卵巢上皮-间质肿瘤中B7-H3、B7-H4的表达及临床病理意义

目的探讨B7-H3、B7-H4在卵巢上皮-间质肿瘤中的表达及其临床病理意义。方法用RT-PCR技术及免疫组化PV9000两步法研究86例卵巢恶性上皮-间质肿瘤(恶性组),40例卵巢交界性上皮-间质肿瘤(交界组)和40例卵巢良性上皮-间质肿瘤(良性组)B7-H3与B7-H4mRNA及蛋白表达情况,并结合临床病理参数进行分析。结果 B7-H3、B7-H4mRNA在3组卵巢肿瘤组织中均有表达,且各自的3组卵巢肿瘤组织的mRNA光密度值差异均有统计学意义(P<0.05);B7-H3与B7-H4蛋白在恶性组中均呈细胞质和(或)细胞膜表达,其中B7-H3阳性率为81.4%(70/86),明显高于交界组22.5%(9/40)和良性组5.0%(2/40)的表达,差异有统计学意义(P<0.05);B7-H4阳性率为77.9%(67/86),明显高于交界组35.0%(14/40)和良性组5.0%(2/40)的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。恶性组的卵巢癌组织中B7-H3蛋白在非黏液性卵巢癌中较黏液性卵巢癌高表达,差异有显著性(P<0.01),与临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。B7-H4蛋白表达与组织病理学类型、临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 B7-H3与B7-H4在卵巢恶性上皮-间质肿瘤表达提示其可能与肿瘤的发生、发展有关,可为卵巢恶性肿瘤的诊断及治疗提供新的依据。     

B7-H4在人胶质瘤组织中的表达及其临床意义

 目的： 探讨B7-H4在人胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法： HE染色分析了150例胶质瘤标本病理级别。免疫组化方法检测B7-H4在胶质瘤中的表达, 并分析其与临床病理参数及生存时间的关系。结果： HE染色检测150例胶质瘤标本病理级别,结果为I级12 例,II级50 例,III级39 例,IV级49 例。150例胶质瘤标本中97例B7-H4高表达,高表达率为64.7％,居于病理级别III～IV级;43例B7-H4低表达,低表达率为28.7%,居于病理级别I～II级。统计学分析提示组织标本中B7-H4的表达与年龄(P<0.01)和病理级别(P<0.01)存在明显相关,与肿瘤的部位没有显著相关性（P>0.05）。B7-H4阳性患者生存期更短（P<0.01）,多因素Cox 回归分析显示B7-H4、年龄、性别及病理级别均是胶质瘤患者的独立预后因素。结论： B7-H4在多数胶质瘤组织中表达较高,可作为脑胶质瘤患者的独立预后分子标志物和新的治疗靶点。     

B7家族的新成员—B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC

T细胞的活化需要TCR与抗原肽-MHC的第一信号，以及共刺激因子的第二信号系统。B7家族是重要的共刺激分子，属于免疫球蛋白家族。除B7-1和B7-2外，近几年又发现了B7家族的新成员——B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC等，与T、B细胞的活化及免疫应答等有关。深入研究B7家族成员的结构和作用机制，有助于T、B细胞活化机制以及免疫耐受、肿瘤免疫研究的深入和发展。     

B7家族的新成员-B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC

T细胞的活化需要TCR与抗原肽-MHC的第一信号,以及共刺激因子的第二信号系统.B7家族是重要的共刺激分子,属于免疫球蛋白家族.除B7-1和B7-2外,近几年又发现了B7家族的新成员--B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC等,与T、B细胞的活化及免疫应答等有关.深入研究B7家族成员的结构和作用机制,有助于T、B细胞活化机制以及免疫耐受、肿瘤免疫研究的深入和发展.     

协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达及定位

探讨负性协同刺激分子B7-H4在胃癌组织及浸润免疫细胞亚群中的表达及定位。应用免疫组织化学、免疫荧光染色及激光共聚焦技术检测B7-H4蛋白在胃癌组织中的表达及定位;流式细胞术检测分析胃癌患者PBMC亚群(CD3+T细胞、CD19+B细胞、CD14+单核细胞及粒细胞)中B7-H4的表达。免疫组织化学检测结果表明,B7-H4在胃癌组织中呈阳性表达。免疫荧光染色及激光共聚焦检测结果显示,B7-H4在胃癌组织中呈阳性表达,并主要定位于胃癌细胞的细胞膜,特别是在Ki67+高度增殖的胃癌细胞中B7-H4呈高表达,且B7-H4在CD34+血管内皮细胞中呈高表达;B7-H4在浸润CD19+B细胞和CD68+巨噬细胞中呈高表达;而在胃癌浸润CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD57+NK细胞中呈弱表达。流式细胞术检测结果表明,B7-H4在胃癌患者外周血浸润CD19+B细胞及粒细胞中呈阳性表达,而在浸润CD3+T细胞及CD14+单核细胞中呈弱表达。本研究结果提示B7-H4在胃癌组织中可表达于肿瘤细胞和部分浸润免疫细胞,并可通过其介导的信号途径参与胃癌的发生与发展。检测B7-H4的表达可作为潜在的胃癌诊断、治疗及预后判断的新靶点。     

免疫检查点分子PD-L1和B7-H4在卵巢癌组织中的表达及意义北大核心

为探讨免疫检查点分子PD-L1和B7-H4在卵巢癌组织中的表达特点以及临床意义,收集46例手术切除的卵巢癌组织,通过免疫组化染色技术检测PD-L1和B7-H4分子的表达水平和定位,采用χ2检验分析其与样本临床参数之间的关系,Spearman法分析相关性。结果显示,PD-L1和B7-H4分子在卵巢癌组织内中/高表达所占百分比分别为67.4%(31/46)和82.6%(38/46),二者同时中/高表达率为58.7%(27/46)。膜PD-L1中/高表达与病理类型、分化程度有关(P<0.05),膜B7-H4中/高表达与病理类型有关(P<0.05);膜PD-L1与膜B7-H4的表达有相关性(r=0.553,P<0.05),浆PD-L1和浆B7-H4的表达有相关性(r=0.429,P<0.05)。该研究提示,卵巢癌组织中癌细胞膜表面PD-L1中/高表达提示肿瘤分化差,胞膜同时中/高表达PD-L1和B7-H4分子主要集中在卵巢透明细胞癌亚组,PD-L1与B7-H4在胞膜和胞浆的表达具有相关性,在免疫治疗卵巢癌时需考虑PD-L1和B7-H4抗体联合靶向干预。     

B7家族PD-L1和B7-H4的研究进展

“协同刺激信号”的提出很好地解释了免疫系统对自身和外源性抗原的不同调节机制.B7家族作为唯一能从抗原提呈细胞传递信号给T细胞的共刺激分子,其与相应配体结合在调节免疫反应、炎症及癌症中都起着重要作用.对于B7家族成员在免疫反应中的调节机制仍然不甚清楚,本文综述了程序性死亡配体1(PD-L1)、B7-H4的生物学功能及其与疾病的关系.     

B7-H4在类风湿关节炎组织内的表达及分布研究

为探讨共刺激分子B7-H4在牛Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的类风湿关节炎(CIA)模型小鼠免疫器官、关节及RA患者滑膜组织内的表达,使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立小鼠类风湿关节炎模型.免疫组化检测B7-H4的表达变化,结果证实小鼠的胸腺、脾脏及淋巴结中有大量的B7-H4阳性细胞,免疫荧光分析结果表明这些B7-H4+...     

B7-H4--B7家族的又一新成员

在T细胞活化和耐受的免疫调节中，B7-CD28家族成员介导的T淋巴细胞共刺激信号传导途径起着至关重要的作用。它们不仅在启动、增强和维持T细胞应答中提供了关键的正性信号，而且还可提供重要的负性信号来限制、终止或削弱T细胞的免疫应答。鉴此在病毒感染、肿瘤、移植免疫排斥以及自身免疫性疾病过程中适当地调节或干预这些共刺激信号，将有助于这些疾病的治疗及改善疾病症状。     

鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的:研制鼠抗人B7-H4分子的单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性。方法:以高表达人B7-H4分子的转基因细胞L929/B7-H4为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交技术,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选、多次克隆化培养,获得两株可特异分泌鼠抗人B7-H4分子mAb的杂交瘤细胞株。采用快速定性试纸分析法鉴定mAb所属的Ig亚类。用Dot-blot、Western blot鉴定mAb的特异性,竞争结合抑制实验鉴定mAb所识别的抗原结合位点,T细胞增殖抑制阻断实验对mAb的生物学功能进行初步的鉴定。结果:获得两株持续、稳定地分泌抗B7-H4 mAb的杂交瘤细胞,分别命名为1F10和2B2。Dot-blot的结果显示,两株mAb均能特异性识别B7-H4分子。Westernblot检测显示,mAb 2B2可以特异性识别B7-H4分子,而mAb 1F10则不能识别。位点竞争实验表明,两株mAb之间,mAb 1F10与商品化的mAb H74之间识别位点不同,mAb 2B2与商品化mAb识别位点相近。T细胞增殖抑制阻断试验显示,这两株mAb均能一定程度地阻断B7-H4对T细胞的抑制作用。结论:成功地获得两株抗人B7-H4分子的mAb,为进一步研究B7-H4分子的生物学功能提供了有效的工具。     

可溶性B7-H4在早期胃癌中的诊断价值探讨

目的:探讨可溶性B7-H4(soluble B7-H4,sB7-H4)在早期胃癌中的诊断价值。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测80例早期胃癌患者与50例正常人血清sB7-H4水平,用化学发光法检测血清CEA、CA19-9水平,利用受试者工作特性曲线(ROC),比较分析sB7-H4作为早期胃癌血清标志物的诊断价值。结果:早期胃癌患者血清sB7-H4水平(47.61±13.57)ng/ml明显高于正常人(30.62±8.65)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.01)。sB7-H4在早期胃癌诊断中的灵敏度(81.25%)和准确性(78.46%)均高于CEA及CA19-9,特异性(74%)低于CEA及A199。结论:sB7-H4在早期胃癌诊断中具有良好的临床应用前景,联合检测sB7-H4、CEA和CA19-9可提高胃癌的诊断率。     

B7-H4实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在人胃癌组织中的初步应用

目的建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织。方法将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19-T,构建重组质粒标准品,并纯化、定量及梯度稀释,分别建立B7-H4和GAPDH的标准曲线,应用实时荧光定量PCR检测8例人胃癌组织中的B7-H4相对于GAPDH的表达情况。结果 B7-H4的最低检测拷贝数为5.27拷贝,线性范围5.27×101~5.27×107拷贝,标准曲线方程y=–3.1395x+41.805,直线回归相关系数r=0.994904,批间变异系数范围2.39%~3.59%,扩增效率108.2%;GAPDH的最低检测拷贝数为38.6拷贝,线性范围3.86×102~3.86×107拷贝,标准曲线方程y=–3.2436x+41.083,直线回归相关系数r=0.998913,批间变异系数范围2.26%~3.86%,扩增效率103.4%。8例人胃癌组织的B7-H4相对于GAPDHmRNA表达水平在0.044~0.888之间。结论荧光定量PCR检测B7-H4的方法具备较高的敏感性和特异性,且系统有良好的重复性和线性范围。     

血清可溶性B7-H4在淋巴瘤患者诊断中的临床意义

目的：探讨血清可溶性B7-H4（sB7-H4）在淋巴瘤患者检测中的临床意义。方法：用ELISA夹心法检测52例淋巴瘤患者与50例健康者血清sB7-H4水平。结果：霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤患者血清sB7-H4水平分别为（45.66±12.48μg/L、50.24±14.52μg/L）明显高于健康者水平（26.47±10.35μg/L）,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：sB7-H4与淋巴瘤的发病有关,对淋巴瘤的辅助诊断具有一定的临床意义。     

新型共刺激分子B7-H4在肿瘤免疫中的研究进展

B7-H4是共刺激分子B7家族的最新成员,是B7家族相关的第3个T细胞抗原特异性反应的负性调控分子,在CD4^＋、CD8^＋T细胞的分化发育、细胞周期的进展以及细胞因子的产生方面发挥广泛的抑制效应。B7-H4途径在器官特异性自身免疫病、病毒感染、移植耐受和肿瘤免疫逃避等方面可能具有重要的作用,因而对B7-H4在肿瘤免疫逃避中发挥的作用的深人研究可以为肿瘤的生物学诊断及治疗策略提供一个新的方向。     

人结肠直肠癌组织中B7-H1的表达及其临床意义

探讨共刺激分子B7-H1在人结肠直肠癌组织中的表达及其意义。运用免疫组织化学SP法检测B7-H1分子在60例结肠直肠癌组织中的表达,并对其表达水平与结肠直肠癌临床病理参数之间的关系进行相关性分析。结果显示,B7-H1分子在结肠直肠癌组织中的阳性表达显著高于正常结肠直肠组织(P<0.01);B7-H1在结肠直肠癌组织中阳性表达率为60%,与患者性别、年龄、肿瘤组织的类型、分级和分期无关(P>0.05),而与淋巴结是否转移显著相关(P<0.01)。B7-H1在结肠直肠癌组织中的高表达,可能在肿瘤的发生、发展中起到一定作用,有望成为结肠直肠癌免疫治疗的一个新靶点。     

负性共刺激分子B7-H4在结直肠癌及其微环境中的表达及临床意义

负性共刺激分子B7-H4是新近发现的B7家族的新成员。为了检测人结直肠癌组织中肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)上B7-H4的表达以及分析巨噬细胞、T淋巴细胞及其亚群的浸润,进而探讨其相关临床意义,本课题采用免疫组化SP法检测98例人结直肠癌组织中肿瘤细胞及浸润淋巴细胞上B7-H4的表达以及巨噬细胞、T细胞及其亚群的浸润,统计学分析B7-H4的表达与患者临床病理参数、预后、肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated mac-rophage,TAM)以及CD3+T细胞、CD8+T细胞浸润程度的相关性。结果显示,结直肠癌组织中高表达B7-H4分子,而正常组织中基本不表达,并且在肿瘤细胞及浸润淋巴细胞中均检测到B7-H4的表达。统计学分析表明,浸润淋巴细胞中B7-H4的表达与患者年龄、有无淋巴结转移、是否为粘液腺癌有关(P<0.05),与患者总体生存率呈负相关(P<0.05),且B7-H4高表达组织较B7-H4低表达组织CD3+T细胞高度浸润例数显著增加(P<0.05);肠癌细胞中B7-H4的表达与患者肿瘤分期、淋巴结转移、有无远处转移以及Dukes分期有关(P<0.05)。综上所述,人结直肠癌患者的肠癌细胞及浸润淋巴细胞较正常细胞均异常表达B7-H4分子,CD3+T细胞的浸润程度与浸润淋巴细胞中B7-H4的表达呈显著相关而与肿瘤细胞上B7-H4的表达无关,而肿瘤细胞表达B7-H4与肿瘤分期、淋巴结转移、有无远处转移以及Dukes分期有关。上述结果提示肿瘤细胞表达B7-H4与浸润淋巴细胞表达B7-H4可能分别以不同机制参与了肿瘤的发生和进展,进一步分析肿瘤组织中B7-H4在不同细胞表达的生物学和临床意义具有重要的价值。     

小鼠B7-H4慢病毒表达载体的构建及对脾细胞增殖的影响

目的:构建小鼠B7-H4(mB7-H4)慢病毒表达载体并观察B7-H4蛋白对脾细胞增殖的影响。方法:从BALB/c小鼠肺脏中克隆B7-H4基因,构建表达载体mB7-H4-EGFP,酶切后克隆入慢病毒表达载体pCDH1-MCS1-EF1-Puro中,命名为pCDH1-mB7-H4-EGFP;以包含起始密码和多克隆位点的寡核苷酸取代mB7-H4作为对照载体pCDH1-Control-EGFP。分别与包装载体混合物一起经LipofectamineTM2000转染入293T细胞包装成病毒颗粒,感染293T细胞。pCDH1-mB7-H4-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞分别与BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)小鼠脾细胞混合培养,用MTT法检测其对脾细胞增殖的影响,对照为pCDH1-Con-trol-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞进行的相同处理。结果:mB7-H4被成功克隆,测序证实与GenBank的mRNA核酸序列2个核苷酸有差异,但与其编码的氨基酸一致。pCDH1-mB7-H4-EGFP慢病毒表达载体被成功构建。mB7-H4蛋白表达在293T细胞表面,与对照相比,对BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)小鼠脾细胞增殖均具有明显抑制作用。结论:成功构建小鼠B7-H4慢病毒表达载体,感染293T细胞后表达出对脾细胞增殖具有抑制活性的mB7-H4膜表面蛋白。     

B7-H4基因对SKOV3细胞生长功能的影响

目的： 初步探讨B7-H4基因对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长和致瘤性的影响。方法：RT-PCR法扩增编码基因, 构建真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,以脂质体为载体将重组质粒PEGFP-N1和PEGFP-N1/B7-H4分别导入SKOV3细胞中,筛选建立高表达的细胞株。MTT法绘制体外培养细胞生长曲线,将转染前后的肿瘤细胞分别接种于SCID小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。结果：成功构建了人B7-H4真核表达载体,SKOV3/B7-H4细胞高表达B7-H4,转染后肿瘤细胞体外生长速度明显增快。SKOV3/B7-H4细胞在小鼠体内的致瘤性较SKOV3/neo细胞和野生型SKOV3细胞明显升高。结论： B7-H4基因导入细胞后在体外和体内具有明显加快肿瘤生长的作用,可作为肿瘤基因治疗的靶向基因。     

可溶性B7-H3在人脑创伤合并骨折愈合中的表达及意义

目的检测外周血中可溶性B7-H3在脑创伤合并骨折,单纯骨折和单纯脑损伤患者中的表达,并研究其对间充质干细胞分化为成骨细胞的作用。方法 ELISA检测可溶性B7-H3及骨折愈合的标志物Cbfa1在脑创伤合并骨折、单纯骨折,单纯脑创伤和正常志愿者外周血中的表达,茜素红、real-time PCR检测不同浓度重组B7-H3蛋白对间充质干细胞向成骨细胞分化的作用。结果可溶性B7-H3在脑创伤合并骨折及单纯脑创伤患者中的表达明显高于单纯骨折和正常人中的表达;可溶性B7-H3在外周血中的含量与脑创伤严重程度相关;重组B7-H3蛋白可促进间充质干细胞向成骨细胞的分化,并随着质量浓度的升高其促分化能力增强。结论脑创伤导致的外周血中升高的可溶性B7-H3促进了骨折愈合。     

胰腺癌B7-H4与相关血清肿瘤标志物的预后价值研究

目的:分析胰腺癌患者肿瘤组织B7-H4表达水平与术前血清中癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)199及CA242等肿瘤标志物表达水平的相关性,同时探讨其在胰腺癌中的临床应用价值。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体免疫组化染色方法测定188例胰腺癌患者手术切除组织中B7-H4表达水平。同时利用电化学发光法检测术前血清中CEA、CA199及CA242浓度。结果:胰腺癌患者术前血清CEA水平与胰腺癌原发灶、淋巴结及远端转移分期(TNM)及远端转移相关(P<0.05)。胰腺癌患者术前血清CA199及CA242水平与胰腺癌患者年龄及远端转移相关(P<0.05)。CA199与术后生存期相关(P<0.05)。胰腺癌患者肿瘤组织B7-H4表达水平与血清CEA表达存在显著正相关(P<0.05),与其他肿瘤标志物之间无显著相关性(P>0.05)。在胰腺癌患者术后6个月生存的预测分析中,B7-H4染色积分的曲线下面积(AUC)明显高于CEA和CA242(P<0.05);B7-H4染色积分联合术前血清CA199的AUC明显高于术前血清CA199(P<0.05),而与B...