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相似文献
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1.
铁剥夺对白血病细胞凋亡相关基因表达的影响   总被引:7,自引:6,他引:1  
目的 探讨去铁胺 (DFO)对白血病细胞K562凋亡相关基因表达的影响及其可能分子机制。方法 采用RT PCR法分析Rb及c myc基因在RNA水平变化。结果 DFO 50 μmol/L及 1 0 0 μmol/L作用于K562细胞 2 4h及 48h ,Rb及c mycmRNA水平较空白对照组增加 (P <0 .0 5) ,且以 1 0 0 μmol/L组增加明显。 结论 铁剥夺剂使K562细胞Rb及c mycmRNA表达增加可能是其诱导白血病细胞凋亡的机制之一。  相似文献   

2.
目的探讨去铁胺(DFO)对白血病细胞K562动态铁池(LIP)、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法实验分为DFO组、DFO 三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测K562细胞LIP改变、流式细胞术观察K562细胞凋亡和RT-PCR测定K562细胞c-myc、Rbb、ax mRNA表达。结果1.不同浓度的DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度增加,LIP降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。2.不同浓度的DFO作用于K562不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05);3.RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、Rb和bax mRNA表达(P<0.05)。结论DFO可诱导K562细胞凋亡;其诱导K562细胞凋亡作用可能与其螯合细胞内铁,降低细胞LIP,上调细胞凋亡相关基因c-myc、Rb、bax mRNA表达密切相关。  相似文献   

3.
铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活的实验研究   总被引:2,自引:2,他引:2  
目的观察铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活间的关系。方法以不同水平的去铁胺(DFO)处理K562细胞。1.用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)对K562细胞进行双标记后,在流式细胞仪下检测细胞凋亡率。2.采用肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测Caspase-3活性。3.用Western blot分析Caspase-3活性蛋白的激活。结果K562细胞经不同浓度DFO处理后,细胞发生明显凋亡,Caspase-3活性渐升高。50、100μmol/L DFO作用于K562细胞24 h后,Caspase-3酶活性升高明显;与对照组比较,有显著性差异(P<0.001);在100μmol/L浓度下14 h可见活性Caspase-3,Caspase-3活性和量为时间-剂量依赖性;10、12 h各浓度组间Caspase-3活性水平比较,差异均无显著性(P均>0.05)。上述作用可被等摩尔浓度的氯化铁(FeCl3)抵消。结论铁剥夺可能通过螯合细胞内铁,激活Caspase-3,诱导K562细胞凋亡。  相似文献   

4.
铁剥夺对 DNR诱导 K562细胞多药耐药基因表达的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 探讨铁剥夺对柔红霉素(DNR)诱导多药耐药基因MDR1表达的影响。方法 以柔红霉素单用或联合应用去铁胺(DFO)或二氯化铁(FeCl3)为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT—PCR法、流式细胞分析技术,检测K562细胞多药耐药基因信使核糖核酸(MDR1mRNA)和P-糖蛋白(Pgp)表达的情况。结果 ①与空白对照组相比,柔红霉素(1μmol/L)作用24h可使MDR1/Pgp表达增加(P〈0.05);②与单用DNR组相比,DFO可显著抑制柔红霉素诱导的MDR1/Pgp的表达,而FeCl3的作用相反(P〈0.05)。结论 柔红霉素短期作用可诱导MDR1表达,提示化疗药本身的诱导作用在肿瘤多药耐药产生中发挥重要作用。铁剥夺可减少柔红霉素诱导的MDRI/PgP表达,而FeCl3的作用相反,提示铁剥夺有可能成为阻止或降低白血病化疗耐药的新的措施之一,而白血病化疗患者补铁应慎重。  相似文献   

5.
铁对白血病细胞HL-60线粒体膜电位及凋亡的影响   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的研究铁对人白血病细胞HL-60线粒体膜电位(ΔΨm)及凋亡影响,探讨其可能机制。方法HL-60细胞分别与10、50、100μmol/L去铁胺(DFO)和10、100μmol/L三氯化铁(FeCl3)共培养,分别造成细胞内铁剥夺和富铁状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同铁状态下细胞活力变化;相差显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率及ΔΨm变化;原位杂交法检测凋亡基因Bax转录水平。结果DFO组细胞生长率呈下降趋势,而FeCl3组细胞生长率呈上升趋势;HL-60细胞经DFO处理后,细胞凋亡率增加、ΔΨm下降(P<0.01);100μmol/L DFO作用细胞244、8 h后,凋亡基因Bax的转录水平均较对照组增高(P<0.01)。FeCl3组细胞ΔΨm及Bax转录无明显变化,但凋亡率较对照组略下降。结论铁剥夺可降低ΔΨm,诱导HL-60细胞凋亡;而富铁对细胞ΔΨm无明显影响,但可增强细胞活力,使细胞凋亡率下降。  相似文献   

6.
人参皂甙对人白血病-60细胞凋亡的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨人参皂甙对白血病细胞的致凋亡作用及其相关作用机制。方法:采用MTT细胞毒实验检测不同浓度(100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625 μmol/L)人参皂甙对人白血病-60(HL-60)细胞的生长抑制活性;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)人参皂甙诱导HL-60细胞凋亡情况;提取各种浓度人参皂甙处理的细胞总蛋白,Western blot检测caspase-8、caspase-9和caspase-3裂解情况;Western blot检测10 μmol/L人参皂甙处理HL-60细胞后caspase-8和caspase-9 抑制剂对caspase-3 裂解情况的影响。结果:人参皂甙对白血病HL-60细胞具有高效的细胞毒作用,IC50值为7.3±1.2 μmol/L;0、5、10、20 μmol/L 人参皂甙处理HL-60细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡率呈剂量依赖性,各处理组之间差异有统计学意义(F=12.67,P<0.01);Western blot检测细胞中caspase-9和caspase-3出现裂解带,而caspase-8未出现裂解带;10 μmol/L人参皂甙诱导caspase-3裂解可以被caspase-9的特异性抑制剂Z-LEHD-FMK所抑制,而caspase-8的特异性抑制剂Z-IETD-FMK却没有这一作用。结论:人参皂甙对人白血病HL-60细胞具有高效的致凋亡作用,激活线粒体凋亡途径可能是其致凋亡的主要作用机制。  相似文献   

7.
目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导白血病 K562 细胞凋亡的作用及其机制。方法:采用 Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度及不同作用时间 DADS 对 K562 细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测DADS作用48 h后 Fas、FasL、caspase-8 mRNA的表达。结果:DADS可诱导K562 细胞凋亡。DADS(作用细胞24 h)浓度从10 mg/L增至40 mg/L时,其对K562细胞的凋亡率由(11.60±0.83)%增至(37.94±0.87)%;DADS(40 mg/L浓度组)作用时间从24 h增至72 h,其对K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)% 增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增加 (P<0.05)。DADS作用48 h后,Fas、caspase-8 mRNA 表达水平较对照组上调;FasL mRNA 较对照组下调(P<0.05)。结论:DADS 呈时间和浓度依赖性诱导白血病K562 细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调 Fas、caspase-8,下调 FasL有关。  相似文献   

8.
铁剥夺抗K562细胞的增殖作用及机制   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的观察铁剥夺对白血病细胞增殖的影响。方法以K562细胞作为人类白血病细胞株,台盼蓝染色,光镜下计数活细胞率;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测A值(570nm),绘制生长曲线;流式细胞术分析细胞周期变化。结果小剂量去铁胺(DFO)(12.5μmol/L)处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,随时间延长和DFO剂量增加(25、50、100μmol/L),细胞存活率明显下降,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO的抗增殖活性为时间-剂量依赖型。用DFO(50、100μmol/L)处理K562细胞48和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异(Pa〈0.001)。上述作用可被等浓度的三氯化铁抵消。结论铁剥夺具有抗白血病细胞增殖作用,剥夺细胞内铁,阻止细胞由G0/G1期进入S期可能是其机制之一。  相似文献   

9.
目的 探讨去铁胺对柔红霉素(DNR)诱导多药耐药基因MDR1及核因子KB(NFκB)表达的影响,初步了解NFKB与MDR1表达、细胞内铁代谢的关系。方法 以DNR单用或联合应用25μmol/L去铁胺(DFO)为处理因素作用于人红白血病细胞株K562,应用RT-PCR法、流式细胞分析技术分别检测对照组、DNR组和DNR+DFO组K562细胞MDRlmRNA和P糖蛋白(PgP)的表达情况,同时采用免疫组织化学染色法检测NFKBκB表达及活性情况。结果 与对照组相比,DNR可同时诱导MDRlmRNA、Pgp表达和NFgB活化(P〈0.05);25μmol/LDFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDRlmRNA、Pgp的表达及NFKB的活化(P〈0.05)。结论 去铁胺可减少柔红霉素诱导的MDRl、PgP表达,其机制可能与铁剥夺后降低了柔红霉索诱导的K562细胞的氧化应激反应,进而影响NFκB的活化有关。  相似文献   

10.
蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞凋亡的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的:观察蛋白酶体抑制剂MG-132对人红白血病细胞株K562的致凋亡作用及其对凋亡相关基因NF-κB与caspase-3表达的影响。方法:将蛋白酶体通路特异性阻断剂 MG-132 加入K562细胞,用AO/EB细胞形态和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,逆转录-PCR检测NF-κB的转录水平,免疫组化法检测NF-κB与caspase-3的表达,比色法检测caspase-3活性。结果:流式细胞仪检测15 μmol/ L MG-132作用24 h后,凋亡率为(26.5±0.6)%,与对照组(1.2±0.1)%相比明显增多,差异有显著性(P<0.01),MG-132诱导K562细胞凋亡具有量-效关系; RT-PCR检测发现NF-κB mRNA表达下调;免疫组化法检测发现MG-132可降低 NF-κB的表达,增加caspase-3蛋白的表达, 且表达量与MG-132的作用呈剂量相关。结论:MG-132能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与MG-132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而上调caspase-3表达有关。[中国当代儿科杂志,2009,11(4):255-258]  相似文献   

11.
目的探讨HL-60细胞铁池改变对凋亡相关基因表达的影响及可能的分子机制。方法实验分组为去铁胺(DFO)组、DFO+三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测HL-60细胞LIP、流式细胞术观察HL-60细胞凋亡和RT-PCR测定HL-60细胞bax、c-myc、rbmRNA表达。结果(1)不同浓度的DFO作用于HL-60细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。(2)不同浓度的DFO作用于HL-60不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05)。(3)RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、rb和baxmRNA表达(P<0.05)。结论DFO通过螯合细胞内铁,降低HL-60细胞LIP,诱导细胞凋亡;诱导HL-60细胞凋亡的作用可能与其降低细胞动态铁池,上调细胞凋亡相关基因c-myc、rb、baxmRNA表达密切相关。  相似文献   

12.
目的探讨铁剥夺和铁超负荷对白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响及其机制,为临床采用铁剥夺策略治疗或辅助治疗白血病提供理论依据。方法在HL-60细胞培养基中分别加入不同浓度的去铁胺(DFO)或三氯化铁(FeCl3),造成细胞内铁剥夺或铁超负荷状态,采取噻唑蓝(MTT)法、DNA原位末端标记染色法(TUNEL)、免疫组化法检测铁剥夺和铁超负荷状态下HL-60细胞活力、凋亡率、细胞色素C(Cyt C)阳性细胞率。结果 DFO组细胞活力呈明显下降趋势,凋亡率呈显著上升趋势;FeCl3组细胞活力和凋亡率与对照组相比呈下降趋势;DFO组细胞胞浆内Cyt C阳性细胞率与对照组相比明显升高;而FeCl3组细胞浆内Cyt C阳性细胞率与对照组相比无明显差异。结论铁剥夺可促进线粒体释放Cyt C,诱导HL-60细胞凋亡;铁超负荷对线粒体释放Cyt C无直接影响作用。  相似文献   

13.
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对K562白血病细胞中铁代谢相关基因表达产物(H-Fn、TfR及IRP2)的影响及其相互关系.方法 应用联苯胺、瑞氏、非特异性酯酶、硝基四氮唑蓝还原试验4种染色方法 ,观察ATRA对K562细胞的诱导分化特点;应用流式细胞术检测经ATRA处理后,K562细胞表面抗原CD71及CDl3表达水平的变化;应用RNA/蛋白带移动分析方法 (RNA/protein band-shift assay)检测铁调节蛋白(IRP)的结合活性;采用放射免疫分析法测定K562细胞内铁蛋白含量的变化;采用RT-PCR方法 对ATRA处理的K562细胞H-Fn、TfR及IRP2 mRNA水平的表达进行检测,同时对RT-PCR产物克隆测序.结果 K562细胞经ATRA诱导,出现粒系分化的形态学特征,中幼粒细胞及以后阶段的细胞数明显增多.细胞表面抗原CD71下降而CD13表达升高.ATRA处理组的H-Fn mRNA水平较对照组升高,而IRP2及TfR mRNA减少;处理组IRP结合活性较对照组明显下降,但铁蛋白含量升高.结论 ATRA诱导K562细胞向粒系方向分化过程中,伴有一系列铁代谢相关基因表达产物的改变,其上游调控机制有待进一步探讨.  相似文献   

14.
目的探讨不同铁状态下IRP2 mRNA和TfR mRNA在HL-60细胞中的表达以及二者之间的关系。方法将FeCl3或去铁胺(Desferrioxamine,DFO)加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,使HL-60细胞处于缺铁或富铁的状态下进行培养。于细胞培养后第12、24和48小时收集各组细胞,提取总RNA。采用RT-PCR半定量法测定IRP2 mRNA和TfR mRNA的相对表达量。结果①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大,无明显差异(F组间=1.199,P>0.05)。细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响,差异有显著性(F组内=43.418,P<0.05),表现为随时间的延长,IRP2 mRNA的表达降低。②各实验组之间TfR mRNA的差异有显著性(FW-S=7.184,F组间=113.926,P<0.01)。在加入DFO的两个实验组中TfR mRNA表达升高。在加铁的两个实验组中,与对照组相比较,在12h时TfR mRNA的表达量上升,24h时达到高峰,之后迅速下降。结论①铁或去铁胺对HL-60细胞IRP2 mRNA的表达无直接影响。②当细胞内铁降低时,TfR mRNA的基因表达则增加;当细胞内铁增加时,TfR mRNA的基因表达则降低。  相似文献   

15.
目的 观察Apollon siRNA 靶向沉默Apollon 基因联合川芎嗪(TMP)对人慢性粒细胞白血病细胞株K562 增殖及凋亡的影响。方法 根据前期实验筛选出的干扰效果最佳的Apollon siRNA 片段,构建pGPHIGFP-Neo-Apollon 真核表达载体,并将构建成功的载体转染至K562 细胞。将实验分为细胞对照组(未行任何处理)、阴性对照组(转染阴性质粒载体)和RNA 干扰组(转染pGPHI-GFP-Neo-Apollon 质粒载体),利用RT-PCR 法和细胞免疫荧光法分别检测各组细胞Apollon mRNA 及蛋白的表达情况;再于上述分组基础上新增TMP 组(施加320 μg/mL TMP)、TMP+ 阴性对照组和TMP+RNA 干扰组,应用MTT 法和流式细胞术分别检测各组K562 细胞的增殖能力和细胞凋亡率。结果 构建的pGPHI-GFP-Neo-Apollon 载体能在K562 细胞内稳定表达;RNA 干扰组Apollon mRNA 及其蛋白的相对表达水平明显低于细胞对照组和阴性对照组(均P<0.05);RNA 干扰组K562细胞的增殖抑制率和凋亡率高于细胞对照组(P<0.05),与RNA 干扰组及TMP 组比较,siRNA 转染联合TMP能显著提高K562 细胞的增殖抑制率和凋亡率(均P<0.05)。结论 Apollon siRNA 转染能显著抑制K562 细胞增殖并促进其凋亡,且与TMP 联合使用对提高K562 细胞的增殖抑制率和凋亡率具有显著协同作用,提示siRNA技术联合药物在白血病治疗中具有重要的潜在价值。  相似文献   

16.
Zhou M  Liao QK  Li FY  Gao J  Fu RY  Luo CH  Li Q  Jia CS 《中华儿科杂志》2003,41(7):528-530
目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythroipoitin,rhEPO)和铁对白血病细胞K562转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)即CD71抗原表达的影响,及其相同处理因素对K562细胞周期变化的影响.方法体外培养K562细胞并加rhEPO等处理因素,分别在24 h和72 h终止处理,各处理组细胞分别与FITC荧光标记的CD71单抗孵育,或与DNA染料碘化丙啶作用.通过流式细胞分析技术检测CD71抗原的表达和细胞周期,观察各组TfR表达情况和S期细胞百分率.结果 (1)不同浓度的rhEPO培养K562细胞72 h,均可使TfR表达增加,与同期空白对照组相比差异有显著意义(P<0.05).(2)单独使用rhEPO(5 U/ml)或rhEPO(5 U/ml)+FeCl3(100 μmol/L)培养细胞72 h可使S期细胞百分率上升,且与空白对照组相比差异有显著意义(P<0.05).结论 rhEPO可通过增加白血病细胞转铁蛋白受体的表达而增加DNA的合成.  相似文献   

17.
为研究环胞霉素A(CaA)的抗白血病潜能,应用四甲基偶氮唑蓝法及细胞活力试验于体外观察CsA对各种不同来源白血病细胞株(包括T细胞性Jurkat、molt-4、GCRF-CEM、前B细胞性白血病细胞株Nalm-6及急性髓性白血病细胞株K562,耐药细胞株K562/AO2)的增殖及活力影响。结果显示临床耐受剂量CsA对所有细胞株包括多药耐药细胞株的活力和增殖均有明显的抑制作用。提示CsA有可能成为治疗白血病的一种安全有效的新药。  相似文献   

18.
目的 研究PI3K/AKT 信号通路在二烯丙基二硫(DADS)诱导K562 细胞凋亡中的作用。方法 用 10、20、40、80 mg/L DADS 处理K562 细胞48 h,采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法倒置显微镜观察细胞形态学变化;AnnexinV-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western blot 技术检测AKT、p-AKT、Caspases-3 蛋白的表达,并设置空白对照组和溶媒对照组。结果 DADS 作用K562 细胞48 h 后,细胞出现体积缩小、形态不规则、胞膜突出等凋亡特征。AO/EB 染色显示:随DADS 浓度增加,胞体缩小、胞核呈固缩状或圆珠状,染色质凝集,核染色呈橘红色的凋亡细胞数增多,以40 mg/L DADS 组最明显。10、20、40、80 mg/L DADS 组的凋亡率均高于对照组(P P > 0.05);随DADS 浓度增加,p-AKT 蛋白逐渐下降、Caspases 3 蛋白逐渐升高,差异有统计学意义(P 结论 DADS 诱导K562 细胞发生凋亡,其机制可能与DADS 抑制PI3K/AKT 信号通路的表达相关。  相似文献   

19.
目的 目前慢性粒细胞性白血病 (CML)的化疗效果仍不理想 ,为寻找对CML敏感的药物 ,该研究探讨四硫化四砷、STI5 71和除莠霉素对CML细胞株K5 6 2的作用。方法 通过MTS方法检测三种药物在不同浓度 (0 .0 1 ,0 .1 ,1 .0 ,2 .0 ,5 .0 ,1 0 .0 μmol/L)下对K5 6 2细胞活力的影响。采用瑞氏染色、荧光染色和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞形态学的变化和细胞凋亡的发生。用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 用 5 .0 μmol/L的四硫化四砷、STI5 71和除莠霉素培养 3天 ,K5 6 2细胞活力明显下降 ,其吸光值分别为 0 .32± 0 .0 4 ,0 .4 9± 0 .0 1 ,0 .6 9± 0 .0 2 ,其中四硫化四砷和STI5 71对细胞的抑制作用强于除莠霉素 (P <0 .0 1 ) ,前两者间无明显差异 (P >0 .0 5 )。 1 .0 ,5 .0 ,1 0 .0 μmol/L的四硫化四砷对K5 6 2细胞的抑制作用呈时间依赖关系 (P <0 .0 1 )。小于 1 .0μmol/L的四硫化四砷对K5 6 2细胞活力无明显影响。四硫化四砷培养 2 4至 4 8小时后 ,K5 6 2细胞出现染色质浓缩、核碎片及凋亡小体等典型的凋亡形态学改变。用 5 .0 μmol/L的四硫化四砷、STI5 71和除莠霉素培养 72小时后 ,K5 6 2细胞的凋亡率分别为 6 8.8%、5 6 .7%和 35 .5 % ,2 .0与 3.0 μmol/L的四硫化四砷诱导K5 6 2细胞凋  相似文献   

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