血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂在系膜细胞培养中对结缔组织生长因子表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂Losartan对系膜细胞(MCs)结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响方法分离培养SD大鼠肾小球系膜细胞。培养的系膜细胞中分别加入不同浓度的AngⅡ(10     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生？…

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况，方法：从６日龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：（１）经１０＾－８，１０＾－７，１０＾－６和１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａ     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂在系膜细胞培养中对结缔组织生长因子表达的影

目的：研究血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）及其受体拮抗剂Ｌｏｓａｒｔａｎ对系膜细胞（ＭＣｓ）结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）表达的影响。方法：分离培养ＳＤ大鼠肾小球系膜细胞。培养的系膜细胞中分别加入不同浓度的ＡｎｇⅡ（１０＾－９、１０＾－７、１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）,及１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ ＡｎｇⅡ＋１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ Ｌｏｓａｒｔａｎ,作用７２ｈ后,采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术测定ＭＣｓ ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ水平变化。结果：ＡｎｇⅡ能促进ＭＣｓ ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达,且呈剂量依赖性;Ｌｏｓａｒｔａｎ能部分降低ＡｎｇⅡ对ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达的诱导。结论：ＡｎｇⅡ可能通过促进ＭＣｓ ＣＴＧＦ的表达而促进了肾纤维化的进展;Ｌｏｓａｒｔａｎ可以部分抑制ＡｎｇⅡ对ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达的诱导,从而可能有益于延缓肾     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生的实验研究

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况。方法：从６月龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：①经１０－８、１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激４８ｈ后，系膜细胞的ＡＴ１受体ｍＲＮＡ表达均有升高，并呈一定的浓度依赖性；而ＡＴ２受体ｍＲＮＡ仅在１０－５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激下才有微弱表达。②１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ能明显促进系膜细胞产生ＦＮ和ＦＮ的ｍＲＮＡ表达的上调，并与ＡｎｇⅡ刺激浓度呈正相关。结论：ＡｎｇⅡ刺激后可使系膜细胞的ＡＴ１受体基因表达和ＦＮ的产生明显增加，并呈一定的浓度依赖性，而ＡｎｇⅡ高浓度可以使ＡＴ２受体表达上调     

抑制NF-κB活性下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管紧张素原表达水平

在体外原代培养的SD大鼠肾小球系膜细胞中,观察高糖培养条件下血管紧张素原(AGT)表达和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平变化,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预作用.结果 显示高糖上调ACT mRNA(0.29±0.07对0.20±0.05,P<0.05)和蛋白(0.66±0.23对0.37±0.15,P<0.05)表达以及AngⅡ分泌[(9.85+2.08对7.50±1.51)ps/ml,P<0.05]水平,PDTC通过抑制NF-κB活性下调其水平.     

血管紧张素Ⅱ体外诱导人肾小球系膜细胞衰老

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用不同时间后对人系膜细胞(GMC)衰老指标的影响。方法应用10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L AngⅡ刺激人GMC,刺激时间为24、48、72、96 h,通过检测细胞增殖情况、衰老相关β半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色阳性细胞百分率、细胞周期变化及细胞形态改变确定AngⅡ诱导人GMC衰老的最佳浓度和时间。结果 10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h,可抑制GMC增殖,且80%以上的GMC SAβ-gal染色阳性,82%以上的GMC进入G0^G1期;10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h诱导的衰老GMC,光镜下表现为体积增大,胞体扁平,胞质内颗粒增多,细胞排列不规则,多型核及双核细胞增多;电镜下显示核膜内陷,染色质凝集、边集,细胞质空泡形成,出现髓样溶酶体,粗面内质网扩张。结论 10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h可作为诱导GMC发生衰老的最佳刺激因素。     

血管紧张素Ⅱ在高糖诱导大鼠系膜细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达中的作用

高糖刺激大鼠系膜细胞血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）的产生，高糖组和ATⅡ组系膜细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达降低，基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）mRNA表达增加，MMP-9／TIMP-1 mRNA比值下降，ATⅡ受体阻断剂Saralasin能逆转上述改变。     

高糖环境中血管紧张素Ⅱ影响肾小球系膜细胞促纤维化因子的表达及机制

目的:在高糖环境中,用不同浓度血管紧张素II(Ang II)刺激肾小球系膜细胞(GMC),观察不同时点细胞内磷酸化信号转导子与转录激活子3(p-STAT 3)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(FN)的表达变化及AG-A90对上述指标表达的影响,探讨高糖和Ang II共同作用对GMC分泌促纤维化因子及细胞外基质的影响. 方法:(1)GMC在高糖环境中培养48h后,加入Ang II(0.1 μmol/L)孵育不同时间,用免疫细胞化学及Western Blot方法检测p-STAT 3的表达,RT-PCR检测GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的表达.(2)用JAK 2/STAT 3通路特异性阻断剂AG-490(10 μmol/L)对GMC进行预处理后再加入Ang II,RT-PCR方法检测大鼠GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的表达变化. 结果:(1)外源性Ang II显著增加了GMC p-STAT 3表达,刺激5 min后p-STAT 3表达即开始增多,并向细胞核积聚,30 min达高峰,90 min后逐渐恢复到刺激前水平.(2)Ang II刺激后GMC的 TGF-β1、CTGF、FN mRNA表达明显上调,而AG-490预处理显著降低了TGF-β1、CTGF、FN mRNA的高表达. 结论:Ang II可一过性激活大鼠GMC JAK 2/STAT 3信号转导通路,并上调TGF-β1、CTGF及FN mRNA表达,而阻断JAK 2/STAT 3信号转导通路可明显降低Ang II诱导的大鼠GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的高表达.     

血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞表达结缔组织生长因子的抑制作用

目的 探讨血管紧张素(Ang)(1-7)对Ang Ⅱ诱导的肝星状细胞(HSC)表达结缔组织生长因子(CTGF)的抑制作用及其机制.方法 培养人HSC细胞系(LX2细胞),以AngⅡ刺激24h,分别予以AngⅡl型受体阻断剂irbesartan、ROCK抑制剂Y27632预处理lh.设立AngⅡ+ Ang (1-7)处理组,观察Ang (1-7)对Ang Ⅱ的抑制作用;Mas受体拮抗剂A779阻断Mas受体,观察对Ang (1-7)抑制效应的阻断作用.利用Western blot、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和多基因定量检测系统检测RhoA、ROCK2 mRNA、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白和mRNA的表达.结果 研究结果显示Ang Ⅱ刺激后,RhoA蛋白(0.87±0.093对比0.337±0.074)、ROCK2mRNA (0.747±0.061对比0.163±0.024)、CTGF mRNA (0.578±0.028对比0.262±0.007)相对表达量与对照组相比显著增高,差异有统计学意义(P值均＜0.01);irbesartan (RhoA蛋白:0.558±0.030对比0.87±0.093 ; ROCK2 mRNA:0.368±0.023对比0.747±0.061 ; CTGFmRNA:0.309±0.019对比0.578±0.028).Y27632(RhoA蛋白:0.564±0.067对比0.87±0.093 ; ROCK2 mRNA:0.218±0.046对比0.747±0.061 ; CTGF mRNA:0.340±0.020对比0.578±0.028)预处理组上述基因或蛋白相对表达量显著减低,差异有统计学意义(P值均＜0.01);Ang (1-7)单独处理组RhoA蛋白(0.449±0.035对比0.337±0.074)及CTGF mRNA(0.256±0.008对比0.262±0.007)与对照组相比无明显改变,差异无统计学意义(P值均＞0.05);但是Ang(1-7)可抑制AngⅡ诱导的上述基因或蛋白表达的增高(RhoA蛋白:0.615 ±0.034对比0.87±0.093;ROCK2 mRNA:0.403 ±0.040对比0.747±0.061; CTGF mRNA:0.265±0.011对比0.578±0.028),差异有统计学意义(P值均＜0.01); Mas受体拮抗剂A779可以阻断Ang (1-7)对AngⅡ的抑制作用(RhoA蛋白:0.929±0.076对比0.615±0.034; ROCK2 mRNA:0.720±0.054对比0.403±0.040; CTGF mRNA:0.568±0.029对比0.265±0.011),差异有统计学意义(P值均＜0.01).结论 AngⅡ通过RhoA-ROCK通路促进人HSC表达CTGF mRNA; Ang (1-7)与其Mas受体结合后对AngⅡ激活的CTGF mRNA的表达具有抑制作用.     

高糖对体外培养大鼠肾小球系膜细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的观察高糖环境对肾小球系膜细胞(HBZY-1)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响,进一步探讨糖尿病肾病的发生、发展机制。方法体外常规培养HBZY-1,传代后分五组培养:对照组培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L,高糖a、b、c、d组培养液葡萄糖浓度分别为10、15、20、30 mmol/L;分别作用24、48 h后RT-PCR法测定各组细胞VEGF和PEDF mRNA表达水平;用ELISA法测定各组细胞培养液中VEGF和PEDF蛋白含量。结果与对照组相比,高糖各组细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白的表达均升高,PEDF mRNA及PEDF蛋白表达均降低(P<0.05);高糖各组随葡萄糖浓度升高,VEGF表达升高、PEDF表达降低,呈浓度依赖性。结论高糖可导致肾小球系膜细胞VEGF和PEDF表达失衡,可能为糖尿病肾病微血管病变及肾小球硬化发生发展的机制之一     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞增殖的影响及细胞因子信号转导抑制蛋白-1的干预作用

目的探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ对肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响及细胞因子信号转导抑制蛋白(SOCS)-1的干预作用。方法体外培养HMC细胞,MTT法检测AngⅡ有效作用浓度,ELISA法检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western印迹法测定肾组织SOCS-1表达,确定SOCS-1的干预作用。结果 AngⅡ作用于HMC细胞后,吸光度值(OD值)明显增加(P0.05),10~(-6)mol/ml AngⅡ在48 h作用最明显(P0.01)。SOCS-1可以抑制HMC细胞增殖,降低IL-6和IL-1β水平,与AngⅡ组比较有显著性差异(P0.01)。结论 AngⅡ可诱导HMC细胞增殖,10-6mol/ml在48 h作用最明显;SOCS-1可以降低HMC细胞分泌IL-6和IL-1β的含量,抑制HMC细胞增殖,从而延缓与减轻肾小球硬化,减缓疾病进展。     

血管紧张素Ⅱ和血小板衍生生长因子BB:引起系膜细胞内游离钙浓度变化的异同

目的：研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)引起的肾小球系膜细胞(MC)内游离钙浓度变化的异同。方法：以体外培养的MC为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果：AngⅡ和PDGF-BB均可浓度依赖性地引起MC内游离钙浓度的升高，但二者的动态变化曲线存在显著不同。无钙缓冲液和钙通道阻滞剂均可抑制AngⅡ和PDGF-BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制的方式和程度均有所不同。结论：AngⅡ和PDGF-BB通过不同的激发途径引起MC内游离钙浓度的升高。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管外膜成纤维细胞产生结缔组织生长因子

目的 研究血管外膜成纤维细胞(AF)能否产生结缔组织生长因子(CTGF)，以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对CTGF的影响。方法 组织贴片法培养WKY大鼠主动脉AF，经AngⅡ(10^-7～10^-9mol／L)处理，应用免疫细胞化学和Western blot的方法，观察CTGF的表达，及AT1受体阻断剂氯沙坦和AT2型受体阻断剂PD123319干预后的CTGF表达。结果 免疫细胞化学显示AF表达CTGF，AngⅡ可以诱导AF以及其上清液中CTGF表达增加。Western blot显示AngⅡ诱导CTGF表达呈剂量和时间依赖性。10^-7mol／L AngⅡ刺激24h诱导AF产生CTGF作用最强。AngⅡ诱导CTGF表达增加作用可以被氯沙坦阻断，而不受PD123319影响。结论 AngⅡ通过AT1受体诱导CTGF合成。     

血管紧张素Ⅱ及氯沙坦对肾系膜细胞蛋白激酶C亚型表达及转位的影响

血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是肾素 血管紧张素 醛固酮系统(ＲＡＳ)中最重要的生物活性肽 ,可经ＡｎｇⅡ受体激活细胞内信号传递的关键酶———蛋白激酶Ｃ (ＰＫＣ)介导各种细胞效应 ,在肾脏疾病的发生发展中起重要作用[1] 。目前已知ＰＫＣ共有 12种亚型 ,不同ＰＫＣ亚型在ＡｎｇⅡ信号传递中的作用尚不十分清楚。为此 ,我们将肾系膜细胞进行体外培养 ,采用多光子共聚焦显微镜观察ＡｎｇⅡ、ＡｎｇⅡ受体 1(ＡＴ1)拮抗剂———氯沙坦对三种ＰＫＣ亚型α、β、ε表达和转位的影响 ,探讨这三种ＰＫＣ亚型在肾脏疾病中的作用。一、材料和方法1 …     

肾病综合征大鼠肾小球血管紧张素Ⅱ受体功能变化及其机制

目的：探讨肾素—血管紧张素系统(RAS)在肾病综合征发病机制中的作用。方法：放射配基结合实验测定血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与阿霉素肾病大鼠(ADR)肾小球的结合，以及血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对结合的影响；同时应用放免分析法测定相应的血浆AngⅡ和醛固酮水平。结果：①大鼠肾小球具有特异性、可逆性、可饱和性、竞争性和高亲和力的AngⅡ结合位点。②肾病组血浆AngⅡ和醛固酮水平、受体的解离常数(Kd)与对照组比较差异无显著性意义(P＞0．05)，但肾病组肾小球AngⅡ受体的最大结合容量(B max)较对照组显著下降(P＜0．01)。应用依那普利治疗后，两组大鼠肾小球AngⅡ受体的B max均上升，组间无显著性差异(P＞0．05)。结论：①肾小球AngⅡ结合位点是AngⅡ的受体。②ADR肾内RAS处于活化状态，B max的下降为同系物下调。     

氨氯地平对SHR肾小球系膜细胞的保护作用

目的 观察氨氯地平是否能抑制SHR肾小球系膜细胞的肥大与增殖。将氨氯地平与苯那普利拉及氯潲坦比较其单用或合用时的不同效应。方法 采用SHR系膜细胞培养技术，以^3H-亮氨酸或^3H-胸苷的cpm值反映蛋白或DNA合成。结果 （1）SHR系膜细胞在AngⅡ，PDGF刺激后引起的肥大与增殖，均可被氨氯地平所抑制；（2）在AngⅡ组，对于肥大与增殖三种药物单用时抑制作用无差异。PDGF引发的肥大，氯沙坦，普那普利拉明显优于氨氯地平，且普那普利拉比氨氯地平强；PDGF引发的增殖，仅氯沙坦比氨氯地平强。（3）氨氯地平与普那普利拉或氯沙坦联合后均有协同的抗肥大作用。抗增殖方面，氨氯地平与普那普利联合在AngⅡ组无协同作用，在PDGF组有协同作用。氨氯地平与氯沙坦配伍后对增殖有协同拮抗作用。结论 （1）氨氯地平能抑制SHR系膜细胞的肥大与增殖。（2）在AngⅡ组，抗系膜细胞的肥大与增殖，氨氯地平与普那普利拉，氯沙坦互相之间无差异；由PDGF引发的肥大与增殖，氯沙坦明显优于氨氯地平；（3）氨氯地平与普那普拉或氯水坦联合后有协同抗系膜细胞肥大作用；在抑制增殖方面，氨氯地平＋氯沙坦可能优于氨氯地平＋普那普利拉。     

血管紧张素转换酶抑制剂对2型糖尿病患者肾小球高滤过的影响

2型糖尿病患者早期存在肾小球高滤过 (ＨＧＦＲ) 〔1,2〕。血管紧张素转换酶抑制剂 (ＡＣＥＩ)能使糖尿病肾病 (ＤＮ)患者的全身血压和肾小球毛细血管内压降低 ,从而延缓ＤＮ的进展。但ＡＣＥＩ对正常白蛋白尿排泄率 (ＵＡＥＲ)伴ＨＧＦＲ的 2型糖尿病患者研究却报告甚少。本研究对新诊断的 30例 2型糖尿病伴ＨＧＦＲ的患者进行为期 14个月的随机、双盲、安慰剂对照研究 ,以观察ＡＣＥＩ对其肾功能的影响。现将结果报告如下。一、对象和方法1.研究对象 :2型糖尿病患者 30例 (男 2 2 ,女 8) ,平均年龄 48岁 (30～ 6 0岁 )。入选要求 :(1)肾小…     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠肾小球内皮细胞（GEC）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的影响,探讨其相关作用机制。方法 对大鼠GEC进行分离培养与鉴定;采用Western blot法检测大鼠GEC炎性因子MCP-1蛋白的表达;RT-PCR和Western blot法检测血管紧张素Ⅱ 1型受体（AT1R）的mRNA和蛋白水平。结果 与正常对照组比较,施加AngⅡ刺激因素后MCP-1表达量明显增高,呈剂量（10^-7 mol/L～10^-5 mol/L）依赖效应;10^-5 mol/L AngⅡ作用下,大鼠GEC的AT1R mRNA和蛋白水平明显增加,成时间依赖效应;10^-6 mol/L AT1R拮抗剂替米沙坦（TEL）可以抑制AngⅡ（10^-5 mol/L）的作用,MCP-1的表达量下降。结论 AngⅡ通过上调大鼠GEC的AT1R水平,使大鼠GEC的MCP-1表达量增加。     

血管紧张素Ⅱ调控大鼠肝星状细胞血管紧张素Ⅱ受体表达及其功能的影响

国内外学者在心、肾、肺等脏器纤维化实验研究中发现，血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能刺激这些脏器组织间质成纤维细胞胶原分泌，证实AngⅡ参与组织纤维化的形成。现已证实AngⅡ调节血压、水电解质平衡和细胞生长都是通过AngⅡⅠ型受体(AT1R)发挥作用。在肝纤维化发生过程中，肝星状细胞(HSC)是否也表达AT1R和AT2R，为此我们观察了AngⅡ对大鼠HSC表达AngⅡ受体(ATR)及前胶原基因的调控情况，旨在探讨AngⅡ对HSC功能的影响及其机制。     

恒定和波动高糖对大鼠肾系膜细胞损伤及RAGE表达的影响

目的 研究恒定和波动高糖对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)损伤及细胞晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达的影响,探讨糖尿病肾病的病理损伤机制.方法 将体外培养的大鼠GMC在恒定和波动高糖培养基中培养,分别于24 h、48 h进行细胞学形态观察,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,生化法测定培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛的含量,RT-PCR检测细胞RAGE mRNA的表达情况.结果 波动高糖组在细胞形态、SOD活性、丙二醛含量、RAGE mRNA的表达与正常对照组和恒定高糖组相比均有明显差异(P＜0.05).结论 波动高糖造成大鼠GMC损伤比恒定高糖更为严重,是导致糖尿病肾病发生的重要原因之一.