重组减毒李斯特菌载体疫苗抗肿瘤的研究进展

随着医学免疫学及分子生物技术的飞速发展,人们已从分子水平对肿瘤进行研究,开始尝试根据肿瘤免疫的理论,利用基因工程的方法制备肿瘤疫苗,并应用于肿瘤的实验及临床治疗中,近年来,重组减毒李斯特菌作为疫苗载体被应用于抗多种肿瘤(如黑素瘤,宫颈癌,卵巢癌等)的研究,其能引起机体强烈的免疫应答,抑制肿瘤生长,且不产生明显的毒副作用.     

携带MART-1基因的减毒单核细胞增多性李斯特菌抑制小鼠恶性黑素瘤的研究

目的 探讨携带黑素瘤分化抗原MART-1基因的减毒单核细胞增多性李斯特菌（LM）对恶性黑素瘤的抑制作用及其机制。方法 构建pERL3-MART-1载体,通过电转化建立携带MART-1基因的△inlB LM-MART-1和△actA/△inlB LM-MART-1重组李斯特菌。浓度梯度稀释法测定各减毒菌株半数致死量（LD50）。C57BL/6小鼠随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）组,△inlB LM- MART-1组和△actA/△inlB LM- MART-1组。首次免疫后第7天于小鼠腹部皮下接种B16F10细胞,第14天、21天重复免疫小鼠,观察并记录肿瘤大小及小鼠生存状态。应用实时定量PCR检测肿瘤组织中MART-1表达量。流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+ T细胞阳性率。结果 经鉴定成功构建△inlB LM-MART-1和△actA/△inlB LM-MART-1。减毒株△inlB LM 和△actA/△inlB LM的LD50比LM-EGDe标准株毒力分别下降100倍和10 000倍。体内抑瘤试验显示,与PBS组比较,△inlB LM- MART-1组抑瘤率为46.95%,△actA/△inlB LM-MART-1抑瘤率为83.96%,差异均有统计学意义（P < 0.05和0.01）。PBS组、△inlB LM-MART-1组和△actA/△inlB LM-MART-1组肿瘤组织中MART-1表达量递增,以ＰＢＳ组表达量为１,后两组为8.988 ± 0.207和11.315 ± 0.445,各组间差异均有统计学意义（P值均 < 0.05）,且三组小鼠脾细胞中CD4+CD25+ T细胞阳性率依次为（2.52 ± 0.20）%、（1.14 ± 0.13）%和（0.44 ± 0.15）%,组间差异均有统计学意义（P值 < 0.01）。结论 携带MART-1基因的减毒LM毒性明显低于LM标准株,而且可以有效抑制黑素瘤生长,延长小鼠生存期。