异氟醚对PC12细胞株细胞周期与凋亡的影响

目的 探讨异氟醚对PC12细胞株细胞周期与凋亡的影响.方法 经神经生长因子孵育7d的神经元样PC12细胞,培养于25 cm2培养瓶,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=6):对照组(C组)和异氟醚组(Ⅰ组).C组正常培养,Ⅰ组用1.2％异氟醚处理12 h.采用倒置相差光学显微镜观察细胞形态;收集细胞,采用流式细胞术测定细胞凋亡率、细胞周期、线粒体膜电位(MMP)及胞浆钙离子浓度([Ca2+]i).结果 与C组比较,Ⅰ组G0/G1期细胞比例减少,S期和G2/M期细胞比例增加,细胞凋亡率增加,MMP降低,[Ca2+];增加(P＜0.05).Ⅰ组细胞形态发生损伤变化.结论 1.2％异氟醚处理神经元样PC12细胞12 h,可异常启动细胞周期,致细胞发生凋亡.     

异氟醚对老年大鼠脑组织神经元凋亡的影响

目的 探讨异氟醚对老年大鼠脑组织神经元凋亡的影响.方法 健康雌性老年SD大鼠90只,月龄22～24月,体重497～593 g,随机分为对照组(C组)、1.2%异氟醚组(Ⅰ1组)和1.8%异氟醚组(Ⅰ2组),每组30只.C组吸入含40%O2的空氧混合气体3 h;Ⅰ1组和Ⅰ2组分别吸入1.2%、1.8%异氟醚3 h维持麻醉.待翻正反射消失时各组随机取3只大鼠股动脉置管监测血液动力学,于股动脉置管后5 min、吸入异氟醚1、2、3 h时抽股动脉血行血气分析;大鼠苏醒后24 h时各组随机取12只行Morris水迷宫实验测试认知功能,历时7 d,记录逃避潜伏期;分别于苏醒后24、72 h及7 d时各组随机取5只大鼠断头处死取脑,采用TUNEL法检测海马及皮层区凋亡神经元,计算神经元凋亡率.结果 三组各时点血液动力学指标及血气分析结果 差异无统计学意义(P>0.05);与C组比较,Ⅰ1组和Ⅰ2组第2、3天逃避潜伏期延长(P<0.05或0.01),第4～6天差异无统计学意义(P>0.05),苏醒后24、72 h及7 d时皮层区神经元凋亡率升高(P<0.05或0.01).结论 吸入异氟醚可导致老年大鼠认知功能一过性降低,可能与其诱发大脑皮层区神经元凋亡有关.     

比较七氟醚、异氟醚和安氟醚对颅内压的影响

目的：为了观察七氟醚对颅内压的影响。方法：选择２４例颅内肿胶病人,测定七氟醚麻醉的时颅内压变化并与异氟醚和安氟醚进行比较。术前用药、麻醉诱导及维持的静脉用药相同。于Ｌ３－４穿刺蛛网膜睛腔测脑脊液压（代表颅内压,ＩＣＰ）。依吸入药不同随机分为七的氟醚（Ｓ）组,异氟醚（１）组和安氟醚（Ｅ）组,监测ＢＰ、ＭＡＰ、ＥＣＧ、ＳｐＯ２、ＰＥＴ、ＣＯ２和ＭＡＣ,调整ＶＴ和ＲＲａＣＯ２维持在４～４．６６ＫＰＡ。三     

地氟醚、七氟醚和异氟醚对犬冠脉血流的影响

目的：采用超声血流量监测仪观察地氟醚、七氟醚和异氟醚对犬冠脉血流的影响。方法：犬１８只，腹腔注射１．５％硫喷妥钠２０ｍｇ／ｋｇ，静脉注射阿曲库铵０．８ｍｇ／ｋｇ麻醉诱导，气管插管后取正中开胸，分离冠状动脉左前降支，将３ｍｍ或３．５ｍｍ超声Ｄｏｐｐｌｅｒ血管探头置于分离血管处，连接超声多普勒冠脉血流量监测仪测定冠脉血流量，然后随机吸入地氟醚、七氟醚或异氟醚，ＭＡＣ分别为７．２％、２．３％和１．２８％     

异氟醚预处理对谷氨酸诱导大鼠神经元样PC12细胞凋亡的影响

目的 探讨异氟醚预处理对谷氨酸诱导大鼠神经元样PC12细胞凋亡的影响.方法 神经生长因子孵育5d的神经元样PC12细胞,以5×104个/ml密度接种于6 cm培养皿(3 ml/皿)或6孔板(2ml/孔),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=18):正常对照组(C组)、谷氨酸组(G组)、谷氨酸+异氟醚组(GI组)和谷氨酸+异氟醚+三磷酸肌醇受体拮抗剂光溜海绵素组(GIX组).C组不做任何处理;G组、GI组和GIX组均加入500 μmol/L谷氨酸,GI组和GIX组通入1.2％异氟醚2h,停止通入后10 min加入谷氨酸,GIX组通入异氟醚前即刻加入光溜海绵素100 nmol/L.于谷氨酸孵育20 min时,每组取6皿和6孔,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(MMP),采用显微荧光测量技术检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]i).结果 与C组比较,G组和GIX组细胞凋亡率和[Ca2+]i升高,MMP降低(P＜0.01),GI组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与G组比较,GI组和GIX组细胞凋亡率和[Ca2+]i降低,MMP升高(P＜0.05或0.01);与GI组比较,GIX组细胞凋亡率和[Ca2+]i升高,MMP降低(P＜0.01).结论 异氟醚预处理可抑制大鼠神经元样PC12细胞凋亡,其机制与激活内质网三磷酸肌醇受体,抑制内质网释放Ca2+,提高MMP有关.     

七氟醚 异氟醚和安氟醚对离体兔胸主动脉环收缩功能的影响

目的：比较吸入麻醉药七氟醚、异氟醚和安氟醚对离体兔胸主动清脉环收缩功能的影响。方法：将取自２４只新西兰白兔的离体胸主动脉环随机分为七氟醚、异氟醚、安氟醚三组。衔用ＰＥ产生主动张力,稳定后分别吹入上述三种吸入麻醉药七氟醚记录不同浓度时的血管张力。结果：与基础值（麻醉药浓度为零时）相比,血管张力在三种吸入麻醉药２为１．０、１．５、２．０ＭＡＣ时均降低（Ｐ值分别小于０．０５、０．０５、０．０１）。安氟醚     

异氟醚和七氟醚麻醉对患者心率变异性的影响

目的研究异氟醚和七氟醚麻醉对患者心率变异性(HRV)的影响。方法60例择期颅脑手术患者,用动态心电图仪记录麻醉诱导前、插管后10 min、停药时、停药后1、2 h和4 h的HRV。结果ISO1组(异氟醚,年龄<60岁)和ISO2组(异氟醚,年龄≥60岁)插管后10 min、停药时、停药后1、2 h的低频功率(LF)、高频功率(HF)值均显著低于麻醉诱导前(P<0.05)。SEV1组(七氟醚,年龄<60岁)和SEV2组(七氟醚,年龄≥60岁)的LF、HF值在插管后10 min、停药时、停药后1 h均显著低于麻醉诱导前(P<0.05)。ISO组插管后各时点的LF、HF值均显著低于SEV组(P<0.05)。结论异氟醚对患者的交感神经和迷走神经都有明显的抑制作用,而对于交感神经和副交感神经活性的均衡性没有显著的影响。异氟醚对于交感神经和迷走神经的抑制作用比七氟醚更为明显。     

Bax对HCC-9204细胞系的凋亡及化疗敏感性的影响

目的研究Bax对HCC-9204细胞系凋亡和对阿霉素敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将Bax基因转入HCC-9204细胞中。免疫组织化学分析Bax在HCC-9204细胞中的表达,TUNEL及细胞周期分析细胞凋亡,MTT实验判断肿瘤细胞的活力。结果免疫组化结果显示转染Bax基因的HCC-9204/Bax细胞的Bax表达显著增加。TUNEL检测显示,HCC-9204/Bax细胞的凋亡指数在ZnSO4诱导后24、48h明显增加(3·6±5·3vs27·2±10·5,t=63·45,P<0·05;4·2±4·1vs32·3±8·6,t=93·27;P<0·05),流式细胞仪分析显示,诱导后48h出现显著的“亚二倍体峰”。MTT实验显示Bax基因的过表达能够降低阿霉素处理后的细胞活力,呈时间依赖性。结论Bax基因不仅可以诱导HCC-9204细胞的凋亡,而且能够增加HCC-9204细胞对阿霉素杀伤作用的敏感性。     

丹参对急性胰腺炎三磷酸肌醇及钙代谢的影响

目的 观察丹参对重症急性胰腺炎(SAP)时三磷酸肌醇(IP3)及钙代谢的影响.方法 30只SD大鼠随机等分为3组:SAP模型组(SAP组)、丹参治疗组(T组)和对照组(C组).SAP组和T组以3%牛磺胆酸钠诱发SAP模型,后者术后注射丹参.观察18 h各组胰腺细胞IP3和细胞内钙(Ca~(2+))、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、血清钙(血钙)和淀粉酶(AMY),以及胰腺的病理改变(PSP).结果 SAP组IP3、Ca~(2+)、TNF-α、AMY和PSP显著高于T组和C组(P<0.05),C组明显低于T组(P<0.05),且IP3与Ca~(2+)和TNF-α及后两者间呈明显正相关(P<0.05);血钙则是SAP组显著低于T组和C组(P<0.05),C组明显高于T组(P<0.05),IP3、Ca~(2+)和TNF-α与血钙为明显负相关(P<0.05).结论 丹参可抑制大鼠SAP时IP3释放,调节钙代谢,使胰腺病理损害减轻.     

毒扁豆碱对异氟醚麻醉大鼠炎性反应和认知功能的影响

目的探讨毒扁豆碱对异氟醚麻醉大鼠认知功能的影响及其机制。方法 2月龄SD大鼠80只,随机分为四组,每组20只。对照组(C组)吸入含有30%氧气的空氧混合气体6h;异氟醚组(I组)吸入1.4%的异氟醚6h;毒扁豆碱+异氟醚组(PI组)与毒扁豆碱组(P组)腹腔注射毒扁豆碱100μg/kg,每8小时一次,共3次。首次给药后,PI组吸入1.4%异氟醚6h;P组吸入同浓度载气6h。麻醉结束行动脉血气分析,12h后取海马组织,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6含量,RTPCR法检测capase-3mRNA的表达。光镜下观察海马CA1区锥体细胞形态学变化。麻醉后第2~7天评估认知功能。结果四组大鼠动脉血气指标、血糖和海马TNF-α含量差异均无统计学意义。与C组和P组比较,I组和PI组大鼠海马IL-1β、IL-6含量、capase-3mRNA明显升高,第4~6天逃避潜伏期明显延长,探索时间明显缩短(P0.05)。与I组比较,PI组大鼠海马IL-1β、IL-6含量、caspase-3mRNA表达明显降低,第4~6天逃避潜伏期明显缩短,探索时间明显延长(P0.05)。结论毒扁豆碱改善了异氟醚麻醉引起的大鼠认知功能损害,其机制可能与抑制海马炎性反应及神经元凋亡有关。     

转染可溶性CD40基因的树突状细胞在体外对T淋巴细胞功能的抑制作用

目的探讨转染可溶性CD40(sCD40)基因的树突状细胞(DC)在体外对T淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞毒活性的影响。方法采用脂质体转染法,将携带鼠CD40胞外区和绿色荧光蛋白的融合基因的质粒pEGFP-N1/sCD40转染小鼠DC细胞株(DC 2.4)。以Balb/c小鼠淋巴细胞为反应细胞,分别以转染组DC、空载体转染组(空载体组)DC和未行转染处理的DC(空白DC)作为刺激细胞,进行单向混合淋巴细胞培养,四唑氮化合物比色法检测细胞增殖情况。用乳酸脱氢酶释放试验和流式细胞术检测转染组DC及其培养上清液对CTL细胞毒活性及其凋亡的影响。结果转染组DC及其培养上清液对同种细胞刺激的淋巴细胞增殖反应有显著的抑制作用(P<0.05),并对特异性CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用(P<0.05);转染组DC可诱导CTL凋亡(P<0.05)。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋白的DC,在体外对T淋巴细胞的增殖和CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用,并可诱导CTL凋亡。     

大鼠肝脏冷灌注保存中肝细胞凋亡及其调控基因的研究

目的 通过检测凋亡细胞计数及凋亡相关基因bax和Fas的表达，探讨细胞凋亡及其相关基因在冷灌注保存大鼠肝脏组织中的作用。方法 本研究采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法（TUNEL法）及RT-PCR，按照供肝保存时间30、60、90、120、180、300min分为6组进行凋亡细胞计数及其相关基因的检测。结果 不同保存时间大鼠肝脏组织中均有凋亡细胞发生，随着时间延长，凋亡细胞计数呈进行性增加趋势；未检测到bcl-2的表达，但可明显检测到bax和Fas基因的表达。结论 在冷灌注保存肝组织中，细胞凋亡是早期细胞死亡的主要原因之一。细胞凋亡的发生可能与bax和Fas的高表达以及bcl-2的低表达有关。     

Ganciclovir对转导HyTK基因人膀胱癌EJ细胞DNA含量的影响

目的了解ＨｙＴＫ基因转移联合Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对人膀胱癌细胞的杀伤作用。方法采用５７０型粘附式细胞激光定量分析筛选仪测定ＧＣＶ作用下人膀胱癌细胞株ＥＪ细胞、转导ＨｙＴＫ基因的ＥＪ细胞（ＥＪ／ＴＫ）ＤＮＡ含量的变化。结果实验组ＥＪ／ＴＫ细胞ＤＮＡ平均荧光值１５９２０８±１８０７０,明显低于对照组２０４７１７±２２８４１（Ｐ＜０００１）;而ＥＪ细胞ＤＮＡ平均荧光值实验组为２２４６０６±２３４．６６,对照组为２２３２９７±２５２．０８,两组间差异无显著性（Ｐ＞０５）。结论ＧＣＶ作用能明显降低转导ＨｙＴＫ基因ＥＪ细胞（ＥＪ／ＴＫ）的ＤＮＡ含量,提示ＨｙＴＫ基因转移联合ＧＣＶ对膀胱癌细胞有杀伤作用     

转染RhoA基因对树突状细胞抗胃癌功能的影响

目的 研究转染RhoA基因对树突状细胞(DC)免疫功能的影响,观察修饰后的DC在体外诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应.方法 用增强型绿色荧光蛋白标记的RhoA重组腺病毒载体作为介质,将RhoA基因转染入DC,用RT-PCR法检测培养上清RhoA基因的表达.检测这种DC分泌细胞因子IL-12、TNF-α的功能,以及表面分子CD1α、CD83、MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达,用MTT法诱导人特异的细胞毒性T淋巴细胞的能力. 结果培养上清中均可以检测到RhoA基因表达;在这种转基因DC的上清中IL-12、TNF-α 含量分别为(301±24)和(418±64)pg/ml,明显比非转染的DC组高,P＜0.05;转基因DC表面高表达CD1α(70.13±0.03)、CD83(68.10±0.03)、MHC-Ⅱ(69.73±0.13)、CD80(78.73±0.25)、CD86(74.20±0.05),而在非转染的DC中是低表达的;经转染RhoA基因的DC提呈的T细胞对胃癌细胞的杀伤率为87%,而未修饰的DC杀伤作用较低. 结论RhoA基因转染修饰的DC能诱导细胞毒性T淋巴细胞的特异性,显著地提高DC的抗原提呈功能,在体外能诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应.     

Effect of hepatitis B virus X gene on apoptosis and immune molecules of renal tubular epithelial cells

Objective To investigate the effect of hepatitis B virus X (HBX) gene on apoptosis and immune molecules of human proximal renal tubular epithelial cell line (HK-2). Methods The eukaryotic vector pcDNA3.1-myc-HBX containing HBX gene was transiently transfected into HK-2 cells by lipofectamine mediation. Untransfected HK-2 cells and those transfected with empty vector were used as controls. The TLR4 expression was detected by real-time PCR and Western blotting. The apoptosis of cells and expression of MHC-Ⅱ and CD40 were detected by flow cytometry, and the contents of IL-4 and IFN-γ in the supernatant were detected by ELISA. Results Compared with control groups, the number of apoptotic cells was significantly increased in the HBX transfection group (P＜0.05), and the expressions of TLR4, MHC-Ⅱ and CD40 were also significantly increased in the HBX transfection group (all P＜0.05). IFN-γ level in the supernatant of HBX transfection group was higher (P＜0.05), but IL-4 level was lower as compared to control groups (all P＜0.05). Conclusions Over-expression of HBX gene may induce apoptosis of HK-2 cells and up-regulate the expression of immune molecules of renal tubular epithelial cells leading to injury of cells and dysfunction of immunomicroenviroment.