L-S靶向超声造影微泡的制备及声学性质的实验研究

目的探讨将淋巴细胞选择素(Lymph-Selectin,L-S)链接到脂质超声造影微泡膜表面的可行性,并体外验证其声学性质,为淋巴结特异靶向超声造影制备靶向微泡。方法采用静电吸附法将L-S链接到普通脂质超声微泡膜表面制备成L-S靶向超声造影微泡,荧光免疫染色实验验证L-S与脂质微泡膜的结合;流式细胞仪检测不同浓度L-S与微泡的结合率;超声体外验证L-S靶向微泡声学性质。结果 L-S靶向微泡的免疫荧光染色实验为阳性;L-S抗体浓度为5、15、35 μg/ml时L-S与脂质微泡的平均结合率分别为(9.88±1.49)%、(29.59±2.23)%、(86.66±4.71)%,两两比较均有统计学意义(P0.01);体外声学造影实验中,普通微泡组(UCM)和L S靶向微泡组(TUCM)平均灰度值分别为:(75.77±7.08)dB和(73.72±8.19)dB(P0.05)。结论采用静电吸附法可将L-S链接到脂质超声微泡膜表面制备成L-S靶向超声微泡,其结合率与加入的L-S抗体浓度有关。L-S的链接不会破坏靶向微泡的声学特性。     

纳米脂质微泡超声造影剂制备及其显影效果的实验研究

目的 制备一种纳米级脂质超声微泡造影剂,并将其与普通脂质微泡在正常兔肝的造影效果进行比较,以评价其造影效果.方法 经机械振荡法制备纳米脂质微泡,检测其形态、粒径、表面电位等物理特性.分别经兔耳缘静脉团注自制纳米脂质、普通脂质微泡造影剂(2.5 ml/kg),动态观察肝的实质回声增强情况,并用DFY型超声图像分析诊断仪对造影效果进行定量分析.结果 纳米脂质微泡平均粒径为415.8 nm,平均电位为-(13.7±1.6)mV.造影后观察:该纳米微泡能明显增强兔肝的二维灰阶显像,与普通脂质微泡比较,纳米微泡达峰时间较晚,峰值持续时间较短,增强持续时间较普通脂质微泡长,纳米微泡对肝的增强峰值强度略低于普通微泡.结论 自制纳米微泡形态好,粒径均一,显影效果理想,为肿瘤的靶向性研究提供了一个前期基础.     

亲血栓性靶向超声造影剂增强兔腹主动脉新鲜血栓显像的实验研究

目的探讨亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂体内增强兔腹主动脉新鲜血栓显像的效果.方法采用三氯化铁(FeCl3)溶液诱发20只健康新西兰大白兔腹主动脉非梗阻性新鲜血栓形成;经耳缘静脉团注0.04 ml/kg的白蛋白靶向超声造影剂进行声学造影;采用目测观察和视频灰阶分析技术,评价血栓显像的增强效果.结果造影后目测观察,亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂对腹主动脉新鲜血栓增强显影达10 min以上,灰阶值为(98.463±6.3)dB,与造影前0 s[灰阶值(18.741±2.86) dB]比较相差非常显著(P＜0.001);普通白蛋白造影剂造影后血栓超声显像效果改善不明显,但灰阶值升高,为(28.862±2.15)dB,与造影前0 s比较相差显著(P＜0.05),与靶向造影剂造影后灰阶值比较相差非常显著(P＜0.001).结论亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂可显著增强兔腹主动脉内新鲜血栓超声显像效果.     

超声组织定征视频法监控兔缺血再灌注肾靶向声学造影实验研究

目的定量评价自制靶向超声造影剂对兔缺血再灌注肾显像的靶向增强效果。方法将磷脂酰丝氨酸(phos-phatidylserine,PS)加在自制表面活性剂类超声造影剂微泡壁上,用有和无PS造影剂分别对6只肾缺血再灌注损伤兔进行声学造影,谐波显像观察肾实质回声的变化,用国产“DFY-2型超声图像定量分析诊断仪”对兔肾实质灰阶(GS)值进行动态定量分析。结果造影后,有和无PS组GS峰值分别高于造影前(P<0.001和P<0.05);有PS组GS峰值高于无PS组(P<0.001)。结论超声组织定征视频法可定量评价兔缺血再灌注肾靶向声学造影的增强效果。     

自制靶向脂质微泡与普通脂质微泡超声显影的对比实验研究

目的探讨自制的靶向脂质微泡超声造影剂在正常兔肝脏与VX2兔肿瘤模型的超声成像特点,对比研究其与普通脂质做泡超声造影剂超声成像的异同。方法分别从正常兔及VX2肿瘤兔耳缘静脉团注普通脂质微泡超声造影剂与自制靶向脂质微泡超声造影剂,使用飞利浦iU22超声诊断仪的造影模式,实时监控2种不同造影剂各自的超声显影特点。DFY定量分析诊断仪分析图像的达峰时间、峰值回声强度、清除时间并对各组参数进行比较。结果在正常兔肝实质,普通脂质微泡超声造影剂(MB)达峰时间明显早于自制的靶向脂质微泡超声造影剂(MB’)达峰时间,峰值回声强度前者高于后者,清除时间前者显著短于后者。在VX2肿瘤区,MB达峰时间明显早于MB’,峰值回声强度前者明显高于后者,清除时间前者显著短于后者。结论自制靶向脂质微泡超声造影剂有其自身独特的超声显像过程和特点,呈"负向显影"模式。     

微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的初步研究

目的研究微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的可行性。方法 26只皮下VX_2肿瘤荷瘤兔随机分为超声微泡组、单纯超声组及假照组。超声微泡组经耳缘静脉推注微泡联合超声辐照肿瘤,单纯超声组以生理盐水代替微泡,假照组超声假照。各组治疗前、治疗后0、30和60min时间点对肿瘤进行超声造影,分析各时间点造影灌注峰值灰阶变化。结果超声微泡组肿瘤造影灰阶值(级)从治疗前的(67.8±13.3)级降至(29.7±20.1)级(P0.01),维持超过60min仍无明显再通;而单纯超声组、假照组肿瘤造影灰阶值无明显变化(P0.05)。结论微泡增强的超声空化能够有效阻断兔VX_2皮下肿瘤的微循环,其发生机制尚不清楚。     

免疫脂质体超声造影剂增强荷肝癌裸鼠肿瘤显像的实验研究

目的探讨人肝细胞癌靶向脂质体超声造影剂对荷肝癌裸鼠肿瘤的增强显像效果。方法采用人肝癌细胞株HHCC接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠模型;将靶向脂质体超声造影剂或普通脂质体超声造影剂经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,使用二次谐波显像模式观察并记录造影过程;采用目测观察和视频灰阶分析技术,以时间-强度曲线分析来定量评价肿瘤显像的增强效果。结果造影后目测观察,靶向造影剂对肿瘤有延迟增强显像效果,靶向造影剂组肿瘤的增强显影约在8min达到峰值,峰值灰阶强度值为(39.545±10.099)dB;普通造影剂组肿瘤增强显影达峰值时间约为10s,峰值灰阶强度值为(22.438±5.108)dB,与靶向造影剂造影后灰阶强度峰值比较相差显著(P<0.01)。结论人肝细胞癌靶向脂质体超声造影剂可以增强荷人肝癌裸鼠的肿瘤超声显像效果。     

自制脂质超声造影剂稳定性和造影增强的实验研究

目的对自制脂质超声造影剂体外稳定性影响因素进行考察,观察其对正常兔肝、肾实质增强效果.方法考察3个体外稳定性影响因素:强光照射、60Co辐射和溶解后不同时间对造影剂外观、微泡形态、微泡浓度和平均粒径的影响.应用实时造影匹配成像(CnTI)技术观察自制脂质超声造影剂对5只兔的肝和肾实质造影后视频增强强度及增强持续时间.结果体外稳定性实验结果说明,自制脂质超声造影剂溶解后微泡较为稳定,溶解后90 min时微泡浓度还保持在较高水平(4×108个/ml左右).长时间强光照射影响脂质超声造影剂溶解后微泡的圆整形态,灭菌剂量的60Co辐射不影响脂质超声造影剂的外观形态、微泡浓度和平均粒径等指标.体内造影表明自制脂质超声造影剂能够有效增强兔肝和肾实质显像强度,肝和肾平均峰值视频强度分别为(4.67±0.26)和(4.78±0.16),肝和肾的平均增强持续时间分别为(290±9)s和(300±10)s.结论自制脂质超声造影剂贮存应避免强光照射,制备时可采用60Co辐射灭菌,溶解后微泡稳定时间较长,可以作为有效的超声造影诊断试剂.     

载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声造影剂的制备及其特性检测

目的 制备一种载重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂,对其物理特性、载病毒的能力及在兔肝脏的显影效果进行研究.方法 采用机械振荡法及分层吸附法制备一种载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的脂质超声微泡造影剂,用DFY-Ⅱ型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径和浓度;检测其结合腺病毒的能力及观察对正常兔肝脏的显影效果.结果 载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声微泡分布均匀,平均粒径为(1.17±0.82)μm,浓度为(2.50±0.12)×10~9/mL;该造影剂的最大腺病毒结合的效率为30%;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肝脏实质回声.结论 自制载重组腺病毒的微泡造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载腺病毒效率高,为超声靶向微泡破裂基因释放技术的发展开辟新思路.     

携GL-7靶向微泡造影剂对高脂饮食兔腹主动脉内膜的靶向作用

目的 探讨携GL-7靶向微泡造影剂对高脂饮食兔腹主动脉内膜体外特异性结合及体内增强显影效果.方法 14只新西兰兔用高脂饮食法建立腹主动脉内膜损伤模型,并随机分为两组,4周后分别使用对照微泡和靶向微泡造影剂进行腹主动脉超声造影,以视频密度法评价两种造影剂对动脉内膜的增强效果,荧光显微镜观察两种造影剂体内结合情况及与动脉内膜荧光染色的结合情况及荧光强度统计分析.结果 对照微泡、靶向微泡造影后血管内膜回声均较造影前增强,靶向微泡造影与对照微泡造影比较,血管内膜峰值视频密度差异有统计学意义(P<0.05).荧光显微镜观察,靶向微泡血管腔内呈现绿色荧光,而对照微泡血管腔内仅有微弱的绿色荧光.动脉血管冰冻切片结果显示,靶向微泡造影组动脉内膜有绿色荧光表达,而对照微泡造影组绿色荧光表达较弱,两组荧光强度差异有统计学意义(P<0.05).结论 GL-7靶向微泡造影剂与兔动脉血管内膜体内、体外特异性结合,可显著增强兔腹主动脉内膜靶向显影.