大鼠急性脑损伤后神经元类凋亡的观察

目的：观察急性脑损伤后神经元凋亡现象。方法：以大鼠急性弥漫性脑创伤模型为研究对象，采用光镜、电镜观察方法对模型的损伤情况进行组织、细胞形态观察；以DNA－梯形凝胶电泳、凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）对急性脑损伤后鼠脑皮层、海马区神经元DNA损伤情况进行观察。结果：大鼠致伤后，光镜下观察到神经元出现皱缩变性；电锏 上观察发现，伤后2h可观察到神经元类凋亡，24h最为严重，持续到7d；DNA－梯形凝胶电泳显示伤后24h海马及皮层区出现DNA梯状电泳；神经元TUNEL染色伤后2h即可见，24h最为明显，7d时仍高于正常。结论：大鼠急性脑创伤后脑组织中存在神经元类凋亡现象，并在创伤后较长时间内持续存在。     

弥漫性轴索损伤对神经元影响的实验研究

目的　探讨弥漫性轴索损伤后迟发性神经元损伤的病理变化。方法　以大鼠视神经牵拉损伤模型为研究对象 ,采用光镜、电镜方法对模型的损伤情况进行形态学观察 ;以TUNEL法对神经元DNA损伤情况进行观察。结果　光镜下观察见神经元数量减少和空泡化 ;电镜下观察见神经元凋亡 ,在伤后 5天最严重 ;TUNEL法见 1～ 3天陆续出现TUNEL染色阳性细胞 ,5天达到高峰 ,7天仍然存在大量阳性细胞。结论　弥漫性轴索损伤后可引起迟发性神经元死亡 ,以凋亡为主 ,持续时间较长。     

人脑创伤后神经元凋亡及调节机制的观察

目的：观察人类急性脑创伤后迟发性神经元死亡现象，了解调节人类神经元凋亡的机制及相关基因表达变化，为临床治疗迟发性神经元死亡寻找新的方法。方法：收集急性脑创伤患者脑标本，采用光镜、电镜以及凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）观察创伤后神经元DNA损伤情况；用原位杂交、免疫组化法观察bcl-2、bax、p53、caspase-3 p20亚单位在mRNA与蛋白质水平表达变化。结果：人脑创伤后有细胞凋亡现象发生，24h左右最为明显。正常人脑组织中几乎没有bcl-2、p53 mRNA及蛋白以及活化的caspase-3存在。急性创伤后bcl-2、p53 mRNA及蛋白表达增加；caspase-3被激活。正常人脑组织持续性表达高水平bax mRNA及蛋白，创伤后bax mRNA及蛋白表达升高。结论：人脑创伤后有细胞凋亡现象发生。人脑创伤造成bcl-2、bax、p53 mRNA及蛋白表达增加；caspase-3酶活性增加。     

高压氧对急性CO中毒大鼠迟发型脑损伤的影响

目的探讨一氧化碳（CO）中毒迟发性脑损伤的病理机制，及高压氧治疗对迟发性脑损伤的作用，为临床治疗提供实验依据。方法参照Ischiropoulos的方法制备急性CO中毒动物模型。采用组织病理学、免疫组织化学等方法检测大鼠染毒后1、3、5、7、14、21d等各时间点脑组织病理改变的特点并与高压氧治疗组比较，以此评价高压氧的治疗作用。通过原位末端转移酶标记（TUNEL）技术方法进行细胞凋亡的检测，观察急性CO中毒及高压氧治疗后神经元凋亡的发生情况。结果急性CO中毒大鼠脑内发生广泛的病理损伤，中毒组大鼠脑皮质、海马和纹状体等部位神经元出现变性坏死，其中大脑皮质、海马等部位损伤较重。TUNEL染色表明，CO中毒大鼠海马神经元发生凋亡，凋亡神经元从染毒后第3天开始显著增加，第7天达到高峰（P〈0．01），以后逐渐减少。CO中毒动物，高压氧治疗组与非治疗组比，脑内神经元变性坏死明显较轻，各时间点海马区损伤均较轻；凋亡神经元数目较少，尤以CO中毒后第5天和第7天明显（P〈0．01）。高压氧促进CO中毒大鼠海马区Bcl-2蛋白表达，尤以CO暴露后第3、5天明显（P〈0．01）。结论急性CO中毒大鼠出现广泛的迟发性神经元损伤，表现为迟发的神经元坏死和凋亡。高压氧治疗可以有效减少神经元变性坏死，促进凋亡抑制基因Bcl-2表达，从而抑制神经元坏死和凋亡。     

大鼠实验性脑震荡的病变规律和神经细胞凋亡研究

采用Wistar大鼠复制脑震荡动物模型，于伤后1，3，7，14及30天活杀取脑组织，经光镜，电镜和原位末端标记等技术研究脑震荡的病变规律及神经细胞凋亡情况。结果显示，100g砝码于1m处撞击大鼠头部可复制大鼠脑震荡的模型，其基本病变为脑血管扩张，淤血，出血，脑组织水肿，神经元变性，凋亡和坏死，尼氏体减少甚至消失。伤后1－3天，脑组织呈点状坏死，周围组织疏松，单核及泡沫样细胞增多，神经元变性，凋亡和坏死。7天脑水肿达高，海马锥体细胞减少，呈极度缺血性改变，14－30天内仍见血管扩张，淤血，可见出血，水肿好转。原位末端标记显示，伤后1天见凋亡细胞增多，3天数量达高峰，伤后30天凋亡的神经元持续存在。结果显示，脑震荡以血液循环障碍和实质细胞变性，凋亡和坏死为主要病理改变；神经细胞凋亡是脑震荡神经元迟发性损害的主要形式之一。     

急性CO中毒大鼠脑的病理改变及白细胞介素-1β,γ-干扰素表达的免疫组化研究

目的 研究大鼠急性一氧化碳中毒（ACOP）后脑中自细胞介素。1β（IL-1β）、 γ-干扰素（γ-IFN）表达的特点。方法体重240-280g雄性SD大鼠，经预实验确定染毒剂量，于动物实验高压氧舱内行急性一氧化碳（CO）暴露，于染毒后3，7，10，20d取脑组织，常规制备石蜡病理切片，行HE染色及IL-1β，γ-IFN免疫组化染色，观察ACOP后大鼠脑皮质及海马神经元的病理性改变及脑中IL-1β，γ-IFN表达的情况。结果 病理学检查发现，与对照组相比，CO暴露组大鼠染毒后3—20d脑中皮质及海马有明显的神经元变性坏死，以7和10d最为明显，免疫组化染色发现HE染色显示的神经元变形坏死区域有大量神经元细胞和胶质细胞表达IL-1β，γ-IFN。结论 ACOP后大鼠脑中出现IL-1β，γ-IFN的迟发性表达，CD4’T淋巴细胞介导的免疫炎症反应可能参与了ACOP后迟发性神经元损伤的过程。     

大耳白兔蛛网膜下腔出血神经元细胞凋亡的研究

 目的证实大耳白兔蛛网膜下腔出血后存在着不同程度的神经细胞凋亡现象,初步探讨其发生机制.方法电镜观察神经细胞的超微结构变化,TUNEL原位标记凋亡的神经细胞,免疫组化技术和图像分析技术检测神经元细胞内Bcl-2/Bax蛋白表达.结果蛛网膜下腔出血组电镜观察出现典型凋亡超微结构特征,TUNEL染色可见不同程度的神经细胞凋亡阳性反应,Bcl-2/Bax表达在各组中存在显著性差异(P＜0.05).结论蛛网膜下腔出血出现迟发性神经元死亡(Delayed neuron death,DND),凋亡是DND形式之一,Bcl-2/Bax基因发生重要调控作用.     

缺糖缺氧对体外培养海马神经元的影响

脑缺血-缺氧性神经元死亡有坏死和凋亡两种不同的细胞死亡过程,具有不同的分子生化机制,对缺血-缺氧引起神经元凋亡或坏死的不同病理过程的评价直接影响到缺血-缺氧性脑血管疾病的治疗策略,因此,它是近年来神经研究领域极为关注的问题。目前用于区分神经元坏死和凋亡常用台盼蓝染色和TUNEL染色两种方法。本文用图像分析仪的多视场多参数形态定量分析模块对培养海马神经元缺糖缺氧后台盼蓝和TUNEL染色阳性神经元进行定量分析,使凋亡、坏死和正常神经元得以较正确区分。观察缺糖缺氧诱导培养海马神经元损伤。作者取培养12d的海马神经元,在…     

脑创伤后nNOS和iNOS对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的 探讨大鼠脑创伤后神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOs)的神经毒性作用机制及7-硝基吲唑(7-NI)和氨基胍(AG)的治疗作用.方法 雄性成年Wistar大鼠250只,随机分为5组(假手术组、创伤组、AG治疗组、7-NI治疗组、AG+7-NI联合治疗组),每组又分为伤后1、3、6、12h及1、3、7、14d共8个时相点.采用Marmatou法制作大鼠重型弥漫性颅脑创伤模型,免疫组织化学法检测海马CA1区nNOS和iNOS表达情况,TUNEL法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡情况,双标染色观察细胞凋亡与nNOS、iNOS的关系.结果 创伤组海马CA1区nNOS表达在伤后6h达高峰,iNOS表达及细胞凋亡在伤后3d达高峰,各治疗组凋亡细胞均有不同程度的减少.伤后6h创伤组TUNEL与nNOS共阳性细胞较多,应用7-M后共阳性细胞明显减少.伤后3d创伤组TUNEL与iNOS共阳性细胞较多,应用AG后共阳性细胞明显减少.结论 大鼠脑创伤后nNOS和iNOS的过度表达对大脑神经组织具有毒性作用,是海马CA1区神经细胞凋亡的原因之一.7-NI和AG可抑制nNOS和iNOS的活性,减少神经细胞凋亡,从而起到神经保护作用.     

大鼠轴索损伤后视网膜神经节细胞和少突胶质细胞内Tau蛋白的表达

目的 观察大鼠轴索损伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)及少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)内Tau蛋白表达的变化,探讨Tau蛋白与轴索损伤后病理变化的关系. 方法 光镜下观察正常对照组、单纯视神经牵拉伤组、单纯热应激处理组和热应激预处理牵拉伤组大鼠视神经、RGCs、OLs的形态学变化,免疫组化染色检测各组大鼠RGCs及OLs中Tau蛋白的表达情况. 结果 牵拉伤后视神经轴索、RGCs及OLs的形态发生明显的病理变化,热应激预处理再致伤后上述病理改变有显著改善.单纯牵拉伤可使RGCs及OLs中Tan蛋白的表达增加,单纯热应激处理后Tau蛋白的表达不受影响,热应激预处理后再致伤使Tau蛋白的表达明显减弱. 结论 神经元及神经胶质细胞共同参与了轴索损伤后的病理过程.Tau蛋白表达变化可能与迟发性轴索断裂及迟发性神经元凋亡有关.热应激能使Tau蛋白表达减弱和延后,减轻细胞骨架的损害.     

大鼠脑创伤后bcl-xL和bax mRNA的表达改变

目的探讨脑创伤后bcl-x     

体外培养大鼠胚胎脊髓神经元损伤前后的凋亡变化

目的研究体外培养脊髓神经元损伤前后的凋亡变化,进一步探讨中枢神经损伤的分子机制。方法取孕14天的Wistar大鼠脊髓神经元进行培养,划痕损伤神经元突起,对神经元损伤前后的凋亡变化进行观察。结果损伤前后体外培养脊髓神经元凋亡数量有明显差异,损伤前几乎未见凋亡的神经元,损伤后1天凋亡神经元最多,损伤后3天凋亡神经元也明显增多,损伤后5天凋亡神经元呈明显下降的趋势,损伤后7天凋亡神经元又开始增多。结论了解体外培养脊髓神经元损伤前后细胞凋的规律,为脊髓神经元损伤后给予干预措施的实验研究奠定了基础。     

氧自由基-线粒体信号通路在Edaravone治疗创伤性脑创伤中的作用

目的 探讨创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后在抗氧化剂Edaravone干预下大鼠大脑皮质凋亡相关蛋白表达改变情况并探讨氧自由基-线粒体信号通路在Edaravone治疗创伤性脑创伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠180只随机分为TBI组、Edaravone治疗组和对照组.每组设伤后1,3,6,24,48,72 h 6个时相点.Edaravone治疗组给予Edaravone(10 mg/kg),对照组、TBI组给予等量等渗盐水.HE染色观察大鼠TBI后皮层神经元的病理改变.免疫组化和TUNEL法以及硫代巴比妥酸缩合法观察不同时相点大鼠皮层Cyt-c、Bcl-2和Bax的表达情况,细胞凋亡和丙二醛(MDA)变化情况.结果 HE染色可见创伤后6 h大脑皮质出现散在变性坏死神经元,伤后24 h达高峰.Edaravone治疗组伤后6 h即可检测到自由基中间产物丙二醛(MDA)的升高,与对照组相比,48 h达高峰.与TBI组相比,MDA含量各时相点均降低,其中在24,48和72 h差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,TBI组Cytc阳性细胞免疫反应6 h增强,24 h达高峰,在3,6,24,48和72 h差异有统计学意义(P＜0.05).与TBI组相比,Edaravone治疗组Ctyc阳性细胞免疫反应在24,48和72 h降低.Bcl-2表达在伤后应激性增高,于3 h达高峰,以后逐渐下降.Bax在伤后表达逐渐增高,于48 h达高峰,Bax/Bcl-2于48 h达高峰.TBI后,TUNEL阳性细胞数逐渐增多,24 h以前以TUNEL Ⅰ型细胞为主,24 h后以Ⅱ型细胞为主,并于48 h达高峰.结论 大鼠TBI后皮质神经细胞死亡存在坏死和凋亡两种方式,以凋亡为主.氧自由基-线粒体是TBI后神经细胞凋亡的信号转导通路中的一条.Edaravone对TBI有治疗作用.     

脑外伤后氧化应激对神经细胞凋亡及c-myc蛋白表达的影响

目的　探讨氧化应激对脑损伤后神经细胞凋亡和c -myc蛋白表达的影响及c -myc基因在脑损伤神经细胞凋亡中的作用。　方法　 90只SD大鼠液压冲击致脑损伤后 ,随机分成两组 ,实验组给予单甲氧基聚乙二醇 -超氧化物歧化酶 (monomethoxypolyethleneglycolmodified -SOD ,MPEG -SOD) ,对照组给予等渗盐水 ,分别于伤后 3,12 ,2 4 ,4 8,72h采用原位末端标记法 (TdT -med iatedbiotinylated -dUTPnickendlabeling ,TUNEL)检测脑损伤区神经细胞凋亡 ,流式细胞仪检测神经细胞凋亡率 ;免疫组织化学法检测c-myc蛋白的表达。　结果　大鼠脑损伤后 3h ,在实验组和对照组均可检测到神经细胞的凋亡和c-myc蛋白的表达 ,至 2 4～ 4 8h达到高峰。实验组神经细胞凋亡率和c -myc蛋白的灰度明显较对照组低 (P <0 .0 1)。TUNEL阳性细胞数和c -myc蛋白灰度具有明显的相关性 (实验组r=0 .92 ,对照组r =0 .84 ,P <0 .0 1)。　结论　脑损伤后氧化应激诱导神经细胞凋亡和c -myc蛋白表达 ;c -myc蛋白可促进脑损伤后神经细胞凋亡     

NF-κB在大鼠颅脑损伤后表达水平与细胞凋亡的关系

目的 探讨颅脑损伤后不同阶段NF-κB及其下游炎症因子与神经元凋亡的共变关系及可能的机制. 方法采用随机数字表法将大鼠分为颅脑损伤组、颅脑损伤+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组和假手术对照组,并在处理后6,24,168 h分别用免疫组化、RT-PCR、TUNEL法测定脑组织NF-κB、TNF-α和神经元凋亡水平. 结果在颅脑损伤后急性、亚急性期,颅脑损伤组损伤灶周围脑组织中NF-κB、TNF-α较假手术对照组和PDTC组表达明显增高,与神经元凋亡指数呈正相关;在颅脑损伤晚期颅脑拟伤组损伤灶周围脑组织中NF-κB、TNF-α表达有所下降,但仍高于假手术对照组和PDTC组,与神经元凋亡指数呈负相关. 结论 NF-κB和下游炎症因子可能在颅脑损伤后急性、亚急性期有促进神经元凋亡作用,在慢性期有抑制神经元凋亡作用.     

高压氧治疗对大鼠脑挫裂伤后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响

目的探讨高压氧(HBO)对创伤性脑损伤的治疗作用与对细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响之间的关系。方法制作SD大鼠自由落体脑挫裂伤动物模型,设立HBO治疗组和对照组,分别应用透射电镜、原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞技术对各组动物脑挫伤灶旁和海马结构的细胞凋亡情况进行检测;使用WesternBlot和免疫组化方法,检测bcl-2和Bax蛋白在脑组织中的表达情况。结果脑外伤后存在细胞凋亡,细胞凋亡的发生在伤后24h达到高峰,HBO治疗组在伤后24h和48h细胞凋亡发生率低于相应的对照组(P<0.05);脑挫裂伤灶和海马结构bcl-2蛋白的表达均增强,HBO治疗组bcl-2的表达强于对照组(P<0.05),而Bax的表达在各组间差异无统计学意义。结论HBO治疗对创伤性脑损伤后细胞凋亡的发生及凋亡相关蛋白的表达有影响,抑制细胞凋亡很可能是HBO对创伤性脑损伤治疗作用的重要机制。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的观察大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡现象。应用垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)观察其对损伤后大鼠神经细胞凋亡的影响。方法采用TBI模型,运用原位末端标记(Tunel)技术,观察大鼠中度脑损伤后2小时～3天伤侧大脑皮层、海马神经细胞凋亡情况。结果(1)Tunel染色:伤侧大脑半球广泛存在细胞凋亡,以受伤区周缘为甚,伤后2小时即可见凋亡细胞,2～3天达高峰。(2)PACAP治疗后12小时～3天,伤侧皮层、海马区细胞凋亡数与损伤组比较明显减少(P<0.05)。结论大鼠TBI后,神经元在发生变性、坏死的同时,存在凋亡现象。PACAP能阻滞大鼠TBI后神经细胞的凋亡,具有脑保护作用。     

大鼠重型脑伤后一氧化氮/诱生型一氧化氮合酶神经细胞毒性的作用机制

目的 探讨大鼠创伤性脑损伤后一氧化氮／诱生型一氧化氮合酶（ＮＯ／ｉＮＯＳ）神经细胞毒性作用机制。方法 将雄性ＳＤ大鼠１５０只随机分为假手术组、重离伤对照组、左旋精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）治疗组、伤后６ｈ ｉＮＯＳ抑制剂氨基胍（ＡＧ）治疗组、伤后１２ｈ ＡＧ治疗组。采有向位素标记法和免疫组化双酶双标技术,研究大鼠重型脑伤后ｉＮＯＳ活性变化及其细胞定位,观察ｉＮＯＳ抑制剂氨基胍（ＡＧ）及其作用底物Ｌ－Ａｒｇ