亚健康疲劳状态时血清对骨骼肌细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和线粒体能量负荷的影响

背景：前期研究表明亚健康疲劳者血清对体外培养骨骼肌细胞的生存活力和细胞超微结构具有显著影响代谢方面观察亚健康疲劳时血清对骨骼肌细胞的影响。目的：以亚健康状态时血清培养人骨骼肌细胞，观察线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和能量负荷的变化培养结果相比较。设计、时间及地点：对比观察实验，于2006—10／2007叭在南方医科大学中医证候研究实验室完成。实验进一步从能量并与健康状态血清材料：25～40岁符合中医相关男性亚健康疲劳状态诊断标准者10名，治疗前后采血分别制备亚健康疲劳状态血清和正常状态血清，人骨骼肌细胞购于美国Sciencell研究实验室。方法：将人骨骼肌细胞常规培养、细胞融合达80％以上时，按随机数字表法分为4组，20％亚健康状态血清组、30％亚健康状态血清组、20％正常状态血清组、30％正常状态血清组。分别用含不同浓度亚健康状态血清和正常状态血清DMEM／F12细胞培养液培养。主要观察指标：培养24，48，72h时，采用生物化学法和高效液相色谱法测定人骨骼肌细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷含量。结果：含20％亚健康状态血清和含20％，30％正常状态血清DMEM／F12细胞培养液培养人骨骼肌细胞在72h内，细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和能量负荷各时点差异均无显著性意义（P〉0．05），含30％亚健康状态血清DMEM／F12细胞培养液在培养人骨骼肌细胞48h和72h时，细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和能量负荷显著降低，与其他各时点比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。进一步分析显示，线粒体能量负荷与线粒体膜细胞色素C氧化酶活性呈正相关。结论：亚健康疲劳状态时血清可致人骨骼肌细胞呈现能量代谢障碍的表现。     

体外培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响

目的:探讨体外长期培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响.方法:制备原代和第7代体外培养的人皮肤角质形成细胞的总蛋白样品进行双向凝胶电泳.采用PDQuest图像分析软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行分析.串联飞行时间质谱鉴定选取的差异表达蛋白质点.半定量RT-PCR对差异表达蛋白质的mRNA水平进行确证.结果:获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,串联飞行时间质谱鉴定选取的2个在第7代角质形成细胞中表达显著下调的蛋白质分别为PA-FABP(psoriasis-associated fatty acid binding protein 5)和Galectin-7,半定量RT-PCR确证第7代角质形成细胞中PA-FABP和Galectin-7的基因转录水平较原代角质形成细胞相应的基因转录水平显著降低.结论:体外长期培养人皮肤角质形成细胞可能影响一些与细胞的脂肪酸代谢及细胞凋亡相关蛋白的表达.     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化◆

背景:肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤.目的:比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制.方法:应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15 min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析.结果与结论:相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白.结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15 min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变.     

利用双向凝胶电泳技术进行胃癌差异蛋白质组研究

目的:分离胃癌蛋白质组,找出胃癌组织的差异蛋白质点,为进一步鉴定胃癌的差异蛋白质打下基础。方法:利用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)分离胃癌组和正常胃粘膜对照组总蛋白质,并通过优化的计算机图像分析软件分析电泳图谱。结果:在胃癌组织中点检测共有蛋白质点1 147个,正常胃粘膜组织中点检测共有蛋白质点1 079个,发现两者间共有164个差异蛋白质点,其中41个点仅在胃癌组织中表达,27个点仅在正常胃粘膜中表达,39个点在胃癌组织中高表达,57个点在胃癌组织中低表达。结论:通过优化的双向凝胶电泳和图像分析技术对胃癌蛋白质组进行研究,获得了胃癌蛋白质组与正常对照组的差异蛋白质点。为进一步利用质谱分析技术做差异蛋白质鉴定奠定了基础。     

肝癌切除肝缺血再灌注损伤前后的蛋白质组学变化

背景：肝癌切除肝缺血再灌注损伤可促进微小转移灶的侵袭转移并引起线粒体损伤。目的：比较肝癌切除手术过程中肝正常组织缺血再灌注损伤前后蛋白质表达谱的改变,筛查发生肝缺血再灌注损伤应激的相关蛋白质分子标志物并探讨可能机制。方法：应用双向等电聚焦/聚丙烯酰胺凝胶电泳建立20例肝癌切除患者肝缺血再灌注前与灌注后15min肝正常组织的全细胞蛋白质和线粒体蛋白质表达图谱,并进行差异分析,应用基质辅助激光解吸离子化串联时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定,并进行生物信息学分析。结果与结论：相同条件下对各组全细胞和线粒体蛋白样品分别进行3次双向电泳,筛选在3次电泳中均存在的差异点进行分析,在全细胞蛋白质图谱中共鉴定出5个差异蛋白,在线粒体蛋白质图谱中未鉴定出明显的差异蛋白。结果可见肝癌切除手术过程中肝缺血再灌注15min即可使细胞骨架蛋白、热休克蛋白等细胞保护蛋白表达发生改变,同时有促进肿瘤转移的风险,需要采取预防措施降低影响,但线粒体蛋白表达基本未发生改变。     

早期诊断唐氏综合征的母体血清蛋白新标志物筛选与初探验证

目的 探讨经筛选与验证的唐氏综合征(DS)相关特异性母体血清蛋白新标志物的临床应用价值.方法 选取确诊为DS胎儿的孕中期(14 ～ 20周)母体血清7份(DS组)和同期正常胎儿母体血清7份(正常对照组)行二维凝胶电泳(2-DE),建立DS胎儿母体血清蛋白表达差异图谱,提取差异表达蛋白质点进行质谱分析.免疫印迹法(WB)验证部分差异蛋白的表达差异.采用近似t检验比较分析2组间相应蛋白条带的吸光度(A)值差异.结果 经2-DE和差异蛋白图谱分析,在DS组母体血清中共发现表达差异1.5倍以上的蛋白质点29个,其中表达上调的19个,表达下调的10个.表达差异2倍以上的8个蛋白质点经质谱分析,从美国国立生物技术信息中心( NCBI)蛋白质序列数据库中搜索为dGTP酶(dGTPase)和β2-糖蛋白Ⅰ(β2-GPI)等12个蛋白质分别与之匹配的可能性较大(概率得分＞66分).WB证实GTPase和β2 -GPI的A值在DS组分别为21 567.0±3009.4和22 097.0 ± 3958.9,在正常对照组分别为3957.7±250.9和1799.7±105.5,dGTP酶和β2-GPI在DS胎儿母体血清中比正常对照组显著高表达(t ' dGTPasc=- 17.66,t’β2 CPI=- 14.83,P均＜0.0001).结论 2 -DE和质谱技术是初步筛选DS相关特异性母体血清中新蛋白标志物的有效方法,经WB验证的dGTPase和β2 -GPI可能是筛选DS的新标志物.     

低剂量辐射后小鼠血清的蛋白质组学研究

本研究应用蛋白质组学方法探讨低剂量辐射对造血系统的作用机制，筛选与低剂量辐射作用机制相关的蛋白质，为低剂量辐射的临床应用提供实验依据和理论基础。利用双向凝胶电泳建立低剂量辐射后不同时间点小鼠外周血血清与假照射组蛋白质组二维凝胶电泳图谱，利用MALDI-TOF-MS生物质谱对差异表达的蛋白质进行鉴定分析。结果表明：低剂量照射后，与假照射组相比照射组新出现的蛋白点有4个，表达上调的蛋白点有13个，表达下调的蛋白点有6个，消失的蛋白点有3个。某些蛋白的表达在照射组不同时间点呈现动态的变化规律，经质谱鉴定发现雌激素受体在照射组表达下调，维生素D结合蛋白及载脂蛋白等在照射组表达上调。结论：低剂量辐射使血浆中某些蛋白表达上调或下调，并发现了一些与低剂量辐射作用机制相关的蛋白质。     

荧光双向凝胶电泳分析温热处理对K562细胞系蛋白质表达谱的影响

目的:观察温热处理对K562细胞蛋白质表达谱的影响.方法:将培养获得的K562细胞在41℃恒温处理1 h,以37℃作为对照,采用荧光双向凝胶电泳技术分离全细胞蛋白质,分子成像仪获取图像后软件分析差异表达的蛋白质点.结果:温热处理K562细胞与对照组细胞蛋白质表达谱分析比较差异表达蛋白质点数为65个,其中温热处理后表达上调的蛋白质点27个,下调的蛋白质点38个.结论:研究将为阐明热疗的分子基础提供可靠的实验依据,随着研究的深入必将推动基于热疗的肿瘤生物治疗的更大发展和广泛的临床应用.     

氯化钴作用人脐带间充质干细胞的差异蛋白质组学分析

目的 用蛋白质二维凝胶电泳图谱,结合质谱技术鉴定、分析化学低氧模拟剂氯化钴( CoCl2)作用人脐带间充质干细胞(MSC)前后蛋白质组的差异表达.方法 CoCl2作用人脐带MSC,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离细胞总蛋白.ImageMaster 2D Platinum软件分析差异蛋白质点,用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱对差异表达蛋白做质谱鉴定,对差异蛋白进行功能分类.结果建立了CoCl2作用人脐带MSC的蛋白质组图谱,鉴定出26个差异表达蛋白,其中11个表达上调,15个表达下调.其生物学功能涉及糖代谢、蛋白质代谢和修饰、脂类代谢、辅酶与辅基、细胞周期、免疫和防御、细胞结构和运动、信号转导、蛋白靶向和定位、神经细胞的活动、肌肉收缩等.其中过氧化物还原酶-1(Prdx1)表达下调,α-烯醇化酶(ENO1)、单胺囊泡转运蛋白1(VAT1)表达上调.结论 低氧对人脐带MSC的影响涉及多蛋白及多个功能通路.     

Tel／aml1阳性儿童急性淋巴细胞白血病细胞双向凝胶电泳分析

本研究采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术建立不同预后tel／atol1阳性儿童ALL白血病细胞的蛋白质表达谱,探讨此临床亚型儿童ALL的发生发展机制。根据初诊时白细胞数、早期治疗反应及临床预后将tel／aml1（＋）儿童ALL分为3组：早期复发组、高白细胞组和标危组。取初诊患者骨髓提取蛋白,通过双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行细胞蛋白质凝胶电泳,对组间差异蛋白进行图像分析。结果显示：不同组间将tel／aml1（＋）儿童蛋白表达谱存在显著差异（大于2倍或小于0．5倍）,具有统计学意义（P〈0．05）。早期复发病例与标危病例及初诊时高白细胞（〉100×10^9／L）病例相比,有71个蛋白点表达消失,93个新蛋白点出现,37个蛋白点表达上调,23个蛋白点表达下调;标危病例与初诊时高白细胞病例比较,有6个蛋白点表达消失,56个新蛋白点出现,7个蛋白点表达上调,19个蛋白点表达下调。结论：早期复发组病例蛋白表达谱与其他组别存在显著性差异,部分蛋白在儿童ALL的发生发展过程中具有重要作用,可能成为个体化治疗的新的分子指标和药物靶点。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感,不同性别孤独感发生率无差异性,不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）;随年级增加,孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970,P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题,老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童,以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。