTOR和p70S6K的磷酸化及PTEN上调是被麦冬皂苷B抑制的结果.结论:麦冬皂苷B通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬.     

HepG2细胞对丹酚酸B的摄取实验研究

目的研究丹酚酸B(SAB)在肝癌细胞中的摄取动力学特性。方法首先考察系列浓度SAB对HepG2细胞的毒性反应,确定SAB的安全浓度范围,然后建立UPLC-MS法检测SAB浓度,最后考察时间对HepG2细胞摄取SAB的影响,同时研究系列浓度的SAB作用于HepG2细胞后其摄取量,推算摄取动力学参数。结果 1～128μmol·L~(-1)浓度的SAB作用24 h对HepG2细胞活力无明显影响;作用20 min后HepG2细胞对SAB的摄取开始趋于饱和;系列浓度的SAB作用HepG2细胞10 min后,细胞摄取SAB的量亦随着SAB浓度增加而增加,摄取动力学参数Vmax和Km分别为(9.59±1.75)ng/(mL·min)和(24.91±8.59)mmol·L~(-1)。结论 HepG2细胞对SAB的摄取与时间及药物浓度相关,但尚不明确是主动摄取还是被动摄取过程。     

干扰素-γ通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究探讨干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。方法：通过流式细胞技术（FCM）检测干扰素-γ作用后的细胞凋亡情况及Fas、FasL表达情况。结果：MCF-7乳腺癌细胞经干扰素-γ作用后凋亡细胞百分率增加,FasL表达与对照组相比也增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,Fas表达无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：干扰素-γ可通过Fas/FasL诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。     

干扰素-γ对宫颈癌细胞免疫分子表达的影响

目的:研究干扰素-γ对宫颈癌细胞免疫分子表达的影响,探讨其在宫颈癌治疗中的免疫作用机制。方法:采用流式细胞术检测官颈癌细胞HLA-DR、CD80和CD40的表达。结果:干扰素-γ可增加宫颈癌细胞表面HLA DR和CD40的表达,对宫颈癌细胞表面CD80的表达无明显影响。结论:干扰素-γ抗肿瘤效应可能与上调宫颈癌细胞表面CD40和HLA DR分子表达有关。     

开口箭乙醇提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡活性研究

目的探讨开口箭根部乙醇提取物(ERT-95)对肝癌细胞HepG2生长的影响及其抗肿瘤作用的可能机制。方法采用MTT法绘制HepG2细胞生长曲线,检测ERT-95对HepG2细胞的生长抑制作用;采用光学显微镜观察HepG2细胞的凋亡形态变化;采用Hochest染色原理检测HepG2细胞凋亡情况;采用Western blot检测Cyt C蛋白的表达;采用caspase活性检测试剂盒检测caspase-3、caspase-9的活性变化;采用DNA ladder凝胶电泳技术检测DNA的裂解情况。结果 MTT结果显示,ERT-95对HepG2细胞的抑制作用呈剂量依赖性(IC50为52.57μg·mL-1);光学显微镜下,处理组细胞出现皱缩、变圆等形态变化;Hochest-33258染色后的处理组细胞呈现典型的凋亡结构;Western blot结果显示,随着药物浓度增加,Cyt C蛋白表达上调;caspase活性检测显示,caspase-3、caspase-9活性逐步升高;与对照组相比,处理组琼脂糖凝胶电泳图谱出现DNA条带。结论ERT-95有显著的体外促肿瘤细胞凋亡作用,初步研究其促肿瘤细胞凋亡机制是通过线粒体释放Cyt C,进一步活化caspase-9和caspase-3而激活内源性核酸内切酶,导致DNA裂解而实现的。     

阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达

目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化。结果经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌。IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量最高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量最高。结论Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞。B7在T细胞活化中起着重要作用。     

ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系中的表达及意义

目的探讨ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系中的表达及意义。方法应用Transwell(细胞体外侵袭实验)、WesternBlot检测在不同5-Fu剂量干扰下,HepG2肝癌细胞系中ANXA2、VEGF的表达及细胞侵袭力的变化。结果 Transwell检测HepG2肝癌细胞随着5-Fu剂量的增加侵袭力明显降低,各剂量组间差异具有统计学意义(P<0.05);WesternBlot方法检测HepG2肝癌细胞中ANXA2、VEGF蛋白质的表达随着5-Fu剂量的增加逐渐下降,各剂量组间差异具有显著统计学意义(P<0.01),且两者具有相关性r=0.856。结论 ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系的侵袭转移机制中可能具有协同促进作用。     

原因不明复发性流产患者外周血Th1/Th2与共刺激分子B7-1、B7-2的关系

目的探讨原因不明复发性流产患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2、辅助性T淋巴细胞1(Th1)及辅助性T淋巴细胞2(Th2)的表达水平,分析B7-1、B7-2与Th1/Th2比率的关系。方法流式法检测20例原因不明复发性流产女性(流产组)、19例正常妊娠女性(正常妊娠组)和15例正常未孕女性(正常未孕组)的Th1/Th2和B7-1、B7-2的表达水平。结果流产组Th1/Th2(15.8±4.2)、B7-1的表达水平(11.4±1.6)%,显著高于其余2组(P<0.01);流产组B7-2的表达水平(17.5±2.0)%,显著低于其余2组(P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-1的表达水平之间存在显著正相关(r=0.9136,P<0.01);流产组Th1/Th2与B7-2的表达水平之间存在显著负相关(r=-9571,P<0.01)。结论原因不明复发性流产患者B7-1、B7-2、Th1及Th2的表达水平显著异常,B7-1、B7-2与Th1/Th2比率显著相关,可能是原因不明复发性流产发生的重要原因。     

大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用

目的 观察大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用.方法 用不同浓度大蒜素处理对数生长期的人肝癌细胞HepG2.比色还原法检查4、8、16 h时HepG2细胞生长的抑制率;Hoechest荧光染色观察8 h时细胞形态的变化;JC-1检测40 mg/L大蒜素作用4 h后细胞线粒体跨膜电位的变化;免疫组化法检测经浓度为40 mg/L大蒜素作用4 h后其对细胞色素C的影响.结果 与无药阴性对照组比较,大蒜素能明显抑制HepG2细胞的增殖,且抑制率随浓度增加和作用时间延长而升高(P<0.01).Hoechst 33258荧光染色观察到细胞凋亡形态学特征.结论 大蒜素对人肝癌细胞株HepG2有明显的生长抑制作用,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡.这可能与其通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放有关.     

马钱子碱经JNK-Fas途径诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡

目的探讨马钱子碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法通过CCK-8法检测马钱子碱对HepG2细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术检测马钱子碱对HepG2细胞凋亡的影响以及Ca^(2+)的含量、激光共聚焦法观察Ca^(2+)的形态学分布情况、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测基因的表达情况。结果马钱子碱可以有效抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在一定范围内,随着时间的推移和浓度的增加,抑制率和凋亡率明显增加。马钱子碱作用于HepG2细胞后引起MKK7、JNK、Fas、FADD基因的变化,并最终引起Ca^(2+)的释放导致细胞溶解。结论马钱子碱对HepG2细胞有抑制生长的作用,并能诱导HepG2细胞发生凋亡。此过程通过JNKFas通路作用,最终引起细胞内Ca^(2+)的变化,诱导细胞发生凋亡。     

IFN-γ对白血病U937细胞株B7-H1表达的影响

目的探讨IFN-γ对白血病U937细胞株B7分子同源配体1(B7 homolog 1,B7-H1)表达的影响。方法采用不同剂量的IFN-γ处理U937细胞株48h后,分别采用免疫组化法、流式细胞术和实时荧光定量RT-PCR检测IFN-γ对U937细胞表达B7-H1的影响。结果①与对照组(IFN-γ0 ng/ml)比较,在蛋白水平,经不同浓度的IFN-γ(50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml)处理后的U937细胞B7-H1表达强度明显升高(P<0.001);而且B7-H1的表达水平与IFN-γ之间存在剂量效应关系。②在mRNA表达水平,IFN-γ能以剂量依赖性方式诱导U937细胞的B7-H1表达:IFN-γ50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml组B7-H1的表达水平较对照组分别升高了6.5、26和22.7倍。结论 IFN-γ以剂量依赖性方式上调U937细胞上B7-H1表达。     

HepG2细胞诱导下TCR Vα基因的选择性表达研究

目的研究HepG2细胞诱导下T细胞受体(TCR)Vα亚家族基因的选择性表达情况。方法将HepG2细胞与健康人外周血单个核细胞(PBMC)混合培养,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等检测混合培养前后TCR Vα各亚家族基因表达变化。结果混合培养不同时间TCR Vα各亚家族基因表达有一定的变化但并未筛选出针对HepG2细胞特异性表达的TCR Vα亚家族,HepG2和PBMC可能在混合培养96h时相互作用最大。结论在HepG2细胞诱导下,TCR Vα各亚家族基因有一定的选择性但没有明显的特异性表达。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘共刺激分子 B7-1和B7-2的研究

目的：探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘巨噬细胞共刺激分子B7-1、B7-2的表达水平,探讨B7-1、B7-2和B7-1/B7-2在发病中的作用。方法采集28例子痫前期患者（包括12例轻度和16例重度）,12例妊娠期高血压患者,12例正常妊娠妇女的胎盘巨噬细胞,用流式细胞技术分别测B7-1、B7-2的表达率。结果子痫前期患者B7-1/B7-2（0．75＆#177;0．13）均高于其余各组（ P ＜0．05）,子痫前期组胎盘B7-1（19．50＆#177;4．05％）高于其它各组（ P ＜0．05）,结论妊娠期高血压疾病患者胎盘局部B7-1的过度表达及B7-2和B7-1/B7-2失衡可能是其发生的重要原因。     

大黄素诱导人肝癌HepG2细胞线粒体凋亡作用研究

目的 研究大黄素对人肝癌HepG2细胞线粒体凋亡的影响。方法 培养人肝癌HepG2细胞,与5、10、20、40、60、80、100 μmol/L的大黄素作用24、48 h,MTS法检测细胞增殖;40、80、160 μmol/L大黄素作用HepG2细胞24 h,AO/EB双荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;Annexin V/PI染色经流式细胞仪检测细胞凋亡;分光光度法检测caspase 3活性;ATP试剂盒检测细胞ATP含量,不同荧光探针加载后流式细胞仪测定大黄素对HepG2细胞内活性氧（ROS）含量、Ca²⁺浓度、线粒体膜电位（MMP）变化的影响。结果 大黄素抑制HepG2细胞生长,且呈时间、浓度相关性,半数抑制浓度（IC₅₀）为（77.42±1.25）μmol/L;随着大黄素浓度升高,AO/EB双染观察到细胞核浓缩、碎裂、凋亡小体等凋亡形态;与对照组比较,大黄素40、80、160 μmol/L作用于HepG2细胞24 h后细胞凋亡率显著增加,caspase 3活性显著增强,ROS水平、Ca²⁺浓度明显增加（P<0.05、0.01、0.001）,80、160 μmol/L组线粒体膜电位明显降低,ATP含量显著下降（P<0.05、0.01、0.001）。结论 大黄素造成HepG2细胞内ROS堆积,ATP合成功能障碍,线粒体膜电位明显下降,进而诱导线粒体通透转运孔开放,导致钙离子和细胞色素C外流,活化caspase蛋白家族,导致细胞凋亡。     

硼酸钠活化p53诱导人肝癌细胞HepG2凋亡

目的观察硼酸钠(Borax)对人肝癌细胞株Hep G2的生长抑制和诱导凋亡的作用,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度硼酸钠对Hep G2活力的影响,DAPI染色荧光显微镜及Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测硼酸钠诱导细胞凋亡的情况。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测硼酸钠对肿瘤抑制因子p53及其下游基因Bcl-2、Bax、Noxa、Puma mRNA表达的影响。结果与对照组比较,硼酸钠各剂量组均能抑制Hep G2的活力(P<0.01);硼酸钠诱导Hep G2细胞凋亡,不同浓度硼酸钠(0、1.0、2.0、4.0 mmol/L)处理24 h后,晚期凋亡细胞百分比从2.57%分别增加至8.13%、10.4%、15.24%,差异有统计学意义(P<0.01);硼酸钠(4.0 mmol/L)分别作用6、12、24 h后,均可不同程度上调肿瘤抑制因子p53及促凋亡基因Bax、Noxa、Puma mRNA表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论硼酸钠抑制人肝癌细胞Hep G2的生长活性并诱导凋亡,其机制与p53的活化及其下游Bax、Noxa、Puma基因表达上调,以及Bcl-2表达下调有关。     

柴胡皂苷B2(Saikosaponin B2)对四氯化碳损伤HepG2细胞的保护作用

目的初步探讨柴胡皂苷B2(SSB2)对CCl4肝细胞损伤的保护作用。方法用CCl4诱肝HepG2细胞损伤,设立正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度SSB2保护组;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力以及流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的方法,观察SSB2对CCl4诱导的肝细胞损伤的保护作用。结果 MTT检测显示SSB2保护组细胞活性明显高于损伤组,以SSB2浓度为100μg/mL保护组细胞活性最高;流式细胞仪测定细胞凋亡率显示SSB2保护组(终浓度为100μg/mL)凋亡率明显低于CC14损伤组,细胞周期各期细胞分布比例无明显变化。结论 SSB2对CCl4诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用。